Gamma delta T 细胞及其抗肿瘤研究的进展

Gamma delta（γδ）T细胞表达Vγ9Vδ2 T细胞受体,占外周血T淋巴细胞的2％～5％左右,主要分布于黏膜相关淋巴组织,是T细胞的亚群之一。其免疫作用介于固有免疫和适应性免疫之间,为主要组织相容性复合体（MHC）非限制性细胞, 具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用,并且具有广泛的抗瘤谱。许多研究证实γδ T细胞参与了机体免疫防御系统的第一道防线,未来以γδ T细胞为基础的细胞免疫疗法,将会成为肿瘤免疫治疗的新战略。本文将对γδ T细胞的抗肿瘤作用机制及其临床应用作一综述。     

γδT细胞与疾病的关系

γδT细胞已是当今细胞治疗研究的热点,活化的γδT细胞具有较强的杀伤活性,具有抗感染、抗肿瘤作用;γδT细胞还可以维持免疫耐受,调节免疫应答,其异常可导致自身免疫性疾病的发生,本文就γδT细胞在这几方面的作用作一综述。     

非小细胞肺癌患者γδT细胞和NKT细胞及其亚群检测的意义

 目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者γδT细胞、自然杀伤性T（NKT）细胞及相关亚群细胞免疫功能状态及其意义。方法 用荧光标记的单克隆抗体染色，流式细胞仪检测外周血γδ T细胞、NKT细胞及相关亚群的水平。结果 NSCLC 患者γδ T细胞、CD+56 γδ T细胞、CD-56 γδ T细胞、NKT细胞、γδ T+ NKT细胞绝对计数和γδ T细胞、γδ T- NKT细胞相对计数显著低于正常对照；NKT细胞、γδ T+ NKT细胞、γδ T- NKT细胞相对计数和γδ T- NKT细胞绝对计数与正常对照比较，差异无统计学意义。γδ T细胞与NKT细胞相关性分析结果，正常对照无相关性，NSCLC 人群呈正相关关系（r = 0.426，P = 0.009）。结论 NSCLC患者γδ T细胞、NKT细胞及其亚群细胞数量显著低于正常对照，NSCLC 人群γδ T细胞与 NKT细胞呈正相关关系。     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCR γδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件.方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用.结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液.可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体(T cell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性.这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上.结论:可溶性anti-TCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好.     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCRγδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法：分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性antiTCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶（lacate dehydrogenase,LDH）法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果：添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体（T cell receptor,TCR）库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上。结论：可溶性antiTCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。     

伴EB病毒感染的成年女性肝脾T细胞淋巴瘤临床病理分析

0 引言 T细胞根据表面受体的不同而分为两大类,即表达αβ和γδ受体的T细胞.γδ T细胞只占循环T细胞的1％～5％,在感染、炎性反应和自身免疫反应时数量会增多.肝脾T细胞淋巴瘤(hepatosplenic T-cell lymphoma,HSTCL)在临床上较为少见,而且通常为γδ T细胞型.HSTCL主要发生于年轻男性,预后较差.瘤细胞主要源自非活化的细胞毒性γδ T细胞,尤其是V-δ1亚型.本文分析我院收治的1例成年女性肝脾T细胞淋巴瘤的临床特点及病理免疫表型,并进行相关文献复习,以期为该病的诊治提供参考. 1病例报告 患者,女,41岁,以反复发热4月余入院.体温波动在37.0℃～38.8℃,以午后至次日凌晨时段发热较明显,晨起后体温可自行下降至正常范围,经抗感染治疗无效.查体:肝位于右肋缘下5 cm,脾位于左肋缘下6 cm.     

中药对T细胞免疫干预的抗肿瘤作用

中药具有一定的抗肿瘤疗效,不仅能够缓解肿瘤患者症状从而改善生活质量,还能在一定程度上控制肿瘤大小并延长患者生存期。由于T淋巴细胞在肿瘤细胞所产生的免疫应答中起主要作用,因此探索中药对T细胞免疫干预的作用机制可以为肿瘤治疗提供新的思路与方法。目前大多数中药通过促进T细胞因子释放、诱导细胞凋亡、增加T细胞总数及T辅助细胞、促进γδT细胞增殖等途径达到抗肿瘤作用。由于T细胞可分为αβT细胞与γδT细胞两大类,本文综合归纳了常用中药及其单体对αβT细胞与γδT细胞进行干预的主要机制,并提出了未来研究的方向,为进一步研究提供参考。     

T细胞的扩增及其信号转导分子ZAP-70的检测

目的检测γδT细胞信号转导分子ζ链相关蛋白-70（ζ-chainassociated protein70,ZAP．70）。方法分离获取健康人PBMC,用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb．Ag）刺激PBMC,通过流式细胞仪检测总T细胞和丫6T细胞CD69分子的动态表达;Mtb-Ag活化俩T细胞增殖培养,10d后收集细胞,用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞;westernblot方法检测γδT细胞内的ZAP．70分子。结果总T细胞和γδT细胞均在活化刺激24h时表达CD69分子达高峰,但总T细胞仅为16％,γδT细胞可达75．2％;新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4．9％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为69．2％,免疫磁珠阳性分选后达99-3％;检测到Y6T细胞内的ZAP-70分子。结论Mtb-Ag可特异性激活俩T细胞,用Mtb-Ag刺激γδT细胞活化增殖培养,可获得大量的γδT细胞;成功地检测到细胞内ZAP-70分子,这为Y6T细胞内其它分子的检测分析奠定方法学基础,也为进一步检测γδT细胞活化信号转导过程中ZAP-70分子的激活及作用奠定基础。     

2023年γδT细胞肿瘤治疗领域重大进展

γδT细胞是一类表达γδTCR异源二聚体的特殊固有免疫T细胞。过去,缺乏对其全面系统的基础研究,在其发育、分化、增殖、活化、效应和耗竭等所有环节仍有很多问题尚不清楚。然而,因为成熟的γδT细胞优势定植于皮肤、消化道、呼吸道、生殖道等肿瘤高发的黏膜组织,能以MHC非限制性的方式直接识别和杀伤多种肿瘤细胞,在肿瘤免疫治疗领域具有不可替代的优势,近年来其应用异军突起,发展迅速,也因此反过来促进了基础研究的深入,取得了一些亮眼的进展。本文对2023年γδT细胞在肿瘤免疫治疗领域的重大进展进行述评,主要集中在γδT细胞肿瘤抗原识别机制、肿瘤微环境中γδT细胞的功能调控、γδT细胞抗肿瘤细胞毒活性的机制、新型基于γδT细胞的肿瘤免疫治疗协同增效策略四个方面,以期推动γδT细胞在肿瘤免疫治疗领域的进一步发展,为临床γδT细胞应用协同增效的策略提供新的思路。     

食管癌患者外周血γδT细胞对Th1/Th2细胞因子的影响

目的 探讨食管癌患者外周血γδT细胞水平及对Th／Th2细胞因子的影响。方法 用流式细胞仪测定46例食管癌患者、28例本院健康职工外周血γδT细胞在淋巴细胞中的百分率和血浆中Th1／Th2细胞因子的含量。结果 两组比较γδT细胞有显著性意义，Th类因子有显著性意义，Th2类细胞因子无显著性意义。结论 食管癌患者γδT细胞水平显著低于常人群，γδT细胞可以通过分泌细胞因子调节和维护机体Th1／Th2的免疫平衡。     

在肿瘤免疫中早期γ-干扰素的产生来源于γδT细胞

大量实验显示γ 干扰素 (IFN γ)在固有性抗肿瘤免疫和适应性抗肿瘤免疫中发挥重要作。有关IFN γ在肿瘤免疫中的效应机制已有很多解释 ,但有关早期干扰素的来源尚不清楚。众所周知γδT细胞在病原微生物入侵早期的防御性免疫反应中起关键作用 ,且可产生大量的γ 干扰素 ,因而研究者提出了在抗肿瘤免疫中γδT细胞是早期γ 干扰素主要来源的假说。本研究利用多个实验模型验证了这一假说。首先研究了γδT细胞在预防原发肿瘤和移植肿瘤发生发展中的重要性 :①用化学致癌物甲基胆蒽 (MCA ,75 μg 只 )诱导肿瘤的实验显示 ,不仅γδT细胞…     

比较不同磷酸抗原体外扩增前列腺癌患者外周血γδ T细胞的效率

目的:研究唑来膦酸(Zoledronate acid)和异戊烯焦磷酸(IPP)体外扩增前列腺癌患者外周血中γδ T细胞的效率.方法:密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞(PBMCs),分别加入5.0 μmol/L Zol 或10.0 μg/ml IPP联合1 000 IU/ml的rhIL-2于含10%自体血浆的AIM-V培养体系培养,观察并收集细胞,采用流式细胞仪检测刺激后 CD3+Vγ9+的γδ T细胞数量和比例,并计算其扩增效率.结果:经14天扩增培养后,两种磷酸抗原均能在体外扩增前列腺癌患者外周血中的γδ T细胞,Zol组的γδ T细胞在淋巴细胞中最高含量达64.7%,IPP组最高达55.9%,且扩增培养至第9天的γδ T细胞对肿瘤细胞有一定的杀伤活性,但Zol组的扩增效率以及细胞的杀伤活性均明显强于IPP组(P<0.05).结论:Zol具有与IPP体外扩增外周血中γδ T细胞的能力,Zol刺激法可能成为体外扩增前列腺癌患者外周血中γδ T细胞更为经济安全的选择.     

γδT细胞对血液肿瘤细胞的体外杀伤活性

目的:建立γδT细胞培养体系,探讨γδT细胞对不同血液肿瘤细胞的杀伤活性.方法:选取2016年1月至2016年4月在解放军第307医院造血于细胞移植科收治的4例B细胞淋巴瘤患者和该院5例体检健康志愿者,分别分离其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),用唑来磷酸(zoledronate,Zol)和IL-2体外扩增γδT细胞,采用流式细胞术检测γδT细胞对血液肿瘤细胞Jurkat、THP-1、HL-60、K562、Raji、U-937和RPMI-8226的杀伤活性,比较CIK、NK和γδT三种细胞对K562细胞的杀伤作用,检测γδT细胞IFN-γ、TNF-α的分泌水平及CD107a分子的表达水平.结果:成功在体外扩增外周血γδT细胞;γδT细胞对Jurkat、THP-1、HL-60、K562、U-937和RPMI-8226细胞均有明显的杀伤活性(P＜0.05);γδT细胞对K562细胞的杀伤活性与NK细胞无统计学差异,但明显强于CIK细胞(P＜0.01);随着与K562细胞共孵育时间的延长,γδT细胞分泌IFN-γ的水平呈现出时间依赖性增加,TNF-α在8h后逐渐增加;与K562细胞或HL-60细胞共孵育后,γδT细胞CD107a分子的表达水平均显著增加(P＜0.01).结论:体外扩增的γδT细胞对血液肿瘤细胞具有较高的杀伤活性,为血液肿瘤的细胞免疫治疗提供实验依据.     

DC细胞刺激γδT细胞扩增诱导干细胞移植时GVL研究

目的：研究γδT细胞的体外生存期，抗白血病活性及可能引起的GVHD，为将来自体及异体移植后输注γδT细胞诱导GVL作前期基础研究。方法：对移植患者采集物用GM－CSF＋IL－4进行培养，使其分化和扩增为DC；然后用DC和细胞因子IL－2刺激其CD4^ T细胞扩增后，协同DC共同刺激γδT细胞扩增，进而用MTT比色法和CFU－GM集落培养研究其功能。结果：γδT细胞能在体外长期大量扩增。扩增的γδT细胞对多咱白血病细胞株具有杀伤作用，而对自体及异体CFU－GM集落形成能力无显著影响。结论：γδT细胞可望用于造血干细胞移植后的过继免疫治疗，值得进一步做有关临床研究。     

颗粒外排与Fas/Fas配体途径在人yδT细胞的肿瘤细胞毒活性中的作用

目的探讨结核杆菌抗原(Mtb-Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制.方法用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞;用RT-PCR法检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA的表达;用流式细胞仪检测γδT细胞表面Fas配体(FasL)分子以及几种肿瘤细胞表面Fas分子的表达;用MTT法测定γδT细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性,观察穿孔素/颗粒酶途径的阻断剂concanamycin A(CMA)和Fas/FasL途径的抑制剂brefeldin A(BFA)对γδT细胞细胞毒活性的影响.结果经Mtb-Ag激活和扩增的γδT细胞高表达穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA;Mtb-Ag活化的γδT细胞中22.4%表达FasL分子;CMA能明显抑制YδT细胞对肿瘤细胞(尤其对Fas低表达的K562和PG)的杀伤,BFA能强烈抑制γδT细胞杀伤Fas高表达的Raji和A375.结论Mtb-Ag活化的γδT细胞杀伤Fas低表达的靶细胞时主要通过颗粒外排途径,杀伤Fas高表达的靶细胞时,颗粒外排和FasL均起作用.     

颗粒外排与Fas/Fas配体途径在人γδT细胞的肿瘤细胞毒活性中的作用

目的：探讨结核杆菌抗原（Mtb-Ag)特异性活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞的细胞毒活性机制。方法：用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增并用磁珠阳性分选法获得高纯度γδT细胞;用RT－PCR法检测γδT细胞穿孔素,颗粒酶B和FasL mRNA的表达;用流式细胞仪检测γδT细胞表面Fas配体（FasL）分子以及几种肿瘤细胞表面Fas分子的表达;用MTT法测定γδT细胞对肿瘤细胞的细胞毒活性,观察穿孔素／颗粒酶途径的阻断剂concanamycin A(CMA)和Fas/FasL途径的抑制剂berfeldinA(BFA)对γδT细胞细胞毒活性的影响,结果：经Mtb-Ag激活和扩增的γδT细胞高表达穿孔素,颗粒酶B和K562和PG）的杀伤,BFA能强烈抑制γδT细胞杀伤Fas高表面的Raji和A375,结论：Mtb-Ag活化的γδT细胞杀伤Fas低表达的靶细胞时主要通过颗粒外排途径,杀伤Fas高表达的靶细胞时,颗粒外排和FasL均起作用。     

Gal-1单抗增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

目的:探讨γδT细胞联合半乳糖凝集素1(galectin-1,Gal-1)单抗对人宫颈癌细胞的杀伤作用。方法:从人宫颈癌组织中分离肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs),并通过固相单抗包被法在体外扩增获得γδT细胞,流式细胞术检测其纯度;Western blotting和ELISA法检测宫颈癌SiHa、HeLa细胞及其上清中Gal-1的表达,乳酸脱氢酶(lactate de-hydrogenase,LDH)释放实验检测γδT细胞联合Gal-1单抗对宫颈癌SiHa、HeLa细胞的杀伤作用。皮下注射SiHa细胞制备荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、同型对照组(IgG1组)、γδT细胞组(γδT组)、Gal-1单抗组(Gal-1mAb组)及γδT细胞联合Gal-1单抗组(γδT+Gal-1 mAb组),观察各组荷瘤小鼠移植瘤生长的情况。结果:固相单抗包被法体外扩增后TCRγδ阳性γδT细胞比例达(91.2±1.2)%,SiHa、HeLa细胞及其上清中Gal-1高表达。与对照组相比,Gal-1 mAb组能够增强γδT细胞体外杀伤SiHa细胞[(68.1±3.0)%vs(48.7±3.8)%,P<0.05]和HeLa细胞[(79.4±5.6)%vs(48.3±6.5)%,P<0.05]的效率。裸鼠荷瘤30 d,γδT+Gal-1 mAb组的移植瘤体积明显小于Gal-1单抗组[(31.3±9.1)vs(199.6±41.2)mm3,P<0.01]和γδT细胞组[(31.3±9.1)vs(85.6±45.1)mm3,P<0.05]。结论:Gal-1单抗能增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用。     

国内γδT淋巴细胞抗肿瘤作用相关基础研究进展

T淋巴细胞根据其抗原受体的不同可分为αβT细胞和γδT细胞,其中γδT细胞在人类外周血中的数量较少,约占外周血淋巴细胞的1％～5％。γδT细胞具有很多独特的性质,无论是它的解剖分布位置、发育途径、细胞表型,还是抗原识别机制,都与αβT细胞有着显著的区别。     

肝脾γδT细胞淋巴瘤伴副肿瘤综合征一例并文献复习

目的 探讨肝脾γδT细胞淋巴瘤伴副肿瘤综合征患者的临床表现、病理学特征、免疫表型、治疗及预后。方法 分析1例肝脾γδT细胞淋巴瘤伴副肿瘤综合征患者的临床资料,并复习相关文献。 结果 患者为成年男性,以高热、肝脾大、贫血等发病,诊断为肝脾γδT细胞淋巴瘤,后期治疗过程中出现副肿瘤综合征。结论 肝脾γδT细胞淋巴瘤是较为罕见的外周T细胞淋巴瘤,以肝脾大、发热为主要临床表现,可合并副肿瘤综合征。该疾病进展快,预后差,生存期短,目前尚缺乏有效的治疗方法。     

肿瘤免疫治疗进展

肿瘤免疫治疗是肿瘤研究的热点之一.现综述自然杀伤T细胞、树突状细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞及γδT细胞在肿瘤免疫治疗研究的新进展,重点阐述抗肿瘤免疫原理研究进展及实验室抗肿瘤作用的相关结果、意义,并提出需进一步注意及研究的问题.