吉非替尼治疗晚期肺腺癌临床观察

目的观察吉非替尼与多西他赛二线治疗晚期肺腺癌的疗效与毒副反应．方法71例一线化疗失败的晚期肺腺癌患者,随机分为吉非替尼组和多西他赛组,吉非替尼组：250mg,每天一次口服,维持治疗直至病情进展或出现不能耐受的不良反应．多西他赛组：75mg/m^2,第1天静脉滴注1h,每21d重复,至少接受2个疗程,评价其疗效及不良反应．结果71例NSCLC均可评价疗效,2组总有效率（ORR）吉非替尼组40．0％（14/35）,多西他赛组16．7％（6/36）,P〈0．05;疾病控制率（DCR）吉非替尼组74．3％（26/35）,多西他赛组44．4％（16/36）,P〈0．05．吉非替尼组的毒性反应主要为皮疹和腹泻,多西他赛组主要存在骨髓抑制和胃肠道反应毒性（P〈O．05）．结论吉非替尼与多西他赛相比,治疗晚期肺腺癌有较好的有效性和安全性．     

Gefitinib联合化疗药物用药次序对肺癌细胞系GLC-82的不同作用

目的：探讨吉非替尼（gefitinib.，商品名IRESSA）以不同次序联合化疗药（奈达铂、多西他赛、酒石酸长春瑞滨）对EGFR免疫组化染色呈阴性的肺癌细胞系GLC-82的作用。方法：检验不同次序联合吉非替尼时化疗药奈达铂、多西他赛、酒石酸长春瑞滨的IC50，用流式细胞仪检测吉非替尼与化疗药联合的不同次序对GLC-82细胞的细胞周期、凋亡率、Bcl-2表达的影响，用Western blot检测COX2蛋白的表达。结果：在化疗药之前或与化疗药同时使用吉非替尼将使化疗药的抑制率一药物浓度曲线不同程度右移，半数抑制浓度（IC50）升高，晚用吉非替尼比早用吉非替尼有较高的凋亡率、GO-G1期细胞比例，较低的S期细胞比例、较低的Bcl-2表达率和较低的COX2蛋白表达。结论：吉非替尼和化疗药联合需探寻最佳方案，晚于化疗药用吉非替尼效果优于早于化疗药用吉非替尼。     

常规化疗与吉非替尼序贯治疗老年晚期肺腺癌近期疗效观察

目的：观察常规化疗与吉非替尼序贯治疗老年晚期肺腺癌近期疗效及不良反应。方法：选择15例初治老年晚期肺腺癌患者,给予常规化疗序贯吉非替尼治疗：常规化疗,每3周重复,最多不超过6个周期,化疗疗程结束或化疗中出现病情进展后给予吉非替尼治疗,至疾病进展或不良反应不能耐受时停药。观察近期疗效及不良反应。结果：15例患者均可评价疗效,其中完全缓解0例,部分缓解5例（33.3%）,疾病稳定7例（46.7%）,疾病进展3例（20.0%）,有效率33.3%,疾病控制率为80.0%,1年生存率为33.3%。主要不良反应为骨髓抑制、消化道反应及皮疹等。结论：常规化疗与吉非替尼序贯治疗老年晚期肺腺癌疗效确切,安全性较好。     

吉非替尼联合塞来昔布对肺腺癌细胞凋亡和EGFR、COX 2表达的影响

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂吉非替尼联合环氧合酶 2（COX 2）抑制剂塞来昔布对肺腺癌A549细胞株凋亡和EGFR、COX 2表达的影响。方法A549细胞培养于RPMI 1640培养液中,实验分为正常对照组、吉非替尼5?μmol/L组、塞来昔布25?μmol/L组、吉非替尼5?μmol/L联合塞来昔布25?μmol/L组。药物干预细胞48?h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞抑制率、流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡和药物作用周期、免疫荧光检测EGFR和COX 2蛋白的表达情况。结果吉非替尼和塞来昔布对A549细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,两制剂联合作用时抑制作用更强（P<0.01）。吉非替尼和塞来昔布均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞凋亡率更高（P<0.01）;联合用药与单独用药相比,可使细胞发生明显的G1期阻滞（P<0.01）,进一步下调了EGFR和COX 2蛋白的表达（P<0.05）。结论吉非替尼与塞来昔布联合应用具有协同作用,可进一步抑制细胞的生长。     

资讯

吉非替尼对恶性间皮瘤无效，EGFR激酶结构域的再突变与肺癌对吉非替尼或埃罗替尼的继发耐药有关，小细胞肺癌表达EGFR且其酪氨酸磷酸化可被吉非替尼抑制，中国大陆肺腺癌患者可能会从吉非替尼，急性肺损伤是吉非替尼的严重不良反应。     

舒尼替尼联合多西他赛对A549细胞增殖、凋亡、细胞周期及c-met、mek、erk mRNA表达的影响

目的:探讨舒尼替尼单药以及联合多西他赛不同顺序给药对A549细胞增殖、凋亡、细胞周期及c-met、mek、erkmRNA表达的影响。方法:取对数生长期的A549细胞进行以下实验。实验Ⅰ:对照组加入RPMI1640培养基;多西他赛单药组给予多西他赛(终质量浓度16mg/L,下同);舒尼替尼单药组给予舒尼替尼(终浓度7.5μmol/L,下同);舒尼替尼+多西他赛组,加入同时含两药的培养液。实验Ⅱ:多西他赛→舒尼替尼组(D→S组)先加入100μL含多西他赛的培养液培养24h,洗脱,再加入100μL含舒尼替尼的培养液继续培养24h;舒尼替尼→多西他赛组(S→D组),同上反向处理。采用MTT法检测以上各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡,RT-PCR检测A549细胞c-met、mek、erkmRNA的表达水平。结果:Ⅰ:联合用药组较单独用药组细胞增殖抑制率、晚期凋亡率和总凋亡率升高,S期细胞减少,erk表达上调(P<0.05)。Ⅱ:D→S组较S→D组细胞增殖抑制率和凋亡率升高,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增多,c-met、mekmRNA表达下调,erkmRNA表达上调(P<0.05)。结论:舒尼替尼和多西他赛均能抑制A549细胞的生长,联合用药优于单独用药;多西他赛后序贯舒尼替尼能产生明显的协同效应,效果优于舒尼替尼后序贯多西他赛。     

联合应用三苯氧胺和吉非替尼对ＮＳＣＬＣ细胞的抗增殖效应

目的:探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺联合表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对人小细胞肺癌(NSCLC)细胞株增殖和凋亡的影响及相关的分子机制,为联合分子靶向和激素治疗NSCLC提供理论依据.方法:以吉非替尼及三苯氧胺单独或联合处理NSCLC细胞株,MTF法比较细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.应用荧光定量PCR及Western blot检测三种肺癌细胞株中表皮生长因子受体(EGFR)及雌激素受体β(Erβ)的表达情况,并分别检测雌二醇.三苯氧胺(TAM)对细胞中EGFR,以及表皮生长因子(EGF)和吉非替尼对Erβ表达的影响,同时还检测了雌二醇对EGFR的磷酸化作用.结果:联合吉非替尼和三苯氧胺增强对EGFR,Erβ阳性的A549,H1650细胞的抑制作用,促进凋亡,但对EGFR,Erβ阴性的H520细胞无明显改变.雌二醇可促进细胞EGFR磷酸化,却也抑制其表达,而三苯氧胺则上调EGFR的表达.同时,EGF及吉非替尼对Erβ的表达也有类似的相反的调控作用.结论:联合吉非替尼和三苯氧胺能够增强对EGFR,Erβ均阳性的肺癌细胞的抗增殖作用,这可能与细胞内EGFR信号转导途径和雌激素信号通路的交叉有关.因此,结合针对EGFR的分子靶向治疗与激素治疗可能为肺癌的治疗提供新的途径.     

培美曲塞与吉非替尼联合应用对肺腺癌细胞放射增敏的基础研究

目的：观察培美曲塞二钠与EGFR抑制剂吉非替尼单独及联合使用对肺癌细胞放射增敏作用,探讨其作用机制。方法：1、使用噻唑蓝比色法(MTT),检测培美曲塞二钠和EGFR抑制剂吉非替尼各自对人肺腺癌细胞株A549细胞的抑制作用,分别计算出两种药物的IC20和IC50,接着参照各自IC20的药物浓度及预实验结果确定作为放射增敏的浓度。2、采用体外培养克隆形成实验,检测培美曲塞二钠和EGFR抑制剂吉非替尼联合放射线对人肺腺癌细胞株A549细胞的抑制作用,计算其存活分数,同时绘制细胞存活曲线。3、使用流式细胞术,检测细胞周期和细胞凋亡的变化。4、提取蛋白,使用Western-blot,检测Akt和pAkt的表达变化,进一步探索两药联合及放射增敏效应的可能作用机制及细胞信号通路。结果：1．MTT结果显示培美曲塞二钠和吉非替尼对人肺腺癌细胞株A549细胞具有抑制增殖作用,随剂量增加而增强。培美曲塞二钠的IC50为(1485.326) ng/ml;吉非替尼的IC50为(7.196) uM。2．体外培养克隆形成实验分析显示,放疗+两药联用组的Dq、D0及SF2均明显低于单纯放疗组、放疗+培美曲塞二钠组及放疗+吉非替尼组;培美曲塞二钠和吉非替尼SER分别为1.17和1.48,两药联合 SER为2.62。两药联用的放射增敏效应明显高于各自单药的放射增敏效应,两药联合使用可以进一步提高放射增敏作用。3．流式细胞术检测细胞周期结果显示培美曲塞二钠和吉非替尼可以使细胞阻滞在G1/G0期;与放射线联合作用后,使S期细胞比例减少,两药合用作用更明显。检测凋亡结果显示培美曲塞二钠和吉非替尼均可以提高放射线诱导的凋亡,但两药联用可以使其凋亡率达到最高,提示两药联合作用可以进一步提高放射线诱导的细胞凋亡。4．Western- blot结果显示,药物作用前后、照射前后及药物增敏照射后Akt在蛋白表达水平没有明显改变;培美曲塞二钠和吉非替尼均能抑制p-Akt的表达;与单纯照射组相比,培美曲塞二钠和吉非替尼联合照射组p-Akt蛋白的表达减低,两药联用并联合照射组p-Akt/Akt的比值最低。结论：培美曲塞二钠和吉非替尼各自均有放射增敏的作用,两药联合使用可以明显提高放射效应。其机制可能涉及到使细胞周期中对放射线不敏感的S期细胞减少到最低,同时进一步增强了放射线诱导的细胞凋亡;另外可以推断培美曲塞二钠和吉非替尼两药都可抑制PI3K/Akt信号转导通路,为两药联合应用进一步提高放射增敏效应的可能的机制之一。     

培美曲塞二钠与吉非替尼对肺腺癌细胞的放射增敏作用

目的：研究培美曲塞二钠与吉非替尼单独及联合运用对肺腺癌细胞放射增敏作用及机制。方法：单独或联合使用培美曲塞二钠和吉非替尼处理人肺腺癌细胞株A549,使用噻唑蓝比色法（MTT）检测药物对细胞增殖的影响;采用克隆形成试验检测药物联合放射线对细胞的生长抑制作用;使用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot检测细胞内Akt和p-Akt的表达变化。结果：培美曲塞二钠和吉非替尼对人肺腺癌细胞A549增殖具有抑制作用,体外培养克隆形成实验分析显示,放疗+两药联用组的准阈剂量（Dq）、平均致死剂量（D0）及2 Gy照射时的存活分数（SF2）均明显低于单纯放疗组、放疗+培美曲塞二钠组及放疗+吉非替尼组;培美曲塞二钠和吉非替尼放射增敏比（sensitivity enhanced ratio,SER）分别为1.17和1.48,两药联合 SER为2.62。培美曲塞二钠和吉非替尼使细胞阻滞在G1/G0期,与放射线联合作用后,S期细胞比例进一步降低。培美曲塞二钠和吉非替尼均可以提高放射线诱导的凋亡,两药联用后细胞的凋亡率最高。药物作用前后、照射前后及药物增敏照射后Akt水平没有明显改变;培美曲塞二钠和吉非替尼均能抑制p-Akt表达;与单纯照射组相比,培美曲塞二钠和吉非替尼联合照射组p-Akt水平显著减低,p-Akt/Akt的比值最低。结论：培美曲塞二钠和吉非替尼各自均有放射增敏作用,两药联合使用可以明显提高放疗效果,其机制可能与减少S期细胞、增强放射线诱导凋亡和抑制PI3K/Akt信号转导通路有关。     

整合素β1信号通路参与非小细胞肺癌吉非替尼获得性耐药

目的 探讨整合素β1及其下游信号转导通路在非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR) 酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor, TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用。方法 以人肺腺癌细胞株PC-9和吉非替尼耐药株PC-9/G作为研究对象,用MTT法检测吉非替尼和/或磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂PD98059对细胞增殖抑制率的影响;用Annexin Ⅴ/PI试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。免疫印迹分析检测整合素β1、Akt、磷酸化Akt蛋白的表达。结果 吉非替尼耐药株PC-9/G高表达整合素β1,RNAi抑制整合素β1表达能够抑制PC-9/G细胞的生长、促进调亡。ERK抑制剂PD98059不能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性。PC-9/G细胞中吉非替尼对Akt的磷酸化的抑制作用弱于PC-9细胞。PI3K抑制剂LY294002能恢复PC-9/G细胞对吉非替尼的敏感性,RNAi抑制整合素表达后Akt的磷酸化水平降低。结论 表达升高的整合素β1通过PI3K途径激活下游信号分子可能是一种重要的EGFR-TKI耐药机制。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体P848L突变及其功能研究

目的:检测一组中国非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变情况,探讨检出的1例EGFR突变类型P848L的功能特征。方法:收集55例手术或活检确诊的NSCLC标本,抽提细胞DNA,对EGFR的1~27号外显子进行筛查以检出突变情况;利用EGFR野生型全长基因载体,通过定点诱变技术构建出P848L突变型,进一步构建出P848L突变与T790M突变的双重突变体,分别转入293T细胞,观察细胞EGFR磷酸化活性及EGFR靶向抑制剂吉非替尼对其磷酸化的抑制作用。结果:共发现8例NSCLC携带EGFR突变,均为腺癌患者,占非吸烟腺癌患者的34.78%(8/23);其中1例NSCLC患者携带P848L突变体的细胞对吉非替尼的抑制反应与野生型相近,低于经典型突变体;当引入T790M形成双重突变后,对吉非替尼的反应性显著下降。结论: EGFR激活突变在非吸烟的肺腺癌患者具有较高的发生率,而在鳞状细胞癌等类型未发现;P848L突变不能增强吉非替尼对EGFR受体酪氨酸磷酸化的抑制效应,在携带P848L突变的EGFR基因上,引进耐药的T790M突变,能完全抑制其对吉非替尼的敏感性。     

DNA直接测序技术检测EGFR基因及突变分析

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCI,C）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的情况及EGFR-TKI的治疗效果。方法：从94例晚期NSCLC患者的肿瘤组织中提取DNA,采用DNA直接测序技术检测EGFR基因18、19、20、21外显子的突变情况。对EGFR基因突变可评估患者采用TKI口服治疗（吉非替尼250mg／d、厄洛替尼150mg／d）,评价客观有效率（RR）、疾病控制率（DCR）及无疾病进展时间。结果：94例患者中39例（41．5％）存在EGFR基因突变,其中27例外显子19突变．2例外显子20突变,9例外显子21突变、1例外显子18突变。女性患者突变率显著高于男性（56．1％vs30．2％．P〈0．05）;腺癌患者突变率高于非腺癌患者（48％／）815．8％,P〈0．05）;不吸烟者突变率显著高于吸烟者（50．8％vs20．7％,P〈0．05）。16例患者口服TKI后部分缓解5例、疾病稳定7例、疾病进展PD4例,客观有效率为31．2％,疾病控制率为75．0％,截至随访结束,仍有14例患者生存,无疾病进展时间为（11．3l±4．44）个月,1年生存率为43．8％,、结论：DNA直接测序检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变具有高度敏感性,以EGFR基因突变结果为依据,应用TKI治疗晚期NSCL C疗效明显。     

吉非替尼耐药人肺腺癌细胞的建立及耐药机制的研究

目的建立吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株A549/GR,并初步探讨其生物学特性及其耐药机制。方法采用逐步增加吉非替尼剂量法诱导人肺腺癌细胞A549形成吉非替尼耐药的细胞株A549/GR;CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50)及绘制细胞生长曲线,并计算耐药指数;显微镜下观察吉非替尼作用前后A549、A549/GR细胞形态学的改变;直接测序法检测EGFR基因在酪氨酸激酶区的基因突变;q RT-PCR法检测EGFR基因在m RNA水平表达的改变。结果 CCK-8法测得A549/GR细胞的耐药指数为6.00,显示成功建立了吉非替尼耐药的细胞模型,其倍增时间较亲代细胞缩短;形态学观察显示A549/GR细胞极性消失,有变长梭形的趋势;A549/GR细胞系EGFR基因酪氨酸激酶区未发现基因突变;q RT-PCR法显示A549/GR细胞EGFR基因在m RNA水平较亲代细胞轻度上调。结论成功建立吉非替尼耐药人肺腺癌A549/GR细胞模型,A549/GR细胞耐药性的产生与EGFR基因18-21外显子区域突变无关。     

雄激素调节耐多西他赛前列腺癌细胞肺耐药蛋白的表达

目的肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因,肺耐药蛋白(LRP)可诱导多药耐药,我们研究雄激素对前列腺癌的LRP表达影响。方法人前列腺癌细胞株LNCaP及PC-3在含多西他赛的培养液中诱导成为耐药细胞株,耐药细胞株分别在含有DHT培养液和在含DHT及比卡鲁胺培养液中培养7d。免疫细胞化学及Western Blot检测两组细胞的LRP表达。结果 LRP在LNCaP及PC-3细胞系的表达明显低于LNCaP/Docetaxel及PC-3/Docetaxel细胞系,DHT诱导后,LNCaP/Docetaxel及PC-3/Docetaxel细胞系的LRP表达明显增加,经DHT及比卡鲁胺联合作用后,LRP的表达明显低于DHT诱导后。结论多西他赛可诱导前列腺癌LRP表达,二氢睾酮可诱导耐多西他赛前列腺癌的LRP增量表达,雄激素受体阻断剂比卡鲁胺可阻断二氢睾酮的诱导作用。     

老年晚期非小细胞肺癌患者临床特点和吉非替尼的临床疗效观察

目的 探讨老年晚期非小细胞肺癌患者的临床特点和应用吉非替尼治疗的临床疗效。方法 选取2009年1月—2013年10月接受治疗的200例老年晚期非小细胞肺癌患者为研究对象,采用随机数字表法将患者平均分成二组,观察组与对照组,每组各100例。对照组患者给予多西紫衫醇治疗,75mg/m2,静滴;观察组实施吉非替尼治疗,250mg/d,口服。总结老年晚期非小细胞肺癌患者的临床特点并比较二组患者的临床疗效。结果 200例老年晚期非小细胞肺癌患者中男女比例近3：1,61%的患者有吸烟史,腺癌和鳞癌患者达174例（87%）。观察组患者与对照组相比较,治疗有效率为（36%vs12%）,控制率为（74%vs 43%）,中位生存时间为（7.3vs 3.9）个月,均明显高于对照组,二组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 应用吉非替尼治疗老年晚期非小细胞肺癌可以显著改善患者的临床症状,延长患者的生存期,临床疗效显著,且不良反应轻微,安全性好,是临床治疗老年晚期非小细胞肺癌的有效途径。     

肺腺癌EGFR基因突变与血清肿瘤标志物的关系

目的:分析肺腺癌患者EGFR基因突变与血清肿瘤标志物CEA、CA125和CYFRA211水平之间的关系。方法:收集2012年7月至2013年9月在郑州大学第一附属医院行EGFR突变检测的肺腺癌患者528例,采用电化学发光免疫法检测血清中CEA、CA125、CYFRA211的水平,分析EGFR基因突变与血清肿瘤标志物水平之间的关系。结果:肺腺癌患者中CEA、CA125、CYFRA211处于不同浓度梯度时,EGFR突变率差异均有统计学意义(P<0.05)。EGFR突变率随着CYFRA211水平的升高而降低;在CEA≤200 ng/ml的情况下,EGFR突变率随CEA水平升高而升高;当CEA>200 ng/ml或CA125>100 U/ml时,EGFR突变率降低。结论:肺腺癌患者中血清CEA、CA125、CYFRA211在一定程度上可以预测EGFR突变情况。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变检测及其与临床病理特征的关系

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）基因突变情况及其与临床病理的关系。方法对2010年1月—2014年1月来该院诊治的159份非小细胞肺癌手术切除标本进行分析,实验中采用基因测序方法对标本中的EGFR基因突变情况进行检测,分析其与临床病理的关系。结果 159例样本中,EGFR基因突变检出率12.6%（20/159）,突变主要集中在19号外显子的缺失和21号外显子的点突变。女性患者基因突变检出率明显高于男性患者（P﹤0.01）。腺癌及细支气管肺泡癌患者基因突变检出率明显高于其他组织学分型（P﹤0.01）。高分化患者基因突变检出率高于中-低分化检出率（P〈0.05）。EGFR基因突变与年龄及淋巴结转移与否无关（P〉0.05）。结论非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与性别、组织学分型及分化程度密切相关。