大鼠心室肌细胞的分离及其钙电流的观察

目的：探讨大鼠心肌细胞酶急性分离的方法，并观察大鼠心室肌细胞膜钙电流。方法：采用Lngendorff灌流装置，用含胶原酶P(0．12g/L)的台式液，经主动脉逆行灌流心脏，分离心肌细胞；采用膜片钳全细胞记录的方法，观察记录大鼠心室肌细胞膜L型钙电流。结果：心肌细胞的存活率约70％-80％，形态呈长杆状，横纹清晰，膜良好。膜片钳全细胞记录出电压依赖性内向电流，其激活电位-30mV，最大激活电位0mV，反转电位50mV，并且此内向电流可被钙通道阻滞剂维拉帕米抑制。结论：用此法可分离出高存活率的心肌细胞，并具有正常的电生理特性。     

黄连素对培养鸡胚心室肌细胞钙单通道电流的影响

在培养的鸡胚心室肌细胞上，我们采用膜片钳技术的细胞贴附式构型，研究了黄连素（ＢＲ）对细胞膜钙单通道电流的影响。提示：（１）ＢＲ是一种钙通道激活剂；（２）ＢＲ对钙通道的调节作用依赖于β受体介导的磷酸化过程。     

黄连素对培养鸡胚心室肌细胞钙单通道电流的影响

在培养的鸡胚心室肌细胞上，我们采用膜片钳技术的细胞贴附式构型，研究了黄连素（Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ，ＢＲ）对细胞膜钙单通道电流的影响。结果表明：ＢＲ可使心室肌细胞膜钙单通道电流明显增加；钙通道可利用率增加１１４．２％（Ｐ＜０．００１）；钙通道开放概率增加７５．３％（Ｐ＜０．０５）。用心得安阻断β受体或用异搏定阻断钙通道，均可逆转ＢＲ的上述作用。以上提示：①ＢＲ是一种钙通道激活剂；②ＢＲ对钙通道的调节作用依赖于β受体介导的磷酸化过程。     

粉防己碱对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

应用全细胞记录式膜片技术研究了粉防己碱（Ｔｅｔ）对豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙电流（Ｉｃａ）的影响，Ｔｅｔ１μｍｏｌ／Ｌ使Ｉｃａ的电流－电压关系曲线之各电流值为均降低，指令电位（ＶＴ）为０ｍＶ，Ｔｅｔ０．１～３．２μｍｏｌ／Ｌ使Ｌｃａ呈浓度依赖性降低，半数抑制浓度（ＩＣ５０）为０．７μｍｏｌ／Ｌ，此外Ｔｅｔ０．３μｍｏｌ／Ｌ能阻滞异丙基肾上腺素（Ｉａｐ）０．１μｍｏｌ／Ｌ引起的Ｉｃａ的增大，证明了Ｔｅｔ可     

淫羊藿苷对兔心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的:利用膜片钳技术研究淫羊藿苷(ICA)对兔单个心室肌细胞L-型钙电流(ICa,L)的影响。方法:采用酶解法分离兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察10,20,40μmol/L的ICA对心室肌细胞ICa,L的作用。结果:①10,20,40μmol/L的ICA使兔心室肌细胞ICa,L最大峰电流密度从(15.81±1.23)pA/pF分别降至(11.27±0.89)pA/pF,(9.48±0.85)pA/pF和(6.87±0.81)pA/pF(n=6,P<0.05),抑制率分别为28.7%,40.0%和56.5%;ICA使ICa,L的电流-电压曲线上移,但不改变其基本形状;②20μmol/L ICA可以使钙通道稳态失活曲线左移并可减慢L-型钙通道失活后的恢复过程。结论:ICA对ICa,L具有浓度依赖性阻滞作用,这可能是其抗心律失常的重要机制之一。     

粉防己碱对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

应用全细胞记录式膜片钳技术研究了粉防己碱（Ｔｅｔ）对豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙电流（Ｉ（Ｃａ））的影响。Ｔｅｔ１μｍｏｌ／Ｌ使Ｉ（Ｃａ））的电流－电压关系曲线之各电流值均降低。指令电位（ＶＴ）为０ｍＶ，Ｔｅｔ０．１～３．２μｍｏｌ／Ｌ　使Ｉ（Ｃａ）呈浓度依赖性降低，半数抑制浓度（Ｌ（５０））为０．７μｍｏｌ／Ｌ。此外，Ｔｅｔ０．３μｍｏｌ／Ｌ能阻滞异丙基肾上腺素（Ｉ（ｓｐ））０．１μｍｏｌ／Ｌ引起的Ｉ（Ｃａ）的增大。证明Ｔｅｔ可阻滞豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙电流，并提示有增大延迟整流钾电流（Ｉ（ｏｕｔ））的作用。     

心肌梗死后抑郁大鼠心室肌细胞L型钙电流的动力学改变

目的:观察心肌梗死后抑郁大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的动力学特性。方法:将60只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(n=10),心梗组(n=20),抑郁组(n=10),心梗后抑郁组(n=20)。通过结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,予慢性不可预见性温和刺激建立抑郁模型,利用酶解法分离梗死周边区心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录L型钙电流的变化,研究抑郁对心肌梗死后大鼠心室肌细胞ICa-L的动力学影响。结果:与心梗组比较,心梗后抑郁组的I-V曲线上移,激活曲线右移,并延长失活后恢复时间。结论:抑郁可能通过改变心肌梗死后心室肌细胞L型钙通道的动力学来诱发室性心律失常。     

溶血磷脂酸对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

目的 :研究溶血磷脂酸 ( LPA)对心肌细胞膜离子通道的作用及机制。方法 :采用全细胞膜片钳技术。结果 :0 .1、1 .0和 1 0 .0 μmol·L-1的 LPA对豚鼠心室肌细胞 Ca2 +通道电流均具有明显的增强作用 ,而且这种作用可以被 G蛋白受体阻断剂白喉毒素阻断。结论 :LPA通过与 G蛋白偶联的膜受体介导促进豚鼠心室肌细胞 Ca2 + 通道开放     

乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流的影响

【目的】观察乙醇对兔心室肌细胞L-型钙离子通道电流（ICa,L）的影响。【方法】采用蛋白酶消化的成年兔单个心室肌细胞及膜片钳全细胞技术，记录不同浓度乙醇对ICa,L的作用。【结果】（1）乙醇抑制ICa,L峰值，24mmol／L和240mmol／L乙醇抑制率差异有统计学意义（P〈0．05）。（2）24、80、240mmol／L乙醇使ICa,L的电流一电压（I—V）曲线上移，在各测试电压下，电流均减小，但不影响曲线形状，用乙醇后最大激活电压仍在0mV左右。【结论】致毒浓度（24mmol／L）的乙醇对ICa,L具有明显抑制作用。可导致心肌产生负性肌力作用，动作电位时程缩短，诱发心律失常。     

1-磷酸鞘氨醇对豚鼠心室肌细胞钙电流的影响

目的：研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）对心室肌细胞膜钙离子通道的作用及机制。方法：Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞,随机选取心室肌细胞分为正常对照组和S1P 0.1、1.0和10.0 μmol•L^-1剂量组以及百日咳毒素（PTX）0.1 mg•L^-1+S1P1.0 μmol•L^-1组。采用全细胞膜片钳技术分别记录各组心室肌细胞Ca²⁺电流。 结果：1.0 μmol•L^-1的S1P使豚鼠心室肌细胞Ca²⁺电流从给药前的(0.256±0.030)mV增加到（0.367±0.090）mV（P<0.05）,10.0 μmol•L^-1的S1P使Ca²⁺电流从给药前的(0.242±0.030)mV增加到(0.364±0.060)mV(P<0.01),而加入G-蛋白耦联受体阻断剂PTX后,S1P对Ca²⁺通道电流的作用与给药前比较差异无显著性。结论：S1P通过与G-蛋白耦联的细胞膜受体介导促进豚鼠心室肌细胞Ca²⁺通道的开放,并具有一定的剂量依赖性。     

豚鼠心室肌细胞的分离及其基本电生理特性的观察

目的 分离豚鼠单个心室肌细胞,并观察其基本电生理特性.方法 Langendorff灌流,胶原酶法分离心室肌细胞;应用膜片钳全细胞模式记录心室肌细胞的动作电位和L型钙通道电流.结果 酶法分离得到存活杆状细胞达50%以上.全细胞电流钳模式下记录,细胞静息电位为(-69.9±3.4)mV,复位到95%时的动作电位时程(APD95)为(313.1±38.9)ms.全细胞电压钳模式下记录到典型L型钙通道电流.结论 该方法能够简单有效地获得性能稳定的心室肌细胞,尤其适用于膜片钳心电生理学的研究.     

二乙酰基莲心碱对心室肌细胞膜钠、钙通道的影响

目的 :探讨二乙酰基莲心碱 (Diacetyl linesinine)对家兔心室肌细胞膜钠、钙离子通道的影响。方法 :选取10只体重 1.5～ 2 .0kg的健康新西兰大耳白兔 ,酶解法分离单个心室肌细胞 ,应用全细胞膜片钳技术观察 10 ,30 ,10 0 μmol·L-1的二乙酰基莲心碱对心室肌细胞膜钠通道和钙通道的作用。结果 :二乙酰基莲心碱浓度依赖性减少钠电流和L 型钙电流 ,10 ,30 ,10 0 μmol·L-1的二乙酰基莲心碱可分别使峰值钠电流降低 4 0 .7% ,78.4 %和 89.4 % ;使峰值L 型钙电流降低 5 6 .6 % ,6 5 .7%和 73.6 %。另外 ,二乙酰基莲心碱可使钠通道灭活曲线左移 ,并可减慢钠通道灭活后的恢复过程。结论 :二乙酰基莲心碱对钠电流及L 型钙电流具有浓度依赖性阻滞作用 ,并可作用于钠通道的失活态 ,这些可以部分解释其抗心律失常作用机制。     

丙泊酚对新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察使用丙泊酚前及丙泊酚 (5 0 ,2 5 0 μmol/L)预处理后 ,氯化钾和咖啡因诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果　丙泊酚 5 0 μmol/L使氯化钾诱发的新生或成年大鼠心肌细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,较对照组有明显差异 (P <0 .0 1 ) ,对新生大鼠心肌细胞的抑制作用较成年大鼠明显。丙泊酚 2 5 0 μmol/L使细胞内钙荧光强度峰值进一步降低。但两种浓度的丙泊酚对咖啡因诱发的两种心肌细胞钙荧光强度的升高均无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　丙泊酚浓度依赖地降低心肌细胞内钙离子浓度 ,与其抑制细胞外钙内流有关 ,它对新生大鼠心肌细胞的抑制作用更强。提示临床上使用丙泊酚作为麻醉剂 ,尤其对小儿麻醉时应有足够重视。     

Blocking effect of salvianolic acid a on calcium channels in isolated rat ventricular myocytes

Objective:To study the effect of salvianolic acid A（SAA） on L-type calcium current（l-CaL） in isolated ventricular myocytes of Sprague-Dawley rats.Methods:SAA powder was dissolved in normal Tyrode’s solution to reach the concentrations of 1,10,100,and 1000μmol/L.The traditional whole-cell patch-clamp recording technique was employed to evaluate the effects of SAA on 1-CaL in single ventricular myocytes which were prepared by Langendorff perfusion apparatus from Sprague-Dawley rats.Results:SAA（1,10,100, and 1000μmol/L） inhibited l-CaL peak value by 16.23%±1.3%（n=6,P<0.05）,22.9%±3.6%（n=6,P<0.05）, 53.4%±3.0%（n=8,P<0.01）,and 62.26%±2.9%（n=6,P<0.01）,respectively.SAA reversibly inhibited l-CaL in a dose-dependent manner and with a half-blocking concentration(IC₅₀) of 38.3μmol/L.SAA at 100μmol/L elevated theⅠ-Ⅴcurve obviously,and shifted the half-active voltage(V_0.5) from（-15.78±0.86） mV to（-11.24±0.77） mV（n=6,P<0.05） and the slope（K） from 5.33±0.74 to 4.35±0.74（n=6,P>0.05）.However,it did not alter the shapes ofⅠ-Ⅴcurve,steady-state inactivation curve,or recovery from inactivation curve.Conclusions: SAA inhibited l-CaL in a dose-dependent manner.It shifted the steady-state activation curve to a more positive voltage,which indicated that the drug affected the activated state of calcium channels,and suggested that the Ca²⁺ antagonistic effect of SAA be beneficial in the treatment of myocardial ischemia reperfusion injury.     

间羟胺对大鼠心室肌细胞动作电位及L-型钙电流的影响

目的观察α肾上腺素能受体激动剂间羟胺对大鼠心室肌动作电位及L-型钙电流的影响。方法采用全细胞膜片钳方法,记录离体大鼠心室肌细胞动作电位和L-型钙电流。结果 200μmol/L间羟胺可使心室肌细胞L-型钙电流增大（P〈0.05）,动作电位时程（APD）明显延长（P〈0.01）,动作电位复极50%和90%时间（APD50and APD90）明显延长（P〈0.01）。100μmol/L酚妥拉明可使增大的的L-型钙电流和APD、APD50、APD明显恢复。结论间羟胺可明显延长大鼠心室肌动作电位时程,而酚妥拉明可不同程度地拮抗此效应。     

莲心碱对大鼠心室肌细胞I_(Na)、I_(Ca-L)及稳态外向K~ 电流的影响

采用膜片钳技术,研究了莲心碱（Liensinine,Lien）对大鼠心室肌细胞动作电位及钠电流（INa）、L-型钙电流（ICa－L）及稳态外向K＋电流的影响,Lien30μmol／L可显著地降低动作电位幅度、静息膜电位,延长动作电位时程。Lien10,30μmol／L分别使INa及ICa－L从给药前的（7．9±2．2）nA和（699±175）pA降至（4．3±1．7）、（1．8±1．6）nA和（203±132）、（147±121）pA。Lien10μmol／L还抑制INa、稳态外向K＋电流和ICa－L的I－V曲线并使后者的峰值电流电位略右移。提示Lien有钠、L型钙通道阻滞作用并抑制稳态外向K＋电流,这些可解释Lien广泛的抗心律失常作用机制。     

雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流的影响

目的 研究雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流的影响.方法 运用全细胞膜片钳记录方法了解雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流的作用,并了解其是否存在使用依赖性阻滞作用.结果 30μmol/L雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流有明显的抑制作用,其IC50为(39.3±2.0)μmol/L,并且随着刺激频率的增加其作用加强,存在使用依赖性.结论 雷诺嗪对兔心室肌细胞快钠电流有一定的抑制作用,其存在使用依赖性阻滞作用.     

多用途成年大鼠心室肌细胞分离方法

目的 建立稳定的可同时用于细胞培养和膜片钳实验的成年大鼠心室肌细胞的分离方法 .方法 应用Langendorff灌流.生物酶消化法分离耐钙心肌细胞.分别用左右心室肌做细胞培养和全细胞膜片钳研究.结果 左室心肌细胞数(3.7±0.6)× 10~6,杆状细胞得率(84.85±2.7)%.右室心肌细胞横纹清晰,折光率好,膜片钳实验时容易封接破膜,记录到典型的I_(Ca).L、I_(K1)、I_(to)、I_(Na)电流.结论 该方法 简单、节约、重复性好,改善了杆状细胞得率、细胞质量,左右心室肌细胞分别能很好地用于细胞培养和膜片钳实验.     

安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的：通过研究安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响，以探讨其抗心律失常的作用机制。方法：采用膜片钳全细胞记录技术记录了安律胶囊对单个豚鼠心室肌细胞钾电流的影响。结果：①安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使IK1幅值从给药前的（-2．06±0．29，nA）降低到（-1．95±0．34、-1．67±0．43和-1．62±0．25，nA），大剂量具有显著的统计学意义（P〈0．05）；在对IK1时效关系的实验中，在200斗g／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值钾电流为（-1．60±O．27,nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（-1．56±0．35，-1．34±0．26和-1．26±0．29，nA），无统计学意义（P〉0．05）。②安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使Ito1幅值从未给药时的（1．14±0．17，nA），降低到（1．13±0．17、1．10±0．16和1．06±0．13，nA），但无统计学意义（P〉0．05）。③安律胶囊清膏2、20、200μg／L可剂量依赖性的降低Ik，分别使Ik幅值从给药前的（1．45±0．15，nA），降低到（1．42±0．15、1．29±0．10和1．20±0．11，nA），中剂量组具有显著的统计学意义（P〈0．05），大剂量具有极为显著的统计学意义（P〈0．01）；在对Ik时效关系的实验中，在200μg／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值电流为（1．45±0．15，nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（1．21±0．10，1．20±0．12和1．11±0．13，nA），无统计学意义（P〉0．05）。结论：安律胶囊对IK1有-定的阻滞作用且可剂量依赖性的阻滞Ik，但不具有时间依赖性，对Ito1无阻滞作用，这是其抗心律失常作用的机理之一。