基于iTRAQ蛋白质组学技术对前列腺癌血清标志物的筛查

目的:应用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）蛋白质组学技术筛选前列腺癌血清中的差异表达蛋白质,提供新的候选标志物。方法:收集4组患者的外周血清标本:良性前列腺增生（BPH）（n=10）、高级别前列腺上皮内瘤变（HGPIN）（n=10）、局限性前列腺癌（localized PCa）（n=10）以及伴有远处转移的前列腺癌（metastatic PCa）（n=10）。每组10例患者的血清样本进行等体积混合后,应用iTRAQ技术联合液相串联质谱分析（LC-ESI-MS/MS）对蛋白质进行鉴定和相对定量。结果:在患者外周血清中共鉴定到蛋白质825个。相对于良性前列腺增生,在前列腺癌组中表达差异在1.2倍以上的蛋白质13个,其中9个表达上调,4个表达下调。结论:基于iTRAQ技术的蛋白质组学方法有助于鉴定出前列腺癌相关的差异蛋白质,为进一步探索前列腺癌肿瘤标志物提供了新的思路和线索。     

HER-2阳性和阴性乳腺癌中差异表达蛋白的定量蛋白质组学初步研究

目的：通过建立人表皮生长因子受体-2（HER-2）阴性和阳性乳腺癌的蛋白质表达谱寻找二者间的差异表达蛋白,为乳腺癌患者提供新的预后指标和治疗靶点。方法应用蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量（iTRAQ）技术建立 HER-2阳性和阴性乳腺癌的蛋白质差异表达谱,分离并鉴定两组乳腺癌的差异表达蛋白,对部分差异表达蛋白进行生物信息学分析,包括蛋白功能注释和分类 GO 分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析。结果应用 iTRAQ 对乳腺癌组织进行蛋白组学分析,鉴定出 HER-2阳性和阴性组有差异表达的蛋白4999种,以 HER-2（＋）／HER-2（－）≥3为上调标准,确定 HER-2阳性组上调蛋白119种。以 HER-2（＋）／HER-2（－）≤0．5为下调标准,HER-2阳性组下调蛋白47种。GO 分析结果显示 HER-2阴性和阳性乳腺癌的差异表达蛋白的分子功能、生物过程、细胞组成较为复杂,并且在上调蛋白和下调蛋白上存在分布差异。KEGG 通路分析发现部分差异表达蛋白涉及168条信号通路。结论 HER-2阳性和阴性乳腺癌间存在差异表达蛋白,这些蛋白涉及复杂的分子功能、生物过程和信号通路。     

应用iTRAQ多重化学标记串联质谱技术筛选晚期卵巢浆液性腺癌组织中卡铂耐药相关蛋白

目的 利用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ) 技术筛选晚期卵巢癌组织中卡铂耐药相关差异表达蛋白,为临床个体化治疗奠定实验基础。方法 收集Ⅲ期低分化卵巢浆液性腺癌标本并通过ATP-TCA药敏试验检测卡铂敏感度。取卡铂敏感和耐药标本各15例, iTRAQ试剂标记,被标记的肽段进行高效液相色谱（HPLC）分离及质谱检测（MS）。结果 共鉴定出iTRAQ标记定量信息有755个显著差异表达的蛋白。卡铂耐药组与卡铂敏感组相比,上调1.2倍以上的蛋白429个;下调0.83倍以下的蛋白326个。上调蛋白中有osteopontin（OPN）、clusterin（CLU）、5'-nucleotidase（CD73）和tissue inhititor of metalloproteinases 1（TIMP1）等18个蛋白与肿瘤恶性行为及化疗耐药相关。结论 应用iTRAQ技术能筛选出多种与晚期卵巢癌卡铂耐药相关的差异表达蛋白,该技术对于肿瘤组织蛋白质组学的研究有很好的应用前景。     

应用SELDI蛋白质芯片技术筛选肺腺癌血清标志物的研究

目的 通过SELDI蛋白质芯片技术筛选肺腺癌特异血清标志物。方法 采用表面增强激光解析离子化一飞行时间质谱技术（SELDI-TOF-MS），选用弱阳离子加疏水膜芯片对15例肺腺癌患者，30例健康人血清进行检测，筛选在肺腺癌患者血清中差异表达的蛋白质。结果 在质荷比0—20000范围内，共检测到180个蛋白峰，建立了由8个差异表达蛋白质组成的肺腺癌诊断模型。这8个蛋白质中有6个在肺腺癌中表达上调，2个表达下调。软件分析结果显示在预测组中诊断肺腺癌的敏感性为93．33％（14／15）、特异性为100．00％（30／30）；对检测组进行双盲检测，敏感性为73．33％（11／15）、特异性为86．67％（26／30）。结论 由8个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分肺腺癌和健康人。SELDI蛋白质芯片技术能直接筛选出肺腺癌患者血清中相对特异的潜在标志物，具有较好的临床应用价值。     

单肺通气大鼠肺泡表面活性蛋白表达的研究

目的研究单肺通气（OLV）大鼠肺组织肺泡表面活性蛋白A（SP-A）和肺泡表面活性蛋白B（SP-B）表达的变化。方法 42只SD大鼠随机分成单肺通气组（A组）、双肺通气对照组（B组）和空白对照组（C组）。A组和B组根据不同的通气时间分成亚组A1、A2、A3组和B1、B2、B3组,将气管导管过深插管至右肺建立右肺OLV模型。分别取各组左右两侧肺组织,光镜下观察其肺泡结构及肺间质的病理变化,免疫印迹法检测肺组织中SP-A和SP-B蛋白水平。结果与C组相比较,随着通气时间的延长,A组和B组肺组织逐渐表现出肺泡充血水肿、肺间质逐渐增厚,且在A组非通气侧这些病理变化更为严重。与C组比较,A组各亚组SP-A和SP-B蛋白表达均减少（P〈0.05）,且随着OLV时间延长,蛋白表达减少更加明显（P〈0.05）;与B组各亚组对应侧肺比较,A组中各亚组左侧肺SP-A和SP-B蛋白表达均减少（P〈0.05）,右侧肺SP-A蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）,右侧肺SP-B蛋白表达在A1、A2组差异无统计学意义（P〉0.05）,而在A3组则比B3组蛋白表达减少（P〈0.05）;A组各亚组组内两侧肺比较,SP-A和SP-B蛋白在A组各亚组左侧肺均比右侧肺蛋白表达减少（P〈0.05）。结论 OLV可致SP-A和SP-B表达下调,且非通气侧比相同时间的双肺通气肺组织下调更明显,这可能是OLV所致肺损伤更加严重的重要因素。     

三阴性与三阳性乳腺癌定量蛋白质组学和生物信息学比较研究

目的：雌／孕激素受体（estrogen receptor／progesterone receptor,ER／PR）和癌基因人表皮生长因子受体2（hu-man epidermal growth factorreceptor2,HER2）与乳腺癌的发生和发展密切相关,其表达状态是乳腺癌分子分型、治疗方案选择和预后预测的重要依据。为了深入探讨 ER／PR／HER2在乳腺癌发生和恶性演进中的意义及相关机制,拟建立ER／PR／HER-2阴性和阳性乳腺癌的蛋白质表达谱,寻找 ER／PR／HER-2阴性和阳性乳腺癌中差异表达蛋白,为乳腺癌患者提供新的预后预测指标和治疗新靶点。方法应用蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量（isobaric tags for rela-tive and absolute quantitation,iTRAQ）技术建立 ER／PR／HER-2阳性和阴性乳腺癌的蛋白质差异表达谱,鉴定2组乳腺癌的差异表达蛋白,对部分差异表达蛋白进行生物信息学分析,包括蛋白功能注释、基因本体论分类分析（gene ontology classification analysis,GO 分析）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of gene and genome,KEGG）通路分析。结果应用 iTRAQ 蛋白质组学技术对乳腺癌组织进行了蛋白组学分析,鉴定出 ER／PR／HER-2阳性和阴性组间有差异表达的蛋白4999种,以 ER／PR／HER-2阳性∶ER／PR／HER-2阴性≥3为上调标准,确定 ER／PR 阳性组上调蛋白73种。以 ER／PR／HER-2阳性∶ER／PR／HER-2阴性≤0．5为下调标准,ER／PR／HER-2阳性组下调蛋白58种。GO 分析结果显示,ER／PR／HER-2阴性和阳性乳腺癌差异表达蛋白的分子功能、生物过程和细胞定位较为复杂,并且在上调蛋白和下调蛋白上存在分布差异。KEGG 通路分析发现,部分差异表达蛋白涉及200条信号通路。结论 ER／PR／HER-2阳性和阴性乳腺癌间存在差异表达蛋白,这些蛋白涉及复杂的分子功能、生物过程和信号通路,可能与 ER／PR／HER-2的表达状态有关。     

乳腺癌患者血清GSN与ORM1差异表达与化疗耐药相关性初步研究

目的：通过检测局部晚期乳腺癌患者新辅助化疗前后的血清凝溶胶蛋白前体（gelsolin,GSN）和a-1-酸性糖蛋白1前体（alpha-1-acidglycoprotein1precursor,ORMl）变化,从蛋白质组学的角度探索乳腺癌的化疗耐药机制并寻找-种能够评价乳腺癌化疗耐药性的血清蛋白标志。方法：选取烟台毓璜顶医院肿瘤内科200801-01-2010-01-01接受新辅助化疗的局部晚期乳腺癌患者共30例,根据化疗疗效分为敏感组和耐药组。耐药组6例,敏感组24例。留取化疗前后血清进行双向凝胶电泳,得到化疗前后在耐药组血清中特异表达的差并蛋白质点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MAI,DI-TOF-TOF）技术对获得的差异蛋白质胶点进行质谱鉴定,得到耐药组的差异蛋白,应用蛋白质印迹法验证差异蛋白的变化趋势。结果：从耐药组血清中共筛选、鉴定出13个差异蛋白质,上调蛋白7个,下调蛋白6个。其中GSN化疗后下调,ORM1化疗后上调。应用蛋白质印迹法验证,结果显示这2个蛋白的变化与其在蛋白质组学中的表现-致。结论：乳腺癌耐药组患者化疗后血清GSN下调,ORM1上调,这2个蛋白可能与乳腺癌化疗耐药机制有关,可能作为评价乳腺癌化疗耐药性的血清标志。     

应用iTRAQ技术筛选预测食管鳞癌放化疗疗效优势蛋白的研究

目的:利用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选预测食管鳞癌放化疗疗效的血清差异蛋白,以指导临床个体化治疗。方法:纳入52例诊断明确的局部晚期和晚期食管鳞癌患者,行规范放化疗,判断疗效及长期随访,同时收集患者治疗前、后血清。应用iTRAQ技术筛选放化疗疗效相关的血清差异蛋白。应用Uniprot、KEGG等数据库对差异蛋白进行生物学分析,筛选出与肿瘤相关、具有核心作用且介导肿瘤相关通路的优势蛋白。结果:疗效评价结果:放化疗敏感组（CR+PR）食管癌患者占59.62%（31/52例）;放化疗抗拒组（SD+PD）占40.38%（21/52例）。放化疗敏感组对比放化疗抗拒组:共筛选出17个有显著差异的差异蛋白,其中上调蛋白为脂联素（ADIPOQ）、IgL C7、血清转铁蛋白（TF）、中性粒细胞防御素（DEFA1）共4个,下调蛋白为聚合物免疫球蛋白受体（PIGR）、单核细胞分化抗原14（CD14）等13个。KEGG通路分析显示,TF、CD14可能分别参与HIF-1、MAPK信号通路的调节。结论:食管鳞癌患者外周血中能够筛选出预测放化疗疗效的潜在优势蛋白,并参与一些关键通路;TF、ADIPOQ、PIGR、CD14对于食管鳞癌放化疗疗效具有潜在的预测价值。     

不同通气方式对肺叶切除术患者S100A8蛋白表达的影响

目的 探讨血清钙结合蛋白Calgranulin A（S100A8）在不同通气方式下行肺叶切除术的表达。方法 选择行肺叶切除术肺癌患者20例,根据采用不同通气方式,分为单肺通气组和双肺通气组,每组10例。记录两组患者的手术时间、麻醉时间、总输液量、氧合指数、苏醒时间、拔管时间、吸痰次数、有无肺炎、有无肺不张、术后住院时间、有无死亡等情况。采用Western blot分别在手术前（T0）、手术结束时（T1）、术后24 h（T2）和术后48 h（T3）检测两组患者血清中S100A8的表达。结果 单肺通气组和双肺通气组患者手术时间、麻醉时间、总输液量、苏醒时间、拔管时间、吸痰次数、肺炎发生情况、肺不张发生情况、死亡发生情况等比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。单肺通气组氧合指数较双肺通气组低［（296.20±77.64） mmHg vs （319.20±30.23） mmHg,t=2.189,P=0.042）］,术后住院时间增加［（7.80±1.87） d vs  （6.20±1.48） d,t=2.121,P=0.048］。术前单肺通气组和双肺通气组S100A8表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。重复方差分析显示,不同通气方式S100A8表达组间差异有统计学意义（F=310.76,P＜0.001）,随时间变化的趋势不同（F=24.85,P=0.025）,组间与时间点存在交互作用（F=18.85, P=0.001）。结论 行开胸肺叶切除术肺癌患者采用单肺通气较双肺通气的术中氧合指数降低,且S100A8表达升高,可能与其更易发生呼吸机相关性肺损伤有关。     

TMT定量蛋白质组学方法筛选鼻咽癌复发相关表达蛋白

目的 筛选鼻咽癌复发与正常复查随访患者血清差异表达蛋白,寻找鼻咽癌复发诊断的标志物。方法 采集复发20例和正常复查随访20例鼻咽癌患者血清,采用TMT联合二维质谱筛选差异蛋白。进一步收集新标本并采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）验证差异蛋白,其中复发40例和正常复查随访41例。结果 血清中共鉴定出635个蛋白,其中可定量蛋白为413个。两次生物学重复实验中,复发组均表现下调的蛋白有41个,均表现为上调的蛋白有18个。血清ELISA验证结果发现,复发组A2M蛋白浓度较正常复查随访组低（Z=-3.177,P=0.001）。复发组40例患者中可测出A2M蛋白浓度23例,正常复查随访组41例患者中可测出A2M蛋白浓度30例,Spearman相关分析结果显示,可测复发组和可测正常复查随访组患者A2M蛋白浓度与肿瘤分期（r=-0.024,P=0.866）、年龄（r=-0.087,P=0.534）均无相关性,两组患者年龄、性别及肿瘤分期等差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 A2M蛋白可能是鼻咽癌复发诊断的潜在标志物。     

低潮气量联合低呼气末正压通气用于食管癌根治术患者单肺通气的临床观察

目的：观察低潮气量联合低呼气末正压通气用于食管癌根治术患者单肺通气的临床效果。方法：32例ASAⅠ或Ⅱ级择期行食管癌（中段）根治术患者随机均分为A、B两组。A组为低潮气量联合低呼气末正压通气组：VT=6ml.kg-1,f=16次/min-1,加5cm H2O PEEP;B组为传统单肺通气组：VT=10ml.kg-1,f=12次/min。观察气管插管后切皮前（T1）、单肺通气后60min（T2）、恢复双肺通气后15min（T3）、拔管后30min（T4）的动脉氧分压（PaO2）、动脉二氧化碳分压（PaCO2）、呼气末二氧化碳分压（PETCO2）、氧合指数（PaO2/FiO2）、平均动脉压（MAP）及术中的气道峰压（Ppeak）、气道平台压力（Pplat）、气道压力（Paw）。结果：T2时A组的Ppeak、Pplat及Paw明显低于B组（P〈0.05）;T2,3,4时A组的Pa02、Pa02/Fi02明显高于B组（P〈0.05）;两组各时点PaCO2、PETCO2及MAP差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：食管癌根治术中应用低潮气量联合低呼气末正压通气能有效改善患者术中低氧血症,减少肺部并发症,有利于患者呼吸功能的恢复,对血流动力学无明显影响,是食管癌根治手术全麻安全、有效的通气方法。     

食管癌术中硬膜外阻滞对单肺通气期间动脉氧合的影响

目的 探讨食管癌手术采取全麻复合硬膜外阻滞麻醉时对单肺通气（OLV）期间动脉氧合的影响。方法 选择60例行经左胸食管癌根治术患者（ASAI-II级）,随机分为静脉全麻复合硬膜外阻滞麻醉组（A组,30例）和仅静脉全麻组（B组,30例）。两组患者分别于OLV前（T1）、OLV 15min（T2）、OLV 30min（T3）抽取桡动脉血和混合静脉血行血气分析,计算通气/血流比（Qs／Qt）值。结果 在T2和T3时,A组氧分压（PaO2）分别为（219.3±48.2）mmHg和（174.7±37.6）mmHg,显著低于B组的（268.1±81.2）mmHg和（221.6±87.0）mmHg。在OLV期间,A组的Qs／Qt显著高于B组（P＜0.05）,各时间点A组血压均显著低于B组（P＜0.05）。结论 全麻复合硬膜外阻滞麻醉时会引起食管癌患者术中血压下降,而且会引起OLV期间肺内分流的增加和氧分压的降低。     

应用二维电泳、液相色谱串联质谱技术筛选前列腺癌骨转移相关血清蛋白

目的 筛选前列腺癌骨转移患者和无骨转移患者血清中的差异蛋白质。方法 收集前列腺癌骨转移患者和无骨转移患者的血清,分别将两组血清混合并进行二维电泳,随后用液相色谱串联质谱技术进行差异蛋白的进一步分离和鉴定。最后用酶联免疫吸附试验进行验证。结果 发现了两组患者血清中表达水平有显著差异的三个蛋白质：载脂蛋白A-Ⅰ、血清淀粉样蛋白A和细胞角蛋白10,其中血清样淀粉蛋白A-Ⅰ和细胞角蛋白10在骨转移组表达升高;载脂蛋白A-Ⅰ在骨转移组表达降低。免疫吸附试验分析显示：骨转移的前列腺癌患者血清中载脂蛋白A-Ⅰ的表达率显著低于无骨转移的患者。结论 载脂蛋白A-Ⅰ、血清淀粉样蛋白A和细胞角蛋白10与前列腺癌骨转移相关,可能作为前列腺癌骨转移的诊断或预测标志。     

血管内皮生长因子和促红细胞生成素在单肺通气期间的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和促红细胞生成素（EPO）在单肺通气（OLV）肺泡细胞低氧代谢的表达及其意义。方法37例行开胸食管癌手术患者随机分为单肺通气组（OLV组）17例,双肺通气组（TLV组）20例。每组患者分别于OLV或TLV前（T1）、OLV或TLV后30min（T2）、60min（T3）、90min（T4）、120min（T5）、手术结束时（T6）抽取静脉血,检测血清VEGF、EPO水平;并分别于T1、T3、T6时点行血气分析,监测血红蛋白（HGB）Tk平。结果OLV组T6时点PaO2值明显低于TLv组（P〈O．05）,除T1、T2外,OLV组各时点VEGF浓度均高于TLV组（P〈0．05）,OLV组T5、T6时点的血清EPO浓度明显高于TLV组（P〈0．05）。结论在单肺通气期间VEGF和EPO因子表达明显上调,可能参与肺组织损伤及修复过程。     

MALDI蛋白指纹图谱筛选NSCLC患者化疗耐药相关血清标志物

目的通过检测吉西他滨联合顺铂方案化疗敏感及耐药的晚期非小细胞肺癌患者治疗前血清蛋白质谱的差异,寻找可能的化疗耐药血清预测因子。方法收集非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）Ⅳ期患者治疗前血清,予以吉西他滨联合顺铂化疗,每2疗程后评估疗效。基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）检测血清蛋白,生物信息学分析找出差异蛋白峰,对筛选的差异蛋白峰进一步用遗传算法结合支持向量机模型的方法筛选最佳模型。结果收集25例晚期NSCLC患者,14例部分缓解（partial response,PR）进入化疗敏感组,2例疾病稳定（stable disease,SD）和9例出现疾病进展（progression disease,PD）进入化疗耐药组。化疗敏感组与耐药组出现10个明显差异蛋白质峰（P〈0.05）。其中筛选得到4 978 Da、2 999 Da、4 996 Da、2 627 Da、4 188 Da、1 458 Da及1 984 Da 7个蛋白峰组成的最佳模型。结论 MALDI-TOF-MS技术检测得到血清差异蛋白模型可用于预测吉西他滨联合铂类二药化疗疗效。但需进一步扩大样本量以完善及验证疗效预测模型。     

基于二氧化硅、百草枯、博莱霉素建立3种大鼠肺纤维模型的差异蛋白质组学分析

目的 以二氧化硅、百草枯、博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化(PF)模型为研究对象,以期在3种大鼠PF模型中探究存在差异表达的参与PF发生、发展相关的关键蛋白.方法 应用同位素标记相对与绝对定量技术(iTRAQ)结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析3种大鼠PF模型肺组织蛋白表达谱;采用Proteome Discove...