环介导等温扩增技术在检测痰标本结核分枝杆菌中的应用

目的评价结核分枝杆菌环介导等温扩增技术（LAMP）快速检测试剂盒的临床应用效果。方法选取肺结核患者183例（肺结核组）和非肺结核患者120例（对照组）。采用涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP对痰标本进行检测,采用结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒（TB- PCR）检测罗氏培养与LAMP结果不符的标本,分析LAMP与罗氏培养的检出率及两者的符合率。结果去除经鉴定为非结核分枝杆菌的10例标本,涂片抗酸染色、罗氏培养法和LAMP的阳性检出率分为64.1%（111/173）、64.7%（112/173）、78.6%（136/173）。LAMP与抗酸染色、罗氏培养阳性检出率的差异有统计学意义（P＜0.01）,抗酸染色与罗氏培养比较差异无统计学意义（P＞0.05）。以罗氏培养为金标准,LAMP检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.5%（108/122）、82.3%（149/181）、77.1%（108/140）、91.4%（149/163）,LAMP检测与罗氏培养的符合率为84.8%（257/303）。结论结核分枝杆菌环介导等温扩增技术的灵敏度和特异度高,具有简单易行、快速准确的特点,在肺结核患者的早期诊断中将发挥重要作用。     

三种方法检测结核分枝杆菌的比较

目的比较PCR技术与抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,及在临床诊断中的应用价值。方法对108例临床确诊的结核病患者、90例结核性胸膜炎患者的痰标本和50例非结核患者痰标本应用PCR法、痰涂片抗酸染色法和改良罗氏培养法检测,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为44.4%,改良罗氏培养法阳性率为57.4%,PCR技术检测阳性率为80.5%。结论 PCR技术是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果.方法 80份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较.结果 RT-PCR法、菌培养法、染色法的检出率分别为93.75%、71.25%、56.25%.RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法,菌培养法检出率高于染色法.结论 荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便快速、敏感、特异的检测,值得推广应用.     

痰标本直接涂片镜检与培养法联合检测对肺结核的诊断价值

目的：评价肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌的直接涂片显微镜检和培养检查的临床效果。方法：采用直接厚涂片萋-尼法抗酸染色显微镜检和BACTEC—TB960快速培养系统,对670例肺结核患者痰标本进行检测。结果：快速培养法检测的阳性率为36．6％,直接涂片镜检的阳性率为24.6％,两种检测法的阳性率差异有统计学意义（P〈0．01）;两种方法联合检测的阳性率为41．0％,高于培养法阳性率（P〈0．05）。痰标本的留取时间对培养法检出率有很大影响,晨痰检出率高于即时痰（P〈0．01）。结论：采用直接涂片镜检与培养法联合检测,是提高肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌检出率的有效方法,同时还应重视痰标本留取时间对检出率的影响。     

噬菌体生物扩增法检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌

目的探讨噬菌体生物扩增法在检测脓肿型颈部淋巴结结核患者脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值,寻找一快速检测方法。方法采用噬菌体生物扩增技术对21例脓肿型颈部淋巴结结核患者的脓液标本进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养。结果噬菌体生物扩增法阳性率为47.6%（10/21）,涂片抗酸染色阳性率为28.6%（6/21）,罗氏培养阳性率为42.8%（9/21）。检验所需时间：传统的罗氏培养法需8周,而噬菌体生物扩增法仅需2d。结论噬菌体生物扩增法检测颈淋巴结脓液中结核分枝杆菌阳性率高于传统方法,且耗时明显缩短。 关键词：颈部淋巴结结核;结核分枝杆菌;噬菌体生物扩增法     

痰中结核分枝杆菌利福平耐药性检测的研究

目的以比例法为检测标准,了解应用噬菌体生物扩增技术（PhaB法）检测结核分枝杆菌利福平耐药性应用价值。方法选择涂片阳性和涂阴培阳病人标本,利用PhaB法对结核分枝杆菌利福平的耐药性进行直接和培养后检测。结果156例标本中,112例抗酸染色（＋）以上,44例（＋）以下及涂阴培阳。PhaB法对（＋）以上和（＋）以下及涂阴培阳的痰标本检测结核分枝杆菌的敏感性、特异性、符合率分别为82．61％、96．63％、93．75％和80．00％、100．00％、95．46％。结论噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性具有较高的敏感性和特异性,与比例法符合率高。     

耐药肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌L型四种检测方法比较

目的:比较耐多药肺结核患者痰标本中结核分枝杆菌L型的四种实验室检查方法及其临床意义.方法:对103例耐多药肺结核患者的痰标本分别采用萋-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法、改良罗氏培养法、聚合酶链反应(PCR)和结核分枝杆菌L型培养法进行检测.结果:结核分枝杆菌L型培养阳性率高于抗酸染色涂片、改良罗氏培养和PCR检测(P＜0.05～P＜0.005).结论:结核分枝杆菌L型培养可提高结核分枝杆菌的阳性检出率,对结核病的早期、快速诊断具有重要价值;耐多药肺结核患者有较高的结核分枝杆菌L型感染率,这也是结核病程缓慢变化、复发、难治的重要原因.     

检测痰中结核杆菌几种方法的对照

目的 探讨建立快速、准确的痰结核分枝杆菌检测方法.方法 采用直接涂片抗酸染色法、离心沉淀集菌法和结核菌培养法对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较.结果 培养法检出率最高为14.8%.但检测时间较长,离心沉淀集菌法次之为14.5%,直接涂片抗酸染色法检出率最低为10.1%.结论 离心沉淀集菌法找痰结核分枝杆菌快速、安全、简单易行,在肺结核的早期诊断中能发挥重要作用.     

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法，探讨荧光PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针，并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本，应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果荧光定量PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100％、30％。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法，具有重要的应用价值。     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值.方法应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本.结果痰标本3种方法检测结果比较236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(X2=77.706,P＜0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(X2=95.678,P＜0.01).结论FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法.     

套式PCR及测序法检测痰中结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变

目的应用套式PCR及测序法直接检测痰中结核分枝杆菌相关的embB基因突变，以期建立一种直接、快速、准确地检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的实验方法。方法采用套式PCR扩增技术及测序法直接检测130例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌embB基因突变情况，同份痰标本同时做涂片抗酸染色、罗氏培养及菌型鉴定。结果29例耐乙胺丁醇标本有18例发生基因突变，均为306位密码子突变，基因突变率为62．1％（18／29）。结论套式PCR及测序法可望成为一种快速、特异、准确地检测痰中结核分枝杆菌embB基因突变的好方法。     

五种检测方法在结核病诊断中的应用评价

目的评估涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、XPert MTB/RIF法、结核分枝杆菌RNA荧光定量PCR法、结核分枝杆菌DNA荧光定量PCR法在结核病诊断中的应用价值。方法对374例疑似肺结核病患者、120例肺结核患者及70例非结核病患者的痰液标本分别用涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、XPert MTB/RIF、TB-RNAPCR、TB-DNA PCR进行结核分枝杆菌检测,将检测结果进行分析和比较。结果涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法、XPert MTB/RIF、TB-RNA PCR、TB-DNA PCR检测374例疑似肺结核病患者痰液标本阳性率分别为6.68%、13.37%、20.05%、19.25%、22.73%,其中XPert MTB/RIF、TB-RNA PCR、TB-DNA PCR检测阳性率差异无统计学意义(χ2=1.51,P0.05),TB-RNA PCR阳性率高于改良罗氏培养基培养法(χ2=4.75,P0.05),改良罗氏培养基培养法高于涂片抗酸染色法(χ2=9.28,P0.05)。五种方法检测120例肺结核患者及70例非结核病患者的敏感性分别为20.83%、35.00%、50.83%、47.50%、54.17%,特异性分别为100.00%、100.00%、98.57%、100.00%、98.57%。结论 XPert MTB/RIF、TB-RNA PCR、TB-DNA PCR与涂片抗酸染色法、改良罗氏培养基培养法相比,具有敏感、快速、可定量的特点,可以作为结核病辅助诊断的有效检测方法。     

环介导等温扩增法对痰标本中结核分枝杆菌检测效果的评估

目的 探讨环介导等温扩增法对痰标本中结核分枝杆菌的检测效果。方法 选取痰标本422个,以罗氏培养基培养法检测结果为金标准,开展环介导等温扩增法检验,比较两种检查方法的准确率。结果 罗氏培养基培养法和环介导等温扩增法的检测阳性率高于直接涂片染色法(P0.05),同时罗氏培养基培养法和环介导等温扩增法的检测阳性率差异无统计学意义(P0.05)。结论 环介导等温扩增法可有效检测出痰标本中结核分枝杆菌。     

LAMP技术在基层结核病诊疗机构推广应用研究

目的探讨环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测结核分枝杆菌技术在基层结防机构推广应用的可行性。方法选取深圳市宝安区疑似肺结核初诊患者300例,分别采用抗酸染色涂片法、L-J罗氏培养法及LAMP法检测痰标本中结核分枝杆菌。采用卡方检验和Kappa检验分析三种检测方法的一致性,以P0.05为差异有统计学意义。结果 300例痰标本中,抗酸染色涂片法、L-J改良罗氏培养法和LAMP法的阳性检出率分别为13.7%(41/300)、20.7%(62/300)和22.0%(66/300);LAMP法灵敏度、特异度和诊符率分别为44.2%(61/138)、96.9%(157/162)、72.3%(218/300)。同改良罗氏培养法相比,Kappa值=0.94,P=0.219,差异无统计学意义。与涂片法相比,Kappa值=0.674,P0.001差异有统计学意义。结论 LAMP法用于痰标本中结核分枝杆菌检测,其效能同罗氏培养法相当,同直接涂片法相比,LAMP法能够大幅提高阳性检出率,且技术操作较简便,具有较好的临床应用和推广前景。     

噬菌体裂解法鉴定结核分枝杆菌的分析

目的 通过对噬菌体裂解法与罗氏培养法检测结核分枝杆菌的情况进行比较，探索简便、快速、灵敏的结核分枝杆菌检测方法。方法 对2004年9-12月在奉贤区疾病预防控制中心结核病门诊就诊的297位患者的痰标本用涂片法进行筛选，对筛选出的加份阳性标本分别用噬菌体裂解法和罗氏培养法进行检测。结果 罗氏培养法检测到阳性标本32份，噬菌体裂解法检测到阳性标本31份，二者检出的阳性率比较。无显著性差异（X^2=0．0747，P=0．785）。噬菌体裂解法的灵敏度为84．4％，特异度为50．0％。结论 噬菌体裂解法可以快速、简便地检测结核分枝杆菌，并且具有较高的敏感性和一定的特异性。     

肺结核病人两种痰涂片染色法结果比较

目的比较痰涂片两种染色方法对肺结核病人发现的作用。方法采集初诊活动期肺结核病例痰标本进行抗酸染色、荧光染色,并用酸性改良罗氏培养基法进行分离培养结核分枝杆菌,比较痰涂片阳性率。结果1344份痰标本中抗酸染色阳性率11．6％、荧光染色阳性率13．8％,差异有统计学意义（χ2=21．43,P〈0．01）;246份痰培养阳性标本中抗酸染色和荧光染色镜检结果1＋时阳性率分别为20．3％、29．3％,差异有统计学意义（χ2=13．78,P〈0．01）。结论两种痰涂片染色方法对初诊结核病人发现差异有统计学意义,特别是对痰标本中低密度结核分枝杆菌发现荧光染色效果更好,应加强基层技术培训,提高结核病人发现率。     

改良痰结核分枝杆菌L型涂片检测方法的建立和应用

目的建立一种快速简便、灵敏度高、特异性好的痰结核分枝杆菌L型的涂片染色检测方法。方法对常规的抗酸染色法进行方法学改良,以特异性基因扩增诊断法为标准,分析评价改良方法的灵敏度、特异性和总有效检出率等统计学指标;分别采用本改良抗酸染色法(以下简称本改良法)、常规抗酸染色法和改良IK抗酸染色法检测468例临床标本,对三种方法的阳性检出率进行统计学比较。结果本改良法阳性检出率与特异性基因扩增诊断法、改良IK抗酸染色法比较均无明显差异(χ2=0.25,P=0.6171;U=0.155,P=0.4404),但明显高于常规抗酸染色法(U=3.713,P<0.0010);本改良法灵敏度、特异性和总有效检出率与改良IK抗酸染色法相似,但高于常规抗酸染色法。同时,本改良法所需时间少于改良IK抗酸染色法(5minvs24h)。结论成功建立了一种快速简便、灵敏度高、特异性好的痰结核分支杆菌L型的涂片染色检测方法,适合临床推广应用。     

噬菌体生物扩增法在关节结核诊治中的临床应用研究

目的 探讨噬菌体生物扩增法(phage amplified biologically assay,PhaB)快速检测关节结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值.方法 采用PhaB技术对关节结核患者36例,非结核性关节炎患者20例关节液中的结核分枝杆菌进行检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、罗氏培养.结果 36例关节结核积液,PhaB阳性率为47.2%(17/36)、涂片抗酸染色阳性率为2.7%(1/36)、罗氏培养阳性率为5.5%(2/36).20 例非结核性关节炎患者PhaB、涂片抗酸染色、罗氏培养特异性均为100.0%.结论 PhaB法检测关节积液中结核分枝杆菌只需2d,操作简便、灵敏度高、特异性强,不需要特殊仪器设备,可作为诊断关节结核的一种好方法.     

痰液标本不同检测方法对结核杆菌检测比较

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果,为检测方法的选择提供参考。方法60份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别用涂片抗酸染色法、结核分支杆菌培养法和荧光定量法（RT—PCR）检测,分析三种检测方法的检出率、检测时间及检测成本。结果RT—PCR检出率为95．0％,菌培养法检出率为70．0％,染色法检出率为55．0％。RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法;菌培养法检出率高于染色法,染色法检出时间低于菌培养法及RT-PCR法,且检测成本低于菌培养法及RT—PCR法;RT—PCR法检出时间低于菌培养法,但检出成本高于菌培养法。结论不同的检测方法痰液结核分支杆菌的检测效果存在差异,应依据临床用途选择应用。     

噬菌体生物扩增法快速鉴定结核分枝杆菌的临床价值

目的:探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法:应用Phab、罗氏法及涂片法共同检测236例痰标本。结果:痰标本3种方法检测结果比较:236份临床确诊的活动性肺结核患者痰标本,涂片、罗氏培养和Phab法检查结果分别有64份(27.1%)、78份(33.1%)和114份(48.3%)阳性;比较Phab与涂片和培养的阳性检测率,Phab检出率远高于涂片法,差异有统计学意义(χ2=77.706,P<0.01),Phab检出率高于罗氏法检出率,差异有统计学意义(χ2=95.678,P<0.01)。结论:FASTPlaque TB方法能快速、简便地检测结核分枝杆菌,且检出率较高,可作为结核病诊断的重要方法。