丙泊酚对新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察使用丙泊酚前及丙泊酚 (5 0 ,2 5 0 μmol/L)预处理后 ,氯化钾和咖啡因诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果　丙泊酚 5 0 μmol/L使氯化钾诱发的新生或成年大鼠心肌细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,较对照组有明显差异 (P <0 .0 1 ) ,对新生大鼠心肌细胞的抑制作用较成年大鼠明显。丙泊酚 2 5 0 μmol/L使细胞内钙荧光强度峰值进一步降低。但两种浓度的丙泊酚对咖啡因诱发的两种心肌细胞钙荧光强度的升高均无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　丙泊酚浓度依赖地降低心肌细胞内钙离子浓度 ,与其抑制细胞外钙内流有关 ,它对新生大鼠心肌细胞的抑制作用更强。提示临床上使用丙泊酚作为麻醉剂 ,尤其对小儿麻醉时应有足够重视。     

黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的 研究黄芪多糖对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞肥大的保护作用。方法 新生1～2 d的SD大鼠心肌细胞培养48 h后,设对照组,模型组,黄芪多糖低、中、高质量浓度（1、10、100 mg/L）组。计算机图像分析系统测量细胞体积;RT-PCR法检测心房利钠多肽（ANP）mRNA的表达;ELISA法检测细胞肿瘤坏死因子（TNF-α）的量;采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度（[Ca²⁺]_i）的瞬间变化。结果 与对照组相比,LPS 1 mg/L可使心肌细胞体积显著增大,ANP mRNA的表达显著增强,细胞分泌TNF-α蛋白的量显著增加,心肌细胞内[Ca²⁺]_i瞬间峰值增大（P＜0.01）。与模型组相比,黄芪多糖1、10、100 mg/L预先给药均可抑制心肌细胞体积增大;细胞产生的TNF-α显著减少,ANP mRNA的表达不同程度地减少（P＜0.05）,其中10、100 mg/L组这两项指标可恢复到对照组的水平（P＞0.05）;黄芪多糖 10 mg/L可拮抗LPS对正常心肌细胞内[Ca²⁺]_i瞬间变化幅度增大的作用（P＜0.01）。结论 黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与抑制TNF-α的产生、降低[Ca²⁺]_i有关。     

8 Hz/90 dB次声暴露后心肌细胞凋亡及相关机制研究

目的：观察不同时间90dB次声诱导的大鼠心肌细胞凋亡,并探讨其相关机制．方法：用8Hz／90dB的次声分别作用大鼠1,7,14,21和28d,每日2h,观察大鼠心肌细胞凋亡率的变化,测定大鼠7心肌细胞钙离子浓度的变化．结果：大鼠心肌细胞凋亡率随时间逐渐增大（P〈0．01）,大鼠心肌细胞内钙离子浓度随时问逐渐增多（P〈0．01）．结论：90dB次声可引起大鼠心肌凋亡,与次声暴露时间有关．     

异紫堇啡碱对PGF2α诱导心肌细胞肥大的作用

目的从细胞水平研究异紫堇啡碱对PGF2α诱导心肌肥大的作用.方法利用培养的新生大鼠心肌细胞,以细胞直径大小和蛋白含量为心肌肥大反应的指标,用Fura 2/AM为荧光指示剂测定心肌细胞内钙浓度.结果异紫堇啡碱10-4mol/L可明显抑制PGF2α诱导的心肌细胞肥大和细胞内钙增加.结论异紫堇啡碱可抑制PGF2α诱导心肌细胞肥大,该作用可能与其抑制细胞内钙增加有关.     

分离大鼠大脑皮质神经元长时程单细胞内Ca2+的测定

采用酶解结合机械分离方法,急性分离生后6～7d的SD大鼠的大脑皮质神经元;用Fura-2作为钙离子指示剂,用M40钙离子测量系统(PTI)长时程测量单个细胞内钙离子浓度的变化.以激发光波长340nm和380nm时510nm处的荧光发射强度比率(340/380)显示胞内Ca²⁺浓度的动态变化.     

缺氧对心肌细胞内游离钙浓度和细胞膜Ca2+-ATPase表达的影响及薯蓣皂甙的干预作用

目的探讨缺氧对心肌细胞内游离钙离子浓度和细胞质膜Ca2 -ATPase表达的影响及薯蓣皂甙的干预作用.方法原代培养大鼠心肌细胞,制备心肌细胞缺氧模型,随机分为正常对照组、缺氧损伤组、左旋氨氯地平组、薯蓣皂甙组.分别测定各组心肌细胞内游离钙离子的浓度(FURA2/AM荧光探针法)和细胞质膜上Ca2 -ATPase 表达水平(RT-PCR法).结果缺氧损伤组较对照组心肌细胞内游离钙离子浓度显著上升(P<0.01),细胞质膜上的钙泵的表达明显减弱(P<0.05),经薯蓣皂甙及左旋氨氯地平干预后细胞内游离钙浓度均降低(P均<0.01),细胞膜上钙泵的表达均明显增强(P均<0.01).结论细胞内钙超负荷是缺氧损伤心肌细胞的主要机制之一,薯蓣皂甙通过增加细胞膜上钙泵的表达有效减轻心肌细胞内的钙超载,对缺氧心肌具有保护作用.     

麻黄附子细辛汤中有效成分治疗缓慢性心律失常机制研究进展

麻黄附子细辛汤是中医治疗缓慢性心律失常的常用方剂,其作用机制有多种观点,众多研究认为这种抗心律失常药理作用是通过调节心肌细胞膜各离子通道完成的。目前研究表明麻黄主要有效成分麻黄碱可分别通过KCNQ1/KCNE1通道和cAMP/PKA途径刺激钾、钙通道激活;附子主要有效成分乌头碱及去甲乌头碱均可通过调节心肌细胞膜钠、钾、钙电流而影响心肌兴奋性和传导性;而细辛的有效成分β-细辛醚则可通过阻滞钙通道而扩张冠脉,并可激活心肌细胞膜钠通道而发挥强心作用。该文将针对这三种药物作用于心肌细胞膜离子通道调节机制、临床研究的不足等问题做一总结。     

芪玄益心胶囊对糖尿病大鼠缺血心室肌细胞动作电位及瞬时外向钾电流的影响

[目的]探讨芪玄益心胶囊对糖尿病(DM)大鼠急性缺血心肌瞬时外向钾电流的影响,从细胞通道水平探讨该药的治疗机制。[方法]以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射致胰腺损伤合并舌下静脉注射垂体后叶素使冠状动脉收缩,建立DM急性心肌缺血动物模型,采用全细胞膜片钳技术,记录芪玄益心胶囊对单个大鼠心室肌细胞动作电位(AP)相关指标及对瞬时外向钾电流1(I_to1)的影响。[结果]芪玄益心胶囊高剂量组心室肌细胞动作电位相关指标、瞬时外向钾电流密度较模型组明显改善,同模型组比较具有显著意义(P<0.05)。[结论]芪玄益心胶囊能够加大I_to1的开放,并推测芪玄益心胶囊抗心肌缺血的作用与开放瞬时外向钾电流,改善动作电位,进而产生类似缺血预处理的心肌保护作用密切相关。     

盐酸小檗碱对甲状腺素性豚鼠心肌病心肌细胞中I Kr ， IKs和IK1的抑制作用

目的： 研究盐酸小檗碱(berberine,Ber)对甲状腺素性豚鼠心肌病中延迟整流外向钾电流中快激活成分(I _Kr )和慢激活成分(I _Ks )及内向整流电流(I _K1)的抑制作用。方法： 豚鼠腹腔注射L-甲状腺素造成心肌病后,分离单个心肌细胞,用全细胞膜片钳技术记录钾电流。结果： 在心肌病细胞的I _Kr ,I _Ks 和IK1电流密度均明显增大,Ber 30 mmol/L分别抑制心肌病细胞I _Kr 22.8%（+10 mV）和I _Ks 29.5%（+80 mV）,其对I _Ks 的阻断作用大于I _kr 。Ber 30 mmol/L也能阻断心肌病细胞I _K129.1%（+120 mV）,但不影响其反转电位。Ber(1~300 mmol/L）浓度依赖性地阻断心肌病细胞I _Kr 及I _Ks ,其IC₅₀分别为76 mmol/L和55.37 mmol/L。结论： 甲状腺素性心肌病中出现异常增大的I _Ks ,I _Kr 及I _{K1离子流,Ber有明显阻断作用。}     

参附注射液保护阿霉素心肌毒性机理研究

目的:观察参附注射液保护阿霉素心脏毒性的作用机理.方法:急性分离单个心肌细胞,运用TILLVISION钙离子荧光成像及分析系统,观察不同组间单个心肌细胞内游离钙离子的浓度变化.结果:阿霉素可引起心肌细胞内钙离子水平显著升高(P＜0.01),参附注射液干预可显著降低异常心肌细胞内游离钙离子浓度;同时,参附注射液还可抑制咖啡因诱导的内钙释放.结论:参附注射液对阿霉素心脏毒性的保护作用可能是通过抑制肌浆网的内钙释放,避免心肌细胞内钙超载,从而维持细胞内钙离子水平,达到保护心肌的作用.     

Protective Effect of Carvedilol on Abnormality of L-type Calcium Current Induced by Oxygen Free Radical in Cardiomyocytes

Carvedilol (Car)isanon selectivebeta blockerwithalpha receptorblockadeandantioxidantproper ties[1] .RecentCOMETtrialshowsthatCarextendssurvivalcomparedwithmetoprolol[2 ] .Theroleofox idativestresshasbeenexploredassuchamechanismofchronicheartfailure (CHF) …     

The Effect of Levobunolol Hydrochloride on the Calcium andPotassium Channels in Isolated Ventricular Myocytes of Guinea Pig

Summary The effects of levobunolol hydrochlorid (Bun) on the type L calcium channel currents (I_ca and delayed rectifier potassium channel currents (I_k) in isolated ventricular myocytes of guinea pig were studied by using patch clamp whole cell recording techniques. The results were showed that: 1) Bun caused a dosedependent decrease in I_ca and a dose-dependent increase in I_k of the ventricular myocytes. The threshold concentrations of Bun for I_ca and I_k were 10⁻⁸ mol/L and 10⁻⁷ mol/L respectively. The maximum effective concentration of Bun for both I_ca and I_k was 3 × 10⁻⁵ mol/L, and half-maximal concentration Was 3 × 10⁻⁶ mol/L; 2) I_k was blocked by 2 × 10⁻⁶mol/L tetraethylammonium (TEA). A concentration of 3 × 10⁻⁶ mol/L Bun showed a decreasing effect on the Ic as revealed by the current-voltage relationship curve, i.e., Bun caused an elevation of the curve; 3) When I_ca was blocked by 2X10⁻⁶ mol/L Isoptin (Verapamil), at a concentration of 3 × 10⁻⁶ mol/L Bun showed an increasing effect on Ik and the effect could be blocked by TEA- The above-mentioned results indicated that Bun had an inhibitory effect on I_ca and a fascilitatory effect on I_k. The results suggested that the molecular mechanisms of antihypertensive, heart rate slowing and β-receptor blocking effects of Bun might be due to decrease of I_ca and increase of I_k. This project was supported by Science Committee of Hubei Province (No. 95 JJ9-29).     

大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

 目的分离大鼠心室肌细胞,记录大鼠心室肌细胞的单通钙电流,并分析其基本电生理学性质。方法胶原酶法分离大鼠心室肌细胞;应用膜片钳技术细胞贴附式和内膜向外式记录L-型钙通道的电流,并用pClamp10分析软件进行分析。结果分离得到了大鼠心室肌细胞,细胞存活形态良好,呈杆状或柱状,具有清晰的横纹。记录到的L-型钙通道单通道电流,平均电流幅度为（1.13±0.01）pA,电导为19pS,平均开放时间常数为（1.35±0.03）ms,平均关闭时间常数为（46.75±10.04）ms。此外,还记录到了L-型钙通道的Run-down现象。结论本实验分离得到的大鼠心室肌细胞适用于膜片钳单通道记录模式;记录到的L-型钙通道的基本电生理学性质与文献报道相符。     

人参皂苷单体Rb1对缺血心室肌细胞动作电位及L-型钙离子通道的影响

目的: 观察人参皂苷单体Rb₁对豚鼠缺血心室肌细胞动作电位（AP）和L-型钙离子通道的影响。方法: Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞，随机选取心室肌细胞分为正常对照组、缺血组及Rb₁100、200和400 μmol•L^-13个剂量组。应用全细胞电流钳模式记录心室肌细胞动作电位，应用电压钳模式记录L-型钙离子通道电流（I_ca-L。结果: Rb₁ 100、200和400 μmol•L^-1组缺血心室肌细胞动作电位复极50%（APD₅₀）和动作电位复极90%（APD₉₀）明显低于给药前（P<0.05或P<0.001），缺血后的心室肌细胞L-型钙离子通道峰值电流明显低于给药前（P<0.05或P<0.01）。Rb₁抑制缺血心室肌细胞钙离子通道的开放，随浓度增加钙电流显著降低，具有浓度依赖性。结论：Rb₁缩短缺血心肌细胞AP时程和抑制钙通道的作用，可能是其抗心肌缺血的机制之一。     

急性低氧跑大鼠的心肌损伤与心肌钙电流的变化有关

目的 探讨钙离子在急性低氧跑大鼠心肌损伤中的作用。方法 将40只大鼠随机分为常氧安静组（NQ）、常氧跑步组（NR）、低氧安静组（HQ）和低氧跑步组（HR）,10只/组。两个低氧组每天在低压氧舱（氧分压61.6 kPa）4 h,两个运动组每天使用跑轮装置运动4 h,其中低氧跑步组在低压氧舱运动4 h。使用酶消化法分离大鼠心室肌细胞,膜片钳技术记录动作电位和电流,共聚焦钙离子成像技术检测细胞内钙离子水平,Western blotting分析该蛋白的表达。结果 与NQ组相比,HR组SOD显著降低,h-FABP显著升高（P<0.01）。HR组hs-CRP和IMA均高于NQ组（P<0.05或P<0.01）。HR组心肌纤维呈波浪形,横带增厚,部分细胞核浓缩。HR组APD50、APD90明显延长（P<0.05）。在不同的应激条件下,ICa,L电流密度均有不同程度的增加。其中,HR组的增加最为显著。HR组稳态激活曲线显著左移,稳态失活曲线显著右移。NR组、HQ组和HR组的自发性钙波事件均高于NQ组,尤其是HR组（P<0.05或P<0.01）。应激3组大鼠心肌细胞钙火...     

The Study on Intramyocardial Calcium Overload and Apoptosis Induced by Cosackievirus B3

Cosackievirus B3( CVB3) is a major pathogenfor viral myocarditis. About 65 % of the patientswith acute myocarditis have the short- term infectionof CVB3.In this study,a murine model of the cul-tured cardiacmyocytesinfected by CVB3in vitro wasestablished to investigate the CVB3infection- inducedmyocyte apoptosis and intracellular Ca2 i imbalancein order to explore the mechanism of cardiac myocyteinjury induced by CVB3infection.1　MATERIALSAND METHODS1 .1　 MaterialsRenal cells …     

伸筋易骨法调控软骨细胞内钙离子浓度干预细胞代谢的机制研究

[目的]分析伸筋易骨法对L型钙通道活性及软骨细胞内钙离子浓度影响探讨伸筋易骨法防治膝骨性关节炎（KOA）的力学-生物转导机制。[方法]将50只日本大耳白兔编号并随机分成5组,观察组、对照组、模型组、空白组、假手术组各10只,采用改良的Hulth造模法模拟应力失常诱导的KOA模型,观察组以伸筋易骨法治疗,对照组给予关节腔注射玻璃酸钠注射液治疗。通过激光共聚焦显微镜检测各组原代软骨细胞内钙离子浓度,运用膜片钳技术检测各组软骨细胞L型钙通道电流密度。[结果]观察组、对照组原代软骨细胞内钙离子浓度均高于模型组,差异具有统计学意义（P<0.05）;观察组、对照组软骨细胞内L型钙通道电流密度均高于模型组,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]伸筋易骨法上调细胞表面L型钙通道活性,增加软骨细胞内钙离子浓度,进而发挥促软骨细胞合成代谢的作用,该机制可能是推拿手法或同类物理治疗发挥作用的重要原因之一。     

The beta-adrenergic blocker carvedilol restores L-type calcium current in a myocardial infarction model of rabbit

Background Carvedilol, an antagonist of α1- and β-adrenergic receptors, has shown efficacy in reducing all-cause death and arrhythmia death for ischemic heart disease and congestive heart failure in several large-scale trials. It has been found to prevent ventricular remodeling, and recently was reported to reverse down-regulation of Na+ channel in a chronic heart failure model. This study was conducted to investigate whether carvedilol could reverse the ion remodeling in a myocardial infarction model of rabbit.Methods After the procedure of coronary ligation, animals were randomized to placebo or carvedilol treatment (5 mg/kg). Action potentials, L-type calcium current (Ica L) and the effect of isoproterenol stimulation on Ica L were measured using whole-cell patch method. Evaluation of the expression of calcium channel subunits was carried out by RT-PCR and Western blot. Results The results indicate that mean peak Ica L densities (pA/pF) at +10 mV was reduced in postinfarction myocytes (5.33±0.45, n=25) compared to sham myocytes (6.52±0.21, n=20). Treatment of myocardial infarction rabbits with carvedilol could restore it partially (5.91±0.39, n=20, P&lt;0.05). However, steady-state activation parameters were similar in three groups. With stimulation by isoproterenol (1 μmol/L) Ica L increased in all three groups, but the increase was smaller in postinfarction myocytes. mRNA levels of calcium channel subunit CaA1 gene was decreased but CaB2a, CaB2b and CaB3 mRNA levels did not change after MI. Corresponding change in CaA1 protein was also observed. Conclusions The results demonstrate that carvedilol restores Ica L density and reverse the downregulation of CaA1 postinfarction.     

犬心房肌细胞分离及其L型钙通道电流检测的研究

目的探讨一种稳定可靠的犬心房肌细胞的分离方法,提高膜片钳的实验成功率并检测L型钙通道电流。方法采用改良Langderoff灌流系统行主动脉逆行灌注,采用选择性冠状动脉插管的方法,获得单个心房肌细胞。在显微镜下观察细胞形态,并应用膜片钳全细胞模式记录L型钙通道电流。结果分离细胞存活率为70%～80%,复钙后细胞存活率为30%～40%,耐钙细胞形态呈杆状,折光性强,横纹清晰,并能稳定记录L型钙通道电流。结论改良Langderoff技术有助于稳定分离出存活率高、具有正常电生理特性的犬心房肌细胞,能用于心房肌细胞离子通道的研究。     

用荧光染料fura-2法测定心室肌细胞内游离钙离子浓度

用fura-2荧光染料测定了静息时的酶解分离心室肌细胞内游离Ca~(2+)浓度,40mMKCI和5mM咖啡因都能使心室肌细胞内游离Ca~(2+)浓度增加,但KCI增加游离Ca~(2+)浓度需要细胞外液中存在Ca~(2+),而咖啡因则否,提示KCl增加细胞内游离Ca~(2+)浓度可能是通过细胞外Ca~(2+)内流,咖啡因则使细胞内贮存Ca~(2+)释放。