迟发性神经元损伤的实验研究——沙土鼠脑组织水和离子含量的变化

本文以结扎沙土鼠双侧项总动脉5min,然后使血流再通的方法制作迟发性神经元损伤动物模型。用原子吸收分光光度法测定了沙土鼠脑6个分区水和离子含量在脑缺血及缺血后重灌流1～96h的经时变化。实验结果表明,至重灌流24h,海马CA_1区组织钙浓度开始明显增高;随后在48h,水和钠含量亦增多;到96h,钾含量才出现显著性降低。除CA_1区外其它部位的脑组织中则没有上述变化。从本实验可以得出结论,即钙的过负荷加速了迟发性神经元损伤现象的产生。     

沙土鼠脑缺血后海马CA_1区的电镜研究

用20只沙土鼠,雌雄各半,在中断双侧颈动脉血流20分钟,养活1周及1月。其中有8只的脑缺血后海马CA_1区在光镜下观察未见明显的缺血性改变。进一步取背侧及腹侧海马的CA_1区作透射电镜观察,发现CA_1区锥体细胞质内粗面内质网大量增多,高尔基复合体增多,线粒体固缩以及脂褐素增加。此外,还观察了胶质细胞及毛细血管的变化。     

MAPK家族在沙土鼠前脑缺血再灌注期间海马神经元表达的动态变化

目的:探讨MAPK家族三成员在脑缺血再灌注期间其于海马不同亚区神经元的表达及活性变化。方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组(SH)、3min缺血组(IA)及5min缺血组(IS);各组根据再灌注15 min、2 h、4 h、6 h、1 d、3 d、5 d及7 d又分8个亚组(n=8)。在预定时间点行免疫组化法测定海马各亚区MAPK蛋白及其磷酸化水平。结果:三组海马三区ERK、JNK及p38三种蛋白的总体水平在缺血后再灌注期间未发生改变。IS组磷酸化ERK(p-ERK)在缺血后CA3/DG区颗粒细胞及神经元树突上表达,而在CA1区几无表达;磷酸化JNK(p-JNK)在缺血后再灌注7 d内CA3区神经元均有少量表达,在CA1区表达量多并有二次表达高峰(2 h和1 d);磷酸化p-38(p-p38)缺血后再灌注期间的表达区域与p-JNK相似,有一次表达高峰(2 h)。IA组三激酶磷酸化水平均较IS组明显减少(P<0.05),表达规律相同。结论:脑缺血再灌注可导致MAPK三成员在海马各亚区差异性表达,此特征可能与MAPK的作用相关。     

沙土鼠脑缺血再灌流损伤的实验研究

采用阻断沙土鼠双侧颈总动脉60min,继之再灌流120min的实验模型,检测了皮层脑电图(EEG),大脑皮层水、电解质、前列腺素及超微结构等变化。结果表明,脑缺血再灌流后EEG严重抑制;脑组织水、钠、钙含量增加;血栓素(TXB_2)增加;前列环素(6-Keto-PGF_(1α))减少;缺血神经元的超微结构损伤进一步加重。提示沙土鼠脑缺血再灌流后脑组织损伤加重。对上述变化发生的可能机制进行了讨论。     

脑缺血—复灌沙土鼠海马HSP70基因的表达变化

目的 研究沙土鼠海马ＨＳＰ７０基因在缺血－复灌过程中的表达变化，以及不同缺血程度对该基因诱导表达的影响。方法 以蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎（ＢＣＡＯ）建立全脑缺血复灌模型，用人的ＨＳＰ ７０基因探针，通过斑点杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析观察沙土鼠海马ＨＳＰ ７０ｍＲＮＡ水平。     

沙土鼠脑海马CA1区突触结构的衰老性变化

用电镜技术和体视学方法研究老年沙土鼠脑海马ＣＡ１区锥体细胞层和腔隙分子层神经毯内突触结构的变化，并与青年组相比较．结果显示：老年组较青年组锥体细胞层突触数减少２０．９４％，腔隙分子层减少１２．３２％；老年组腔隙分子层突触数密度为（０．５６８±０．０７４）／μｍ２，青年组为（０．６６３±０．０７５）／μｍ２；老年组锥体细胞层不清晰突触占该区突触总数的２６．３９％，青年组占２３．９３％．结果表明衰老时海马ＣＡ１区突触数目减少，不清晰突触代偿性增多，从而补偿了丢失突触的功能．     

小剂量3-硝基丙酸预处理对脑缺血沙土鼠海马CA1区及纹状体神经元的影响

目的 :探讨小剂量 3 硝基丙酸 (3 nitropropionicacid ,3 NPA)预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受的可行性。方法 :将 5组沙土鼠腹腔分别注射双蒸水 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、2 0mg/kg 3 NPA ,于注射 3 NPA后 3d ,透射电镜观察纹状体神经元细胞核和细胞器超微结构形态的变化 ;每组均分别于注射后 1d ,2d ,3d ,4d阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型 ,恢复血流期满时处死动物 ,通过CresylViolet染色观察海马锥体细胞层存活神经元数目结果 :应用不同剂量 3 NPA后 3d ,纹状体神经元细胞核均无明显变化 ,腹腔注射 15mg/kg及 2 0mg/kg 3 NPA组线粒体和粗面内质网轻度肿胀。应用不同剂量 3 NPA 1～ 3d后 ,前脑缺血沙土鼠海马CA1区锥体细胞层存活神经元数目均高于双蒸水对照组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,第 4d则下降 ,与双蒸水对照组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :应用小剂量 3 NPA诱导脑缺血耐受较安全 ,具有时间依赖性 ,无剂量依赖性     

EFFECT OF VASOPRESSIN ON DELAYED NEURONAL DAMAGE IN HIPPOCAMPUS FOLLOWING CEREBRAL ISCHEMIA AND REPERFUSION IN GERBILS

Mongolian gerbils were used as delayed neuronal damage (DND) animal models.At the end of 15 minute cerebral ischermia and at various reperfusion time ranging from 1 to 96 hours,the content of water and arginine vasopressin (AVP) in the CA1 sector of hippocampus were measured by the specific gravity method and radioimmunoassy.Furthermore,we also examined the effect of intracerebroventricular (ICV) injection of AVP,AVP antiserum on calcium,Na^ ,K^ -ATP ase activity in the CA1 sector after ischemia and 96 hour reperfusion.The results showed that AVP Contents of CA1 sector of hippocampus during 6 to 96 hour recirculation,and the water content of CA1 sector during 24 to 96 hour were significantly and continuously increased.After ICV injection of AVP,the water content and calcium in CA1 sector of hippocampus at cerebral ischemia and 96 hour recirculation further increased,and the Na^ ,K^ -AT-tion of AVP antiserum,the water contenr and calcium in CA1 sector were significantly decreased as compared with that of control.These suggested that AVP was involved in the pathopysiologic process of DND in hippocampus following cerbral ischemia and reprfusion.Its mechanism might be through the change of intracellular action mediated by specific AVP receptor to lead to Ca inos over-load of neuron and inhibit the Na^ ,K^ -ATPase activity,thereby to exacerbate the DND in hippocampus.     

小鼠脑缺血再灌后海马组织SDH、CCO活力的动态变化

目的:观察高脂血症小鼠脑缺血再灌注后海马组织琥珀酸脱氢酶(Succinodenhydrogenase, SDH)、细胞色素氧化酶(Cytochrome C oxidase, CCO)活力的动态变化.方法:在造成小鼠高脂血症基础上, 制备脑缺血再灌注模型.采用差速离心法提取脑海马组织线粒体,用生化法测定SDH、CCO活力.结果:模型组小鼠海马组织SDH活力在术后第1、7、15、30天均显著低于正常对照组(P＜0.01),且随着时间的延长,酶活力一直处于低水平.CCO活力与SDH活力的变化趋势相同.结论:SDH、CCO活力降低导致的能量代谢障碍是脑缺血再灌注引起神经元损伤的机制之一.     

实验性脑缺血再灌后迟发性神经元死亡表现为细胞凋亡

目的：探讨脑缺血再灌后迟发性神经元死亡与细胞凋亡的关系。方法：采用脑缺血再灌损伤模型,观察缺血再灌后不同时期神经细胞损伤情况,免疫组化法分别检测缺血再灌后不同时期B的Bcl-2和Bax蛋白的表达,结果：沙鼠脑缺血再灌3d后,缺血神经细胞出现细胞凋亡改变（P＜0．001;缺血再灌后6h及1d出现Bcl-2蛋白表达增加（P＜0．01）,而Bax蛋白则在再灌后6h至第7天呈现持续强阳性表达（P＜0．001）;结论：沙鼠短暂脑缺血再灌后,迟发性神经元残废表现为细胞凋亡,而Bax蛋白的高比率表达可能是导致细胞凋亡的重要因素之一。     

氯胺酮对脑缺血大鼠突触体ATP酶活力的影响

目的 研究氯妥酮（ＫＴ）对大鼠脑缺血ＡＴＰ酶活性变化的影响。方法 采用大鼠四动脉阻断脑缺血模型，缺血１０ｍｉｎ后测量纹状体和海马突触体Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ和Ｃａ＾２＋－＝ＡＴＰ酶活性。结果 脑缺血时两个脑区的ＡＴＰ酶活性均显著下降。缺血的前预先应用ＫＴ２５ｍｇ．ｋｇ＾－１和５０ｍｇ．ｋｇ可拮抗脑缺血时ＡＴＰ酶活性的下降。结论 ＫＴ可通过拮抗脑缺血时ＡＴＰ酶活性的下降对抗脑缺血损伤。     

乳酸在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用

本实验测定了短暂性脑缺血后不同再灌时间乳酸含量的变化,结果发现在短暂性脑缺血时乳酸含量显著增加(P<0.01);再灌流30分钟后乳酸恢复到对照水平(P>0.05);而再灌流48小时后海马乳酸量又再次升高(P<0.01)。本实验结果揭示乳酸在短暂性脑缺血后海马迟发性神经元坏死(DND)发生中起着重要作用。     

兴奋性氨基酸在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用

本实验首先通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10分钟再灌流7天,造成海马DND模型,以计数海马CA_1区神经元密度作为指标,观察谷氨酸钠和氯胺酮对海马DND的影响;用氨基酸自动分析技术测定脑缺血10分钟时背侧海马氨基酸含量。结果示谷氨酸钠加重海马DND损伤;氯胺酮对海马DND有明显保护作用;短暂性脑缺血10分钟时兴奋性氨基酸含量升高。此结果均直接或间接说明兴奋性氨基酸在海马DND发生机制中起着重要作用。     

硫酸镁对兔全脑缺血后海马氨基酸影响的实验研究

目的 :探讨硫酸镁对兔全脑缺血后海马氨基酸含量的影响。方法 :15只兔 ,随机分为 3组 :对照组 (n=5 )、缺血组 (n =5 )和镁处理组 (n =5 )。阻断兔 4血管 6分钟 ,诱导全脑缺血。用高效液相色谱法测定各组缺血再灌注 30分钟兔海马谷氨酸、天冬氨酸、γ -氨基丁酸和甘氨酸含量。结果 :镁处理组海马天冬氨酸和甘氨酸显著低于缺血组 (P <0 .0 1) ,γ -氨基丁酸显著高于缺血组 (P <0 .0 5 )。结论 :硫酸镁处理可使兔全脑缺血再灌注 30分钟海马天冬氨酸和甘氨酸的浓度下降以及γ -氨基丁酸的浓度相应增高 ,故硫酸镁对脑缺血具有神经保护作用     

大鼠海马微血管构筑的衰老变化

目的:观察并定量分析大鼠海马微血管构筑的衰老变化.方法:采用单宁酸-氯化铁媒染微血管的方法分别观察青龄大鼠和老龄大鼠海马的微血管构筑,并采用MiVnt图像分析系统对海马的微血管密度(MVD)及微血管面积密度(MVA)进行定量分析.结果:老龄大鼠海马的微血管分布杂乱、扭曲缠结;老龄大鼠海马的MVD值和MVA值均明显低于青龄大鼠(P<0.01).结论:老龄大鼠海马的微血管明显减少,这是老年血管性痴呆发生机制的主要形态学依据.