哮喘小鼠TSLP及其受体表达和布地奈德干预的影响

目的观察哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)及其受体(TSLPR)的表达和布地奈德(BUD)干预对其表达的影响。方法30只雌性昆明小鼠随机分成哮喘组、BUD干预组及正常对照组,每组10只。用卵清蛋白(OVA)进行致敏和激发,建立哮喘模型,同时进行BUD干预。酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清TSLP的水平及肺组织和脾脏中TSLP和TSLPR的表达。结果哮喘组小鼠外周血TSLP的水平较正常对照组明显上升,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);而BUD干预组小鼠外周血TSLP的水平较哮喘组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);BUD干预组虽高于正常对照组,但差别无统计学意义(P>0.05)。各组小鼠肺组织及脾脏TSLP和TSLPR的组间比较结果均与血清TSLP组间比较结果相似。结论哮喘小鼠血清TSLP的表达及肺组织和脾脏内TSLP和TSLPR的表达均增高。TSLP可能在哮喘中起着重要作用,BUD可明显抑制哮喘小鼠TSLP和TSLPR的表达,TSLP或TSLPR可能成为治疗哮喘的潜在靶点。     

STAT6和ORMDL3在哮喘小鼠肺组织中的表达及布地奈德的干预作用

目的 探讨信号转导和转录激活因子6（STAT6）以及哮喘易感基因血清类黏蛋白1 样蛋白3（ORMDL3）在哮喘小鼠气道重塑中的作用,并观察布地奈德（BUD）对上述两种物质水平的干预作用。方法 BALB/c 雌性小鼠30 只,随机分为对照组、哮喘组和BUD 组。应用鸡卵清蛋白（OVA）激发试验建立哮喘小鼠模型,BUD 组在每次激发前30 min 应用生理盐水溶解的BUD 雾化液进行雾化吸入,对照组应用生理盐水替代OVA 溶液。苏木精-伊红染色及Masson 染色观察各组小鼠气道病理学改变;ELISA 法检测各组小鼠肺组织匀浆中IL-13 水平;RT-PCR 法检测各组肺组织STAT6 及ORMDL3 的mRNA 表达。结果 哮喘组气道病理学改变较正常组和BUD 组明显,而BUD 组气道病理学变化较哮喘组减轻。哮喘组和BUD 组IL-13 水平、STAT6 及ORMDL3 的mRNA 表达均明显高于对照组（PPr=0.676,P=0.032）。结论 STAT6 和ORMDL3 可能参与了小鼠气道重塑过程,BUD 可能通过下调STAT6和ORMDL3 的mRNA 表达,改善气道重塑。     

耻垢分枝杆菌黏膜接种对小鼠过敏性哮喘的免疫调节作用

目的观察耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)对过敏性哮喘小鼠防御素β-2(Defb2)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)、IFN-γ、IL-4及过敏原特异性IgE、IgG1、IgG2a表达的影响,探讨Ms黏膜接种干预哮喘的免疫调节机制。方法 SPF级BALB/c小鼠随机分为哮喘组、干预组、对照组3组。以卵清蛋白(OVA)致敏,气道激发建立哮喘模型。OVA致敏前7 d鼻黏膜接种Ms进行干预。以Real-time荧光定量PCR法检测肺组织Defb2、MIP1、MIP2 mRNA的表达,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、纵膈淋巴结细胞培养上清中MIP1、MIP2、IFN-γ、IL-4的浓度,ELISA法检测血清总IgE以及OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a水平。结果 Ms干预可以显著增高哮喘小鼠Defb-2 mRNA的表达(31.21±1.56对0.78±0.11,P<0.01);Ms干预可使哮喘小鼠表达增高的MIP1 mRNA降低(9.80±1.56对2.44±0.96,P<0.05),但对MIP2 mRNA的影响不明显(P>0.05);Ms干预可使BALF和淋巴结培养...     

骨桥蛋白在哮喘小鼠肺组织中的表达及地塞米松的干预作用

目的 探讨哮喘气道炎症与骨桥蛋白(OPN)表达的相关性,以及地塞米松(DXM)对OPN表达的影响.方法 50只小鼠随机分为正常对照组、不同程度哮喘组(卵清蛋白OVA激发1周和2周组)及DXM治疗1周和2周组,每组10只;OVA致敏、激发建立急性哮喘模型;苏木精-伊红染色观察各组小鼠气道炎症情况;ELISA法检测血清OVA-sIgE水平;免疫组化和Western blot法分别定位和定量分析肺组织OPN表达;Real-time PCR检测肺组织OPN mRNA水平.结果 哮喘组气道病理学改变较对照组和DXM组明显,且OVA激发2周哮喘组改变较激发1周组明显.哮喘组血清OVA-sIgE水平较对照组和DXM组明显升高(PPPP结论 OPN可能是哮喘发病机制中的重要因素,哮喘气道炎症越重,OPN表达水平可能越高;DXM可能通过抑制OPN的表达来减轻哮喘炎症.     

血管活性肠肽对哮喘小鼠气道炎症及Th17/Treg平衡的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对哮喘小鼠气道炎症的影响,以及对Th17细胞/调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法将30只BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘组、VIP组,每组10只。利用卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作急性哮喘小鼠模型;对照组致敏和激发阶段均以生理盐水代替OVA;VIP组每次OVA激发前,先以VIP溶液(20μg/m L)雾化吸入30 min。留取各组小鼠支气管肺泡灌洗液、肺组织等标本。利用苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化;ELISA法检测肺泡灌洗液中Th17/Treg相关细胞因子水平;免疫组化及Real-time PCR检测肺组织中Th17细胞特异性转录因子RORγt及Treg特异性转录因子Foxp3表达情况。结果病理组织学结果显示VIP组小鼠肺组织气道炎症表现较哮喘组减轻。哮喘组小鼠BALF中IL-17浓度高于对照组(P0.01),VIP组IL-17浓度较哮喘组降低(P0.01),但仍高于对照组(P0.01)。哮喘组BALF中IL-10浓度低于对照组(P0.01),VIP组IL-10浓度较哮喘组升高(P0.01),但仍低于对照组(P0.01)。哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA及蛋白表达高于对照组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达低于对照组(P0.01);VIP组肺组织RORγt mRNA及蛋白表达水平低于哮喘组(P0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表达水平高于哮喘组(P0.05)。结论哮喘小鼠存在Th17/Treg免疫失衡,VIP可通过调控Th17/Treg免疫失衡而改善哮喘小鼠气道炎症。     

反义寡核苷酸和激素干预对哮喘小鼠GATA-3表达的影响

目的 探讨转录因子GATA-3在支气管哮喘发病中的作用,评价反义寡核苷酸干预及吸入糖皮质激素对其调节作用.方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘组(B组)、激素治疗组(C组)及GATA-3反义寡核苷酸治疗组(D组)4组.采用卵清白蛋白致敏、激发建立哮喘小鼠模型,对小鼠血及支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞进行计数,并测定小鼠血清IgE含量;采用Western b1ot及RT-PCR技术检测治疗前后哮喘小鼠肺组织中GATA-3蛋白和GATA-3 mRNA的表达.结果 通过小鼠行为学变化、血和BALF嗜酸性粒细胞计数、血清IgE水平以及肺组织病理切片鉴定模型成立.哮喘小鼠气道管壁及伴行动脉周围可见炎性细胞浸润、杯状细胞增生及平滑肌增厚.Western blot结果显示哮喘组小鼠肺组织GATA-3蛋白表达增高,GATA-3反义寡核苷酸治疗组和激素治疗组GATA-3表达均下降,GATA-3反义寡核苷酸治疗组较激素治疗组下降略明显,但差异无统计学意义.RT-PCR结果与Western blot结果一致.结论 蛋白质水平及mRNA水平显示哮喘小鼠模型肺组织GATA-3表达升高,激素和反义寡核苷酸干预可下调GATA-3表达,可能是其抑制气道炎症形成的重要作用机制;应用反义寡核苷酸可能为哮喘治疗提供一种新的方法.     

多聚肌苷酸在支气管哮喘防治中的价值

目的研究多聚肌苷酸[polyinosinic:polycytidylic acid,Poly(I:C)]在支气管哮喘防治中的意义。方法将健康雌性Balb/c 6周龄小鼠80只,随机分为对照组、致敏组、激发前干预组、激发时干预组,每组20只。除对照组外,其余3组小鼠用OVA致敏建立哮喘模型,其中激发前干预组在OVA激发前给予Poly(I:C)干预;激发时干预组在OVA激发同时给予Poly(I:C)干预。通过乙酰胆碱量测定评定气道反应性,ELISA测定血浆IgE水平;测定肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数Eos计数;IL-4和IFN-γ浓度;肺组织切片测定IL-4和IFN-γmRNA浓度。结果致敏组、激发前干预组、激发时干预组小鼠对乙酰胆碱的反应性明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);3组哮喘小鼠之间的差异无统计学意义(P>0.05)。3组哮喘小鼠的血浆IgE水平、BALF中的细胞总数和Eos计数、IL-4和IFN-γ浓度、肺组织中IL-4和IFN-γmRNA水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且3组哮喘小鼠之间的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论在OVA激发前、激发时给予Poly(I:C),均不能改变哮喘小鼠对乙酰胆碱的气道反应性;在OVA激发前给予Poly(I:C)干预可减轻炎症反应,但在OVA激发哮喘时给予Poly(I:C)干预则可加重炎症反应。     

溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对哮喘小鼠气道重塑作用机制研究

目的探讨溴化结构域蛋白抑制剂JQ1对哮喘小鼠气道重塑治疗的分子学机制。方法将24只小鼠随机分成对照组、OVA诱导哮喘组(OVA组)、JQ1干预哮喘组(JQ1+OVA组)(n=8)。采用OVA致敏/激发制备哮喘小鼠模型,雾化激发前1h,JQ1+OVA组小鼠经腹腔注射JQ1溶液(50μg/g)。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,计算各组BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞百分比,肺组织行病理染色观察各组小鼠肺组织病理改变;采用RT-PCR及Westernblot法分别检测小鼠肺上皮间质转化(EMT)过程中钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)m RNA及蛋白水平的表达变化。结果与对照组比较,OVA组小鼠气道炎性细胞明显浸润,气道壁增厚,黏液渗出增多;BALF中细胞总数增加,嗜酸性粒细胞百分比增多(P0.01)。与OVA组比较,JQ1+OVA组小鼠气道炎症反应明显减轻;BALF中细胞总数明显减少,嗜酸性粒细胞百分比降低(P0.01)。与对照组比较,OVA组小鼠肺组织气道上皮E-Cadherinm RNA及蛋白表达水平明显下调,vimentinm RNA及蛋白表达水平明显上调(P0.01);与OVA组比较,JQ1+OVA组E-Cadherinm RNA及蛋白表达水平升高,vimentinm RNA及蛋白表达水平下降(P0.01);JQ1+OVA组与对照组上述指标表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 OVA哮喘小鼠存在EMT气道重塑;溴化结构域蛋白抑制剂JQ1可降低哮喘小鼠气道炎症,抑制EMT,减轻气道重塑,为哮喘治疗提供了一个潜在的新方向。     

布地奈德对哮喘大鼠支气管-肺组织病理及肺部TSLP表达的影响

目的：胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin,TSLP）是启动树突状细胞介导的过敏反应的重要物质。本研究旨在观察布地奈德对哮喘大鼠肺部TSLP表达的影响及对支气管-肺组织病理的影响。方法：采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射2次致敏及雾化吸入4周激发建立哮喘大鼠模型,并在激发第22天将动物随机分为布地奈德组（每天吸入布地奈德0.32 mg/kg,共7 d）、哮喘组（每天吸入等量生理盐水,共 7 d）。荧光免疫组化法、Western blot法分别检测激发后第29天、36天肺TSLP水平,并作支气管 肺组织病理检查。结果：布地奈德组第29天肺部炎症较哮喘组轻,停药7 d后肺部炎症明显加重,杯状细胞增多。激发后第29天、36天肺组织TSLP表达均低于哮喘组（P<0.05）。结论：布地奈德能抑制TSLP表达,减轻哮喘大鼠肺部炎症细胞浸润,但停药后肺部炎症再次加重。［中国当代儿科杂志,2010,12（10）：816-819］     

新生期卡介苗接种对实验性哮喘小鼠肺Th17细胞和IL-17的影响

目的：通过实验性哮喘小鼠模型探讨新生期卡介苗（bacillus Calmette-Guérin,BCG）接种对肺Th17细胞和IL-17的影响。方法：新生期小鼠分3组：对照组,卵白蛋白组（OVA）,BCG干预组（BCG/OVA）。除对照组外,其余两组均给予OVA致敏和激发。观察支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中细胞总数及分类,ELISA法检测BALF中IFN-γ、IL-17含量,流式细胞术检测肺Th17细胞。结果：两哮喘组BALF中细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞比例均明显高于对照组,而BCG/OVA组上述细胞均显著低于OVA组。两哮喘组BALF中IFN-γ水平明显低于对照组,IL-17显著高于对照组,同时BCG/OVA组IL-17水平明显低于OVA组。流式细胞术显示,两哮喘组Th17细胞比例均明显高于对照组,但两哮喘组间差异无统计学意义。结论：Th17细胞/IL-17在实验性哮喘小鼠发病中起作用,新生期BCG接种可抑制气道IL-17的产生,其抑制的IL-17可能并非主要由Th17细胞产生,而来源于其他细胞。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：650-653］     

吲哚胺2,3-双加氧酶在哮喘小鼠模型中的作用

目的 探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在哮喘小鼠模型中所起的作用.方法 卵白蛋白(OVA)致敏、激发诱导哮喘小鼠模型.分别检测肺组织中IDO在蛋白水平和mRNA水平上的表达.免疫荧光组织化学方法检测树突状细胞(DCs)在肺组织中的分布和成熟状态.结果 ①OVA诱导和激发的小鼠哮喘模型的症状和肺部炎症病理改变较对照组严重;哮喘组小鼠血清总IgE为(165.50 ± 30.13)ng/ml,对照组为(94.45 ± 28.30)ng/ml,差异有统计学意义(P ＜ 0.05).②哮喘组小鼠肺部IDO的表达低于对照组.以平均累积光密度为指标检测的小鼠肺组织中IDO在蛋白水平上的表达,哮喘组为11.38 ± 6.05,对照组为23.62 ± 8.92,差异有统计学意义(P ＜ 0.05);实时荧光定量PCR检测小鼠肺组织中IDO在mRNA水平上的表达,哮喘组是对照组的33%,显著低于对照组(P ＜ 0.05).③小鼠肺组织中CD11c+CD86+细胞主要分布于肺泡壁和小血管周围.以双标阳性细胞平均累积荧光强度为指标检测小鼠肺组织中CD11c+CD86+细胞数量,哮喘组的中位数为9 961.86(7 406.52 ～ 12 724.98),对照组为15 974.60(10 006.39 ～ 16 171.46),差异有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 哮喘小鼠肺组织表达IDO低,且成熟树突状细胞减少.提示在哮喘小鼠中,由于成熟的树突状细胞较少,产生IDO偏少,这可能在哮喘发生中起着重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the role of indoleamine 2,3-dioxygenase(IDO)in asthma.Methods The mouse asthma model was induced by ovalbumin(OVA).IDO expression was detected on the level of protein and mRNA respectively.Distribution and maturation of dendritic cells were detected by the immunofluorescence method.Results (1)The symptoms and lung inflammation in the model group were more serious than control group.The serum total IgE was significantly higher in the model group than that in the control group,165.50 ± 30.13 ng/ml vs.94.45 ± 28.30 ng/ml(P ＜ 0.05).(2)IDO expression in the model group was lower than that in control group.On the level of protein,mean intergrated optical density was 11.38 ± 6.05 in the model group vs.23.62 ± 8.92 in the control group(P ＜ 0.05);on the level of mRNA,IDO expression of the model group was 33% of the control group(P ＜ 0.05).(3)CD11c+CD86+ cells were distributed in alveolar wall and around small vessels.The quantity of CD11c+CD86+ cells in lungs of the model group were significantly smaller than that in the control group.The median intergrated fluorescence intensity was 9961.86(range,7 406.52 ～ 12 724.98)in the model group vs.15974.60(range,10 006.39 ～ 16 171.46)in the control group(P ＜ 0.05).Conclusions IDO expression is low and matured dendritic cells are less in situ in the asthma model.These suggest that less matured DCs may produce less IDO,which may play an important role in asthma.     

孟鲁司特对幼年哮喘气道重塑大鼠感觉神经肽受体NK1R表达的影响

目的：探讨孟鲁司特对幼年哮喘气道重塑大鼠中感觉神经肽受体NK1R表达的影响。方法：24只Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为对照组、哮喘组和孟鲁司特组,每组8只。应用卵白蛋白（OVA）雾化吸入法建立哮喘大鼠模型,对照组大鼠应用生理盐水代替致敏液和1%OVA,孟鲁司特组于每次激发前2 h以孟鲁司特（15 mg/kg）灌胃,共持续8 周。采用免疫组化、real-time PCR和Western blot等方法,从mRNA和蛋白水平动态观察NK1R在哮喘大鼠气道重塑中的表达水平及孟鲁司特对其表达的影响。结果：哮喘组NK1R mRNA及蛋白的表达水平均较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.01);孟鲁司特干预后NK1R mRNA及蛋白表达水平较哮喘组减少(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.01)。结论哮喘：诱发大鼠气道NK1R的表达增加,孟鲁司特能够下调哮喘大鼠气道重塑中NK1R的表达水平。     

屋尘螨过敏的支气管哮喘患儿调节性T淋巴细胞水平变化及其临床意义

目的探讨对屋尘螨过敏的支气管哮喘(哮喘)患儿CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞数量和功能的变化,及调节性T淋巴细胞水平与哮喘严重程度的相关性。方法选择60例对屋尘螨过敏的哮喘患儿,依据临床特征分为轻、中、重3组;同时选择20例健康儿童作为健康对照组。分离所有儿童外周血单个核细胞,予屋尘螨浸出液刺激48 h后,应用流式细胞分析仪检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+IL-10+调节性T淋巴细胞的数量。结果轻度组和中度组哮喘患儿CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞的数量与健康对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05),而重度组显著低于健康对照组(P<0.001);哮喘患儿CD4+CD25+Foxp3+IL-10+调节性T淋巴细胞水平与健康对照组比较显著降低(P<0.001),且中度组低于轻度组(P<0.05),而重度组几乎检测不到CD4+CD25+Foxp3+IL-10+调节性T淋巴细胞,其水平显著低于中度组(P<0.01);CD4+CD25+Foxp3+IL-10+T淋巴细胞水平与哮喘患儿疾病严重程度呈负相关(r=-0.637,P<0.05)。结论轻、中度哮喘患儿调节性T淋巴细胞数量无降低,但存在功能障碍,而重度哮喘患儿不仅存在调节性T淋巴细胞功能障碍,而数量降低。CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞可能在哮喘的发病中发挥着重要作用。