辛伐他汀对硬皮病小鼠模型的影响

目的 探讨辛伐他汀对硬皮病小鼠模型胶原合成的影响。方法 采用博来霉素诱导的动物模型,分早期给药组和硬化后给药组。用5 mg·kg-1·d-1辛伐他汀处理,用药4周后收集标本,采用HE染色观察皮损组织病理改变并测量表真皮厚度,比色法检测皮损羟脯氨酸含量,并利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测小鼠硬皮病皮损前胶原（pro-COL1α1） mRNA的表达情况。结果 早期给药组中,模型组与阴性对照组比较,小鼠真皮内胶原增粗,表真皮厚度和羟脯氨酸含量及pro-COL1α1 mRNA 表达明显增加（P < 0.01）;而5 mg·kg-1·d-1辛伐他汀处理组较模型组小鼠真皮厚度变薄（P < 0.05）,羟脯氨酸含量降低（P < 0.01）,皮损pro-COL1α1 mRNA表达下降（P < 0.05）。硬化后给药组中,辛伐他汀处理组与空白对照组比较小鼠真皮厚度、羟脯氨酸含量均无明显改善,但pro-COL1α1 mRNA表达下降（P < 0.05）。结论 早期予以辛伐他汀处理可以减轻博来霉素诱导的小鼠皮肤硬化程度。硬化后予以辛伐他汀处理则皮肤硬化改善不明显。     

建立小鼠硬皮病模型的实验性研究

硬皮病是一种以局限性或弥漫性皮肤硬化或伴有内脏器官纤维化为特征的结缔组织病.此病发病机制不明,治疗困难,给患者带来痛苦.近年来,许多学者用局部注射博莱霉素建立小鼠硬皮病模型,我们为研究此方法的可重复性及筛选合适的博莱霉素造模剂量,为后期新药实验做准备,特进行该实验,现将实验过程、方法介绍如下.     

温阳活血方及丹参对硬皮病小鼠模型的影响

目的 研究温阳活血方及丹参对硬皮病小鼠模型的影响。方法 将温阳活血方及丹参应用于博来霉素诱导的硬皮病小鼠模型。用药小鼠分成早期给药组和硬化后给药组。两组分别分为口饲温阳活血方组、口饲丹参组和静脉注射丹参组。于用药后不同时期进行皮肤、肺组织病理学及血清自身抗体检测分析。结果 与未用药的同期对照组相比,硬化后给药组至给药第5周末皮肤组织学无明显改善。早期给药组给药第5周末亦无组织学上的明显改善;第8周末,皮肤厚度比同期对照组有所降低,胶原纤维增生则有较明显改善,尤其是口饲温阳活血方组和静脉注射丹参组(P<0.05)。肺组织学和血清自身抗体检测提示,硬化后给药和早期给药组均无明显改善。结论 早期给药组小鼠随用药时间的递增,皮肤硬化得到明显改善,其中义以口饲温阳活血方组、静脉注射丹参组改善效果更明显;硬化后给药组小鼠皮肤硬化改善不明显。各组小鼠肺纤维化和血清自身抗体均无明显改善。     

UVA1对硬皮病小鼠模型影响的实验观察

目的：观察UVA1对硬皮病小鼠模型的影响。方法：用波长365nmUVA1照射博来霉素诱导的硬皮病小鼠模型,观察照射前后局部皮肤的变化,进行皮肤病理检查、羟脯氨酸含量测定及免疫组化法测定核心蛋白多糖、TGFβ1及TGFβ2等因子。结果：照射组与模型组相比,局部硬化皮肤明显软化,羟脯氨酸含量显著降低（P〈0.05）;病理示真皮层变薄,胶原纤维排列疏松,数量减少;免疫组化示核心蛋白多糖无阳性表达;TGFβ1和TGFβ2呈阳性表达,且照射对其阳性表达有影响。结论：UVA1照射的有效性可能与其下调与硬皮病相关的细胞因子TGFβ1和TGFβ2等表达有关。     

局部注射博来霉素建立硬皮病小鼠模型的实验研究

目的了解通过局部注射博来霉素(BLM)建立硬皮病小鼠模型的方法。方法选用C3H/He小鼠作为实验对象,对照组9只小鼠随机分成3组,分别在各组小鼠背部中央区皮下注射100μL0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)1次/d连续1周,2周和3周。动物模型组12只小鼠,随机分成4组,每组3只,分别背部皮下注射100μL600μg/mLBLM1次/d连续1周,2周和3周,进行皮肤组织病理学以及血清自身抗体检测验证。结果与对照组相比,连续注射3周BLM的小鼠真皮均匀硬化,皮损区表真皮厚度增加(P<0.05),羟脯氨酸含量显著增高(P<0.05),肥大细胞数目显著增加(P<0.05)伴有脱颗粒现象,TGF-β表达显著高于对照组(P<0.05)。BLM连续注射1周和2周的小鼠皮损区上述改变不明显。该小鼠模型肺泡间隔增厚,伴单一核细胞浸润,并可见肺组织小血管壁增厚。小鼠模型血清中ANA阳性,结合ENA抗体测定提示存在Scl-70抗体。硬皮病小鼠停止注射BLM后继续观察6周,皮肤硬化仍然存在。结论在C3H/He小鼠背部每日皮下注射600μg/mLBLM,连续3周可以成功建立硬皮病小鼠模型。     

硬皮病皮损CTGF,COL-Ⅰ Ⅲ的检测及意义

目的研究硬皮病(SD)发病与结缔组织生长因子(CTGF)及Ⅰ,Ⅲ型胶原(COL-Ⅰ,Ⅲ)表达的关系,探讨硬皮病可能的发病机制。方法采用免疫组化SP法检测72例SD患者皮损中CTGF蛋白及COL-Ⅰ,Ⅲ蛋白表达,18例正常人皮肤组织作为正常对照组。结果①CTGF在SD患者皮损的表达强于对照组,在系统性硬皮病(SSc)表达高于局限性SD(P均<0.001);②COL-Ⅰ在SD患者皮损的表达强于对照组,但在SSc组、局限性SD组间表达无明显差异(P>0.05);COL-Ⅲ在SD患者皮损的表达与对照组相近(P>0.05);相关分析表明COL-Ⅰ与CTGF的表达呈正相关(r5SC=0.728,rSD=0.71,P均<0.01)。结论COL-Ⅰ与CTGF在SD患者皮肤硬化过程中起一定作用,可能与SD的病理纤维化形成有关。     

结缔组织生长因子mRNA在硬皮病模型小鼠真皮中的表达

目的 探讨博来霉素诱导硬皮病样改变.方法 24只BALB/c小鼠随机分为模型组和对照组,每日分别于背部皮下注射0.1mL博来霉素(300μg/mL)和0.1mL生理盐水,共4周.然后取背部皮肤行组织病理检查及真皮厚度测量,比色法测定羟脯氨酸含量,原位杂交法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达细胞及RT-PCR法测定α1前胶原(pro-COL1A1)和CTGF mRNA表达量.结果 模型组小鼠皮肤表现出典型的硬皮病改变,其真皮较对照组显著增厚(P<0.01),羟脯氨酸含量显著升高(P<0.01);CTGF mRNA阳性杂交信号主要分布于真皮成纤维细胞胞浆中,模型组CTGF和pro-COL1A1 mRNA表达均较对照组显著增强(P分别<0.05和0.01);模型组皮肤羟脯氨酸含量与pro-COL1A1 mRNA表达量呈正相关(P<0.05),而pro-COL1A1 mRNA又与CTGF mRNA表达量呈正相关(P<0.01).结论 博来霉素可能通过上调成纤维细胞CTGF mRNA表达而增强pro-COL1A1 mRNA表达,最终导致皮肤胶原含量增多.     

博来霉素诱导硬皮病小鼠模型及其抗体测定的初步研究

目的以博来霉素(Blm)诱导建立硬皮病小鼠模型并加以验证。方法将200μg/mLBlm100μL注射在C3H/He小鼠(C3H小鼠)背部皮下,每日1次,连续3周,建立硬皮病小鼠模型,并经皮肤、肺组织病理学及血清自身抗体检测加以验证。结果注射200μg/mLBlm3周的C3H小鼠,与对照组相比,注射区皮肤厚度明显增加(P<0.001),胶原纤维组织化学指数显著升高(P<0.0001),真皮出现均匀硬化表现;该小鼠肺泡间隔增厚,伴单一核细胞浸润,并可见肺组织小血管壁增厚;血清ANA阳性,间接免疫荧光法检测见细胞核呈粗斑点或细斑点状黄绿色荧光,有的斑点相互聚集成若干大斑点位于核中央,结合抗ENA抗体测定提示存在抗Scl-70抗体、抗着丝点抗体和抗U1-RNP抗体等。结论对C3H小鼠背部每日皮下注射200μg/mLBlm共3周,成功建立了硬皮病小鼠模型。     

复方茯苓汤对小鼠接触性过敏反应的影响

复方茯苓汤是按照中医对湿疹的治疗法则,由动物实验筛试具有抗Ⅳ型变态反应的中药所组成,经临床应用对湿疹具有明显疗效^[1]。为了探讨其作用机制,我们利用小鼠二硝基氟苯(DNFB)变应性接触性皮炎(ACD)为动物模型,观察中药复方茯苓汤抗Ⅳ型变态反应的作用及其对白介素-1、2、6(IL-1、2、6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响,并与氢化可的松比较。     

软皮热敷散对硬皮病小鼠模型Wnt1和Wnt5a表达的影响

目的观察软皮热敷散对硬皮病模型小鼠皮损中Wnt1、Wnt5a蛋白表达的影响,探讨其治疗硬皮病的作用机制。方法将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、肝素钠组、10%浓度组、20%浓度组、40%浓度组各10只;采用盐酸博莱霉素磷酸缓冲液皮下注射小鼠背部造模,模型组皮下注射生理盐水,1次/d,连续4周,其余40只分别外用肝素钠软膏、10%、20%、40%浓度的软皮热敷散药糊,1次/d,连续4周。观察各组小鼠的皮肤大体形态及组织病理变化;免疫组织化学SABC法检测小鼠皮肤组织中Wnt1与Wnt5a的表达情况。结果模型组真皮厚度较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。20%、40%浓度组与模型组、肝素钠组及10%浓度组相比真皮厚度明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。20%、40%浓度组与模型组、肝素钠组及10%浓度组相比皮损组织病理情况明显好转。模型组Wnt1、Wnt5a免疫组织化学指数较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。40%浓度组Wnt1免疫组织化学指数与模型组相比明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。20%、40%浓度组Wnt5a免疫组织化学指数与模型组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。硬皮病模型小鼠皮损中Wnt1与Wnt5a表达相关系数无统计学意义(P>0.05),两者无相关性。结论 Wnt1、Wnt5a在硬皮病的发病过程中可能具有重要作用,软皮热敷散可能是通过降低皮损中Wnt1、Wnt5a表达从而改善硬皮病模型小鼠的皮肤硬化。     

滋阴疏肝汤对多囊卵巢小鼠内分泌功能的影响

目的探讨中药滋阴疏肝汤调节小鼠内分泌功能的作用机理.方法将NIH小鼠及造模后的实验性多囊卵巢小鼠各随机分成2组--治疗组与对照组,分别灌服滋阴疏肝汤和等量的生理盐水,观察中药对NIH小鼠及实验性多囊卵巢小鼠体重、睾酮、雌二醇、子宫、卵巢总重量的影响.结果滋阴疏肝汤能明显抑制多囊卵巢模型小鼠睾酮与雌二醇的异常升高,抑制小鼠子宫、卵巢的异常增重(P＜0.01).结论滋阴疏肝汤组有调节小鼠内分泌异常的作用.     

IL-8及瘦素在硬皮病小鼠模型体内的表达和相关性

目的通过建立硬皮病小鼠模型,检测模型小鼠血清及皮肤组织中IL-8及瘦素的表达水平,探讨IL-8及瘦素在硬皮病发病机制中的作用。方法实验用博莱霉素(BLM)造模方法,将小鼠随机分为二组:模型组小鼠每日用BLM在小鼠背部皮肤皮下注射,对照组小鼠每日用磷酸盐缓冲液(PBS)于背部相同部位皮下注射,连续4周后分别取小鼠背部皮肤及肺组织、血清。采用HE染色观察皮肤及肺的组织病理变化特点,并测量两组小鼠真皮厚度。采用酶联免疫吸附法分别检测两组小鼠血清IL-8及瘦素浓度,采用免疫组化法检测IL-8及瘦素在皮肤中的定位及表达。结果与对照组比较,模型组小鼠皮肤组织呈典型的硬皮病病理学改变,同时模型组小鼠肺组织切片HE染色结果显示肺泡间隔增宽以及大量单个核细胞浸润。模型组小鼠真皮(135.60±3.71)μm较PBS对照组(84.94±1.75)μm显著增厚(P0.01)。酶联免疫吸附法测得硬皮病模型小鼠血清中IL-8及瘦素表达水平上升(P0.01),两者呈正相关性(r=0.84,P0.01)。免疫组化结果显示IL-8及瘦素在硬皮病模型皮肤中表达阳性,且表达均高于对照组。结论博莱霉素反复皮下注射可诱导建立硬皮病小鼠模型。硬皮病小鼠血清及皮肤组织中IL-8及瘦素水平较对照组升高且呈正相关性,提示这些因子在硬皮病发病中可能发挥重要作用。     

“热敷药”对硬皮病小鼠模型COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量的影响

目的 观察“热敷药”对硬皮病小鼠模型Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)含量的影响.方法 60只BALB/c小鼠按照随机原则分为空白组、模型组、西药组、小浓度组、中浓度组、大浓度组各10只,采用博莱霉素皮下注射形成硬皮病模型,造模完成后,根据分组分别给予10％、20％、40％“热敷药”药糊及肝素钠软膏外用,1次/d,连续1个月,空白组及模型组不用药.完成后观察各组皮肤组织病理变化,免疫组化检测皮损COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量.结果 与模型组相比较,高、中浓度组硬皮痛小鼠模型COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量明显降低,差异较显著(P＜0.05);结论 “热敷药”具有改善硬皮病小鼠模型皮肤硬化,降低COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的作用.     

扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠模型免疫器官及生活质量的影响

目的探讨扶正汤治疗系统性红斑狼疮的有效性和机制。方法应用经典红斑狼疮小鼠模型MRL/1Pr小鼠,分为生理盐水对照组、中药组、中西医结合组、西药组,治疗6周。对小鼠精神状态、食量、体重、胸腺和脾脏指数进行观察和检测。结果中药组小鼠精神状态好、食量、体重、胸腺和脾脏指数均较对照组增加,西药组体重较其它三组减轻,胸腺和脾脏指数下降。结论扶正汤能改善红斑狼疮小鼠生存质量,并可能通过不同与激素的机制发挥免疫调节作用。     

细胞因子TGFβ1,CTGF和IFN-γ对系统性硬皮病克隆成纤维细胞胶原代谢的影响

目的研究细胞因子(TGFβ1,CTGF和IFN-γ)对系统性硬皮病具有不同胶原合成能力的克隆成纤维细胞胶原代谢的影响。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测细胞因子(TGFβ1,CTGF和IFN-γ)对系统性硬皮病具有不同胶原合成能力的克隆成纤维细胞Ⅰ型前胶原和MMP-1 mRNA水平的影响情况。结果 TGFβ1(5ng/mL)作用48h仅使具有低胶原合成能力的系统性硬皮病克隆成纤维细胞的Ⅰ型前胶原mRNA水平上升(1.20±0.50vs0.04±0.04,P=0.001);CTGF(20ng/mL),IFN-γ(100ng/mL)作用48h使系统性硬皮病克隆成纤维细胞MMP-1 mRNA水平下降(F=6.221,P=0.034;F=53.505,P=0.000),且具有高胶原合成能力的克隆成纤维细胞MMP-1 mRNA水平下降幅度大(F=8.817,P=0.016;F=8.092,P=0.019)。结论系统性硬皮病具有不同胶原合成能力的克隆成纤维细胞Ⅰ型前胶原和MMP-1 mRNA水平对细胞因子的反应存在异质性。     

长波紫外线照射对硬皮病鼠模型皮肤硬化程度的影响

目的 探讨长波紫外线照射对硬皮病鼠模型皮肤硬化程度的影响。方法 小鼠局部注射博来霉素建立硬皮病鼠模型后，随机分成三组，每组3只小鼠，其中一组小鼠不照射UVA1，另外两组小鼠分别每次照射UVA1 12 min（5.32 J/cm2）、25 min（11.1 J/cm2），连续20次，累积剂量分别为106.4和222 J/cm2。另一批小鼠随机分两组，每组3只小鼠，每日注射博来霉素同时每日照射UVA1剂量分别为5.32 J/cm2和11.1 J/cm2，连续20次，累积剂量分别为106.4和222 J/cm2。结果 和未经UVA1照射的硬皮病鼠模型比较，接受不同剂量UVA1照射后的两组硬皮病小鼠皮损区表真皮厚度显著降低（P ＜ 0.05），羟脯氨酸含量显著降低（P ＜ 0.05）， 真皮中转化生长因子β（TGF-β）表达降低（P ＜ 0.05），基质金属蛋白酶1（MMP-1）表达升高（P ＜ 0.05）。两组小鼠注射博来霉素同时接受不同剂量UVA1照射后皮损处表真皮厚度、TGF-β表达、MMP-1表达差异均无统计学意义（P ＞ 0.05）。结论 UVA1照射博来霉素诱导的硬皮病小鼠模型均可导致皮损处能分解胶原纤维的MMP-1表达增加，促进胶原合成的TGF-β表达降低，胶原含量降低，表真皮厚度降低。     

扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠模型肾脏作用的实验研究

目的研究中药扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠肾脏的影响。方法将MRL/1Pr模型小鼠随机分成4组:0.9%生理盐水对照组(A组)、西药组(B组)、中药组(C组)、中西医结合组(D组),治疗6周。每两周称重量一次;邻苯三酚红-钼络合显色法测定24h尿蛋白含量;直接免疫荧光法测定小鼠肾脏IgG含量;小鼠肾脏HE染色,观察各组小鼠肾组织的形态学改变。结果治疗后A、C、D组体重较治疗前明显增加(P0.01),B组体重较治疗前增加不明显并较其它三组下降(P0.01)。3个给药组尿蛋白含量均有明显下降(P0.01)。C组尿蛋白缓慢下降,B组后期下降不明显。各给药组均能降低小鼠肾脏IgG沉积的荧光强度和面积,与A组相比有显著差异(P0.01),B组荧光强度明显强于C和D组(P0.01)。病理检查发现各给药组均使肾损害明显减轻,D组最为明显。结论扶正汤对狼疮小鼠肾脏有明显的治疗作用,中西药合用和中药组明显优于西药组。     

TGF—β1、ET-1及AngII在博来霉素诱导小鼠硬皮病模型体内的表达

采用免疫组化法、酶联免疫法检测20只博来霉素诱导硬皮病小鼠动物模型皮肤、血浆及肺组织TGF—β1、ET-1、AngII的表达水平,并以20只正常小鼠作为对照。①免疫组化法检测博来霉素诱导硬皮病小鼠皮损中TGF—β1表达程度高于对照,纤维化肺组织中表达程度也高于对照;皮损及纤维化肺组织中ET-1表达程度也高于对照;但AngII在皮损及纤维化肺组织中表达与对照无明显差异。②ELISA法检测博来霉素诱导硬皮病小鼠血浆及肺组织中TGF—β1表达上调;ET-1在血浆中表达水平两组无显著差异,在肺组织中表达水平明显高于对照;AngII在血浆及纤维化肺组织中表达均明显高于对照。提示博来霉素诱导硬皮病小鼠发病与上述细胞因子异常表达有关。     

TGF- β1、ET-1及Ang Ⅱ在博来霉素诱导小鼠硬皮病模型体内的表达

采用免疫组化法、酶联免疫法检测20只博来霉素诱导硬皮病小鼠动物模型皮肤、血浆及肺组织TGF-β1、ET-1、AngⅡ的表达水平,并以20只正常小鼠作为对照.①免疫组化法检测博来霉素诱导硬皮病小鼠皮损中TGF-β1表达程度高于对照,纤维化肺组织中表达程度也高于对照;皮损及纤维化肺组织中ET-1表达程度也高于对照;但AngⅡ在皮损及纤维化肺组织中表达与对照无明显差异.②ELISA法检测博来霉素诱导硬皮病小鼠血浆及肺组织中TGF-β1表达上调;ET-1在血浆中表达水平两组无显著差异,在肺组织中表达水平明显高于对照;AngⅡ在血浆及纤维化肺组织中表达均明显高于对照.提示博来霉素诱导硬皮病小鼠发病与上述细胞因子异常表达有关.     

硬皮病的治疗

在硬皮病的治疗方面,许多药物被认为是有效的,但它们的实际疗效,对于能自愈的限局性硬皮病很难作出肯定估价,对硬皮病内脏损害,作用不大。对周围循环症状,皮肤硬化情况及关节症候的改善,也还不够理想。血管扩张剂:仅在肢端动脉痉挛综合征阶段有指征,对严重的病期已久的全身性硬皮病则在应用后,有加剧循环系统、肺及肾脏损害的危险。常用