大鼠脑损伤后氨基胍的神经保护作用

目的探讨大鼠脑损伤后诱导性一氧化氮合酶（iNOS）抑制剂——氨基胍（AG）的神经保护作用。方法采用大鼠额叶锐器损伤模型,将SD大鼠随机分成氨基胍（AG）治疗组和生理盐水（NS）对照组。用生物化学方法检测NO含量;RT-PCR法及免疫组织化学染色方法观察iNOSmRNA和iNOS阳性细胞表达变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺1：3末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。将两组结果进行比较。结果AG治疗组创伤区及周边NO含量、iNOSmRNA和iNOS阳性细胞表达量较NS组明显降低,凋亡细胞数量也相应明显减少。结论AG能选择性地抑制iNOS表达,减少NO过量产生,从而减少细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

大鼠额叶损伤后细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白的表达变化

本研究目的为探讨大鼠额叶锐器损伤后细胞凋亡的变化规律及调控机制。通过电镜、TUNEL法及免疫组织化学染色方法检测细胞凋亡和Bax、Bcl2蛋白的表达变化,结果发现凋亡细胞在损伤后3h即可发现,24h达到高峰;伤后3hBax和Bcl2表达明显升高,Bax表达12h达到高峰,而Bcl2表达6h即达到高峰;伤后Bax/Bcl2比值上调,24h达到高峰,随后逐渐下降。结果表明大鼠额叶锐器伤后存在细胞凋亡,凋亡细胞数量的变化与伤后时程有关,Bax/Bcl2比值是决定细胞凋亡的重要因素。     

大鼠创伤性脑损伤后细胞凋亡及NOS阳性细胞的变化

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时相皮质、海马、隔区细胞凋亡及NOS、ChAT阳性细胞的变化。方法：采用大鼠自由落体脑损伤模型，伤后1、2、3、4、5、7、10d取脑切片，经Nissl染色，用TUNEL法检测细胞凋亡，NADPH—d组化染色观察NOS阳性细胞，ChAT免疫组化染色观察隔区ChAT阳性细胞。结果：Nissl染色可见损伤侧海马CA2、CA3区锥体细胞层细胞消失或紊乱。损伤区周围皮质凋亡细胞伤后3d达到高峰；损伤侧海马凋亡细胞伤后5d达到高峰；损伤侧隔区凋亡细胞7d达到高峰。正常侧上述脑区各时相点均未见到凋亡细胞。损伤区周围皮质、损伤侧海马和隔区iNOS阳性细胞数量明显增加。损伤侧隔区ChAT阳性神经元也明显减少。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤区周围皮质和损伤侧海马、隔区细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞iNOS表达增加是导致细胞凋亡的因素。     

大鼠创伤性脑损伤后星形胶质细胞的变化

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后星形胶质细胞的形态学变化及GFAP和NOS的表达情况。方法：采用大鼠自由落体脑损伤模型，伤后1、3、7d取脑切片，行Nissl染色以及GFAP免疫组化和NADPH—d组化单标记及双标记染色。结果：损伤区周围皮质GFAP阳性细胞胞体增大、突起增粗增长，GFAP阳性细胞数量与正常侧及对照组相比，伤后1d即有明显增加，伤后3d、7d数量持续增加；损伤侧海马CAI～3区和DG各层GFAP阳性细胞排列紊乱，胞体增大、突起增粗增长，GFAP阳性细胞数量与正常侧及对照组相比则无明显变化。损伤区周围皮质、损伤侧海马NOS阳性细胞数量明显增加。伤后3d损伤区周围皮质和损伤侧海马中GFAP与NOS双标细胞分别占GFAP阳性细胞的14．2％和13．4％左右。结论：大鼠创伤性脑损伤后大量的星形胶质细胞活化、GFAP表达增加并且部分转化为NOS阳性细胞，提示其参与了脑组织的损伤与修复过程。     

孕酮对大鼠脑损伤后大脑皮质及海马CA1区环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的: 观察孕酮对大鼠脑损伤后皮质及海马CA1区COX-2和iNOS表达的影响.方法: 雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组和孕酮治疗组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型.孕酮治疗组伤后1h、 6h腹腔注射孕酮16mg/kg.各组于伤后24h取材.用免疫组织化学法及免疫蛋白印迹法,观察大鼠皮质及海马CA1区COX-2、iNOS的免疫阳性细胞数和蛋白表达水平变化.结果: 与假手术组大鼠相比,脑损伤组大鼠皮质及海马CA1区COX-2、 iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平较假手术组增加;孕酮治疗组与脑损伤组比较,大鼠皮质及海马CA1区COX-2、 iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平减少,差异有统计学意义.结论: 孕酮可能通过降低COX-2、 iNOS的表达发挥脑损伤保护作用.     

大鼠创伤性脑损伤后海马细胞凋亡及bcl-2、NGF-R阳性细胞的变化

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时相海马细胞凋亡及。bcl-2、NGF—R阳性细胞的变化规律。方法：采用大鼠自由落体脑损伤模型，伤后1、2、3、4、5、7、10d取脑切片，作：Nissl染色，用TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组化染色观察bcl-2、NGF-R阳性细胞。结果：Nissl染色可见损伤侧海马CA2、CA3区锥体细胞层细胞消失或排列紊乱。损伤侧海马凋亡细胞伤后5d达到高峰，正常侧海马各时相点均未见到凋亡细胞。损伤侧海马bcl-2阳性细胞数量下降，伤后3d至最低点；NGF—R阳性细胞数量增加，伤后5d达到高峰。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤侧海马细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞bcl-2表达下降、NGF-R表达增加是导致细胞凋亡的因素。     

c-Jun氨基末端激酶基因表达与急性脊髓损伤大鼠神经功能修复状态的关联研究

目的探索急性脊髓损伤后大鼠脊髓组织中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)基因表达与神经功能修复状态的关联。方法取健康成年雄性大鼠50只,随机选取,假手术对照组18只,实验组32只。损伤后1、12、24、72 h行PCR检测,比较大鼠脊髓组织中JNK(JNK1、JNK2、JNK3)表达水平变化;损伤后12、72 h选取L_(4/5)节段脊髓行HE染色、,比较脊髓损伤大鼠脊髓组织细胞凋亡情况、神经功能变化状态(NSS)。结果 PCR结果显示,髓损伤大鼠脊髓组织中JNK1、JNK2、JNK3的表达,在损伤后1、12、24、72 h除JNK3在相应时点表达水平与假手术组比较水平下降外,其他两项表达与假手术对照组无明显差别。L4/5脊髓HE染色结果提示,与假手术组比较,损伤后12 h损伤的脊髓皮质周边区HE染色阳性细胞显著增多。随着时间推移,染色阳性细胞出现明显减少的趋势,损伤后12 h的染色阳性细胞明显少于72 h。损伤组NSS评分则明显更高,但脊髓损伤组损伤后不同时点比较,NSS评分渐减。结论脊髓损伤后出现JNK3表达下调的情况,可能与神经细胞凋亡以及促进损伤后神经功能的恢复有关联。     

孕酮抑制大鼠脑损伤后炎症反应诱导的神经细胞凋亡

目的:研究孕酮(progesterone,PROG)对大鼠脑损伤后皮质COX-2、iNOS、NF-κB和caspase-3表达的影响,以探讨PROG脑保护作用的可能机制。方法:雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、脑损伤组和PROG治疗组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型。PROG治疗组伤后1,6h腹腔注射PROG16mg/kg,各组于伤后24h取材。用免疫组织化学法及免疫蛋白印迹法,观察大鼠皮质COX-2、iNOS、NF-κB和caspase-3的免疫阳性细胞数和蛋白表达水平变化。结果:与假手术组大鼠相比,脑损伤组大鼠皮质COX-2、iN-OS、NF-κB和caspase-3阳性细胞数和蛋白表达水平较假手术组COX-2、iNOS、NF-κB和caspase-3显著增加(P0.05);PROG治疗组与脑损伤组比较,大鼠皮质COX-2、iNOS、NF-κB和caspase-3阳性细胞数和蛋白表达水平明显减少(P0.05)。结论:PROG可通过抑制NF-κB的活化,阻断NF-κB和iNOS自身强化的炎症反应过程,降低COX-2、caspase-3的表达,抑制脑损伤后的炎症反应和细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。     

大鼠坐骨神经损伤后诱导型一氧化氮合酶表达的变化

为了探讨大鼠坐骨神经损伤后再生过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化及意义,本研究采用大鼠坐骨神经切断缝合模型,分别于术后1、3、7、14、21及28d取吻合口远端的神经,采用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测损伤神经远端iNOSmRNA及其蛋白的表达水平。结果显示:假手术对照组坐骨神经中未见明显的iNOS阳性产物,iNOSmRNA表达极低。实验组神经损伤后iNOSmRNA及其蛋白的表达水平均明显增高(P<0.01),iNOS阳性产物的吸光度(A)值在术后7d达高峰。iNOSmRNA表达在术后1、3、7d维持较高水平,此后则明显下降。上述结果说明大鼠坐骨神经损伤后神经纤维中iNOS的表达增加,iNOS可能在周围神经损伤后的再生过程中起着一定的作用。     

单纯性脑震荡对大鼠海马iNOS表达影响的实验研究

目的　观察单纯性脑震荡( pure cerebral concussion, PCC )大鼠海马脑区诱导性一氧化氮合酶( inducible nitric oxide synthase, iNOS )的表达变化,探讨iNOS表达变化规律及其与PCC之间的病理联系。 方法　采用单摆闭合式脑损伤打击装置制造PCC大鼠模型,造模后随机分为3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d 六个损伤组( n=5 ),另设正常对照组( n=5 )。采用iNOS单克隆抗体(鼠)进行免疫组织化学SP法染色和Western Blot实验,检测PCC组和正常组大鼠海马( CA1~4及上、下齿状回 ) iNOS表达的定位及定量情况。 结果　正常生理状态下,海马iNOS阳性细胞染色较浅、轮廓不清,且iNOS蛋白表达较弱,致伤后3 h组iNOS阳性表达开始增强,在3 d组出现表达高峰,iNOS蛋白表达高峰出现在2 d组,与正常组比较均有显著性差异( P<0.05 ),随后均出现下降,至7 d均仍高于正常组。 结论　PCC损伤早期海马脑区出现iNOS表达增强,提示iNOS是参与PCC继发性病理损伤的主要炎症因子之一。     

大鼠脊髓压迫损伤后COX-2基因和蛋白的表达

目的观察大鼠脊髓压迫损伤后COX-2mRNA和蛋白在脊髓组织内表达的时间特征,以及COX-2的空间分布特点。方法以压迫装置致脊髓损伤后,在伤后不同时间点(30min、3h、6h、24h、72h、1w)分别应用RT-PCR、Western blotting、免疫组化技术检测COX-2mRNA和蛋白表达和分布。结果RT-PCR和Western blotting显示,COX-2mRNA和蛋白伤后30min表达开始增加,于伤后6h达到峰值,伤后1w表达接近基础水平。免疫组化提示,COX-2蛋白在假手术组表达仅见于脊髓血管内皮细胞,伤后COX-2蛋白表达见于损伤区附近脊髓灰质内的神经元和血管内皮细胞,损伤中心部位COX-2免疫阳性细胞少见。结论脊髓压迫损伤早期可快速诱导COX-2基因的表达上调和蛋白的合成,伤后COX-2蛋白分布发生变化,主要位于脊髓神经元和血管内皮细胞。     

大鼠额叶皮质损害后诱导型iNOS阳性细胞的变化

目的：一氧化氮在脑内的许多生功能中起重要作用,并参与脑损伤的病理生理过程。本研究旨在探讨实验性脑损伤后的NOS阳性细胞的来源及成份。方法：利用机械油吸法制成大鼠额叶皮质损伤动物模型,应用NADPH-d组织化学及GFAP免疫组化法观察损伤后1、3、7、14、21、30及60d皮质损害区NOS阳性细胞的类型和变化。结果：损害后1d即见皮质损害区底部和两侧nNOS阳性细胞增加,损害底部出现诱导型胶质细胞,尤以胼胝体中更为密集。这种反应3-7d时逐渐增强,2周时最明显,以后随时间推移及损害的修复而降低,研究发现部分iNOS阳性细胞与GFAP者共存,提示系反应性胶质细胞,未见eNOS阳性细胞上调现象。结论：皮质受损时,出现2种不同表型的NOS阳性细胞且上调,即出现诱导型神经元nNOS和诱导型iNOS胶质细胞。究其来源各不相同,但均能合成NO,NO主要集中在损伤部位的周围。     

Constitutive and inducible nitric oxide synthases after dynorphin-induced spinal cord injury

It has recently been demonstrated that selective inhibition of both neuronal constitutive and inducible nitric oxide synthases (ncNOS and iNOS) is neuroprotective in a model of dynorphin (Dyn) A(1-17)-induced spinal cord injury. In the present study, various methods including the conversion of 3H-L-arginine to 3H-citrulline, immunohistochemistry and in situ hybridization are employed to determine the temporal profiles of the enzymatic activities, immunoreactivities, and mRNA expression for both ncNOS and iNOS after intrathecal injection of a neurotoxic dose (20 nmol) of Dyn A(1-17). The expression of ncNOS immunoreactivity and mRNA increased as early as 30 min after injection and persisted for 1-4 h. At 24-48 h, the number of ncNOS positive cells remained elevated while most neurons died. The cNOS enzymatic activity in the ventral spinal cord also significantly increased at 30 min 48 h, but no significant changes in the dorsal spinal cord were observed. However, iNOS mRNA expression increased later at 2 h, iNOS immunoreactivity and enzymatic activity increased later at 4 h and persisted for 24-48 h after injection of 20 nmol Dyn A(1-17). These results indicate that both ncNOS and iNOS are associated with Dyn-induced spinal cord injury, with ncNOS predominantly involved at an early stage and iNOS at a later stage.     

成年鼠大脑皮质损伤后神经前体细胞的增殖、迁移和分化

探讨皮质损伤后室管膜下区(SVZ)神经前体细胞增殖、迁移和分化的变化。在立体定位仪上纵切SD大鼠的大脑皮质,于手术后10d腹腔注射BrdU,分别于术后10、13、16、19和21d处死动物。用BrdU、nestin、GFAP和NSE免疫组化单标或双标染色方法,观察损伤后神经前体细胞增殖、迁移和分化的情况。结果显示:损伤后第10d,除损伤区出现大量BrdU阳性细胞外,SVZ背外侧角也聚集大量BrdU阳性细胞;第13d时,SVZ背外侧角的BrdU阳性细胞开始沿胼胝体向损伤区迁移;至第16d和19d,BrdU阳性细胞已迁移到SVZ背外侧角和损伤区之间;第21d时,BrdU阳性细胞已进到损伤区;BrdU阳性细胞为神经前体细胞,但未见分化为星形胶质细胞和神经元。结果提示机械性大脑皮质损伤可诱导SVZ背外侧角神经前体细胞增殖并引导向损伤区迁移,可能参与脑损伤后的修复。     

Plasma proteins in normal neurons. Immunohistochemical studies on autopsy material and experimental animals.

Previous observations have shown that plasma proteins are taken up by damaged neurons after trauma, cold injury and anoxic lesions. The present study was undertaken to test whether such uptake also can occur in normal neurons. Normal human brains at different intervals after death as well as normal rat brains after perfusion and immersion fixation were studied. During the first 24 h after death, the human cases showed practically no immunostaining with anti-fibrinogen and vague and inconstant staining with anti-albumin in the cortex and hippocampus, while certain brain stem nuclei were stained with both antisera even at the shortest postmortem intervals. At longer intervals, increased immunostaining of the neurons in the cortex and hippocampus was also demonstrated. Generally, more cells were positive for albumin than for fibrinogen. Perfusion-fixed rat brains showed no immunostaining, whereas rat brains that were immersion-fixed 24 h after death showed positive staining, mainly located in the brain stem. It is concluded that the staining of normal neurons demonstrated with the present method is due to postmortem leakage of proteins. Since practically no uptake of fibrinogen occurs in the cortex or hippocampus during the first 24 h, a definite neuronal staining with anti-fibrinogen at these intervals probably indicates true neuronal damage. In the brain stem, on the other hand, this phenomenon can not be used to demonstrate neuronal damage even at the shortest postmortem intervals.     

骨形成蛋白4在大鼠中枢神经系统发育过程中的表达

目的 研究骨形成蛋白4(BMP4)基因在大鼠中枢神经系统(CNS)发育过程中的表达。方法 地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术。结果 在E16大鼠，BMP4主要在小脑与嗅球呈强阳性表达。在P1—2大鼠，BMP4 mRNA在延脑的舌下神经核呈强阳性信号，在三叉神经脊束核、脊髓小脑束可见部分BMP4 mRNA阳性细胞。在P1周大鼠，额叶皮层、枕叶皮层与海马的前下托可见较强的阳性信号。生后1个月，海马与皮层BMP4的表达达到生后的峰值。此时BMP4在颞叶皮层与杏仁周皮质呈强阳性表达。生后3个月，BMP4在大鼠CNS有广泛表达，其中在海马、颞叶皮层、杏仁周皮质、丘脑侧核与下丘脑的室旁核均可见强阳性信号，而生后18个月大鼠的皮质、海马、丘脑、下丘脑仍可见一定数目的阳性神经元。结论 提示BMP4对新生期和成年期大鼠CNS的发育起重要作用。