新型重组人肿瘤坏死因子在小鼠体内的药代动力学

目的　研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在小鼠体内的药代动力学 .方法　采用 1 2 5I标记的 nrh TNFα同位素法 ,观察 im和 iv后的体内过程 .结果　按 10 ,2 0和 4 0μg· kg- 1 3个剂量给小鼠 im nrh TNFα后在 1～ 2 h达到峰浓度 ,总放射性在体内消除较快 ,t1 / 2 为 4 .7～ 6 .5 h,所得结果均证明 Cmax和 AU C与剂量呈显著相关 (r=0 .95 ) ,与 iv给药 (10μg· kg- 1 )的血药浓度进行绝对生物利用度试验 ,其 im给药生物利用度为 0 .80 3.nrh TNFα在体内的分布以肾含量最高 ,脑浓度最低 ,但都低于同时间的血药浓度 .按 10 μg·kg- 1 im给药后 ,用 RA法测定尿和粪 2 4 h放射性总量 ,尿中放射性回收率为 86 .8% ,粪中回收率为 9.5 % ,总排泄量达给药剂量的 96 .3% .结论　 nrh TNFα在小鼠的体内代动力学符合二室模型     

小鼠注射新型重组人肿瘤坏死因子的药代动力学

目的　研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在小鼠体内的药代动力学 .方法　给小鼠按 10 ,2 0和 40μg·kg- 1 剂量 im nrh TNFα后 ,不同时间点采血 ,分离血清 ,采用高效液相色谱法 (HPL C)分离结合同位素法和酶联免疫法(EL ISA)测定血清中 nrh TNFα的浓度 .结果　小鼠 im后 ,nrh TNFα能迅速进入血液循环 ,约在 0 .5 h内达到最大血浓度 ,未降解的 nrh TNFα在体内的分布以肾脏最高 ,血液次之 ,其后为肺、肝 ,脑浓度最低 .消除半衰期 (T1 /2 )在 0 .6～ 1h.两种方法所得 Cmax和 AUC与剂量呈显著相关 .与 iv比较 ,im给药 nrh TNFα的绝对生物利用度仅为 0 .16 6 ,表明nrh TNFα在体内易代谢消除 .结论　阐明了 nrh TNFα原型药物在小鼠体内的药代动力学过程     

恒河猴肌注新型重组人肿瘤坏死因子的药代动力学

目的　研究新型重组人肿瘤坏死因子 (nrh TNFα)在恒河猴体内的药代动力学行为 .方法　采用 EL ISA法测定恒河猴 im nrh TNFα后的血药浓度 .结果　恒河猴按 40 μg·kg- 1 剂量 im nrh TNFα后 ,血液中的平均达峰时间为 1.7h;峰浓度的个体差异较大 ,范围为 5 75～ 112 0 ng· L- 1 ,平均峰浓度为 833ng· L- 1 ;药物在血液中的消除符合一房室模型 ,半衰期 T1 / 2 为 1.4～ 2 .4(平均 1.9) h.结论　 nrh TNFα im后 ,能被恒河猴吸入血 ,在血液中的消除符合一房室模型 ,在灵长类动物恒河猴的药代动力学行为与啮齿类动物小鼠的相类似 ,但吸收入血和消除均较小鼠的慢     

重组人血小板生成因子注射液的I期临床药代动力学

目的:研究国产重组人血小板生成因子注射液在健康志愿者体内的药动学特征,为II期临床试验提供合理的用药方案,以及新药的审批提供理论依据.方法:27名健康志愿者随机分为0.5,1.0和2.0μg/kg三个剂量组,单次皮下注射重组人血小板生成因子注射液,用ELISA法测定人血清中rhTPO浓度.结果:药代动力学参数如下:T1/2ke分别为(46.74±6.36),(48.53±2.29)和(51.88±3.34)h;T1/2ka分别为(2.17±0.53),(2.64±0.53)和(2.84±0.62)h;Tpeak分别为(10.00±1.51),(10.22±1.20)和(10.00±1.00)h;ρmax分别为(312.29±61.65),(465.14±46.94)和(811.34±106.73)ng/L;AUC(0-216h)分别为(17269.92±4470.23),(29710.56±3890.28)和(53358.41±5608.01)ng/L·h.结论:当以0.5～2.0μg/kg单次皮下注射重组人血小板生成因子注射液时,其在正常人体内表现为线性药动学特征,消除半衰期较长.推荐II期临床给药剂量为皮下注射1.0μg/kg,1次/d,连续7d.     

重组人血小板生成因子注射液的Ⅰ期临床药代动力学

目的:研究国产重组人血小板生成因子注射液在健康志愿者体内的药动学特征,为Ⅱ期临床试验提供合理的用药方案,以及新药的审批提供理论依据.方法:27名健康志愿者随机分为0.5,1.0和2.0μg/kg三个剂量组,单次皮下注射重组人血小板生成因子注射液,用ELISA法测定人血清中rhTPO浓度.结果:药代动力学参数如下:T1/2ke分别为(46.74±6.36),(48.53±2.29)和(51.88±3.34)h;T1/2ka分别为(2.17±0.53),(2.64±0.53)和(2.84±0.62)h;Tpeak分别为(10.00±1.51),(10.22±1.20)和(10.00±1.00)h;ρmax分别为(312.29±61.65),(465.14±46.94)和(811.34±106.73)ng/L;AUC(0-216h)分别为(17 269.92±4470.23),(29 710.56±3890.28)和(53 358.41±5608.01)ng/L·h.结论:当以0.5～2.0μg/kg单次皮下注射重组人血小板生成因子注射液时,其在正常人体内表现为线性药动学特征,消除半衰期较长.推荐Ⅱ期临床给药剂量为皮下注射1.0μg/kg,1次/d,连续7d.     

重组人肿瘤坏死因子α与其衍生物A的毒性比较

比较重组人肿瘤坏死因子α衍生物与重组人肿瘤坏死因子α的毒性。方法 急性毒性试验和长期毒性试验。结果 急性毒性试验结果：ｒｈＴＮＦαＤα和ｒｈＴＮＦα的小鼠ＬＤ５０分别为０．６７×１０＾９和３９×１０＾６ＩＵ／ｍ＾２。长期毒性试验结果：ｒｈＴＮＦαＤα的毒性作用性质与ｒｈＴＮＦα相似，毒性作用广泛，对中枢神经系统，心血管系统，消化系统，造血系统，雄性生殖系统，肾脏均有损害，连续注射且会引起恶病质。     

重组葡激酶的人体药代动力学研究

目的　研究重组葡激酶 (r- SAK)静脉给药后在健康人体内的药代动力学。方法　 9例健康成人每人给药 1 0 mg(先静脉推注 1 mg,2 m in内推完 ,余下 9mg30 min内推完 ) ,采血时间为开始给药后的 1、1 0、2 0、30、35、40、5 0、6 0、70、90、1 2 0、2 1 0和 2 70 min。以双夹心酶联免疫吸附法检测血药浓度。结果　中心室分布容积为 (4.45± 1 .6 2 ) L,药 -时曲线下面积(AUC0～ 2 70 )为 (89935± 1 32 2 8) min· ng/m l,药物总清除率为 (6 .30± 1 .0 5 ) L /h,T1 /2α(分布相半衰期 )为 (1 3.30± 2 .0 6 )min,T1 /2β(消除相半衰期 )为 (6 7.94± 2 1 .39) min。结论　 r- SAK在健康人体内的药代动力学类型符合二室模型。建议临床给药方式为 1 0 mg r- SAK 30 min内静脉输注 ,必要时在第 1次给药结束后 30～ 6 0 min可再给 1 0 mg。     

肿瘤坏死因子抗人鼻咽癌细胞的活性

目的：研究新型重组人肿瘤坏死因子α（ＮｒｈＴＮＦ－α）对鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ－２）的细胞致死性和联合用药的协同作用。方法：用细胞毒分析法观察了ＮｒｈＴＮＦ－α、重组人肿瘤坏死因子α（ｒｈＴＮＦ－α）对ＣＮＥ－２生长的影响，并对不同联合用药模式进行研究。结果：ＮｒｈＴＮＦ－α对ＣＮＥ－２细胞的杀伤作用明显强于ｒｈＴＮＦ－α，同一浓度的杀伤作用强２￣３倍。细胞杀伤效应为剂量依赖型，ＮｒｈＴＮＦ－α与重     

人基因重组肿瘤坏死因子单克隆抗体的研制

肿瘤坏死因子(Tumour necrosis factor,TNF)是由激活的巨噬-单核细胞所产生的一种细胞毒因子,在介导内毒索的生物学作用(肿瘤坏死活性,内毒素休克等)中起着关键的作用。制备成TNF的单克隆抗体(McAb),有助于从细胞-分子水平了解TNF的作用机理,并提供一种内毒素休克的有效防治手段。 实验以人基因重组肿瘤坏死因子(rHu-TNF-α,由日本Tejkyo大学Soma教授赠送,比活性5.4×10~7U/mg蛋白质)常规免疫BALB/c纯系小鼠,取其脾细胞与小鼠SP2/1骨髓瘤细胞在pEG作用下进行     

肿瘤坏死因子α主要通过其受体1作用于鼠肾上腺皮质Y1细胞皮质醇的表达

背景和目的：全身炎症反应综合征时肿瘤坏死因子α（TNF-α）在导致肾上腺相对不足中起着重要的作用。为探讨TNF-α是通过其哪个受体来抑制皮质醇释放,我们研究肾上腺皮质Y1细胞TNF-α受体表达情况及其受体阻断与皮质醇释放间的关系。 方法: 应用RT-PCR和免疫细胞化学方法来评估Y1细胞中的TNF受体的表达。 合成与TNF受体1（TNF-R1）DNA片段相对应的shRNA序列,并克隆于表达载体pcDNA™6.2-GW/EmGFP中,然后转染Y1细胞。采用实时定量PCR（Q-PCR）检测转染shRNA或 mock-shRNA Y1细胞TNF-R1表达的阻断率,同时对转染的Y1细胞加入TNF-α 和 ACTH,检测Y1细胞皮质醇的表达水平。 结果： RT-PCR和免疫细胞化学方法,在肾上腺皮质Y1细胞检测到TNF-R1的表达,而检测不到TNF-R2的表达。shRNA 转染的Y1细胞中TNF-R1 mRNA表达明显低于mock shRNA转染的Y1细胞（P<0.05）。通过shRNA阻断TNF-R1表达,TNF-α就不能抑制ACTH促皮质醇的合成,shRNA 转染Y1细胞的皮质醇表达水平明显高于mock-shRNA Y1细胞(P<0.05)。 结论：我们的结果显示,在肾上腺皮质中,TNF-α抑制ACTH促皮质醇的合成是通过TNF-R1受体。     

Tumor necrosis factor alpha affect hydrocortisone expression in mice adrenal cortex cells mainly through tumor necrosis factor alpha-receptor 1

Background  Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is important in promoting relative adrenal insufficiency (RAI) due to systemic inflammatory response syndrome (SIRS). We identified the TNF-α receptor involved in the inhibition of adrenal corticotrophin (ACTH)-stimulated hydrocortisone release by studying the expression of TNF-α receptors in adrenal cortex Y1 cells and the effect of downregulating TNF receptors on ACTH-stimulated hydrocortisone release.

Methods  We used real-time PCR and immunocytochemistry to evaluate the expression of TNF receptors on Y1 cells. TNF-receptor 1 (TNF-R1) DNA fragments corresponding to the short hairpin RNA (shRNA)-sequences were synthesized and cloned into pcDNA^TM 6.2-GW/EmGFP expression vector. Knockdown efficiency of TNF-R1 expression was evaluated in miRNA transfected and mock-miRNA transfected Y1 cells by quantitative real-time PCR (Q-PCR). Hydro- cortisone expression levels were determined in TNF-R1-knockdown and control Y1 cells treated with TNF-α and ACTH.

Results  Mouse adrenal cortex Y1 cells were positive for type I TNF-R1, but not type II TNF-receptor (TNF-R2). Blocking TNF-R1 expression resulted in loss of TNF-α-mediated inhibition of ACTH-stimulated hydrocortisone expression, suggesting a role for the TNF-R1 related signaling pathway in ACTH-stimulated hydrocortisone synthesis.

Conclusion  The inhibitory effect of TNF-α on ACTH-stimulated hydrocortisone synthesis was mediated via TNF-R1 in adrenal cortex.

     

逆转录病毒介导人肿瘤坏死因子-α基因抑制胆管癌细胞的生长

[目的 ]研究逆转录病毒介导的人肿瘤坏死因子α(TNFα)基因转染对人胆管癌细胞生长的抑制作用。 [方法 ]构建逆转录病毒 -TNFα(pLNCX -TNFα)复合体 ,转染人胆管癌细胞得到稳定表达 ,通过聚合酶链式反应 (PCR)、流式细胞仪 (FCM )、免疫组织化学等方法检测基因表达、细胞生长增殖和细胞凋亡等情况。 [结果 ]pLNCX -TNFα基因转染人胆管癌细胞后 ,pLNCX空质粒转染组、pLNCX -TNFα基因转染组的细胞均能扩增出 70 8bp的基因片断 ,而未转染组则无 ;pLNCX -TNFα基因转染组的细胞克隆抑制率为 6 4% ,与对照组和 pLNCX空质粒转染组相比 ,差异性非常显著 (P <0 .0 1 ) ;转染的人胆管癌细胞G1期比例从 2 9.0 7%增加到 5 4.2 4 % ,G2 -M期和S期比例分别从 5 2 .0 3%下降到 2 .0 2 % ,1 8.32 %下降到 1 0 .34% ;凋亡细胞数从 5 .83%增加到34.76 %。[结论 ]TNFα基因通过诱导胆管癌细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞抑制胆管癌细胞的生长。     

肿瘤坏死因子对滋养细胞侵袭性的影响

目的 探讨外源性肿瘤坏死因子(TNF-α)及其多克隆抗体对原代滋养细胞侵袭力的影响。方法 采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法,检测TNF-α、anti TNF-α、TNF-α+anti TNF-α对原代滋养细胞基质金属蛋白酶(MMP-2)及其组织抑制因子(TIMP-2)表达的影响。结果 原代滋养细胞表达MMP-2,经过5 ng/ml的TNF-α、TNF-α+antiTNF-α分别刺激培养原代滋养细胞48 h后,细胞MMP-2的表达显著性提高(P<0.001),50 ng/ml的antiTNF-α刺激培养后MMP-2的表达显著性降低(P<0.001);各组间MMP-2的表达存在显著性差异(P<0.001),但是均未见明显的TIMP-2的表达。结论 外源性细胞因子TNF-α可以增强滋养细胞的侵袭力,多克隆抗体antiTNF-α则降低其侵袭力。     

肿瘤坏死因子-α及受体与冠心病心力衰竭的关系

目的 :探讨肿瘤坏死因子 α(TNF α)和可溶性肿瘤坏死因子受体 (STNFR)与冠心病心力衰竭的关系。方法 :138例拟诊冠心病的住院患者均行冠状动脉造影 (CAG)检查 ,依照CAG结果及纽约心脏协会 (NYHA)心功能判定标准 ,分为正常对照组 40例 ,冠心病无心衰组 61例 ,冠心病心衰组 37例。所有患者均在CAG当日清晨采血用酶联法测定TNF α和STNFR。结果 :三组间血浆TNF α和STNFR水平有显著性差异 (P <0 .0 1)。冠心病心衰组明显高于对照组及无心衰组 (P <0 0 5 )。心衰组TNF α与STNFR水平呈显著性正相关关系 (r =0 .42 3,P <0 0 1)。结论 :TNF α可促使冠心病心衰的发生和发展 ,血浆TNF α和STNFR水平及其比值对反映冠心病患者的心功能状态有重要意义     

重组人肿瘤坏死因子致肺癌细胞(LC-6)凋亡的研究

目的：探讨重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）引起肺癌细胞（ＬＣ－６）死亡的机制。方法：应用原位细胞毒性分析、ＤＮＡ解降片段琼脂糖凝胶电泳、形态学和流式细胞学测定的动态分析。结果：ｒｈＴＮＦ作用于肺癌细胞（ＬＣ－６）数小时后,引起细胞核ＤＮＡ解成寡聚核苷酸片断,说明肺癌细胞（ＬＣ－６）以细胞凋亡的方式死亡,并且细胞凋亡的程度与重组人肿瘤坏死因子作用的时间及浓度呈正相关。单纯应用放线菌素Ｄ后则肺癌细胞（     

大肠杆菌表达人新型肿瘤坏死因子的纯化

制备符合临床要求的高纯度新型人肿瘤坏死因子，建立简单，高效的纯化途径。方法：用本室构建的ｎｈＴＮＦ基因工程菌，经发酵收菌，裂菌，硫酸铵盐析，Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及Ｓ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ层析，得到高活性，高纯度的ｎｈＴＮＦ－单一色谱峰，比活性达１×１０＾９Ｕ／ｍｇ蛋白。     

Effect of cholinesterase inhibitor galanthamine on circulating tumor necrosis factor alpha in rats with lipopolysaccharide- induced peritonitis

Background The nervous system, through the vagus nerve and its neurotransmitter acetylcholine, can down-regulate the systemic inflammation in vivo, and recently, a role of brain cholinergic mechanisms in activating this cholinergic anti-inflammatory pathway has been indicated. Galanthamine is a cholinesterase inhibitor and one of the centrally acting cholinergic agents available in clinic. This study aimed to evaluate the effect of galanthamine on circulating tumor necrosis factor alpha （TNF-a） in rats with lipopolysaccharide-induced peritonitis and the possible role of the vagus nerve in the action of galanthamine. Methods Rat models of lipopolysaccharide-induced peritonitis and bilateral cervical vagotomy were produced. In the experiment 1, the rats were randomly divided into control group, peritonitis group, and peritonitis groups treated with three dosages of galanthamine. In the experiment 2, the rats were randomly divided into sham group, sham plus peritonitis group, sham plus peritonitis group treated with galanthamine, vagotomy plus peritonitis group, and vagotomy plus peritonitis group treated with galanthamine. The levels of plasma TNF-α were determined in every group. Results The level of circulating TNF-α was significantly increased in rats after intraperitoneal injection of endotoxin. Galanthamine treatment decreased the level of circulating TNF-α in rats with lipopolysaccharide-induced peritonitis, and there was significant difference compared with rats with lipopolysaccharide-induced peritonitis without treatment. The 3 mg/kg dosage of galanthamine had the most significant inhibition on circulating TNF-α level at all the three tested doses. Galanthamine obviously decreased the TNF-a level in rats with lipopolysaccharide-induced peritonitis with sham operation, but could not decrease the TNF-α level in rats with lipopolysaccharide-induced peritonitis with vagotomy. Conclusion Cholinesterase inhibitor galanthamine has an inhibitory effect on TNF-α release in rats with Iipopolysaccharide-induced peritonitis, and the vagus nerve plays a role in the process of the action of galanthamine.