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1.
目的表达口蹄疫病毒3D聚合酶,并制备兔抗3D多克隆抗体。方法采用PCR方法扩增口蹄疫病毒(FM-DV)3D聚合酶基因,经BamHⅠ和NdeⅠ双酶切后插入pET-30a(+)原核表达载体,构建的pET-3D重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化蛋白免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,以Western blot鉴定抗体特异性,并以间接ELISA方法测定其效价。结果SDS-PAGE电泳分析显示,表达的目的蛋白约为46ku,与预期结果相符,制备的多克隆抗体效价达1∶8000以上,且具有较高的特异性。结论制备了具有高亲和性和特异性的3D聚合酶多克隆抗体,为3D聚合酶的生物学功能和抗原表位研究奠定了基础。 相似文献
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目的原核表达口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体P1基因并纯化。制备其兔多克隆抗体并进行鉴定。方法从重组克隆载体pGEM-P1中扩增编码P1区结构蛋白的基因片段。并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中。原核表达与蛋白纯化后,免疫新西兰兔,制备P1蛋白抗血清。抗体效价及特异性检测分别用间接ELISA和Westernblot法鉴定。结果在大肠杆菌中成功表达了分子量约为80.475kDa的P1蛋白。ELISA法检测抗血清的效价可达到1∶25600,Westernblot分析抗血清可与原核表达的P1蛋白特异性结合。结论在大肠杆菌中成功表达了口蹄疫病毒Asia1/HeB株衣壳蛋白前体,并制备了P1衣壳蛋白前体的抗血清,为进一步研究P1区结构蛋白的结构、功能以及抗原表位的确定奠定了基础。 相似文献
3.
目的 对弓形虫缓殖子期抗原1(BAG1)基因进行优化、克隆、原核表达,表达产物纯化后免疫小鼠,制备BAG1多克隆抗体,评价重组蛋白的免疫原性,并观察BAG1在虫体内的定位。方法 对bag1基因序列进行筛选和优化,利用生物信息学方法分析其编码蛋白的氨基酸序列结构和功能,预测其免疫原性。将合成的pET28a(+)-bag1质粒转化至BL21感受态细胞中,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度l mmol/L,37℃诱导4 h,用HIS标签蛋白纯化试剂盒纯化表达蛋白。取纯化蛋白做SDS-PAGE凝胶电泳分析,用BCA法测定蛋白浓度。取7只BALB/c小鼠,取纯化的BAG1蛋白与等体积的弗氏佐剂按双推法混匀,皮下多点注射免疫小鼠,每鼠每次注射蛋白25μg(第一次使用弗氏完全佐剂,后两次均使用弗氏不完全佐剂,每隔两周免疫一次),末次免疫4 d后摘眼球取血,分离血清,以此为一抗,采用Western blot检测碱性条件下我国流行优势基因型Chinese 1虫株(TgCtwh6)速殖子向缓殖子转化及含有TgCtwh6包囊小鼠脑组织中的BAG1蛋白,间接免疫荧光(IFA)试验检测TgCt... 相似文献
4.
近年研究表明慢性心力衰竭与自身免疫显著相关,与β1-受体自身抗体的关系尤其受到关注。β1-受体自身抗体可以发挥部分肾上腺素能受体激动剂样作用,可能与心力衰竭患者易发心律失常有关,可以导致心肌β1-受体密度下调,促进心肌细胞凋亡,导致心力衰竭恶化。但β1-受体自身抗体与慢性心力衰竭的因果关系尚无定论,对于β1-受体自身抗体阳性的心力衰竭患者的治疗与阴性患者有无区别尚待研究。 相似文献
5.
目的应用人工合成多肽技术制备肺癌转移相关蛋白1(Lung Cancer Metastasis-Related Protein1,LCMR1)的多克隆抗体。方法运用生物信息学技术和人工合成多肽方法制备LCMR1特异性多肽,鉴定纯度后与牛血清白蛋白、匙孔血蓝蛋白进行偶联制备多肽抗原,然后免疫新西兰雄性白兔,获得抗血清,经亲和层析法纯化后,用ELISA法鉴定抗体效价,用Western Blot鉴定特异性。结果成功获得了LCMR1的多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1:100 000,Western Blot免疫印迹结果显示其具有抗原特异性识别。结论应用免疫原性肽抗体技术成功制备了LCMR1的多克隆抗体,为今后深入了解LCMR1基因的生物学功能提供了有用的研究工具。 相似文献
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抗极低密度脂蛋白受体多克隆抗体的制备及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为制备抗极低密度脂蛋白受体的多克隆抗体,以极低密度脂蛋白受体配体结合域上特定片段的合成肽免疫新西兰家兔,收集免疫前后动物的血清,通过酶联免疫吸附法及免疫印迹法对血清中抗体进行分析和鉴定。结果发现,已获得高效价的抗极低密度脂蛋白受体血清,可利用免疫印迹法检测人、鼠组织和细胞中的天然极低密度脂蛋白受体及其亚型的蛋白。此结果提示,抗极低密度脂蛋白受体多克隆抗体的制备为从蛋白水平研究极低密度脂蛋白受体提供了有效的工具。 相似文献
7.
近年来研究发现自身免疫机制参与心脏损伤,促进了心血管疾病的发生和发展.β1肾上腺素受体自身抗体(β1ARAb)是靶向心脏β1受体的自身抗体,可与心脏β1受体结合,激活相应细胞信号转导途径,在心肌病、心力衰竭、心房颤动等多种心血管疾病中起重要作用.对其作用机制的深入研究,有助于β1ARAb成为心血管疾病新的病因诊断标志物... 相似文献
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目的观察抗β1-肾上腺素受体(AR)抗体对大鼠T淋巴细胞的作用。方法用人工合成的β1-肾上腺素受体细胞外第二环肽段(β1-AR—ECⅡ)作为抗原主动免疫大鼠,采用流式细胞技术测定大鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化;观察抗β1-AR自身抗体对培养的淋巴结T细胞的影响。结果免疫组血清中T淋巴细胞亚群CD4^+/CD8^+在处理24h后开始升高,在第7天时达到高峰并持续2个月;抗β1-AR自身抗体可促进T淋巴细胞增殖,与β1-AR特异性阻断剂Metoprolol或β1-AR—ECⅡ共同作用时,可使抗体的促增殖效能显著减弱。结论抗β1-AR自身抗体可以使免疫系统失衡,促进T淋巴细胞的增殖。 相似文献
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卡维地洛对心脏β1、β2和α1受体自身抗体及心功能的影响 总被引:27,自引:0,他引:27
目的旨在探讨卡维地洛在慢性心力衰竭(心衰)中的治疗作用及其对抗心脏β1、β2和α1受体自身抗体的影响.方法 54例心衰患者随机分为卡维地洛组34例和常规治疗组20例.常规治疗组应用血管紧张素转换酶抑制剂、利尿剂和洋地黄制剂.卡维地洛组在此基础上加用卡维地洛.随访半年,治疗前后采用超声心动图和酶联免疫法分别测定心功能和β1、β2和α1受体自身抗体进行疗效观察.结果 (1)治疗后卡维地洛组左室舒张期末内径和左室收缩期末内径分别为(57.50±7.29)mm和(43.17±8.27)mm,显著低于常规治疗组(64.09±7.40)mm和(52.93±8.35)mm;左室射血分数为(50.41±10.91)%,显著高于常规治疗组(41.70±7.45)%,P<0.01.(2)治疗后卡维地洛组三种抗体阳性率及抗体滴度均较治疗前显著降低(P<0.05),且卡维地洛组三种抗体阳性率及三种抗体滴度(分别为1∶ 72.44、1∶ 61.66和1∶ 67.30)均较常规治疗组(分别为1∶ 113.24、1∶ 110.66和1∶ 113.24)显著降低(P<0.05).结论卡维地洛通过β1、β2和α1受体阻滞作用,在改善心功能的同时降低肾上腺素能受体自身抗体的阳性率和抗体滴度,提示自身抗体参与心衰的发生、发展的病理生理过程,卡维地洛对其有抑制作用. 相似文献
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目的 观察β1及β3肾上腺素受体自身抗体(β1-AA及β3-AA)在缺血性心肌病心衰不同时期的分布特点,及探讨β受体阻滞剂治疗不同抗体分布特点患者的临床价值。方法 选择缺血性心肌病患者 60 例为心力衰竭组,健康对照组 50 例。心力衰竭组分别于入院即刻、琥珀酸美托洛尔缓释片治疗后7天、3月测定血浆β1-AA、β3-AA、氮末端脑钠肽前体( NT-proBNP) ,入院后24 h 内行心脏超声检查,测量左心室舒张末期内径( LVIDd) 和左心室射血分数( LVEF) ; 出院后1年随访其是否发生心血管事件( 包括心力衰竭、恶性心律失常、死亡等) 。结果:心衰组β1-AA/β3-AA值小于对照组(1.53±0.33vs1.76±0.68,p<0.05)。心功能Ⅳ级的缺血性心肌病急性发作期患者β1-AA/β3-AA较心功能Ⅲ级患者低(1.51±0.43vs 1.55±0.23,p<0.05)。随着心功能得到改善,β1-AA、β3-AA均有所下降,且二者比值短期内升高,后又有下降趋势(p<0.05)。出院后1年时间内,与未发生心血管事件的患者相比,发生心血管事件患者的后期β1-AA/β3-AA、服用β受体阻滞剂时间/病史均较低(P < 0. 01) ; 用全模型多元Logistic 回归分析,后期β1-AA/β3-AA、服用β受体阻滞剂时间/病史为缺血性心肌病患者独立预后指标( P < 0. 01) 。结论:β1-AA/β3-AA失调与缺血性心肌病心力衰竭之间存在联系,可用于临床指导β受体阻滞剂治疗缺血性心肌病心力衰竭。 相似文献
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最近我们发现 ,抗β1 肾上腺素能受体抗体 (以下简称抗 β1 受体抗体 )在肝炎病毒性心肌炎中检出率较高 ,且与临床表现严重程度具有相关性〔1〕。本文旨在用乙型肝炎病毒 (HBV)接种小鼠 ,探索HBV诱导抗β1 受体抗体对心肌的作用。1 材料与方法实验组 (n =30 ) :将HBV( 8.4× 1 0 7拷贝 /L)与等体积完全弗氏佐剂混匀成乳化剂 ,取混合液1 0 0 μl每只小鼠腹腔注射 ,初次接种后的第 1 4天、2 8天和 42天各重复 1次。对照组 (n =30 ) :用0 .85 %氯化钠溶液与等体积的完全弗氏佐剂混匀后按同样的方法假性免疫。于实验第 0、35天眼内眦静… 相似文献
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目的明确免疫大鼠血清中抗β1、β3肾上腺素受体及M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类,为进一步研究此类抗体的作用机制提供实验依据。方法以合成的大鼠β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体细胞外第二环肽段为抗原分别主动免疫Wistar大鼠,应用免疫球蛋白纯化技术特异性提纯其血清中IgG类抗体,应用BCA进行蛋白定量,调整血清中蛋白量一致,用SA—ELISA法检测抗β1、β3肾上腺素受体和M2乙酰胆碱受体抗体的IgG亚类。结果免疫组中属于IgG2a亚类的抗β1肾上腺素受体抗体的A值为(0.45±0.01),明显高于对照组(0.08±0.003,P〈0.05);免疫组中属于IgG2b亚类的抗艮肾上腺素受体抗体的A值为(0.59±0.02),显著高于对照组(0.2±0.02,P〈0.05);免疫组中属于IgG2a亚类的抗M2乙酰胆碱受体抗体的A值为(0.56±0.04),显著高于对照组(0.12±0.01,P〈0.05)。结论免疫大鼠血清中抗β1肾上腺素受体抗体和抗M2乙酰胆碱受体抗体主要属于IgG2a亚类,抗β3肾上腺素受体抗体主要属于IgG2b亚类。 相似文献
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目的 在大肠杆菌中克隆表达和纯化寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)包膜糖蛋白(Envelope Protein,E)及第三结构域(Envelope DomainⅢ,EDⅢ),并制备两种免疫原的鼠多克隆抗体。方法 通过Vero-E6细胞培养扩增ZIKV,提取病毒总RNA并反转录为cDNA,利用E和EDⅢ基因的cDNA序列构建原核表达载体pET32a/E和pET28a/EDⅢ,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni+柱亲和层析法纯化蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清,间接ELISA法测定效价,Western Blot检测特异性。结果 成功表达并纯化重组蛋白E和EDⅢ,获得的多克隆抗体效价均达到1:409 600,Western Blot检测多克隆抗体可特异性识别重组E蛋白和EDⅢ以及天然E蛋白。结论 成功制备出特异性抗寨卡病毒E蛋白和EDⅢ的鼠源多克隆抗体,为深入探索寨卡病毒致病机制、检测方法和免疫策略奠定了研究基础。 相似文献
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目的表达及纯化单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)并制备多克隆抗体。方法双酶切pcDNA 3.1-HSV1-gD和pFastBacTM I质粒,gD基因克隆到pFastBacTM I载体,连接产物转化E.coli DH10Bac感受态细胞并鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD。将构建正确的重组杆粒转染Sf9细胞包装杆状病毒。杆状病毒经传代扩增后,诱导重组gD蛋白的表达,使用Ni-NTA亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组gD蛋白,进行15%SDS-PAGE电泳鉴定并采用肽指纹图谱分析纯化的gD蛋白。将纯化的gD蛋白进行热稳定性试验检测其在不同缓冲液条件下的稳定性。用重组gD蛋白免疫小鼠,利用ELISA法检测血清抗体滴度。结果成功构建重组质粒pFastBacTM I-gD,转化E.coli DH10Bac感受态细胞后,经蓝白斑筛选鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,鉴定正确的重组质粒感染Sf9细胞,包装出重组杆状病毒,获得滴度为8×108 pfu/ml的P3代杆状病毒。重组杆状病毒再次感染Sf9细胞能够表达高纯度可溶性的重组gD蛋白。不同缓冲液条件下重组gD蛋白稳定性良好。用gD蛋白免疫小鼠,获得ELISA效价为1×105的多克隆抗体。结论成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,表达的HSV-1 gD蛋白稳定及免疫原性良好,制备的抗gD蛋白多克隆抗体滴度高,为HSV-1的亚单位疫苗的制备鉴定了基础。 相似文献
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心力衰竭患者与心脏β2、α1肾上腺素能受体和血管紧张素Ⅱ1型受体的自身抗体 总被引:15,自引:1,他引:15
目的 本研究检测不同心脏病所致的慢性心力衰竭 (心衰 )患者 β2 、α1 肾上腺素能受体和血管紧张素Ⅱ 1型 (AT1 )受体的自身抗体 ,探讨心功能发生病理变化时 ,上述三种自身抗体的产生与疾病的相关性。方法 以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原 ,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术 ,随机检测 2 67例受试者血清中 β2 、α1 和AT1 受体的自身抗体。心衰组为 2 0 6例不同心脏病的心衰患者 ,其中缺血性心肌病 63例、扩张型心肌病 86例、高血压病 57例。正常组为 61例正常人作对照。结果 (1 )心衰组 β2 、α1 和AT1 受体的自身抗体阳性分别为 46 1 % (95/ 2 0 6)、48 5 % (1 0 0 /2 0 6)和 46 6 % (96/ 2 0 6) ,明显高于正常组的 8 2 % (5/ 61 )、9 8% (6/ 61 )和 1 3 1 % (8/ 61 ) ,P <0 0 1 ;(2 )心衰组自身抗体阳性患者的抗体滴度分别为 1∶89、1∶98和 1∶96 ,明显高于正常组的 1∶35、1∶32和 1∶31 ,P <0 0 1 ;(3)心衰组 β2 受体自身抗体阳性者 95例中 ,有 60例 (63 2 % )患者同时具有α1 受体的自身抗体 ,有 64例 (67 4% )患者同时具有AT1 受体的自身抗体 ,有 51例 (53 7% )的患者同时具有上述三种受体的自身抗体阳性。结论 β2 、α1 和AT1 受体的自身抗体不仅存在于多种心脏病心衰患者 相似文献
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目的对犬瘟热病毒(CDV)弱毒株M基因进行克隆及原核表达,并制备鼠抗CDV M蛋白多克隆抗体。方法针对犬瘟热病毒弱毒株(CDV-LP)的M基因序列设计引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,扩增产物克隆至表达载体pET-30a(+)并转化至宿主菌BL21(DE3),在0.4mmol/L IPTG和37℃条件下诱导表达目的蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化的M蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后采血,分离血清,制备鼠抗CDV M蛋白多克隆抗体。结果通过RT-PCR成功扩增出大小为1 014bp的CDV M基因,构建的重组质粒pET-30a(+)-M在大肠埃希菌中诱导表达出分子质量单位为43ku的重组M蛋白,与预期值相符;重组蛋白主要以包涵体形式表达,Western blot检测显示M重组蛋白能被抗CDV多克隆抗体识别;免疫小鼠制备的多抗能与纯化的重组蛋白发生特异性反应。结论本研究成功构建了pET-30a(+)-M并表达了CDV M蛋白,制备了鼠多克隆抗体,为建立CDV M蛋白的ELISA抗原检测方法,鉴定表达M蛋白的重组杆状病毒奠定了基础。 相似文献
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目的制备人载脂蛋白A5(ApoA5)重组蛋白及其多克隆抗体,利用该抗体检测ApoA5在体内的组织分布情况,为进一步研究该分子的功能和血清水平等提供条件。方法2004年3月至6月,中南大学湘雅二医院心内科通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术,构建了含ApoA5编码基因的表达载体,表达了His-ApoA5融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备了抗ApoA5多抗;经酶联免疫吸附分析技术(ELISA)、Western-blot等方法进行鉴定,并初步用于临床组织标本的检测,观察ApoA5在体内的表达。结果所表达的His-ApoA5融合蛋白相对分子质量约为40ku),以其为抗原制备的ApoA5特异性抗血清具有良好的免疫反应性、较高的效价和特异性。Western印迹表明,ApoA5存在于人血清和肝组织中(无论正常血脂和高血脂者),其他组织中(心、血管、小肠、脾、肺)未见到阳性结果。结论ApoA5存在人血清中,ApoA5在肝内表达对于血脂在肝内代谢可能具有重要的意义。 相似文献
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目的原核表达、纯化DENV-2贵州分离株NS1部分序列表达蛋白,并制备其多克隆抗体以研究其功能。方法合成DENV-2M株NS1部分基因序列,克隆到原核表达载体pET28(a),转化大肠埃希菌BL21(DE3);用IPTG诱导表达,Ni柱亲和层析纯化、回收融合蛋白;用纯化融合蛋白免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价。结果原核表达了NS1部分序列融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1∶800。Western blot检测该蛋白能被His标签抗体识别。结论 DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白可诱导小鼠产生较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白的免疫原性奠定了基础。 相似文献
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目的 探讨抗G-蛋白耦联型血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、α1肾上腺素能受体(α1R)和β1肾上腺素能受体(β1R)自身抗体是否与甲状腺毒症性心脏病(THD)发病相关.方法 以细胞外第二环表位肽段的合成肽作为抗原,应用酶联免疫吸附技术检测277例受试者血清中AT1R、α1R和β1R自身抗体.237例甲状腺毒症(TT)患者分为治疗组(n=148)和恢复组(n=89)、或THD(n=46)和TT无心脏病组(n=191).正常对照组40名.结果 (1)TT组AT1R、α1R和β1R自身抗体阳性率分别为31.6%、27.8%和23.6%,明显高于正常对照组的12.5% 、10.0%和7.5% (P<0.05);TT患者中弥漫性毒性甲状腺肿(GD)组3种受体自身抗体阳性率(36.3%、32.2%和28.1%)明显高于非GD组(19.7%、16.7%和12.1%,均P<0.05).(2)TT治疗组AT1R和α1R自身抗体阳性率(40.5%和33.1%)明显高于TT恢复组(16.9%和19.1%,均P<0.05).(3) THD组AT1R和α1R自身抗体阳性率(52.2%和43.5%)明显高于TT无心脏病组(26.7%和24.1%,均P<0.05).结论 抗G-蛋白耦联型AT1R、α1R和β1R自身抗体可能与甲状腺毒症发病有关,且AT1R和α1R自身抗体在THD病理生理过程中发挥重要作用. 相似文献
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目的制备SADS-CoV N蛋白的多克隆抗体,进一步了解及探究SADS-CoV N蛋白的基本结构,为猪急性腹泻综合征病毒疫苗的研制奠定基础。方法将N蛋白基因片段克隆至pColdⅡ载体,并将其转化至BL21感受态细胞,采用1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,经Ni-NTA柱纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体。利用生物信息学软件对SADS-CoV N蛋白的理化性质、亲疏水性、信号肽、二级结构、三级结构及B淋巴细胞与T淋巴细胞抗原表位进行预测。结果重组菌在37℃经1mmol/L IPTG诱导表达分子质量为48 ku的目的蛋白,与预期N蛋白分子质量相符。用该蛋白免疫小鼠,制备的抗N蛋白多克隆抗体的效价可达1︰200000;经IFA、Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能够特异性识别SADS-CoV感染猴肾细胞(Vero)表达的N蛋白,具有较高的抗体效价及特异性。生物信息学分析SADS-CoV N由375个氨基酸组成,分子质量为41.636 ku,等电点为9.90;N蛋白为亲水性蛋白,无信号肽,无跨膜结构;螺旋和无规则卷曲是N蛋白二级结构中主要的蛋白质元件;N蛋白存在9个潜在的B细胞表位,第127-135位、134-142位、275-283位可能存在T细胞表位。结论成功构建pColdⅡ-SADS-CoV-N重组质粒,用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠获得高效的特异抗体血清。生物信息学预测SADS-CoV N含有丰富的螺旋和无规则卷曲结构,以及B、T淋巴细胞抗原表位,为揭示SADS-CoV N蛋白的功能及SADS-CoV相关的转录机制奠定了基础。 相似文献