骨髓干细胞与肝细胞移植

肝细胞移植为治疗各种肝病提供了一种新的途径,其目的是通过移植细胞的增殖逐步替代或重建受损的肝组织结构。细胞来源是当前阻碍肝细胞移植发展的主要问题。骨髓干细胞可以分化为与其组织发育或再生来源不同的细胞类型,可望成为肝细胞移植的重要细胞来源问题。本文就近年来相关研究进行综述。     

肝细胞极化标志分子在骨髓基质干细胞向肝细胞分化过程中的表达

目的观察在体外诱导成人骨髓基质干细胞向肝细胞分化过程中肝细胞极化标志分子的表达和分布。方法从成人骨髓中分离基质干细胞，在体外诱导分化为成熟肝细胞。应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法比较肝细胞极化标志蛋白二肽酰基肽酶Ⅳ（DPPIV）和低密度脂蛋白受体（LDLr）mRNA在诱导分化（实验组）和非诱导分化（对照组）条件下的表达情况。应用免疫荧光方法在共聚焦显微镜下观察DPPIV和LDLr在细胞膜上的分布情况。结果成人骨髓来源的基质干细胞经诱导后分化表达白蛋白，实验组DPPIV和LDLr mRNA的表达高于对照组（P〈0．05）。DPPIV和LDLr在肝细胞膜上呈特征性分布。结论成人骨髓基质干细胞在向肝细胞分化过程中表达肝细胞极化标志分子，进一步表明骨髓基质干细胞具有向肝细胞分化的潜能。同时，肝细胞体外分化可以做为研究肝细胞极化形成机制的良好模型。     

骨髓间充质干细胞定向分化肝细胞及肝内移植研究

目的 观察体外诱导骨髓问充质干细胞分化及肝纤维化形成环境中移植情况。方法 首先行骨髓间充质干细胞提取、分离和培养，加入肝细胞生长因子（HGF，20μg／L）和表皮生长因子（EGF，1．5mg／L）诱导定向分化。肝纤维化形成的大鼠随机分成2组，每组10只。使用5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记诱导的骨髓间充质干细胞，经门静脉向肝纤维化形成的SD大鼠肝脏移植，对照组用BrdU标记未经诱导的骨髓间充质干细胞。2周后通过免疫组织化学方法检测大鼠肝脏标记细胞的分布及BrdU^＋／ALB^＋细胞数量。结果 体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化的细胞CK8及ALB表达阳性。移植2周后大鼠肝脏均可检测到BrdU标记细胞，与对照组相比诱导后骨髓问充质干细胞组BrdU^＋／ALB^＋细胞数较多，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 经体外诱导骨髓间充质干细胞能分化为肝细胞，移植在大鼠肝纤维化形成环境中，白蛋白表达细胞数更多。     

一种肝细胞移植的新来源--骨髓干细胞可塑性的应用研究(文献综述)

逐步替代或重建受损的肝组织结构是肝细胞移植治疗肝病的最终目的.骨髓干细胞可以演变成为与其组织发育或再生来源无关的细胞类型,即骨髓干细胞的可塑性(plasricity).骨髓干细胞分化为肝实质细胞的发现提示它可能参与了体内肝组织细胞的再生、及损伤的修复与替代,而这一进程与肝细胞移植的作用机制类似,本文就近年来的有关研究进行综述.     

骨髓基质干细胞分化来源肝细胞移植的细胞准备及组织学观察

目的 探讨大鼠骨髓基质干细胞向肝细胞分化后体外标记方法及移植肝细胞的肝内组织学表现。方法 分离大鼠骨髓基质细胞，在体外诱导分化为成熟肝细胞。将5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入后的肝细胞移植入已行部分肝切除大鼠体内，分别应用免疫组织化学和免疫荧光方法观察受体肝脏内移植细胞的形态和功能。结果分化成熟肝细胞在BrdU掺入培养后细胞核染色可见特异性棕褐色标记；肝细胞移植后肝组织切片BrdU染色可定位移植细胞；白蛋白抗体染色显示移植细胞具有功能活性。结论 骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞移植后形态功能稳定，是进行肝细胞移植的理想细胞来源。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的：探讨HGF和EGF对骨髓间充质干细胞向肝细胞方向的诱导分化作用，探索出合适的诱导条件，为肝细胞移植、生物人工肝、组织工程构建等提供基础。方法：骨髓来自杂种犬的髂骨，采用全血贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞CD标记；用含HGF和EGF的α—MEM培养液进行诱导培养，并于诱导后7、14、21d留取细胞；用免疫组化检测AFP、CK18，免疫荧光检测ALB，PAS反应检测糖原；流式细胞仪检测细胞分化率。结果：分离的骨髓间充质干细胞表面CD13、CD34和CD45皆为阴性，CD29为阳性。诱导至7d出现AFP表达．14d表达增高，21d时表达下降。CK18、ALB和糖原14d时出现表达，并随时间延长表达逐渐增加：21d时ALB表达阳性率可达50％以上。结论：HGF和EGF有诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的作用。     

骨髓间质干细胞培养上清液调控肝细胞的体外研究

目的探讨骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)培养上清液对肝细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨BMSC治疗肝纤维化的旁分泌机制。方法采用密度梯度离心及贴壁细胞分离相结合提取BMSC。培养48h的BMSC细胞培养上清液按BMSC不同处理(培养)时间和含量两种方法建组。不同处理时间建组:取培养48hBMSC上清液处理肝细胞(完全培养),分为处理24h、48h、72h组,对照组为1640培养基处理24h的肝细胞。不同含量BMSC建组:实验1组为完全BMSC培养上清液(含肝细胞的6孔板中每孔加入BMSC上清液2ml)处理肝细胞;实验2组为部分BMSC培养上清液(每孔加BMSC上清液1ml+1640培养基1ml)处理肝细胞;对照组为完全细胞培养基(每孔加1640培养基2ml)处理肝细胞。用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测BMSC旁分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)情况及培养时间对其的影响;用流式细胞仪观察肝细胞细胞分期和检测凋亡细胞数;用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测样本上清液中白蛋白的表达。结果 BMSC分泌HGF,其含量变化具有时间依赖性。加入BMSC培养上清液后,与对照组相比,实验1组中的培养上清液可以明显促进肝细胞增殖、抑制其凋亡,并随着处理时间的延长而增加(处理72h>处理48h>处理24h,均为P<0.05);实验组(1组、2组)的白蛋白分泌较对照组上调,且随着处理时间的延长白蛋白含量增加。结论 BMSC有可能通过分泌HGF促进肝细胞增殖、抑制凋亡,促进白蛋白分泌,从而抑制肝脏纤维化。     

骨髓干细胞向肝细胞分化的研究进展

骨髓中存在多种具有很强的自我更新和多向分化能力的干细胞。研究表明,骨髓干细胞在体外可通过肝细胞生长因子等的诱导作用转化成肝样细胞,在体内利用特定微环境的作用也可转化为肝前体细胞和成熟的肝细胞,并明显改善肝功能。骨髓干细胞有望成为肝细胞移植或生物人工肝的新型种子细胞。本文就近年来对骨髓干细胞向肝细胞的转化研究进行综述。     

一种肝细胞移植的新来源—骨髓士细胞可塑性的应用研究

逐步替代或重建受损的肝组织结构是肝细胞移植治疗肝病的最终目的，骨髓干细胞可以演变成为与其组织发育或再生来源无关的细胞类型，即骨髓干细胞的可塑性（plasticity)。骨髓干细胞分化为肝实质细胞的发现提示它可能参与了体内肝组织细胞的再生，及损伤的修复与替代。而这一进程与肝细胞移植的作用机制类似，本文就近年来的有关研究进行综述。     

小鼠骨髓干细胞向肝细胞转化的体外实验研究

目的建立以30 ng/ml FGF-4和30 ng/ml OSM为主的诱导培养体系,研究体外骨髓干细胞向肝细胞的转化过程中细胞形态、结构、功能的变化.方法建立以30ng/ml FGF,30ng/mlOSM为主的小鼠骨髓干细胞诱导培养体系.观察细胞形态和数量的变化;RT-PCR、Western blot、免疫荧光染色检测肝细胞特异性标记物的表达;通过PAS糖原染色、白蛋白ELISA、尿素合成试验,检测细胞的合成和代谢功能.结果诱导12 d,观察到多极性的肝细胞样细胞,且逐渐增多、集落不断增大.在诱导过程中,不同的时间点可以分别检测到HNF-3βmRNA、ALBmRNA、CK18mRNA、TTRmRNA、G6-PasemRNA和TATmRNA的表达.诱导21 d,细胞表达HNF-3β、ALB、CK18蛋白;免疫荧光定位示ALB表达于胞浆和胞膜,而CK18表达于胞浆.诱导21 d,细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒;在诱导过程中,不同的时间点检测到细胞分泌ALB、合成尿素的量的变化.结论我们建立的以30ng/ml FGF、30 ng/ml OSM为主的诱导培养体系,可以有效地促进骨髓干细胞体外定向转化为肝细胞.     

经肝动脉骨髓干细胞移植治疗肝硬化的初步临床应用

目的探讨经肝动脉自体骨髓干细胞肝内移植治疗失代偿期肝硬化的临床应用可能性及效果。方法20例失代偿期肝硬化患者，乙型肝炎后肝硬化19例，酒精性肝硬化1例。Child—Pugh分级：A级2例，B级6例，C级12例。所有患者术前均行影像学及肝脏功能等检查。移植术当日抽取患者自体骨髓30～50ml，分离出骨髓干细胞，经肝固有动脉注入。对于造影发现肝内有单发小肝癌者，先行肝段超选择TACE治疗，再选择性插管至正常肝动脉供血区，注入骨髓干细胞。术后1周、2周、1月观察患者临床症状、体征，复查肝功能等实验室指标。结果2例造影发现合并单发小肝癌。20例患者中，14例有效，6例无效。所有病例术后均未出现发热、过敏反应及其他不适。结论经肝动脉行自体骨髓干细胞移植安全可行；部分肝硬化患者用此方法治疗近期有效；治疗中通过肝动脉造影可能发现其他影像学检查未能显现的早期肝癌。     

骨髓干细胞在血管外科的基础研究与临床应用

干细胞是一类具有自我复制和多项分化潜能的原始细胞，包括胚胎干细胞和成体干细胞，生命体正是通过于细胞的分裂来实现细胞的更新及保证持续生长。而干细胞的发育也受到多种内在机制和微环境因素的影响。     

基质条件对骨髓间充质干细胞定向肝细胞分化率的影响

在体外适当条件下，骨髓来源的干细胞可跨胚层分化为肝细胞和胆管细胞。但肝细胞作为“锚着”性细胞，体外培养时，需要接触与基底膜相似的物质才能稳定而充分地发挥其功能。由骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导产生的肝细胞也需要接触基底膜。我们通过应用多聚赖氨酸和胶原蛋白作为基底膜结构，在其中向肝细胞诱导，来探讨提高诱导分化率的机制和条件。     

体外诱导小鼠骨髓干细胞转化为肝细胞的实验研究

目的模拟体内肝脏发生发育的环境和条件，建立以细胞因子为主的体外诱导培养体系，探讨骨髓干细胞体外转化肝细胞的可行性。方法获取小鼠骨髓干细胞，建立以细胞因子为细胞诱导的培养体系。在细胞培养过程中，观察细胞形态和数量，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝细胞特异性基因的表达。Western blot和流式细胞仪检测ALB和CK18在蛋白水平的表达情况。糖元染色法行细胞糖原染色、尿素合成试验检测细胞的合成和代谢功能。结果在诱导培养12d，可以观察到多极性的肝细胞样细胞。且细胞逐渐增多、集落不断增大。诱导细胞在培养7d开始表达AFP mRNA并维持到第21天。此后表达逐渐减弱；培养7天开始表达ALB mRNA和CK18 mRNA。随着培养时间的延长表达不断增强；培养14d开始表达TTR mRNA，随着培养时间的延长表达不断增强。通过Western blot检测，诱导21d的细胞表达ALB和CK18蛋白，流式细胞术分析ALB阳性细胞的比例为60．45％，CK18阳性细胞的比例为67％。诱导培养21d，细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒；诱导培养6d，细胞开始合成尿素，尿素合成功能随诱导时间的延长而增强，于第15天达到高峰。结论我们建立的以细胞因子FGF、HGF、OSM、EGF为主的细胞诱导培养体系能促使骨髓干细胞定向转化为肝细胞。     

骨髓型肝干细胞

依据干细胞定义 ,目前在胚胎肝组织和成年肝组织中都已经找到了具有自我更新能力、具有分化形成肝细胞和胆管细胞潜能的肝干细胞〔1,2〕,使得长达 10余年关于在肝组织中是否存在肝干细胞的争论得以结束。最近 ,又有学者发现在骨髓细胞或称造血细胞中也存在肝干细胞〔3～ 5〕。为了更好地认识和利用肝干细胞 ,本文把这种来源于骨髓造血组织的肝干细胞称为骨髓型肝干细胞 ,并将其研究现状综述如下。1.骨髓型肝干细胞不仅存在 ,而且可以在肝内分化形成肝细胞和胆管细胞 ,并且参与肝损伤后的修复与再生。Theise等〔3〕报道 ,雌性小鼠在接受致死…     

自体骨髓干细胞移植治疗下肢缺血的研究

目的　为临床探索一种更简便安全的下肢动脉缺血性疾病的治疗途径。方法　建立鼠后肢缺血动物模型 ,将取于自体的骨髓细胞制成悬液注射于缺血部位 ,4周后行动脉造影并取标本 ,测定毛细血管密度。结果　动脉造影显示大鼠缺血肢体侧支动脉明显增多 ,毛细血管密度增加。结论　自体骨髓干细胞移植可望成为一种简单的、有效的治疗下肢缺血的方法     

骨髓间充质干细胞可分化为搏动的心肌细胞研究

骨髓间充质干细胞 (MSCs)是一种具有多向分化潜能的多能干细胞 ,在特定的条件下可向成骨细胞、软骨细胞、肌腱、肌细胞、脂肪细胞、骨髓基质细胞、心肌细胞、血管内皮细胞及神经星状细胞分化[1 3 ] 。为此 ,我们进行了MSCs向心肌细胞的体外诱导分化的研究 ,为临床应用提供理论依据和技术支持。一、材料与方法1.试剂Percoll为Pharmacia公司产品。DMEM和 5 氮杂胞苷购自Sigma公司。α 横纹肌动蛋白免疫组织化学试剂盒购自北京中山生物公司。胎牛血清(FBS)购自天津血液病研究所。2 .动物选择 :选用日本大耳白兔 48只 ,雌雄不限 ,年龄 3…     

肝细胞生长因子诱导人骨髓来源的多能成体祖细胞向肝样细胞分化的实验研究

作为骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的亚群细胞多能成体祖细胞（MAPCs）,由于其取材方便,可以来自病人自身,无排斥反应,具有重要的临床应用价值.本实验即在成功分离并培养人骨髓源MAPCs（hMAPCs）的基础上,用肝细胞生长因子（HGF）诱导其向肝细胞方向分化,并采用不同方法鉴定细胞分化能力,试图为生物人工肝及肝细胞移植等找到新的种子细胞来源.     

自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死患者的护理

采用自体骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死患者。提出术前加强心理护理，认真做好各项检查及准备工作；术中严密监测生命体征，及时纠正心律失常；术后密切观察病情变化，做好详细的出院指导，有利于减少术后并发症的发生．促进患者早日康复。     

自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化

目的 探讨自体骨髓干细胞移植对失代偿期肝硬化患者的疗效.方法 回顾性分析2009年7月至2010年3月解放军第一○五医院收治的28例失代偿期肝硬化患者的临床资料.抽取患者骨髓后,体外分离、纯化骨髓间充质干细胞(BMSCs),经股动脉置管至肝固有动脉,再将BMSCs植入肝脏.自体移植后观察患者临床症状、体征,术前、术后第2、4、8、12周检测肝功能生化指标.组间比较采用单因素方差分析,当方差齐时,组间多重比较采用LSD法分析,若方差不齐则采用Dunnett's法.结果 本组中,26例患者术后1周食欲增加,乏力明显改善;23例术后第4周腹腔积液明显减少或消失.至第12周,患者ALT由(99±36)U/L降至(48±26)U/L,AST由(86±36)U/L降至(46±22)U/L,TBil由(38±16)μmol/L降至(18±13)μmol/L,Alb由(29±4)g/L升至(35±5)g/L,PT由(19±4)s降至(13±4)s.治疗前、后患者各实验室指标比较,差异有统计学意义(F=267.35,143.52,218.74,125.57,331.25,P<0.05).本组患者未见发热、皮疹、过敏反应等并发症,其中1例髂后上棘穿刺点出现血肿,1周后自行消退;1例在施行BMSCs移植过程中出现肝区不适,移植完毕拔管后症状消失;1例于术后3个月因上消化道大出血死亡.结论 BMSCs移植治疗失代偿期肝硬化近期安全有效,远期效果有待进一步观察.