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1.
目的:研究沉默半乳糖凝集素-3(Galectin-3)对卵巢癌细胞凋亡和内质网应激的影响。方法:卵巢癌SKOV3细胞感染Galectin-3 siRNA 重组慢病毒,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT方法测定细胞增殖变化,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot检测细胞中c-caspase-3、CHOP、ATF4蛋白水平变化。结果:与感染阴性对照慢病毒和未感染的细胞比较,Galectin-3 siRNA 重组慢病毒感染后的SKOV3细胞中Galectin-3 mRNA和蛋白表达水平均降低。与感染阴性对照慢病毒和未感染的细胞比较,Galectin-3 siRNA 重组慢病毒可以明显下调SKOV3细胞的增殖、克隆形成能力,提高细胞凋亡率,促进细胞中c-caspase-3、CHOP、ATF4蛋白水平。结论:沉默Galectin-3抑制卵巢癌细胞生长,诱导卵巢癌细胞凋亡,促进细胞内质网应激。 相似文献
2.
目的:探讨miR-144-3p是否通过靶向E盒锌指结合蛋白1(zeb1)调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡。方法:qRT-PCR检测miR-144-3p在卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中的表达差异。在卵巢癌细胞SKOV3中转染miR-144-3p mimics,MTT法测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中cyclinD1、p27、C-caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测miR-144-3p的靶基因可能为zeb1,荧光素酶报告系统鉴定其靶向关系。在卵巢癌细胞SKOV3中共转染miR-144-3p mimics、pcDNA3.1-zeb1,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:miR-144-3p在卵巢癌细胞中的表达水平低于正常人卵巢上皮细胞。转染miR-144-3p mimics后的卵巢癌细胞SKOV3增殖能力下降,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡增多,细胞中cyclinD1蛋白表达减少,p27、C-caspase-3蛋白表达增加。miR-144-3p靶向调控zeb1表达。pcDNA3.1-zeb1可以逆转miR-144-3p mimics对卵巢癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:miR-144-3p靶向zeb1抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖并诱导细胞凋亡。 相似文献
3.
目的应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)基因的表达,探讨其对卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和生长周期的影响。方法采用脂质体介导法将LSD1-siRNA转染卵巢癌OVCAR-3细胞;实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和Western blot法检测基因的表达;MTT法检测细胞增殖能力;FCM分析细胞周期。结果成功转染LSD1-siRNA后,OVCAR-3细胞中LSD1 mRNA和蛋白表达均明显下降;细胞增殖明显抑制;G2/M期细胞比例增加。结论 LSD1-siRNA可显著下调LSD1基因在卵巢癌OVCAR-3细胞中的表达水平,在一定程度上抑制卵巢癌细胞的增殖,导致细胞周期阻滞。 相似文献
4.
目的:采用siRNA技术沉默IFITM1基因表达,观察对卵巢癌CP70细胞侵袭及凋亡能力的影响及其可能的分子机制。方法:利用脂质体转染法将靶向IFITM1的小干扰RNA转染卵巢癌CP70细胞株;Western blot检测CP70细胞IFITM1蛋白的表达;Transwell侵袭小室、MTT、流式细胞仪检测转染细胞侵袭力、顺铂敏感性和凋亡的变化;Western blot观察转染后CP70细胞caspase-3的表达变化。结果:转染IFITM1 siRNA后卵巢癌CP70细胞的IFITM1表达受到高效而特异的抑制,减低了卵巢癌细胞的侵袭力,增加了细胞对顺铂的敏感性,促进了细胞凋亡,蛋白印迹结果显示转染细胞在顺铂作用下caspase-3磷酸化水平明显上调。结论:沉默IFITM1可以降低卵巢癌细胞的侵袭能力,提高对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡可能与上调凋亡相关的关键分子密切相关,IFITM1可能成为卵巢癌治疗的潜在靶点之一。 相似文献
5.
背景与目的:信号转导因子与转录激活因子3(STAT3)是近期研究较多的-种基因,在多种实体瘤如乳腺癌、胃癌和卵巢癌等中均有异常表达和活性增强.本研究旨在探讨STAT3短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体对卵巢癌细胞SKOV3化疗敏感性的作用.方法:构建STAT3基因shRNA真核表达质粒,并转染卵巢癌SKOV3细胞.试验分为SKOV3、SKOV3NX和SKOV3siRNA3组,以RT-PCR及免疫蛋白印迹法分别检测各组STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平.细胞经20 μmol/L顺铂(DDP)作用后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡率.结果:MTT法检测肿瘤细胞的生长抑制率,SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞抑制率分别为0.46±0.13、0.44±0.11和0.71±0.12.与SKOV3组、SKOV3NS组相比,SKOV3siRNA组细胞抑制率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞抑制率差异无统计学意义(P>0.05).SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞凋亡率分别为185:4、17±3和35±4.与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05).SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞STAT3mRNA检测结果分别为0.50±0.08、0.48±0.07和0.31±0.09.与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞STAT3 mRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组细胞比较,STAT3mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05).SKOV3组、SKOV3NS组和SKOV3siRNA组细胞STAT3蛋白检测结果分别为0.54±0.09、0.56±0.08和0.32±0.09.与SKOV3组、SKOV3NS组比较,SKOV3siRNA组细胞STAT3蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而SKOV3NS组与SKOV3组比较,细胞STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:针对STAT3基因的shRNA真核表达载体能有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞STAT3基因表达,增强其对化疗药物DDP的敏感性. 相似文献
6.
目的 探讨应用RNA干扰(RNAi)技术沉默信号转导子与转录活化子(STAT3)基因对膀胱癌细胞株T24及5637细胞的影响.方法 针对STAT3 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,转染人类膀胱癌细胞株T24及5637细胞.通过半定量RT-PCR、Western blotting法检测STAT3基因不同水平的表达情况,采用流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.结果 成功构建pGenesil-1-shRNA-STAT3重组质粒,并成功转染T24及5637膀胱癌细胞;半定量RT-PCR、Western blotting结果显示,重组质粒转染组细胞的STAT3基因表达在RNA及蛋白水平上显著低于对照组(P<0.05);流式细胞仪的结果显示,重组质粒转染组细胞明显受到抑制并出现凋亡现象.结论 pGeneSil-1-shRNK-STAT3转染膀胱癌细胞株T24及5637细胞后,可有效抑制STAT3的表达,并抑制膀胱癌细胞的生长. 相似文献
7.
目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中,构建STAT3-siRNA表达载体,稳定转染人食管癌Eca-109细胞,利用RT-PCR、Western blot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况.结果:成功构建STAT3-siRNA表达载体,经测序鉴定正确.RT-PCR和Western blot结果显示,STAT3-siRNA3表达载体明显抑制了人食管癌Eca-109细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).MTT实验显示,稳定转染siRNA后,siRNA3实验组细胞的增殖能力明显下降,细胞生长抑制卒为35.68%,较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞技术显示,siRNA3实验组出现了细胞周期阻滞和细胞凋亡,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率为13.26%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);结论:RNA干扰技术沉默STAT3基因可以有效地抑制STAT3基因的表达,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖,引起细胞周期G_0/G_1期阻滞,促进其凋亡. 相似文献
8.
目的构建GSK-3β基因特异性短发卡状(shRNA)干扰载体,观察RNA干扰技术对卵巢癌SKOV3细胞 GSK-3β基因表达的抑制作用,并且探讨促进紫杉醇药物敏感度的机制。 方法设计合成并构建针对GSK-3 β mRNA的特异性shRNA干扰质粒,将干扰质粒转染SKOV3细胞。筛选稳定转染的单细胞扩大培养,应用 RT-PCR、Western blot方法检测各组细胞GSK-3β表达抑制情况。流式细胞学检测法(FACS)检测细胞凋 亡率。比较抑制GSK-3β 基因前后卵巢癌SKOV3细胞抵抗紫杉醇药物的差异。结果成功构建pGSK3β-shRNA 干扰载体。SKOV3 细胞转染pGSK3β-shRNA干扰载体后,RT-PCR、Western blot方法显示,转染后GSK-3β mRNA 和蛋白表达均显著下降。FACS检测结果显示,转染pGSK3β-shRNA干扰载体,不同浓度紫杉醇作用 24h后,卵巢癌SKOV3细胞对紫杉醇敏感度都有显著性提高。细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论运用 RNAi 技术构建的pGSK3β-shRNA干扰载体能特异、高效抑制靶基因GSK-3β表达;降低卵巢癌细胞中GSK-3 β基因表达水平,能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感度,促进肿瘤细胞凋亡。 相似文献
9.
目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)信号通路抑制剂AG490对过表达转录因子21(TCF21)的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:卵巢癌细胞ES-2转染TCF21过表达载体,Western blot检测转染后细胞中TCF21表达情况。ES-2细胞分为对照组(未转染且正常培养)、过表达组(转染TCF21过表达载体)、抑制剂组(未转染的细胞经过STAT3信号通路抑制剂处理)、联合组(STAT3信号通路抑制剂处理过表达TCF21的细胞)。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、剪切后的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果:转染TCF21过表达载体的ES-2细胞中TCF21表达水平升高明显高于对照组(P<0.05)。过表达组和抑制剂组细胞增殖率和p-STAT3/STAT3水平明显低于对照组且明显高于联合组(P<0.05)。过表达组和抑制剂组细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3水平明显高于对照组且明显低于联合组(P<0.05)。结论:STAT3信号通路抑制剂能够协同TCF21促进卵巢癌细胞凋亡并抑制卵巢癌细胞增殖。 相似文献
10.
抑制survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞顺铂药物敏感性的影响(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨应用RNA i技术下调survivin基因对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:构建survivin基因shRNA真核表达载体,转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR和Western blotting观察SKOV3细胞survivin mRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性和药物敏感性;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SKOV3-siRNA组细胞survivin mRNA及蛋白表达下降,同时细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。SKOV3-siRNA组细胞对顺铂的化学敏感性升高,顺铂的IC50值降低(P<0.05)。结论:下调survivin基因表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖能力,诱导细胞凋亡,增强细胞顺铂药物敏感性。因此,survivin基因可能成为抗肿瘤治疗的潜在靶点。 相似文献
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目的:研究沉默变异性浆细胞瘤异位1(plasmacytoma heterotopic 1,PVT1)基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、信号转导及转录活化因子(STATs)3通路的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞株,设计PVT1 siRNA序列,转染细胞,分为siRNA组、阴性对照组(NC)、空白对照组(BC),利用qRT-PCR检测各组细胞PVT1相对表达量,利用MTT法检测细胞增殖情况,利用划痕实验检测细胞迁移能力,利用Transwell实验检测细胞侵袭能力,利用WB法检测STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:转染后,siRNA3组细胞中PVT1表达水平较BC组与NC组显著降低(P<0.05);转染后,与BC组与NC组比较,siRNA3组细胞增殖率较BC组与NC组显著降低(P<0.05),迁移、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),p-STAT3蛋白,MMP2、MMP9、CD44、PCNA蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:沉默PVT1可能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移与侵袭,其具体机制可能与STAT3信号通路有关。 相似文献
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13.
RNA干扰Survivin基因沉默对卵巢癌SKOV3及SKOV3/ADM细胞凋亡的影响 总被引:10,自引:1,他引:9
背景与目的:RNA干扰技术被广泛应用于肿瘤基因治疗、抗病毒感染、基因药物筛选等许多领域。Survivin基因在卵巢癌细胞株SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM中高表达,是进行卵巢癌基因治疗理想的靶点。本研究探讨Survivin基因沉默后对卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM凋亡的影响。方法:将重组质粒pshRNA鄄Survivin以脂质体转染至SKOV3、SKOV3/ADM细胞。分别用半定量RT鄄PCR、Westernblot检测细胞内SurvivinmRNA和蛋白表达的变化,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法、TUNEL及流式细胞仪检测重组质粒诱导细胞凋亡的情况。结果:转染pshRNA鄄Survivin后,SKOV3、SKOV3/ADM细胞中SurvivinmRNA拷贝数明显减少,抑制率分别为83.79%和91.56%,蛋白质的表达水平显著降低;干扰组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,Survivin沉默后48h,SKOV3、SKOV3/ADM的细胞凋亡率分别为14.05%和21.02%,而在对照组未检测到明显凋亡。结论:重组质粒pshRNA鄄Survivin可明显抑制SKOV3、SKOV3/ADM细胞内SurvivinmRNA和蛋白的表达,介导卵巢癌细胞凋亡。 相似文献
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目的:通过小分子干扰RNA(siRNA)技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中P13K/AKT信号通路关键基因蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKTsiRNA转染SKOV3细胞。荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKTmRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测P13K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪AnnexinV/pI法检测细胞凋亡率的变化。结果:siRNA干扰组AKTmRNA的表达量为(O.325±0.04)明显抑制,并显著低于对照组,q=58.96,P〈O.001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而P13K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0.637;流式细胞仪AnnexinV/PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达(79.52±2.31)%,较对照组(27.35±2。01)%与空白载体组(28.64±1.96)%明显升高,约是空白载体组(q=60.880,P〈0.001)与对照组(q=58.553,P〈0.001)的3倍,差异有统计学意义。结论:AKTsiRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法。 相似文献
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RNA干扰survivin基因对卵巢癌细胞生长凋亡及药物敏感性的影响 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 探讨下调survivin基因对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞株SKOV3/DDP细胞生长、凋亡及药物敏感性的影响.方法 构建survivin基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体pSilencer-survivin,用脂质体方法转染SKOV3/DDP细胞株,另设未转染组和转染pSilencer-control组作为对照.显微镜下观察转染前后细胞的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测survivinmRNA及蛋白的表达,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化.各组细胞加入DDP,检测其对DDP药物敏感性的影响.结果 survivin siRNA可明显下调SKOV3/DDP细胞中survivin mRNA及蛋白表达水平.SKOV3/DDP细胞生长受到明显抑制,生长曲线低平.转染48 h后,转染pSilencer-survivin组细胞凋亡率为19.1%,明显高于末转染组(2.6%)和转染pSilencer-control组(3.5%),G1/G0期细胞所占的比例增高,而G2/M期细胞所占的比例降低.转染pSilencer-survivin组细胞的IC50明显降低,为1.16 μg/mi.结论 survivin siRNA可下调SKOV3/DDP细胞中survivin的表达,使细胞生长减慢,凋亡增加,对DDP的药物敏感性增强. 相似文献
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RNA干扰对Aurora-A在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 〖HT5"SS〗探讨应用RNA干扰技术沉默AuroraA基因表达,研究其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗: 设计合成两对特异性针对AuroraA基因的Oligo siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用RTPCR和Western blot检测AuroraA mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪观察转染后细胞增殖抑制和凋亡情况。〖HT5W〗结果:〖HT5"SS〗转染Oligo siRNA后,SKOV3细胞AuroraA mRNA表达受抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低;细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率明显增高(P<005, P<0.01)。〖HT5W〗结论: 〖HT5"SS〗体外合成的特异性针对AuroraA基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中AuroraA基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用,为进一步研究Auroraa基因的功能提供了实验基础。 相似文献
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