基因诊断儿童Alport综合征30例临床分析

目的　探讨儿童Alport综合征（Alport syndrome,AS）的临床表型与基因突变检测的临床意义。方法　回顾性分析2013年1月至2017年6月在广州医科大学附属广州市第一人民医院儿科收治的30例基因突变患儿的资料。采集患儿及其家系成员的外周血样品,应用基因测序外显子序列捕获技术,寻找样品中是否存在Ⅳ型胶原α3链（COL4A3）、α4链（COL4A4）或α5链（COL4A5）三个突变基因,并对直系亲属行基因验证。结果　经过基因检测确诊Alport综合征（AS）30例,18例（60.00%）进行肾活检,光镜检查结果呈多样化,5例（16.67%）电镜检查表现为肾小球基底膜（glomerularbasementmembrane,GBM）弥漫性变薄、增厚和撕裂分层; 4例（13.33%）电镜表现为薄基底膜病（thin basement membrane nephropathy,TBMN）改变;免疫荧光检查3例（10.00%）肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链阴性。22例患儿基因诊断X连锁显性遗传Alport syndrome （X-linked Alport syndrome,XL-AS）,发现8个COL4A5新突变位点。8例患儿基因诊断为常染色体隐性遗传（autosomal recessive Alport Syndrome,AR-AS）,发现3个COL4A4新突变位点。结论　儿童Alport综合征临床表现多样化,缺乏特异性,肾组织病理类型各异,难以早期诊断。基因检测有助于AS的早期诊断,判断患儿的预后,避免不必要的药物治疗。     

Alport综合征患儿临床表型及基因型单中心分析

目的 了解儿童Alport综合征(AS)临床表型及基因突变的特点.方法 回顾性分析2011年5月至2014年5月于上海交通大学附属儿童医院肾脏风湿科明确诊断并具有完整资料(临床、肾组织病理、基因检测结果)的AS患儿25例.采用外显子捕获-二代测序技术进行基因检测,包括COL4A3、COL4A4、COL4A5基因,并同时进行家系验证.结果 (1)25例患儿中X连锁AS(XL-AS)19例(76％),常染色体隐性遗传AS (AR-AS)6例(24％).25例患儿均以血尿和(或)蛋白尿起病,8例以上呼吸道感染为诱因.其中2例(8％)存在听力损伤,1例(4％)患儿存在眼部病变.(2)25例均行肾组织活检,光镜表现为:16例轻微病变,8例系膜增生,1例局灶节段硬化.电镜下仅2例(8％)见肾小球基底膜致密层撕裂分层等典型AS改变,另4例表现为薄基底膜病,8例系膜增生性改变,6例轻微病变,5例未见肾小球.肾组织Ⅳ型胶原α链间接免疫荧光检测中21例(84％)存在表达缺失.(3)对25例(来自23个家系)行COL4A3、COL4A4及COL4A5基因突变检查,发现突变类型24种(16种突变未见报道).其中COL4A3基因突变1种(4％),COL4A4基因突变5种(21％),COL4A5基因突变18种(75％).同时对25例患儿的直系家庭成员全部可疑致病突变进行了验证,结果发现13例突变遗传自母亲,3例遗传自父亲,2例(同胞姐妹)患儿的1种突变遗传自父亲、另一种遗传自母亲,7例为新生突变.结论 (1)AS以X连锁显性遗传为主,病理检查多表现为轻微病变或系膜增生性改变,电镜下少数患儿可表现为薄基底膜病.(2)25例患儿共检出24种COL4A3、COL4A4、COL4A5基因突变,其中16种未见报道.     

一个Gilbert综合征家系UGT1A1基因突变报告

目的通过对一个Gilbert综合征遗传家系UGT1A1基因突变位点的检测,明确该家系的基因遗传特点。方法提取先证者及其4名家系成员基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶UGT1A1基因的5个外显子、启动子及苯巴比妥增强原件,以琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物,纯化后直接测序鉴定。同时检测生化指标。结果先证者UGT1A1基因1号外显子第211位的鸟嘌呤(G)突变为腺嘌呤(A),为Gly71Arg纯合突变。其父、兄、祖母均存在Gly71Arg纯合突变,其母为杂合突变。血液生化检测结果证实基因型与表型一致。结论该家系的分子遗传学特征为UGT1A1基因第1外显子Gly71Arg突变。     

X-连锁肾上腺脑白质营养不良ABCD1基因突变分析

目的对5例X-连锁肾上腺脑白质营养不良（X-ALD）患儿及其中2例的母亲进行ABCD1基因突变分析。方法聚合酶链反应（PCR）扩增5例X-ALD患儿ABCD1基因的10个外显子及其侧翼序列,直接进行测序。将测序结果与正常ABCD1基因序列比对,确定突变位点和突变形式。同时测定30例健康儿童ABCD1基因序列以明确突变位点是否为基因多态性。结果伴ABCD1基因突变3例,1例为外显子6上518位氨基酸的点突变,为Arg518Gly（CGG→GGG）;2例为外显子1上8个碱基缺失（134del8）。同时在外显子7上发现4个位点的基因多态性,分别为Gly551X（GGC→GGT）、Arg554His（CGT→CAT）、Gln567Arg（CAA→CGA）和Val582Ile（GTC→ATC）。2例患儿的母亲均未检测到突变。结论3例X-ALD患儿证实存在ABCD1基因突变,其中外显子1的8个碱基的缺失（134del8）为新发现的突变;新发现中国人外显子7的4个位点基因多态性,分别为Gly551X、Arg554His、Gln567Arg和Val582Ile。     

成骨不全4个家系基因突变检测及表型与基因型的关系

目的对国内4个成骨不全(OI)家系进行临床调查分析和基因突变检测,探讨中国人群OI基因型与表型的关系。方法分别对4例来自不同家系的OI先证者进行体格检查及家系调查,收集临床资料及血液标本,绘制家系图谱,确定各家系成员患病个体的临床诊断分型。提取其血液标本基因组DNA,应用PCR扩增及DNA直接测序法对4例先证者Ⅰ型胶原基因进行基因突变检测,并应用生物信息学软件对测序结果与Genbank标准序列进行对比;根据先证者检测结果,分别对各家系成员进行COL1A1/COL1A2基因突变检测和分析。结果在先证者1及家系患病个体中检测到COL1A1基因第36外显子c.2473位点G>A突变,在先证者2COL1A1基因上第26内含子剪切位点处c.1821+1G>A突变,在先证者4及家系患病个体中检测到COL1A1基因第9内含子剪切位点处c.697-2A>T突变,先证者3及4个家系非患病成员均未检测到COL1A1/COL1A2基因突变。结论COL1A1基因突变是引起中国人群OI的原因之一,但还可能有其他的基因突变存在,临床表型不仅与基因型有关,还可能受遗传背景、环境及其他因素的影响。     

儿童Alport综合征COL4A5基因型及临床特点分析

目的 探讨儿童Alport综合征（Alport syndrome,AS）致病基因COL4A5基因型与临床表型的特点。 方法 回顾性分析19例存在COL4A5基因突变的AS患儿的基因检测结果和临床资料。 结果 19例COL4A5基因突变导致的AS患儿中,1例（5%）存在COL4A5基因新突变位点c.3372A>G(p.P1124=),其表现为AS合并IgA血管炎肾炎;3例（16%）存在COL4A5基因大片段缺失,其中2例（例7为新突变位点：loss51-53）起病即存在肉眼血尿和蛋白尿,1例（例13,存在新突变位点：loss3-53）仅有镜下血尿;其余15例（79%）患儿均为AS的常见临床表型,其中7例存在COL4A5基因新突变位点。3例（16%）患儿合并COL4A4基因突变,1例（5%）合并COL4A3基因突变,在这些双基因突变患儿中有2例起病即为肉眼血尿合并蛋白尿。 结论 该研究拓展了AS致病基因COL4A5的基因型和表型谱;发生COL4A5基因大片段缺失突变或COL4A5合并COL4A3或COL4A4的双基因突变患儿的临床表现更严重。     

COL4A5突变Alport综合征儿童临床表型分析(附31例报告)

目的探讨儿童X-连锁显性遗传性Alport综合征临床表型和基因型的特征。方法回顾性分析2011年6月至2016年6月上海交通大学附属儿童医院肾脏风湿科确诊的31例COL4A5基因突变的X-连锁Alport综合征患儿的临床特征和病理特点。结果 (1)31例患儿中共12例(38.7%)女性,19例(61.3%)男性,平均发病年龄2.6岁。13例患儿以血尿合并蛋白尿起病,22例患儿有阳性家族史。1例患儿有眼部病变,2例患儿听力受损。(2)26例行肾穿刺检查,病理提示15例表现为轻微病变,5例系膜增生,仅6例符合AS的典型改变。(3)共检出31种基因突变,19例错义突变,2例大片段删除,4例剪接突变,6例框移突变。19例错义突变中16例突变为Gly-X-Y型突变。结论 X-连锁显性Alport综合征患儿病理表现多为轻微病变,基因突变以错义突变最为多见,其临床特征和病理表现不典型易引起临床医生的忽视。     

不同遗传型Alport综合征的产前基因诊断

Alport综合征(Alport syndrome,AS)是最常见的遗传性肾脏疾病之一,临床主要表现为血尿和进行性肾功能减退,伴随感音神经性耳聋和眼部异常等.AS是一种遗传异质性疾病,目前已证实存在3种遗传方式:X连锁显性遗传(Xlinked dominant Alport syndrome,XLAS)最为常见,约占80%～85%,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致;常染色体隐性遗传(Autosome recessive Alport syndrome,ARAS)约占15%,常染色体显性遗传(Autosome dominant Alport syndrome,ADAS)非常少见,二者均因COL4A3或COL4A4基因突变所致[1-2].我们继往研究中对不少AS家系进行了基因诊断[3],并在国内开展了AS的产前基因诊断[4].在此,我们结合临床实施的几例不同遗传型AS的产前基因诊断家系,探讨此类疾病的产前基因诊断方法以及需要注意的问题.     

儿童Alport 综合征1 例COL4A5 基因新发突变分析

目的分析儿童Alport综合征的基因型和临床特点。方法回顾分析1例Alport综合征患儿的临床资料及基因检测结果。结果患儿男性,11岁,7岁出现不明原因的血尿、蛋白尿,肾功能轻度异常,因治疗依从性差而进展至慢性肾脏病尿毒症期。肾穿刺活检病理显示,慢性硬化性肾小球病变,弥漫性肾小管萎缩(萎缩面积超80%);免疫荧光染色α3、α5(IV)基底膜染色阳性。基因检测显示,COL4A5基因存在的一处半合子突变c.2631dupA(插入突变),导致氨基酸改变p.G878Rfs*20(移码突变20位后蛋白翻译提前终止);家系验证其为新发突变,父母均未携带。依据ACMG指南,该突变变异类型为致病性突变。查阅HGMDpro数据库未见报道。结论基因检测有助于确诊Alport综合征,新发现COL4A5基因半合子突变。     

软骨发育不全与软骨发育低下家系的FGFR3基因突变分析

目的了解临床诊断为软骨发育异常类疾病患儿及其家系成员的成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)基因突变情况。方法应用聚合酶链式反应(PCR)和DNA测序技术分析7例患儿及其家系成员的FGFR3基因突变热点分布区域第10外显子以及第13外显子的序列。结果 4例患儿存在FGFR3基因第10外显子c.1138GA(p.Gly380Arg)杂合突变,确诊为软骨发育不全(ACH),其父母未见突变。1例症状较轻微的患儿及其有同样表型的母亲存在FGFR3基因第13外显子c.1620CA(p.Asn540Lys)杂合突变,确诊为软骨发育低下(HCH)。2例患儿未发现以上两个位点的突变。结论检测FGFR3基因第10、第13外显子可诊断大部分ACH或HCH病例,但少数患儿尚有必要检测FGFR3基因其他区域及其他相关基因以明确诊断。     

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??Objective??To analyze the features of clinical manifestions and gene mutations of Chinesse children with X-linked Alport syndrome??XLAS??. Methods??Retrospectively analyze the clinical and pathological features of 31 patients with Alport syndrome with COL4A5 mutations??who were treated in Shanghai Children’s Hospital from June 2011 to June 2016. Results??Of these 31 cases??there were 12??38.7%?? females and 19??61.3%?? males??and the average age of onset was 2.6 years old. Thirteen patients had an onset of hematuria and proteinuria and 22??70.9%?? patients had family medical history. One patient presented ocular changes and 2 patients had hearing loss. Renal pathology showed that 15 of them had minimal change disease??MCD?? and 5 mesangial proliferative glomerulonephritis??and only 6 had typical pathologic changes of Alport syndrome. We identified 31 different mutations in all patients??and there were 19??61.3%?? cases of missense mutations??2??6.5%??cases of large deletion mutations??4??12.9%?? cases of spice-site mutations and 6??19.3%?? cases of frame shift mutations. Among these 19 missense mutations??16??84.2%?? cases were Gly-X-Y mutations. Conclusion??Most of XLAS children show MCD in renal biopsy and had missense mutations in COL4A5 gene. Clinical symptoms and pathology are not typical?? resulting in the difficulities in diagnosis of Alport syndrome.     

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??Objective??To investigate the clinical significance of the clinical phenotype and gene mutation detection in children with Alport syndrome. Methods??The data of 30 children with gene mutation admitted to Guangzhou First People’s Hospital??Guangzhou Medical University from January 2013 to June 2017 were retrospectively analyzed. Collect peripheral blood samples from children and their family members .Then use gene sequencing exon sequence capture technology to find out whether there was mutation gene??including ?? type collagen alpha 3 chain??COL4A3????alpha 4 chain??COL4A4?? or alpha 5 chain??COL4A5??. Gene mutations of related family members were identified by Sanger method. Results??The 30 children with AS were diagnosed by gene detection. Renal biopsy was performed in 18 cases??60.00%?? of 30 children with AS??and the results of light microscopy were various. Electron microscopic examination revealed diffuse thinning??thickening and delamination of the glomerular basement membrane??GBM?? in 5 cases??16.67%??. The electron microscopic examination showed thin basement membrane disease in 4 cases??13.33%??. Three cases??10.00%?? of immunofluorescence showed type ?? collagen alpha 3??alpha 5 chain negative in renal tissue. Totally 22 cases were diagnosed with X linkage dominant hereditary Alport syndrome??XL-AS?? by gene text??and 8 new mutation sites of COL4A5 were found. Genetic diagnosis showed 8 children were autosomal recessive inheritance??and 3 new COL4A4 mutations were found. Conclusion??The clinical manifestations of children with Alport syndrome are diverse and lack of specificity??and the pathological types of renal tissue are different. It is difficult to diagnose early. Gene detection helps to early diagnose of AS??to judge the prognosis of the children??and to avoid unnecessary drug treatment.     

X连锁Alport综合征女性患者临床表型差异的可能机制

Alport综合征(Alport syndrome,AS)是以血尿、感音神经性耳聋和进行性肾功能减退为临床特点的遗传性肾脏疾病,X连锁显性遗传(X-linked Alport syndrome,XLAS)为其主要遗传方式,因COL4A5和(或)COL4A6基因突变所致。X连锁Alport综合征女性患者临床表型差异很大,轻者无症状或仅表现为镜下血尿,重者有慢性肾功能衰竭,尤其是来自同一家系的女性患者临床表型可以明显不同,这种现象不能完全用COL4A5基因突变类型来解释。近年来,研究显示XLAS女性患者临床表型的差异与COL4A5突变mRNA及基底膜a5(Ⅳ)链的表达量相关,而COL4A5突变mRNA及基底膜a5(Ⅳ)链的表达量不同的机制可能与X染色体失活有关,其他表观遗传学调控方式也可能参与其中。该文就X连锁Alport综合征女性患者临床表型差异的可能机制进行了文献综述。     

糖原累积症Ⅰb型15家系SLC37A4基因分析研究

目的 研究中国人糖原累积症Ⅰb型SLC37A4基因突变状况.方法 对临床表现为肝大、空腹低血糖、高乳酸血症、高脂血症和粒细胞减少的15家系17例患者进行外周血DNA直接测序,分析SLC37A4基因突变情况.用限制性内切酶片段长度多态性方法对于新发现的错义突变给予分析判断.用RT-PCR方法对于新发现的剪切突变进行分析.并对患者的临床表现和基因型进行比较分析.结果 在15家系的17例患者的28个等位基因上共检测出11种突变和12种基因型,包括错义突变6个,p. Leu23Arg、p.Gly115Arg、p.Gly149Glu、p.Pro191Leu、p.Gly281Val和p.Arg415Gly;剪切突变2个,c,784+1G＞A和c.870+5G＞A;无义突变1个,p.Arg415X;缺失突变2个,c.1014_1120del107和c.1042_1043 del CT.突变p.Pro191Leu、p.Gly149Glu和c.870+5G＞A为最常见突变,分别占37%,15%和11%.结论 从17例糖原累积症Ⅰb型中国患者中共检出突变11种,包括7种新突变,最常见突变为p.Pro191leu、p.Gly149Glu和c.870+5G＞A.

Abstract：

Objective Glycogen storage disease type Ⅰ b (GSD Ⅰ b, MIM: 232220 ) is an autosomal recessive inborn error of metabolism caused by deficiency of the glucose-6-phosphate translocase.The clinical manifestations include symptoms and signs of both the typical GSD Ⅰ a, including hepatomegaly,fasting hypoglycemia, lactic acidemia and hyperlipedemia, and the dysfunction of neutrophils of recurrent infection and neutropenia. More than 84 mutations have been identified since the discovery of the SLC37A4 gene as the disease causing gene. Up to date, 5 mutations in 4 Chinese patients were reported from Hong Kang and Taiwan. In order to see the spectrum of the SLC37A4 gene mutations and the correlation between genotype and phenotype in patients with GSD Ⅰ b of the mainland of China, the authors investigated 17 GSD Ⅰ b patients from 15 families in this study. Method Data of 17 patients from 12 provinces, 11 male and 6 female, aged 6 months to 35 years, were collected from the genetic clinics of Peking Union Medical College Hospital from Oct. 2006 to Mar. 2009. All of them were Han Chinese in ethnicity. Consanguineous status was confirmed in 2 unrelated patients. All patients were presented with hepatomegaly, fasting hypoglycemia,lactic acidemia, hyperlipedemia and neutropenia with variable frequency of infections. The full coding exons, their relevant exon-intron boundaries, and the 5'- and 3'-flanking regions of the SLC37A4 gene were amplified and directly sequenced. RT-PCR was performed to verify the effect of the 2 novel splicing mutations. Result A total of 11 mutations were identified in 15 families. Four mutations, p. Gly149Glu,p. Pro191Leu,p. Arg415X and c. 1042_1043 del CT, were previously reported, and seven mutations, p.Leu23Arg, p. Gly115Arg, p. Gly281Val, p. Arg415Gly, c. 784 + 1G ＞ A, c. 870 + 5G ＞ A and c. 1014_1120del107, were novel. The frequent mutations are p. Pro191Leu, p. Gly149Glu and c. 870 + 5G ＞ A,accounting for 37%, 15% and 11% of mutant alleles respectively. RT-PCR analysis of novel mutation c. 784 + 1G ＞ A confirmed the splicing of exon 5 of 159 bp, causing inframe deletion. While mutation c. 870 +5G ＞ A was proved to cause exon 6, 86 bp, deletion causing frame-shift. Among 15 families, 12 genotypes were identified, including 3 with homozygous mutation and 9 with compound heterozygous mutations.Homozygous p. Pro191 Leu mutation was the only genotype detected in more than 1 family and was found in 4 unrelated families, including 1 patient from consanguineous marriage. Conclusion A total of 11 SLC37A4 gene mutations were identified in 15 families of the mainland of China. The frequent mutations are p. Pro191Leu,p. Gly149Glu and c. 870 + 5G ＞ A. The number of Chinese SLC37A4 gene mutations was extended from 5 to 14.     

91例儿童Alport综合征临床、病理特点及误诊分析

目的探讨儿童Alport综合征(AS)临床、病理特点和诊治情况,以提高对AS的认识。方法收集确诊的91例AS患儿临床资料进行回顾性分析。结果 91例患儿均有血尿,86例伴有蛋白尿。61例X连锁显性遗传AS(XL-AS)患儿有阳性家族史。肾活检的82例患儿中74例有轻度或轻-中度系膜增生,48例系膜区少量免疫复合物,53例肾小球基底膜(GBM)有变薄、增厚和撕裂。63例进行了肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链免疫荧光检测,确诊AS 58例,其中53例符合XL-AS,5例符合常染色体隐性遗传AS。91例AS患儿中,58例通过肾组织Ⅳ型胶原α3、α5链免疫荧光确诊,21例通过电镜确诊,1例通过皮肤活检确诊;12例基因诊断确诊。发现6个COL4A5基因新突变。45例曾被误诊其他疾病,其中41例接受过激素和/或免疫抑制剂治疗。结论儿童AS临床表现缺乏特异性,特征性GBM电镜改变仅见于部分患儿,本区域儿童AS误诊误治率仍较高。COL4A5基因新突变比例较高。     

糖原累积病Ib型患儿基因突变分析与临床研究

目的：糖原累积病Ib型（GSDIb）是由于SLC37A4基因突变引起葡萄糖-6-磷酸转移酶（G6PT）活性缺陷所致,该病患者大部分有反复感染及炎症性肠病的发生,预后较差。SLC37A4基因的检测对GSDIb患者的诊断、分型、预测患者的预后尤为重要。本文旨在研究糖原累积病Ib型患儿SLC37A4基因突变的情况,探讨基因型与临床表型的关系。方法：应用聚合酶链反应直接测序的方法,对拟诊GSDIb型的28例患儿行SLC37A4基因外显子及其相邻区域的突变筛查。结果：7例患儿检测到SLC37A4基因突变,检出率为25% (7/28例),包括错义突变：p.Gly149Glu（9/13,69%）、p.Gly115Arg（1/13,8%）、p.Pro191Leu（1/13,8%）;移码突变：c.959-960 insT（1/13,8%）;剪接突变：c.870+5G>A（1/13,8%）。结论：c.959-960 insT为新突变,p.Gly149Glu为本研究最常见的突变,p.Gly149Glu突变可能与患儿的严重感染相关。     

双胎新生儿枫糖尿病及其基因突变分析

目的 分析一对经典型枫糖尿病（MSUD）汉族双胎新生儿的临床特点及其相关基因的致病性突变,为MSUD早期诊治提供指导。方法 收集患儿的临床及影像学资料,提取患儿及其父母的外周血,检测枫糖尿病相关基因（BCKDHA,BCKDHB,DBT,DLD）,确定基因突变位点,并进行生物信息学分析。结果 双胎患儿在BCKDHB基因上发现2个突变：错义突变c.304G > A（p.Gly102Arg）和无义突变c.331C > T（p.Arg111*）,均为杂合子,且c.304G > A（p.Gly102Arg）为国际上未报道的新突变。其父亲携带错义突变c.304G > A（p.Gly102Arg）,其母亲携带无义突变c.331C > T（p.Arg111*）。结论 BCKDHB基因c.331C > T（p.Arg111*）杂合突变是该双胎患儿的致病性突变,是枫糖尿病患儿临床表现的基因分子基础。     

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目的探讨肥胖儿童黑皮质素4受体(MC4R)的突变频率及其与临床生化指标改变的关系。方法浙江大学医学院附属儿童医院等单位于2004—2005年,对200例肥胖及100例正常体重儿童,利用PCR及基因测序技术进行MC4R基因筛查,同时对200例肥胖儿童进行生化检测和口服葡萄糖耐量试验。结果(1)200例肥胖儿童中检出杂合子错义突变、无义突变3例;100例对照组中未检出突变;Val103Ile基因多态性在两组中分别有6例、2例。肥胖组中发现了3个新的杂合子突变位点Val166Ile、Cys277Stop、Arg310Lys;肥胖组和对照组中同时检测到新的杂合子变异Leu23Arg。(2)MC4R突变组和非突变组的肥胖儿童BMI、ALT、AST、TG、CHO、WBI-SI比较均无统计学意义(P>0·05)。结论(1)首次在汉族儿童人群中发现了MC4R基因3个新的杂合子突变位点(Val166Ile、Cys277Stop、Arg310Lys)。(2)Leu23Arg可能是汉族人群MC4R的基因多态性。     

儿童肾母细胞瘤WT1基因突变四例报道

目的 研究儿童肾母细胞瘤患者WT1基因的突变类型及突变频率.方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增出54例儿童肾母细胞瘤患者WT1基因全部10个外显子及其相邻内含子序列,经纯化后进行PCR产物直接测序.结果 4例患者WT1基因分别存在3个杂合无义突变及1个纯合错义突变.例1患者WT1基因7号外显子第1006位碱基A→T杂合突变,造成第336号氨基酸由赖氨酸转变为终止密码子,即K336X.例2患者WT1基因9号外显子第1168位碱基c→T杂合突变,造成第390号氨基酸由精氨酸转变为终止密码子,即R390X.例3患者WT1基因6号外显子第814位碱基G→T杂合突变,造成第272号氨基酸由谷氨酸转变为终止密码子,即E272X.例4患者WT1基因10号外显子第1228位碱基A→G纯合突变,造成第410号氨基酸由丝氨酸转变为甘氨酸,即S410G.结论 散发的中国儿童肾母细胞瘤患者WT1基因外显子突变的发生率与国外报道相近,检测到的4例突变患者中3例为无义突变、1例为错义突变.