特异性ILK-siRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭和迁移的影响

目的设计合成有效的ILK-siRNA,并检测其对EJ细胞侵袭和迁移的影响。方法构建针对ILK基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体pGenSil-1 siRNA1、pGensil-1 siRNA2和1个阴性对照载体pGenSil-1 siRNA3。稳定转染膀胱癌EJ细胞后,通过RT-PCR检测EJ细胞中ILK mRNA水平的表达,并通过Western blot和细胞免疫荧光检测ILK蛋白水平的表达;观察EJ细胞形态变化;检测EJ细胞迁移、黏附和侵袭能力及基质金属蛋白酶的变化。结果重组质粒构建成功。干扰组细胞ILK mRNA及蛋白的表达分别较3个对照组(未转染组、转空质粒组和转阴性对照质粒组)比较,呈显著性下降(P<0.05);HE染色结果显示,细胞铺展良好,核质比减小;转染干扰质粒的2个实验组细胞的黏附能力相对于对照组分别增加87%和76%,黏附能力显著升高,迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05);与3个对照组比较,转染pGenSil-1 siRNA1与pGensil-1 siRNA2质粒到EJ细胞后,MMP-2及MMP-9的表达水平明显降低(P<0.05)。结论成功构建的干扰质粒能抑制ILK基因及蛋白水平的表达,显著抑制细胞的生长、侵袭及迁移能力。     

应用表达载体介导siRNA抑制胰腺癌skp2基因表达的研究

目的探讨表达载体介导小干扰RNA(siRNA)对人胰腺癌细胞系Capan-2skp2基因表达的抑制作用。方法构建靶向SKP2的siRNA质粒表达载体,采用LipofectamineTM2000转染Capan-2细胞,实时定量PCR和Western blot观察Capan-2细胞转染后SKP2mRNA和蛋白表达的改变。结果PCR和DNA测序证实SKP2siRNA表达载体构建成功,分别转染Capan-2细胞后,skp2基因的mRNA和蛋白表达量与对照组相比均明显下降(P<0.05)。结论所构建的靶向SKP2的siRNA质粒表达载体可以有效地阻断Capan-2细胞SKP2的mRNA和蛋白表达,为下一步以SKP2为靶点的胰腺癌的基因治疗实验研究奠定基础。     

乙酰肝素酶基因siRNA表达载体的构建及其沉寂作用

目的:构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用。方法:设计HPSE靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pRNATU6.1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人恶性黑素瘤细胞A375,采用半定量PCR测定HPSE基因RNA水平变化,Western blot检测HPSE蛋白表达的变化。结果:将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pRNATU6.1载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染A375细胞后,半定量PCR和Western blot检测显示,HPSE基因和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制HPSE的表达。     

COL1A1-shRNA表达载体的构建及对胃癌细胞增殖迁移的影响

目的:构建COL1A1特异小干扰RNA(siRNA)表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响.方法:根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA(short hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencerTM 4.1- CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株.通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化.结果:序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体.实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低(P<0.05).结论:COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移.     

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的机制

目的利用RNA干扰技术探讨DNA-PKcs基因沉默影响肝癌细胞BEl7402/5-FU耐药性的机制。方法将靶向DNA-PKcs的干扰质粒shDNA-PKcs转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU,利用实时荧光定量PCR及Western blot法检测转染干扰质粒后DNA-PKcs基因的沉默效率;Western blot检测Artemis、磷酸化Artemis蛋白水平的表达。结果实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示转染shDNA-PKcs后,DNA-PKcs mRNA及蛋白水平表达均下调（P〈0.05）;Western blot检测结果显示shDNA-PKcs转染组Artemis蛋白表达水平与对照组相比均有所降低（P〈0.05）,磷酸化Artemis蛋白表达水平在转染前后无明显变化（P〉0.05）。结论 ShDNA-PKs干扰质粒能抑制Bel-7402/5FU细胞中DNAPKcs、Artemis蛋白的表达、但对P-Artemis的表达无影响。     

RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响.方法:根据RegIα cDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致.将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株.通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化.结果:成功构建RegIα cDNA的全序列表达质粒.RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIα mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05).结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力.     

锌α2糖蛋白真核表达载体的构建和体外表达鉴定

目的 构建小鼠锌α2糖蛋白(mZAG)真核表达载体,在体外培养细胞中鉴定其mRNA和蛋白水平表达.方法 提取小鼠肝组织总RNA,采用RT-PCR法扩增mZAG全基因表达序列,酶切法将mZAG cDNA全序列插入表达质粒载体pcDNA3.1(-)中构建pcDNA3.1(-)-mZAG真核表达质粒.采用阳离子脂质体转染法将不同浓度mZAG表达质粒(0、0.4、0.8、1.6ug)pcDNA3.1(-)-mZAG和4对mZAG小干扰RNA(siRNA)序列转染到3T3-Ll前脂肪细胞中,实时荧光定量RT-PCR测定mZAG mRNA表达水平,Western blot检测mZAG蛋白表达情况.结果 测序鉴定证实成功构建mZAG真核表达质粒pcDNA3.1(-)-mZAG.实时荧光定量RT-PCR检测结果显示,0.4、0.8、1.6μg mZAG转染组3T3-Ll细胞中的mZAGmRNA表达水平分别是0μg mZAG转染组的2.58(P=0.002)、3.67(P=0.000)、5.19倍(P=0.001);mZAG-siRNA1组和mZAG-siRNA4组小鼠3T3-L1细胞中的mZAG mRNA表达水平显著减少,分别是不转染mZAG siRNA干扰序列对照组的49%(P=0.002)和41%(P=0.000).Western blot检测结果显示,0.8μg mZAG质粒转染组的体外mZAG蛋白表达水平是不转染mZAG质粒对照组的2.75倍(P=0.017);mZAG-siRNA1和mZAG-siRNA4干扰序列转染组的体外mZAG蛋白表达水平仅为对照组的55%(P=0.004)和62%(P=0.025).结论 成功构建mZAG真核表达载体,该载体能够在体外细胞中良好表达.筛选出能够显著抑制mZAG表达的siRNA1和siRNA4,为今后进一步深入研究ZAG提供了有用工具.     

肺腺癌细胞A549 hnRNP B1基因RNA干扰的体外研究

目的 体外研究特异的小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌细胞A549 hnRNP B1 基因表达及生长的抑制作用. 方法设计和构建由H1启动子驱动产生的特异的hnRNP B1 siRNA 表达质粒,转染至A549细胞,荧光定量PCR法及Western blot检测hnRNP B1基因的表达,MTT法检测该表达质粒转染后对A549细胞生长的影响.结果 针对hnRNP B1 基因构建的重组质粒具有明显的干扰效果,受特异hnRNP B1 siRNA 干扰的A549细胞hnRNP B1 mRNA及蛋白表达下调,细胞生长受到抑制.结论 应用RNA干扰技术可阻止hnRNP B1基因的表达,有望成为肿瘤基因治疗新的研究方向.     

TRIM21调控人结直肠癌细胞增殖分子机制研究

目的:探讨TRIM21通过正调控转化生长因子-β1(TGF-β1)-Smad2/3信号通路影响人结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:在人结直肠癌细胞HCT116中转染TRIM21 siRNA沉默TRIM21的表达,采用荧光定量PCR和Western blot检测转染效果;采用MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h和96 h时的细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1的表达;采用Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况;荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad2和Smad3在mRNA水平上的表达,Western blot检测TGF-β1、Smad2/3在蛋白水平上的表达及Smad2/3的磷酸化,验证TRIM21 siRNA转染后对TGF-β1—Smad2/3通路的影响。结果:TRIM21 siRNA转染组HCT116细胞中的TRIM21表达量明显下降(P<0.01),转染后24 h、48 h、72 h和96 h的细胞活力显著高于阴性对照组(P<0.05),Cyclin D1表达量上调(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染后的凋亡细胞比例显著下降(P<0.01)。TRIM21 siRNA转染组TGF-β1的表达降低(P<0.01),Smad2和Smad3的表达量基本不变(P>0.05),但Smad2/3的磷酸化水平显著下降(P<0.01)。结论:干扰TRIM21的表达促进人结直肠癌细胞HCT116细胞增殖、抑制凋亡,其作用机制可能与影响TGF-β1—Smad2/3信号通路的激活和CyclinD1表达有关。     

靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建

目的：利用pSUPER载体构建针对人核因子E2 p45相关因子2（Nrf2）基因的RNA干扰真核表达载体，为研究Nrf2基因在结肠癌化学预防中的作用奠定实验基础。方法：设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列，构建重组载体pSUPER Nrf2转染人结肠癌HT 29细胞。同时转染pEGFP N1质粒，通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光监测转染效率，共转染pEGFP N1 48h后G418筛选稳定表达的细胞。RT PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞Nrf2基因的表达，观察稳定筛选出的细胞中UGT1A基因mRNA水平的表达变化。结果：成功构建RNA干扰真核表达载体pSUPER Nrf2。转染后24～96?h，荧光显微镜及FCM检测显示转染效率为30％～75％。瞬时转染pSUPER Nrf2 A2，pSUPER Nrf2 B2重组质粒Nrf2 mRNA的表达差异无显著性（P>0.05）；瞬时转染72?h及稳定转染后，pSUPER Nrf2 A1，pSUPER Nrf2 B1可显著抑制Nrf2基因的表达。RT PCR检测显示，稳定筛选出的细胞中UGT1A表达水平降低（P<0.05）。结论：成功构建了Nrf2的RNA干扰表达载体，筛选并获得低表达Nrf2基因的稳定克隆，筛选出的细胞UGT1A表达水平明显降低，表明Nrf2可能对UGT1A酶的表达具有调节作用。     

OPN干预子宫内膜异位症腺上皮细胞中NF-κBp65表达及其对细胞侵袭性的影响

目的：探讨子宫内膜异位症（EMS）患者在位内膜腺上皮细胞中骨桥蛋白（OPN）对核因子κB（NF-κB）p65表达的影响及其与细胞侵袭的关系。方法原代分离培养12例EMS患者在位内膜原代腺上皮细胞。采用OPN siRNA干扰细胞24 h后收集,Western blot、RT-PCR方法分别检测干预前、后细胞中OPN、NF-κBp65蛋白及其mRNA表达情况;Transwell试验检测干预前、后细胞侵袭性的变化。采用相同剂量的无RNA酶水干预EMS患者在位内膜腺上皮细胞作为未干预组。结果与干预前比较,OPN siRNA干扰后细胞中OPN蛋白、mRNA的表达明显下降（t1＝7.92,t2＝9.87,P＜0.05）;与未干预组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;OPN siRNA干扰后细胞中NF-κBp65蛋白及mRNA的表达明显减弱（t1＝—2.13,t2＝— 8 .61,P＜0.05）,与未干预组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。OPN siRNA干扰后原代腺上皮细胞的侵袭性明显降低（t＝2.38,P＜0.05）,与未干预组比较差异无统计学意义（ P＞0.05）。O PN、N F-κBp65在 EM S患者在位内膜腺上皮细胞中的表达呈明显的正相关（ r＝0.87）。结论 OPN siRNA沉默EMS患者腺上皮细胞中的OPN后OPN、NF-κBp65的表达及细胞的侵袭性均明显降低,且二者呈明显正相关,揭示二者极有可能在异位细胞的侵袭中发挥同步协调作用。     

载体介导的RNA干扰技术对甲状腺癌细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制作用

目的应用载体介导的RNA干扰(RNA i)技术特异性地抑制甲状腺癌细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达。方法构建利用U6启动子转录功能性小干扰RNA(siRNA)的质粒载体,对阳性克隆进行酶切和测序鉴定后,转染人甲状腺癌FRO细胞,利用RT-PCR和W eston blot法检测hTERT基因的表达情况。结果构建的表达质粒转染FRO细胞后,hTERT基因mRNA和蛋白质的表达水平明显降低,抑制率分别为76%和81%。结论siRNA的表达质粒能成功抑制甲状腺癌细胞hTERT基因的表达,为RNA i技术应用于甲状腺癌的基因治疗提供了实验基础。     

Peroxiredoxin2基因RNAi慢病毒载体构建及对SW480细胞增殖的影响

目的：构建Peroxiredoxin2（PRDX2）基因RNA干扰（RNAinterference,RNAi）慢病毒表达载体,探讨PRDX2基因干扰后对结直肠癌SW480细胞增殖的影响。方法设计、合成靶向PRDX2的RNA干扰的序列,构建pGC‐EGFP‐shPRDX2慢病毒载体并进行鉴定,同时应用qRT‐PCR和Westernblot方法观察转染的SW480结肠癌细胞PRDX2mRNA和蛋白表达的抑制效果,并通过MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖变化。结果成功构建PRDX2基因慢病毒载体并经测序证实;pGC‐EGFP‐shPRDX2可有效抑制结直肠癌SW480细胞PRDX2的表达,感染慢病毒的SW480细胞中PRDX2mRNA和蛋白表达水平明显降低（P＜0．05）;SW480细胞经PRDX2RNA干扰后其生长和增殖能力显著降低（P＜0．05）。结论PRDX2基因RNAi慢病毒表达载体在SW480细胞中表达稳定可靠,PRDX2基因干扰后有效抑制了结直肠癌SW480细胞的增殖和生长,为进一步探讨PRDX2在结直肠癌发生、发展及转移中的作用奠定基础。     

利用纳米和RNA干扰技术抑制HBV-DNA 在HepG2 2.2.15细胞中的复制和表达

目的：通过RNA干扰和纳米技术抑制HBV-DNA在体外的复制和HBV核心抗原的表达。方法：制备靶向HBV核心抗原（HBcAg）的纳米小干扰RNA（siRNA）,利用U6启动子质粒转染入HepG2 2.2.15细胞;RT-PCR和Western印迹检测转染细胞HBV核心抗原在mRNA和蛋白水平的表达情况;real-time PCR 检测上清液HBV-DNA,放射免疫法检测细胞HBV表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）、核心抗原（HBcAg）。结果：成功构建了含磁性纳米的siRNA质粒;多种方法检测均显示转染后的细胞HBV核心抗原表达明显下降;其表面抗原、e抗原和HBV-DNA值均较对照组降低。结论：RNA干扰联合纳米技术可明显下调HBV核心抗原的表达,抑制HBV-DNA复制。     

脂联素在人肾小球微血管内皮细胞中的表达与调节

目的 探讨人肾小球微血管内皮细胞(HRGEC)是否合成脂联素,及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对HRGEC合成脂联素的影响.方法 用免疫组织化学染色检测脂联素在人肾组织表达;分别用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测体外培养的原代HRGEC对脂联素mRNA及蛋白的表达,并对PCR产物进行DNA测序鉴定.用TNF-α刺激HRGEC,分别用实时荧光定量PCR和时间分辨荧光法检测HRGEC脂联素mRNA及蛋白表达变化.结果 (1)免疫组织化学染色显示人肾小球毛细血管壁脂联素染色强阳性.(2)RT-PCR检测发现原代培养的HRGEC表达脂联素mRNA;PCR产物经DNA测序与基因库中的脂联素DNA序列完全一致;蛋白质印迹检测证实HRGEC培养上清中含有脂联素蛋白.(3)不同浓度TNF-α刺激HRGEC 24 h,与未刺激组比较,实时荧光定量PCR显示.250 IU/ml和500 IU/ml组的脂联素mRNA表达量显著上调(P<0.05和P<0.01);时间分辨荧光检测显示,250 IU/ml和500 IU/ml组的脂联素蛋白含量显著增加(P<0.05和P<0.01).(4)500 U/ml浓度TNF-α刺激HRGEC 6、12、24和48 h,与未刺激组比较,6、12和24 h组的脂联索mRNA表达均显著上调(P<0.05,P<0.05和P<0.01);24 h和48 h组的脂联素蛋白含量显著增加(P<0.01).结论 HRGEC能合成脂联素,TNF-α可上调HRGEC的脂联素mRNA和蛋白表达.     

HOXB7基因对卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭的影响

目的研究人类同源异型盒基因HOXB7小分子干扰RNA（siRNA）对卵巢透明细胞癌ES-2细胞侵袭的影响。方法采用半定量RT-PCR,Western blot印迹方法分别检测卵巢透明细胞癌细胞株ES-2,卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3的HOXB7基因mRNA及蛋白质表达水平。将ES-2细胞分为3组：空白组、阴性对照组（转染阴性质粒pRNAT-neg）、HOXB7 siRNA组（转染干扰质粒pRNAT-hoxb7）。荧光显微镜观察转染效率、RT-PCR、Western blot检测干扰效应。Transwell小室检测3组细胞侵袭、运动能力的变化;明胶酶谱实验检测3组细胞上清中基质金属蛋白酶活性;Western blot检测细胞内基质金属蛋白酶-2（MMP-2）变化。结果RT- PCR、Western blot结果显示：HOXB7在卵巢癌SKOV3,ES-2细胞中均阳性表达。转染质粒pRNAT-hoxb7到ES-2细胞后,HOXB7基因的表达受到高效且特异的抑制（P〈0．01）;细胞侵袭力及趋向运动能力均下降。明胶酶谱、Western blot结果显示HOXB7干扰后,ES-2细胞MMP-2表达下降。结论HOXB7 siRNA可有效抑制卵巢透明细胞癌ES-2细胞HOXB7基因的表达与MMP-2表达,同时可抑制其迁移、侵袭能力,提示HOXB7可能在卵巢癌转移中发挥作用。     

RNA干扰抑制Survivin表达对人喉癌细胞药物敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin基因表达对增强人喉癌HEP-2细胞化疗药物敏感性。方法:针对Survivin mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Survivin重组表达载体,转染人喉癌HEP-2细胞;通过RT-PCR和Western blot分析其对HEP-2细胞内源性Survivin表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察HEP-2细胞对化疗药物5-FU和优福定敏感性的改变。结果:成功构建pRNAT-Survivin重组质粒,并成功转染HEP-2细胞;RT-PCR和Western blot结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Survivin基因表达(P<0.01);MTT及流式细胞仪结果证明在5-FU和优福定联合作用下,pRNAT-Survivin组HEP-2细胞的生长抑制率明显增高(P<0.01)。结论:pRNAT-Survivin可抑制Survivin在人喉癌HEP-2细胞中的表达,并增强HEP-2细胞对化疗药物敏感性。     

RNA干扰抑制血管平滑肌细胞MT1-MMP基因表达的实验研究

目的 探讨膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)shRNA真核表达载体(pGenesil-1-MT1-MMP)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)MT1-MMP基因mRNA表达及蛋白表达的影响.方法 构建质粒表达载体pGenesil-1-MT1-MMP和pGenesil-1-HK;实验分为3组:空白对照组,阴性对照组(加入pGenesil-1-HK),RNA干扰(RNAi)组(加入pGenesil-1-MT1-MMP).用脂质体瞬时转染VSMC,48 h后通过荧光显微镜观察转染效果,流式细胞仪检测转染效率.于转染后72 h采用RT-PCR方法检测MT1-MMP mRNA表达水平,用Western blot方法检测MT1-MMP蛋白质表达水平.结果 瞬时转染VSMC 48 h后通过流式细胞仪检测转染效率高达85.5%,转染pGenesil-1-MT1-MMP质粒72 h后,RNAi组MT1-MMP mRNA及蛋白质水平明显下调(P<0.05).结论 靶向MT1-MMP的短发夹RNA质粒能够高效地转染入VSMC,并能有效下调MT1-MMP基因mRNA和蛋白的表达.     

沉默FMOD对H322细胞的增殖和迁移的影响及其作用机制探讨

  目的  研究纤调蛋白(fibromodulin,FMOD)对非小细胞肺癌H322细胞增殖、黏附和迁移的影响,并探讨其作用机制。  方法  H322细胞随机分为对照组、小干扰RNA(siRNA) 沉默FMOD（FMOD siRNA）组和对照siRNA（Con siRNA）组。FMOD siRNA和Con siRNA转染H322细胞,CCK-8法检测各组细胞的细胞活性,荧光素双醋酸酯（FDA）荧光染色检测细胞的黏附能力,Transwell法检测细胞的迁移能力;Real time-PCR法检测Con siRNA组和FMOD siRNA组细胞中Cyclin D1、细胞间黏附分子-1（ICAM-1)、钙黏附蛋白-E（E-cadherin）、FMOD、转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2、Smad3、Smad4及Smad7的mRNA表达,蛋白印迹法检测细胞中Cyclin D1、ICAM-1、E-cadherin、FMOD、TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad4及Smad7的蛋白表达。  结果  与Con siRNA组相比,FMOD siRNA组细胞的细胞活性降低,细胞黏附及迁移能力减弱,差异均有统计学意义（P<0.01）,对照组和Con siRNA组差异无统计学意义。Real time-PCR和蛋白印迹法检测结果显示:与Con siRNA组相比,FMOD siRNA组细胞Cyclin D1、ICAM-1、TGF-β1、Smad2、Smad3及Smad4的mRNA和蛋白表达水平降低,E-cadherin及Smad7的mRNA和蛋白表达水平升高。  结论  沉默FMOD基因,可抑制H322细胞的增殖、黏附和迁移,其作用可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路实现。