生存素反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸 (ASODN)对急性早幼粒细胞系HL 6 0细胞凋亡的影响。方法 :应用四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;倒置显微镜观察细胞形态学变化 ;原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数 (AI) ;流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡 ;RT PCR半定量检测生存素mRNA的表达。结果 :5～ 2 0 μmol·L-1生存素ASODN对HL 6 0细胞增殖均有抑制作用 ,且呈时间和剂量依赖性。ASODN组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论 :生存素ASODN能有效抑制HL 6 0细胞生存素mRNA的表达并诱导细胞凋亡 ,表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

人肾透明细胞癌中ki-67 bcl-2 bax p53表达及癌细胞自发凋亡率的临床意义

目的　探讨人肾透明细胞癌中 ki- 6 7、bcl- 2、bax、p5 3表达及癌细胞自发凋亡率的临床意义。方法　选取 4 8例档存的肾透明细胞癌石蜡包埋标本 ,采用免疫组织化学方法检测癌细胞中 ki- 6 7、bcl- 2、bax、p5 3的表达 ,采用缺口末端标记法 ( TU NEL )检测癌细胞的自发凋亡率。结果　 ki- 6 7表达率 ( PI)为 0 .15 %～ 36 .4 % ,随TNM分期的增高而增高。癌细胞自发凋亡率 ( AI)为 0 .2 %～ 15 .4 % ,随 TNM分期的增高有上升趋势。各因子之间关系分析 :1高 bax表达组的癌细胞凋亡率高 ;2 p5 3阴性组的 AI高 ,bax高 ,PI低 ;3未发现 bcl- 2与其他因子间有相关关系。预后分析 :PI、AI、p5 3、bax、bcl- 2 / bax、TNM是预后因素 ,PI、p5 3是独立预后因素。结论　细胞增生状态、细胞凋亡状态以及凋亡调控因子的表达情况是影响肾透明细胞癌发生、发展的重要因素     

槲皮素联合喜树碱促进人前列腺癌PC-3细胞的凋亡

目的考察槲皮素联用喜树碱对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。方法体外培养PC-3细胞,用CCK-8实验、细胞周期检测实验和Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测实验,考察槲皮素联用喜树碱对PC-3细胞增殖凋亡的影响;用Western-Blot实验检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、PARP1和Caspase-3)的表达。结果 CCK-8实验结果显示槲皮素和喜树碱都可以一定程度地抑制PC-3细胞增殖,诱导凋亡作用,其中槲皮素和喜树碱联用效果更优。药物作用48 h后其半数抑制浓度(IC₅₀)分别为38.76、2.25、1.88μmol·L^-1。细胞周期实验显示,药物联用组细胞周期处于S期的细胞比例明显高于单用组(P<0.05);细胞凋亡实验显示,药物联用组的细胞凋亡率显著高于单用组(P<0.05);Western-Blot结果显示,药物联用组对凋亡相关蛋白的影响更为明显,使Bcl-2蛋白表达下降为47%,分别使Bax、PARP1和Caspase-3依次增加1.17、0.77和0.69倍(P<0.05)。结论槲皮素联合喜树碱能够显著促进人前列腺癌PC-3细胞的凋亡。     

基于微流控芯片技术橙皮苷抗肺肿瘤作用机制研究

目的探究橙皮苷诱导人肺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法基于微流控芯片技术采用Hoechst 33342/PI染色法检测橙皮苷对肺癌细胞A549凋亡坏死的影响;流式细胞术检测橙皮苷对肺癌细胞周期及凋亡的影响;实时荧光定量PCR技术检测相关基因VEGF、PI3K及PTEN的表达;Western blot技术检测橙皮苷诱导肺癌细胞中PI3K-Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt、PTEN及凋亡蛋白Bcl-2、周期蛋白Cyclin B1的表达。结果橙皮苷作用于细胞G_0/G_1期及S期,阻滞细胞分裂,并呈现浓度依赖性诱导肺癌细胞凋亡,其细胞凋亡坏死率由正常对照组的(6.7±0.6)%增至(27.9±1.1)%;经橙皮苷诱导后的肺癌细胞中VEGF和PI3K基因表达相对降低,抑癌基因PTEN表达相对增加。Western blot结果显示,经橙皮苷诱导的肺癌细胞中凋亡蛋白Bcl-2及周期蛋白Cyclin B1相对表达降低,PI3K-Akt信号通路蛋白Akt表达量与对照组比较明显减少,PI3K蛋白表达量相对增加,PTEN表达量无明显变化。结论橙皮苷可能是通过干扰PI3K-Akt信号通路,阻碍肿瘤细胞的分裂并促进凋亡蛋白的产生,从而诱导肺癌细胞A549凋亡。     

整合素连接激酶反义寡脱氧核苷酸对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株的作用

目的探讨整合素连接激酶(ILK)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对喉鳞状细胞癌 Hep-2细胞株生物学特性的影响及抑制ILK活性以控制喉鳞状细胞癌细胞生长的可能性。方法应用脂质体包裹的ILK ASODN转染喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,阻断ILK表达;应用光学显微镜观察凋亡细胞的形态学改变;通过细胞生长曲线检测细胞的增殖活性;于处理后120h采用膜联蛋白(Annexin- V)／碘化丙啶(PI)联合标记法于荧光显微镜下观察细胞凋亡;于处理后72h以流式细胞术测定细胞凋亡及细胞周期。结果 ASODN组转染后,Hep-2细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加,细胞周期发生显著变化:G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少,与对照组相比,差异有显著意义 (P<0．05);而SODN及NODN组与对照组相比则无明显变化(P>0．05)。结论 ILK ASODN可以抑制喉鳞状细胞癌Hep-2细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡;应用反义技术抑制ILK活性可能对喉鳞状细胞癌的治疗有意义。     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

不同靶点的反义bcl—2寡核苷酸对白血病细胞足叶乙甙敏感性影响的研究

目的探讨针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对足叶乙甙诱导HL-60和K562细胞凋亡的影响。方法应用MTT法和流式细胞仪检测反义寡核苷酸与足叶乙甙联合作用的HL60和K562细胞中bcl-2蛋白表达和细胞凋亡及足叶乙甙IC50值。结果10μmol     

内源性大麻素联用顺铂对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用

目的观察内源性大麻素（AEA）、顺铂（DDP）单用或联用对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测AEA和DDP对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪（FCM）PI单染检测AEA联用DDP对细胞周期的影响,以Annexinv／PI双染法检测AEA联用DDP对细胞凋亡的影响。结果AEA对肺癌细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。10,20μmol／L的AEA和1,2mg／L的DDP联合作用24,48,72h后,细胞增殖抑制率显著高于单用组;两药联用后诱导细胞凋亡的作用显著增强,AEA可使A549细胞阻滞于G2／M期。结论AEA及DDP对肺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,在一定范围内呈量效关系,且两者联合应用具有相加或协同作用。     

甲状腺肿瘤bcl-2和c-myc蛋白表达与细胞凋亡的关系

目的探讨甲状腺肿瘤细胞bcl-2、c-myc蛋白的表达与细胞凋亡的关系以及它们在甲状腺良、恶性肿瘤中的诊断意义。方法应用免疫组化EnVisionMT法检测甲状腺肿瘤细胞bcl-2、c-myc蛋白的表达,用TUNEL法检测甲状腺肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果30例腺瘤中bcl-2、c-myc蛋白阳性表达率分别为90.0%(27例)、50.0%(15例)鸦30例腺癌中分别为63.3%(19例)、93.3%(28例)。二者在腺瘤和腺癌组间比较差异均有显著性(P<0.05)。30例腺瘤中AI为0.12±0.28,30例腺癌中AI为0.39±0.39,组间比较差异有显著性(P<0.05)。在甲状腺癌中,bcl-2阳性组AI低于阴性组(P<0.05),c-myc阳性组AI高于阴性组(P<0.05)。结论bcl-2、c-myc蛋白和AI可作为鉴别甲状腺良恶性肿瘤的参考指标;bcl-2蛋白的丢失可能与甲状腺乳头状癌的形成有关;bcl-2蛋白高表达抑制细胞凋亡,c-myc蛋白高表达促进细胞凋亡。     

bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡诱导作用

目的探讨bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸(AS-ODN)对模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡诱导作用。方法将模拟急性髓性白血病缓解骨髓(正常骨髓与HL-60细胞按1000:1的比例混合)分别与终浓度为10μM的bcl-2反义寡核苷酸(反义组)和bcl-2正义寡核苷酸(正义组)共培养72小时,同时设置空白对照组,观察细胞凋亡现象。结果反义组药物作用48~72小时后,流式细胞仪和DNA电泳检测到反义组出现细胞凋亡现象,而空白对照组和正义组均未检测到细胞凋亡现象。结论bcl-2AS-ODN可诱导模拟缓解骨髓中白血病细胞的凋亡,是其应用于体外净化的基本条件。     

HIF-1α反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的：本研究通过应用 HIF-1α反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）处理 SMMC-7721肝癌细胞,观察其对 SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制。方法肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞施加 HIF-1α的 ASODN 干预,设浓度梯度和时间梯度。检测不同药物浓度、不同时间对 SMMC-7721细胞的增殖的作用及对细胞周期和凋亡率的影响。对 bcl-2、bax、surviving mRNA 表达产物相对定量,并对 SMMC-7721细胞胞浆 bcl-2、bax、survivin 蛋白进行相对定量分析。结果与对照组相比,各处理组 OD 值均有显著下降,细胞数量降低,且各实验组相比呈明显的时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞后,均可使各处理组 G0/ G1期细胞增多,S 期细胞减少,且呈时间-剂量依赖效应,差异有统计学意义（ P <0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2 mRNA 和 survivin mRNA 表达均有显著下降,差异有统计学意义（ P <0.05）。而 bax 的 mRNA无明显变化趋势（ P >0.05）。不同浓度 HIF-1α的 ASODN 处理细胞不同时间后,与对照组相比,各实验组 bcl-2和survivin 的蛋白表达显著下降,bax 的蛋白表达显著增加,差异有统计学意义（ P <0.05）。结论 HIF-1α的 ASODN可以将 SMMC-7721肝癌细胞株阻滞于 G0/ G1期,影响细胞周期进程,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。HIF-1α促进增殖抑制凋亡的可能机制是上调肝癌细胞 Survivin 和 bcl-2的表达,下调 bax 的表达。针对 HIF-1α抑制剂的应用为肝癌的治疗提供了新思路。     

P53、BCL-2蛋白在肺癌中的表达及临床病理研究

目的探讨P53、BCL-2基因在肺癌发生、分化中的作用机制及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测P53、BCL-2蛋白在55例肺癌的不同病理类型中的表达情况。结果P53在肺鳞状细胞癌中的表达率为51.7%,在肺小细胞癌中的表达率为60.0%,在腺癌中的表达率为61.5%,经统计学分析,无明显相关性(P>0.05):BCL-2在肺小细胞癌(SCLC)中的表达率为80.0%,在肺非小细胞癌(NSCLC)中的表达率为36.0%,经统计学分析,有相关性(P<0.05)。结论P53蛋白与肺癌有密切关系,但与组织学类型无关:BCL-2蛋白与肺癌的组织学类型有密切关系(P<0.05)。     

全反式维甲酸对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对小细胞肺癌细胞的分化诱导作用。方法选择NCI-H446细胞株MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜下观察形态,流式细胞仪进行细胞周期分析。RT-PCR法分析维甲酸受体亚型基因。结果全反式维甲酸诱导小细胞肺癌NCI-H446细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期。结论全反式维甲酸诱导分化能有效抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞株的增殖,促进凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞株HEPG2的抑制作用

目的观察survivin反义寡核苷酸（ASODN）对肝癌细胞的增殖、凋亡的影响。方法人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染肝癌细胞株HEPG2后,用MTT法检测细胞毒作用,流式细胞术检测细胞的凋亡;RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及蛋白的表达。结果survivin ASODN抑制HEPG2增殖,呈剂量依赖性;各survivin ASODN处理组HEPG2细胞凋亡率显著高于对照组（P〈0.01）;survivin ASODN处理组HEPG2细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降（P〈0.01）。结论survivin ASODN能够抑制HEPG2细胞增殖、诱导凋亡。     

宫颈鳞状细胞癌组织中Bcl-2与血管内皮生长因子的表达及相关性

目的探讨凋亡抑制基因Bcl-2与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达,以及二者表达与宫颈鳞状细胞癌中生物学行为的相关性。方法分别对45例宫颈鳞状细胞癌中组织、34例CIN组织和10例正常宫颈组织,采用免疫组织化学法检测Bcl-2的表达,免疫蛋白印迹(Western Blotting)法检测VEGF蛋白的表达,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI)。结果 Bcl-2和VEGF蛋白在45例宫颈鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为51.11%和62.22%,均显著高于CIN组织(11.76%和5.88%)(P<0.05);而在正常宫颈组织二者均无表达。同时,Bcl-2在VEGF表达阳性的宫颈鳞状细胞癌组织中呈高度表达,Bcl-2和VEGF的表达密切相关(χ2=5.148,P<0.05)。结论提示Bcl-2可能参与宫颈鳞状细胞癌的发生和发展;Bcl-2可能通过上调VEGF的表达而促进宫颈鳞状细胞癌的转移,同时VEGF也可能通过诱导Bcl-2的表达而抑制肿瘤细胞的凋亡。     

消癌平对非小细胞肺癌厄洛替尼耐药的逆转作用

目的：研究消癌平对厄洛替尼非小细胞肺癌（NSCLC）耐药细胞株PC9/G2的逆转作用机制。方法：MTT法考察消癌平对PC9/G2非毒性剂量,以及对厄洛替尼NSCLC耐药的逆转效应;RT-PCR法测定消癌平对EGFR下游通路PI3K mRNA表达水平的影响,Western blot法测定PI3K蛋白水平变化,分光光度法测定凋亡蛋白Caspase-3活性的变化。结果：消癌平对PC9/G2的非毒性剂量为10mg/mL;消癌平联合厄洛替尼组有明显的逆转耐药作用,细胞存活率比对照组（单用厄洛替尼）降低15%～23%;消癌平使PI3K mRNA和蛋白表达水平显著下降,Caspase-3凋亡蛋白活性提高。结论：消癌平对厄洛替尼NSCLC耐药有逆转作用,可能通过抑制PI3K表达,进而激活凋亡蛋白Caspase-3的机制实现。     

特异性阻断Shh信号通路对胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的:研究Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡的影响。方法:用四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胃癌细胞系SGC-7901增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI)。结果:Cyclopamine对SGC-7901细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性;Cyclopamine作用后使胃癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加。结论:Shh信号分子对胃癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胃癌细胞增殖,并促进细胞凋亡。     

曲古抑菌素A对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制药曲古抑菌素A(TSA)对肾癌GRC-1细胞生长的影响及其作用机制. 方法使用TSA处理GRC-1细胞. 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western blot免疫印迹分析p53,p21和bcl-2表达. 结果 TSA能明显抑制GRC-1细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的GRC-1细胞早期凋亡率明显提高,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低. TSA能够明显下调bcl-2的表达,上调p21的表达,而对p53的没有显著影响. 结论TSA可以通过诱导肾肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21的表达有关,TSA可能依赖非p53途径调控p21的表达.