宫颈脱落细胞HPVE6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与 HPV分型诊断中的应用

目的 研究宫颈脱落细胞E6/E7 mRNA检测在宫颈癌早期筛查与HPV分型诊断中的应用价值。方法 选取2018年3月至2020年3月安康市妇幼保健院收治的268例宫颈癌疑似病变患者作为研究对象,取宫颈脱落细胞作为实验标本,检测E6/E7mRNA阳性率及拷贝数,并行HPV分型检查。以病理诊断为金标准,其中140例纳入宫颈癌组,128例为非宫颈癌组。并对268例患者进行HPV分型,高危型HPV组212例,低危型HPV组15例,低危混合型HPV组41例,记录宫颈癌发生率。采用多因素回归分析宫颈癌与高危型HPV的影响因素,利用受试者工作曲线（ROC）分析各影响因素单项和联合对检测宫颈癌与HPV分型的准确性。结果 宫颈癌组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于非宫颈癌组,高危型HPV组患者E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均高于低危型及低危混合型HPV组,差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素分析结果显示受教育程度初中及以下（95% CI： 0.187~0.836）、孕次≥3次（95%CI： 1.079~1.625）、初次性生活时间<18岁（95% CI： 1.075~1.611）、鳞状细胞癌抗原（SCC）（95% CI： 1.058~1.782）及HPVE6/E7mRNA阳性（95%CI： 1.251~2.049）是宫颈癌的高危因素（P<0.05）。年龄（35~65岁）（95%CI： 1.134~1.436）、孕次≥3次（95% CI： 1.346~2.472）、性伴侣≥3个（95% CI： 1.526~2.386）、阴道分泌物异常（95%CI： 1.021~1.778）及HPVE6/E7 mRNA阳性（95% CI： 1.216~1.920）是高危型HPV的危险因素（P<0.05）。ROC分析显示孕次、初次性生活时间、SCC及HPVE6/E7 mRNA多项联合检测宫颈癌的AUC为0.826,高于单项检测（P<0.05）。年龄、孕次、性伴侣、阴道分泌物及HPVE6/E7 mRNA联合检测高危型HPV的AUC为0.880,高于单项检测（P<0.05）。结论 HPVE6/E7 mRNA阳性是宫颈癌和高危型HPV共同的独立影响因素,基于HPVE6/E7 mRNA的多项联合检测较单项检测能显著提高检测宫颈癌与HPV分型的准确性。     

高危HPVE6/E7mRNA对宫颈病变诊断价值的研究

目的 探讨高危HPV E6/E7 mRNA对宫颈病变的临床诊断价值。 方法 根据病理诊断结果的不同分为两组,其中慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级患者共48例为对照组,高级别宫颈病变(包括CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈浸润癌)共42例患者为观察组,分别对上述宫颈细胞标本进行HPV DNA分型检测和高危HPV E6/E7 mRNA检测。 结果 慢性宫颈炎、CINⅠ组中高危HPV DNA的检出率(29.1%)明显高于高危HPV E6/E7 mRNA(8.3%),高级别宫颈病变组中高危HPV E6/E7 mRNA的检出率(85.7%)明显高于高危HPV DNA(64.3%),差异有统计学意义(P<0.05);高危HPV E6/E7 mRNA检测的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值(85.7%、91.7%、90.0%、88.0%)均高于HPV DNA分型检测(64.3%、70.8%、65.9%、69.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。 结论 高危HPV E6/E7 mRNA检测在临床诊断过程中大大降低过度检查和治疗的机会,避免了高频率和重复感染给患者带来的经济负担和精神压力。     

人乳头瘤病毒E6/E7mRNA检测在宫颈病变中的诊断价值研究

目的 探索HPV E6/E7mRNA检测在宫颈病变中的诊断价值。方法 收集2016年12月~2017年10月在笔者医院妇科行细胞学和HPV DNA基因分型联合筛查发现疑似宫颈病变并转阴道镜活检的女性病例262例,活检同期均行HPV E6/E7mRNA检测,以宫颈组织病理活检为标准对照。对比3种方法检测宫颈病变HSIL的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比及受试者工作特征曲线下面积（AUC）,及3种方法在不同病理级别中的检出情况,并分析HPV E6/E7mRNA病毒载量与病变关系。结果 HPV E6/E7mRNA检测宫颈病变≥HSIL的敏感度与HPV DNA基因分型和细胞学相似,特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比均高于细胞学和HPV DNA基因分型;HPV E6/E7mRNA的受试者工作特征曲线下面积（AUC=0.80, P<0.01）高于细胞学（AUC=0.65, P<0.01）和HPV DNA分型（AUC=0.54,P>0.05）的曲线下面积;HPV mRNA和细胞学在不同病理级别中的检出率比较,差异有统计学意义（P<0.01）,HPV DNA基因分型在不同病理级别中的检出率比较差异无统计学意义（P>0.05）;HPV E6/E7 mRNA表达水平与组织病理分级之间的相关关系有统计学意义（P<0.01）,且HPV E6/E7mRNA表达水平与宫颈病理分级间呈正相关（r=0.467）。结论 HPV E6/E7mRNA检测对宫颈病变诊断准确性优于细胞学和HPV DNA分型,在宫颈病变及癌变的筛查中具有一定的临床价值,临床医生应给予关注。     

高危型人乳头瘤病毒E6、E7mRNA检测筛检宫颈癌的临床评价

目的:探究高危型人乳头瘤病毒(HPV) E6、E7mRNA检测筛检宫颈癌的临床应用价值。方法:选取2016年3月—2017年3月因宫颈疾病于我院就诊的83例患者为观察对象,采集其宫颈样本后,对宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)常规筛检异常的患者阴道镜下取活检组织送病理学检查,以病理学检查结果为金标准,比较高危型HPV E6、E7mRNA与HPV-DNA分型检出率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及检测费用、患者满意度。结果:高危型HPV E6、E7mRNA检出率57. 83%与HPV-DNA分型检出率62. 65%比较,差异无统计学意义(P> 0. 05),且慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈癌的检出率比较,差异无统计学意义(P> 0. 05);高危型HPV E6、E7mRNA与HPV-DNA分型检测敏感性、阳性预测值、阴性预测值比较,差异无统计学意义(P> 0. 05);高危型HPV E6、E7mRNA检测特异性显著高于HPV-DNA分型(P <0. 05);与HPV-DNA分型检测比较,高危型HPV E6、E7mRNA检测费用显著较低,患者满意度显著较高,差异具统计学意义(P <0. 05)。结论:高危型HPV E6、E7mRNA筛检宫颈癌特异性更高,能减少因误诊造成的过度检测及治疗,提高患者满意度,减轻其经济负担。     

人乳头状病毒16/18及E6、E7基因在宫颈癌组织中的表达

目的探讨高危型人乳头状病毒(HPV)16／18及其E6、E7基因在宫颈癌诊断中的价值。方法对104例宫颈新鲜组织(正常对照16例，轻度宫颈增生18例，中度宫颈增生20例，重度宫颈增生20例，宫颈癌30例)进行研究，荧光定量PCR用于HPV16／18的检测，PCR用于E6、E7基因的检测。结果正常对照组：HPV16／18阳性1例，E6、E7基因无阳性；轻度宫颈增生：HPV16／18阳性2例，R、E7基因无阳性；中度宫颈增生：HPV16／18阳性2例，E6、E7基因阳性1例；重度宫颈增生：HPV16／18阳性6例，R、E7基因阳性2例；浸润型宫颈癌：HPV16／18阳性16例，E6、E7基因阳性7例。结论宫颈癌组织HPV16／18和E6、E7基因阳性率明显高于其它子宫颈增生者，并随子宫颈增生程度逐渐增加。     

HPV 58在宫颈癌组织中的感染分析及其转化基因的克隆

目的 分析中国陕西宫颈癌组织中HPV58的感染情况并克隆其E6、E7主要转化基因.方法 采用HPV GP5+/GP6+通用引物PCR 扩增58例宫颈癌组织DNA粗提物,继之将荧光偏振技术与模板指导的末端延伸反应(TDI-FP)结合,应用探针杂交延伸反应检测HPV58.用特异性引物随机从1例 HPV58 阳性标本中PCK 扩增HPV58 E6、E7基因,将其分别与pGEM-T Easy载体连接,所获得的重组质粒经内切酶消化和测序鉴定.结果 58例宫颈癌标本中10例(17.24%)为HPV 58阳性,克隆获得的HPV 58 E6、E7重组质粒经BLAST分析证实分别含有HPV 58完整的E6、E7基因,与GenBank收录的标准株比较,E6、E7基因分别有5个和2个硷基发生变异,可导致相应的蛋白质氨基酸序列中分别有4个和1个氨基酸替换.结论 中国陕西人宫颈癌组织中HPV 58感染较为多见,且HPV 58 E6和E7转化基因的硷基序列与标准株有所差异.本研究为下一步HPV 58相关肿瘤诊断试剂及疫苗的研制奠定了基础.     

人乳头瘤病毒DNA基因分型和E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的临床价值

目的：探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）DNA基因分型和E6/E7 mRNA检测技术在宫颈癌早期筛查中的临床价值。方法：用PCR?反向点杂交方法对29 081名妇女进行宫颈脱落细胞HPV DNA 基因分型检测,对高危型阳性率、亚型分布统计分析;用Aptima mRNA逆转录扩增法对22 562名妇女进行宫颈脱落细胞HPV E6/E7 mRNA检测,对高危型感染率统计分析;比较不同检测方法和不同年龄段高危型感染率的差异。结果：在接受HPV DNA基因分型检测的29 081例标本中,HPV阳性率为29.57%（8 602/29 081）;高危型HPV感染前5名依次为HPV52、HPV16、HPV53、HPV58、HPV51;高危型阳性率最高峰出现在＜25岁年龄段。在接受HPV E6/E7 mRNA检测的22 562例标本中,高危型阳性率为12.59%（2 840/22 562）,高危型阳性率排名前二的分别是≥65岁年龄段、55~64岁年龄段。除55~64岁年龄段、≥65岁年龄段外,其余年龄段两种检测方法之间HPV16、HPV18/45阳性率差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：HPV E6/E7 mRNA检测可有效减少“假阳性”结果,提高筛查效率。应重视≥55岁女性的HPV筛查,在该年龄段的女性中,两种HPV检测方法的筛查效率相近。     

应用荧光定量聚合酶链方法检测宫颈组织中人乳头瘤病毒16E6基因

目的　建立荧光定量聚合酶链 (FQ PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )E6基因的方法。方法　以 2 2 0例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本 ,人乳头瘤病毒 16型 (新疆株 )E6基因 (HPV16E6 ,AF32 785 1)作为扩增的靶基因 ,同时以人 β 肌动蛋白基因片段作为内参照 ,借助于设计的目的基因引物 ,两个特异的荧光探针 ,在筛选的FQ PCR优化反应体系中 ,同时对两个基因片段进行扩增 ,得到HPV16E6的相对含量。结果　对 β 肌动蛋白阳性的宫颈不同病变组织中HPV16E6阳性率及其相对含量进行统计分析 ,新疆妇女宫颈脱落细胞标本 96例中 ,HPV16E6阳性 3例 (3 3% ) ;宫颈癌蜡块组织 5 9例中HPV16E6阳性 4 9例 (83 0 % ) ;宫颈上皮内瘤变 (CIN)蜡块组织 6 5例中 ,HPV16E6阳性 2 8例 (75 7% ) ;宫颈炎蜡块组织 33例 ,HPV16E6阳性 2 8例 (93 3% )。HPV16E6的相对含量随病情加重呈上升趋势 ,二者呈显著正相关 ,相关系数为 0 83。结论　建立的FQ PCR检测宫颈不同病变组织内HPV16E6基因的方法 ,能反映单位细胞人乳头瘤病毒的复制情况 ,筛查宫颈癌患者 ,并可能应用于宫颈癌的风险评估和疗效观察。     

宫颈癌组织中HPV16 E7序列多态性分析

目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性.方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变.结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸.结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846.     

河南省63043例女性宫颈脱落细胞HPV基因分型分析

目的 对河南省63043例女性宫颈脱落细胞进行人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）基因分型检测,了解HPV基因感染现状和变化情况,为宫颈癌的筛查、预防和治疗提供参考依据。方法 采用PCR-反向斑点杂交分型技术,对2012~2016年河南省63043例女性的宫颈脱落细胞进行核酸提取和HPV基因分型检测。结果 在63043例女性宫颈脱落细胞中,21种HPV基因亚型均被检出,总HPV、单一HPV、多重HPV、单纯高危型HPV、单纯低危型HPV以及合并高低危HPV阳性检出率分别为28.7%、20.1%、8.6%、20.9%、4.1%、3.7%。检出率较高的3种HPV亚型分别是HPV-16 （7.0%）,HPV-52 （4.3%）和HPV-58 （3.4%）。60岁以下女性随年龄的增长,总HPV、高危型HPV、低危型HPV和多重HPV阳性检出率均呈现"U型"变化曲线,年龄≤25岁和56~60岁是检出高峰期（P<0.05）;总HPV、高危型HPV和多重HPV阳性检出率2014~2016年较2012~2013年有所上升,同一年龄段2012~2016年间阳性检出率相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 河南省HPV阳性检出率较高且近年有所上升,应重视该地区≤25岁和56~60岁女性HPV筛查。包含HPV-16、HPV-52和HPV-58常见亚型的新型多价宫颈癌疫苗可能为该地区宫颈癌的预防和治疗提供更高的保护作用。     

L1 C-末端共同序列多肽抗体检测宫颈液基细胞学标本中人乳头瘤病毒

目的 确定由人乳头瘤病毒（HPV）主要外壳蛋白L1 C-末端保守序列多肽诱导的多肽抗体对宫颈脱落细胞内的HPV是否具有良好的检测能力。方法 收集宫颈脱落细胞,一式两份,一份采用巢氏PCR检测HPV DNA,另一份以兔抗多肽纯化抗体和小鼠抗多肽抗血清为探针做夹心法ELISA检测标本中的HPV L1,比较两种方法对HPV的检出率差异。用多肽抗体对部分标本做免疫细胞化学检测。结果 对收集到的269例宫颈脱落细胞标本用MY09/11引物扩增,检出HPV DNA阳性标本30例,检出率为11.15%;对MY09/11扩增后结果为阴性的标本再用引物GP5+/6 进行扩增。又检出阳性标本51例,检出率为21.34%。将两个PCR检测合计,共检测到81例HPV DNA阳性标本,HPV DNA总检出率为30.11%。对263例脱落细胞标本进行ELISA检测,共检出阳性标本91例,HPV阳性检出率为34.60%,与PCR检测结果相比差异无统计学意义。免疫细胞化学检测结果表明多肽抗体能够特异性地显示有HPV感染的宫颈脱落细胞。结论 HPV L1多肽抗体对宫颈脱落细胞内HPV的感染具有良好的检出能力,该抗体在开发用于宫颈癌预防性筛查的HPV检测试剂盒方面具有一定的潜力。     

hTERC基因与宫颈癌发生、发展相关性

目的 探讨分析人染色体端粒酶基因（hTERC）与宫颈癌发生、发展相关性。方法 选取笔者医院妇科收治的经阴道镜宫颈活检结果异常的患者173例,再选择同期行宫颈检查无异常的40例作为正常对照,采用荧光原位杂交技术（FISH）检测受试者宫颈脱落细胞标本hTERC基因的表达情况,并分析HPV感染与hTERC阳性率之间的关系。结果 正常对照组hTERC阳性率7.50%、CINⅠ患者hTERC阳性率15.79%、CINⅡ患者hTERC阳性率46.15%、CINⅢ患者hTERC阳性率68.63%、宫颈癌患者hTERC阳性率91.11%,随着宫颈脱落细胞病变的进程,hTERC阳性率显著递增（P<0.05）;高危型HPV感染合并hTERC阳性患者其癌前病变及癌比例为100.00%,显著高于高危型HPV感染的hTERC阳性患者以及无高危型HPV感染患者（P<0.05）。结论 hTERC基因扩增参与到了宫颈癌的发生、发展过程当中,随着宫颈病变分级的增加而呈上升趋势,hTERC基因阳性表达对宫颈癌的早期诊断具有一定的临床价值。     

宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法的建立及意义

目的：建立宫颈癌组织HPV16早期基因E6相关转录本检测方法,分析宫颈癌发生各时期的HPV16早期基因E6相关转录的情况。方法：留取HPV16阳性的宫颈肿瘤组织63例,包括8例低度鳞状上皮内瘤变（LSIL）、38例高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）和17例宫颈癌,提取RNA,利用含保守序列的RT引物将标本中的mRNA反转录成5’端含保守序列的cDNA,并利用HPV16E6特异性引物（P1）和保守序列（P0）进行PCR扩增,建立特异性扩增HPV16E6相关转录本的方法,检测标本中HPV16E6相关的转录本,通过E6特异性探针进行Southern杂交加以验证。结果：成功建立了HPV16E6相关转录模式分析的方法。经分析HPV16阳性的LSIL、HSIL及宫颈癌组织中E6转录模式结果发现,不同级别HPV16阳性的宫颈肿瘤组织的转录模式差异显著。随着LSIL向宫颈癌发展,肿瘤组织中HPV16E6转录本种类增多,且优势转录模式逐渐清晰。结论：成功建立HPV16E6相关转录模式分析的方法,并发现HPV16早期基因E6相关的转录模式与宫颈肿瘤癌变程度密切相关,其可能参与宫颈癌的发生和发展。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义

目的：探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义。方法：运用PCR方法扩增HPV16E6／E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列，宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法。结果宫颈癌组织中HPV16E6基因的检出率为45％，显著高于宫颈炎组织中5％的检出率，两者有统计学差异。HPV16E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异。结论：HPV16E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用。宫颈组织中HPV16E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段。     

人乳头瘤病毒16型E5基因在宫颈癌发生进程中的动态研究

  目的  观察人乳头瘤病毒(HPV)16型E5基因在宫颈癌发生发展过程中的动态变化情况,探讨E5 mRNA在宫颈癌早期筛查中的临床意义。  方法  收集2015年9月至2017年12月在四川省妇幼保健院宫颈门诊就诊或行宫颈癌机会性筛查人群的宫颈病变组织石蜡标本49例(HPV阳性),按照FIGO标准将收集的宫颈病变标本进行分期:宫颈炎13例,宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅰ 5例,CIN Ⅱ 18例,CIN Ⅲ 5例,宫颈癌8例。利用实时荧光定量PCR检测不同病理分级宫颈组织中E5基因的完整度及E5、E6、E7 mRNA的表达水平。  结果  在49例HPV16阳性感染患者中,CINⅠ宫颈病变组织中E5基因的完整度比宫颈炎、CINⅡ及宫颈癌组织更高(P＜0.05);CINⅠ宫颈病变组织中E5基因完整度虽高于CINⅢ组织,但差异无统计学意义。不同病理级别标本中E5、E6、E7 mRNA的表达水平均在CINⅢ组织最高。与E6、E7 mRNA相比,E5 mRNA在宫颈病变的全过程中均呈现出优势表达状态(P＜0.05),而E6、E7 mRNA的表达水平只在病变后期(CINⅢ和宫颈癌)有升高趋势。  结论  在HPV16阳性感染患者的病变组织中,E5基因的完整度可能与宫颈疾病的发生、发展有关。E5基因有望成为宫颈癌早期筛查的靶基因。     

宫颈癌组织中HPV16E7序列多态性分析

目的 探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性。方法 采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变。结果 50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例。33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸。结论 广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846。     

HPV16E6和E7基因序列多态性与宫颈癌临床病理特征相关性

目的 探讨宫颈癌人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6和E7转化基因序列多态性,及其与宫颈癌临床病理特征的相关性.方法 从77例宫颈癌组织中筛选出51例HPV16阳性标本,扩增E6及E7基因,PCR产物进行序列测定.应用DNAStar生物软件进行核苷酸和氨基酸序列的分析.结果 宫颈癌组织中HPV16 E6共测得6个突变位...     

TDI-FP法检测宫颈癌组织中HPV16E7基因647位点突变

目的:人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7基因的变异可能和HPV的致癌能力直接相关,E7 647位点的突变可能增强了致癌能力. 本课题通过应用TDI-FP法检测宫颈癌HPV16阳性标本中E7 647位点突变情况,可以对确定高危人群、恶性病变的预警筛查、辅助诊断、疗效判定及预后提供临床价值,并可以为宫颈癌及其癌前病变的基因治疗、疫苗治疗和预防提供分子水平方面的重要依据. 方法:TDI-FP技术是一种在聚合酶链反应的基础上具备液相探针杂交和碱基掺入三重特异反应的检测新方法,具有极高的特异性和敏感性. 本课题实验在TDI-FP方法的基础上检测宫颈癌患者HPV16 E7基因647位点突变情况,以进一步明确这些位点突变与宫颈癌变的相关性. 结果:应用TDI-FP法检测宫颈癌组织中HPV16型E7 647位突变率为32.35%,HPV16型E7 647位突变与对照组相比具有统计学差异(χ2=12.437,P＜0.001). 结论:本实验初步提示宫颈癌患者中HPV16型E7 647位突变可能是HPV致癌的一个高危因素.     

子宫颈病变中CADM1、DAPK及RARB基因的甲基化状态

目的 了解基因启动子的甲基化在宫颈癌发生、发展过程中的模式,为筛选和调整一个能用于诊断宫颈刮片标本中宫颈高度病变及宫颈癌的诊断标志物提供依据。方法 利用实时定量甲基特异性PCR （QMSP）分析CADM1、DAPK及RARB 3个基因启动子在宫颈病变组织中的甲基化状态。样本包括石蜡包埋正常宫颈组织20例,CIN1 40例,CIN2 40例,CIN3 18例及宫颈癌3例。同时用导流杂交法检测标本中HPV亚型。结果 CADM1及RARB两个基因的甲基化水平及甲基化阳性率都随着标本的恶性度增加而增加,在各组样本中差异有统计学意义（P<0.05）。DAPK基因的甲基化在各组样本中处于低水平,各组样本中差异无统计学意义（P>0.05）。CADM1/RARB组合敏感度、特异性最高,为82.0%及70.0%。基因甲基化水平与HPV亚型及年龄无关。结论 CADM1及RARB基因甲基化程度随宫颈病变增加而增加,两者联合检测可有效区分LSIL和HSIL病变。