六种中草药有效成分对钙调素依赖环核苷酸磷酸二酯酶的作用

用正交设计观察了6种中草药有效成分和三氟啦嗪（TFP）对钙调素依赖环核苷酸磷酸二酯酶（CaM-PDE）激活活性的影响，结果表明：a）两面针碱（Nit）、槲皮素（Que）和TFP对CaM－PDE激活活性具有明显抑制作用（P＜0．01），其抑制强度：Qne＞TFP＞Nit；小檗碱（Ber）、麻黄碱（Eph）和鱼腥草素（Hou）对CaM－PDE无明显作用（P＞0．05），青藤碱（Sin）对酶的作用可疑；c）Qne与TFP、Nit与TFP之间有协同作用。结果提示Nit和Que可能是CaM拮抗剂，两者的作用位点似乎不同于TFP。     

钙调素－环核苷酸磷酸二酯酶测定体系的建立

用热处理，ＤＥＡＥ－ＳｃｐｈａｄｅｘＡ－２５层折，电泳和电渗析等方法，从牛睾丸组织中分离和纯化钙调素（ＣａＭ）；用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀和ＤＥＡＥ－ｃｃｌｌｕｌｏｓｅ层析等方法，从牛心肌中分离和纯化ＣａＭ依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ），从而建立了ＣａＭ－ＰＤＥ测定体系。这对筛选ＣａＭ的拮抗剂和激活剂提供快速可靠的研究方法。     

钙调素的环核苷酸磷酸二酯酶检测法

从牛脑中提取钙调素依赖性的环核苷酸磷酸二酯酶和钙调素,利用钙调素对磷酸二酯酶的激活作用和孔雀石绿定磷法测定生物样品中具有生理活性的钙调素含量,灵敏度达到２０ｎｇ,检测范围２０￣４０ｎｇ。此法操作简便,不需特殊仪器,较适合一般研究室使用。     

钙调素－环核苷酸磷酸二酯酶测定体系的建立

用热处理，ＤＥＡＥ－ＳｃｐｈａｄｅｘＡ－２５层折，电泳和电渗析等方法，从牛睾丸组织中分离和纯化钙调素（ＣａＭ）；用（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀和ＤＥＡＥ－ｃｃｌｌｕｌｏｓｅ层析等方法，从牛心肌中分离和纯化ＣａＭ依赖环核苷酸磷酸二酯酶（ＰＤＥ），从而建立了ＣａＭ－ＰＤＥ测定体系。这对筛选ＣａＭ的拮抗剂和激活剂提供快速可靠的研究方法。     

二氢吡啶类钙拮抗剂对钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的抑制机理

用单克隆抗体纯化的60kd为亚基的牛脑钙调素依赖性环核苷酸磷酸二酯酶的动力学研究表明,二氢吡啶类钙拮抗剂Nicardipine和Felodipine是该酶的“部分”竞争性抑制剂。因为近饱和浓度的药物抑制该酶活性仅能达到某限定值,且Dixon作图法不呈直线关系。该酶被一定浓度Felo-dipine抑制时,增加Nicardipine浓度可逆转酶的抑制而达到Nicardipine的最大抑制水平,Nicardipine不影响典型的竞争性抑制剂甲基异丁基黄嘌呤对该酶的抑制作用,说明该酶活性中心以外存在和二氢吡啶结合的部位。     

葡甲胺-cAMP对环核苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

葡甲胺环磷酸腺苷(MGM-cAMP)可被依赖钙媒介蛋白的环核苷酸磷酸二酯酶(CaM-PDE)所水解,其降解速度仅及天然底物cAMP的75％。原因在于葡甲胺配基对PDE本身有抑制作用,抑制率约25％。MGM—cAMP对PDE的抑制作用可减慢分解,有利于其在体内发挥治疗作用。     

叶穗香茶菜甲素与DMF包结物的晶体结构研究

叶穗香茶菜甲素（PhyllostachysinA）与DMF包结物的化学计量式为C20H26O6·C3H7ON，用X衍射分析法测定其晶体结构。结晶呈无色透明块状，实验用晶体尺寸为0.6mm×0．6mm×0．8mm，属正交晶系，空间群为P212l2；，晶胞参数为a=10.895（3）、b=13.237（2）和c=15．373（3）A，晶胞体积为V=2217.0（3）A3，晶胞内分子数Z=4，计算晶体密度Dc=1．302gcm－3。应用直接法解析分子结构，以最小二乘法修正结构参数，最终可靠因子Rf=0．060，Rw=0．083。结果表明该结构是由叶稳香茶菜甲素与DMF分子以1：1比例通过氢键包结而形成的隧道型包结物。     

苄基异喹啉类生物碱及其类似物抑制钙调素刺激的磷酸二酯酶的活力

苄基异喹啉类化合物拮抗钙调素(CaM),对环核苷酸磷酸二酯酶(CaM-PDE)产生抑制作用。它们的拮抗能力与分子中非极性端的疏水性相关,增强疏水性能增强拮抗性;极性端为叔胺或季铵离子时,抗CaM性基本不变;在受试的化合物中,D_3的抗CaM活性最强,IC_(50)值为2.8μmol/L。     

环核苷酸磷酸二酯酶活性的反相高效液相色谱测定法

本实验应用反相高效液相色谱法(RP—HPLC)测定环腺苷酸(CAMP)和环鸟苷酸(CGMP)的含量，根据底物量的减少，确认了犬气管平滑肌组织中环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)活性的存在。并首次采用甲醇-磷酸缓冲液(10：90)的非梯度洗脱法，取得良好色谱分离效果，为研究犬气管平滑肌组织中PDE活性提供了简便而有效的测定方法。     

猪肝中环鸟苷酸刺激的磷酸二酯酶的提纯和性质

猪肝中环岛苷酸(cCMP)刺激的磷酸二酯酶(下简称cGMP-PDE)已经被提纯。纯酶的比活力增加约10,000倍,cGMP刺激活力增加20倍以上,PAGE、SDS-PAGE、等电聚焦和PDE活力染色均显示为单一区带,亚基Mr～115KDa,Sephacryl S-300凝胶过滤测得Mr为270KDa,Stokes半径5.41nm,表明这种酶至少由二个相同的亚基所组成。该酶的PI为4.3。以cAMP为底物,Km值存在或不存在cGMP时分别为30μM和210μM。该酶比较稳定,-20℃贮存五个月,酶的刺激活力仍无明显变化。     

胃癌环核苷酸磷酸二酯酶的组织化学研究

本文应用环核苷酸磷酸二酯酶(CPDE)组织化学方法,对43例胃癌组织细胞内cAMP-PDE和cGMP-PDE的活性和分布进行了观察,并对两种CPDE与胃癌的关系作了初步探讨。资料表明,胃癌时两种CPDE阳性率均较“正常”胃粘膜显著降低(P<0.01),且其活性和分布的异常与胃癌的恶性程度密切相关。本文结果提示,CPDE可能通过调节细胞内环核苷酸的含量进而调控细胞在形态学上的分化,而cGMP-PDE活性的降低在减少细胞内cGMP的降解,提升细胞内cGMP水平,使cAMP/cGMP比值降低,进而导致细胞去分化和恶性生长以及最终引起癌变等方面可能起着更为重要的作用。     

大鼠心肌环核苷酸系统的增龄变化

测定不同月龄大鼠心室肌中cAMP、cGMP和钙调素(CaM)含量,及腺苷酸环化酶(AC)基础活性、AC肾上腺素激活活性、cAMP磷酸二酯酶(cAMP-PDE)活性。结果:cAMP、AC基础活性和AC肾上腺素激活活性随大鼠月龄增长而明显降低,cAMP/cGMP比值和CaM含量24月龄鼠明显低于10月龄鼠,cGMP含量10月龄鼠明显低于2月龄鼠,cAMP-PDE活性10月龄鼠明显高于2月龄鼠。提示心肌环核苷酸系统随大鼠月龄的增加而变化。     

胃癌组织环核苷酸磷酸二酯酶与小肠吸收细胞标志酶的比较研究

本文对50例胃癌组织中环核苷酸磷酸二酯酶的活性和分布与小肠吸收细胞标志酶AKP、LAP的表达进行了比较研究。结果显示:环核苷酸磷酸二酯酶与胃癌细胞AKP和LAP的表达呈正相关。并对环核苷酸磷酸二酯酶与胃癌细胞吸收功能分化的关系及其生物学意义作了初步探讨。     

正常成人血浆环核苷酸水平

本文应用~(125)I-cAMP及~(125)I-cGMP放射免疫分析法测定健康成人血浆中环核苷酸的含量。血浆中cAMP含量,男性为24.75±7.41Pmol/ml,女性为23.59±5.71Pmol/ml。cGMP含量,男性为4.04±1.58Pmol/ml,女性为4.88±1.35pmol/ml。cAMP/cGMP含量之比值,男性为6.96±2.58,女性为4.97±1.41。经统计学处理(t检验),男女之间血浆cAMP含量无显著性差异(P>0.05),而cGMP含量及cAMP/cGMP含量之比值有显著性差异(P<0.01),本文认为这可能与女性月经周期内分泌功能改变有关。     

胸导管引流对慢性哮喘病人外周血淋巴细胞内环核苷酸代谢的影响

观察7例慢性哮喘病人胸导管引流治疗前后外周血淋巴细胞内 cAMp/cGMP 值的变化。结果发现,慢性哮喘病人外周血淋巴细胞内 cAMP/cGMP 的值较正常人低(P<0.001);胸导管引流治疗后,哮喘病人外周血淋巴细胞内 cAMP/cGMP 值较治疗前升高(P<0.01)。提示,慢性哮喘病人外周血淋巴细胞功能异常、活性增强,这可能是哮喘发病的重要原因之一。胸导管引流引起的免疫抑制作用,一个重要的机理就是影响淋巴细胞内环核苷酸的代谢,而使淋巴细胞的活性降低,这可能也是胸导管引流治疗慢性哮喘的机理之一。