SPA-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原的研究

目的 探讨SPAK-ELISA检测卡氏肺孢子虫抗原对诊断卡氏肺孢子虫肺炎的价值。 方法 采用SPA-ELISA检测免疫抑制大鼠模型在不同时期肺泡灌洗液(BALF)和血清中肺孢子虫(PC)抗原,以及造血干细胞移植并发肺炎患者痰液和血清抗原,并与病原学检查结果比较。 结果 感染大鼠于用药后第4周,BALF中PC抗原,以及肺组织印片和BALF涂片包囊检查开始出现阳性,但前者阳性率(60％)高于后者(20％和40％),而且全部阳性达到的时间(8周)也早于后者(10周)。第10周有2只鼠血清抗原阳性,但此后又转阴。30例肺炎患者痰液抗原阳性8例,阳性率为26.67％,8例抗原阳性患者中只有3例发现包囊,符合率为37.5％。血清抗原检测全部阴性。 结论 SPA-ELISA检测痰液和肺泡灌洗液抗原比病原学检查敏感性高,而检测血清抗原不适用于诊断卡氏肺孢子虫肺炎。     

PCR对卡氏肺孢子虫肺炎早期诊断的实用性研究

作者将PCR用于临床病人及实验动物的卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)诊断、早期诊断价值、并与以往的PCP诊断方法进行敏感性及特异性的比较研究。 卡氏肺孢子虫(PC)取自感染大鼠与小鼠。以包括PCP在内的44例呼吸道疾病病人的痰液及支气管肺泡灌洗液(BALF)为检测材料。检测对象为:确诊的10例PCP患者,8例疑似的PCP患者,26例其他肺部疾患者(送检材料为痰液者15例,BALF者7     

卡氏肺孢子虫感染的免疫诊断研究

目的：探讨肺泡灌洗液、血清抗原及血清抗体检测诊断卡氏肺孢子虫感染的价值。方法：利用免疫抑制大鼠模型及双夹心ELISA法检测不同时期感染大鼠肺泡灌洗液和血清中肺孢子虫抗原，用IFA法检测血清中的肺孢子虫IgG抗体，并与病原学检查结果进行比较。结果：感染大鼠肺泡灌洗液的抗原检测于免疫抑制6－8wk后均呈阳性，而对照组大鼠均呈阴性；大多数感染大鼠血清抗原检测为阴性；正常大鼠血清中有低滴度肺孢子虫IgG抗体，感染大鼠抗体滴度轻度升高或不升高，但中止免疫抑制后血清抗体滴度明显升高，而肺泡灌洗液中抗原逐渐阴转。结论：肺泡灌洗液抗原检测可用于肺孢子虫感染的诊断，但血清中很难检出这种抗原；血清IgG抗体的上升并不表示为现症感染.     

蒿甲醚用于卡氏肺孢子虫肺炎大鼠的治疗及其对IL-6影响的研究

目的 从病理学和细胞因子角度探讨蒿甲醚对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎（Pneumocystiscarinii Pneumonia POP）的治疗效果和作用机理。方法 给SD大鼠皮下注射地塞米松磷酸钠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型，治疗组给予蒿甲醚治疗。ELISA双抗夹心法分别检测血清和支气管肺泡灌洗液中1L-6水平。结果 与感染对照组比较，蒿甲醚治疗组症状显著改善、肺印片中卡氏肺孢子虫包囊数目显著减少、肺组织炎症明显减轻、血清和肺泡灌洗液中IL-6水平明显下降。结论 蒿甲醚具有一定抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎作用，能够降低PCP大鼠IL-6。     

卡氏肺孢子虫感染的免疫诊断研究

目的：探讨肺泡灌洗液、血清抗原及血清抗体检测诊断卡氏肺孢子虫感染的价值。方法：利用免疫抑制大鼠模型及双夹心ＥＬＩＳＡ法检测不同时期感染大鼠肺泡灌洗液和血清中肺孢子虫抗原，用ＩＦＡ法检测血清中的肺孢子虫ＩｇＧ抗体，并与病原学检查结果进行比较。结果：感染大鼠肺泡灌洗液的抗原检测于免疫抑制６－８ｗｋ后均呈阳性，而对照组大鼠均呈阴性；大多数感染大鼠血清抗原检测为阴性；正常大鼠血清中有低滴度肺孢子虫ＩｇＧ抗体，感染大鼠抗体滴度轻度升高或不升高，但中止免疫抑制后血清抗体滴度明显升高，而肺泡灌洗液中抗原逐渐阴转。结论：肺泡灌洗液抗原检测可用于肺孢子虫感染的诊断，但血清中很难检出这种抗原；血清ＩｇＧ抗体的上升并不表示为现症感染。     

PCR-ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA的研究

目的　建立卡氏肺孢子虫 (P.c )DNA的聚合酶链反应-酶联免疫吸附测定(PCR-ELISA)方法 ,并探讨其应用价值。　方法　实验组患卡氏肺孢子虫肺炎的SD大鼠和Wistar大鼠各 2 8只 ,采用PCR法扩增大鼠肺组织DNA和支气管肺泡灌洗液 (BALF)DNA ,用PCR ELISA检测其扩增产物。 2 8只患病大鼠分别制作肺组织印片及BALF涂片 ,姬姆萨 (Giemsa)染色镜检 10 0个视野中有无P .c包囊 (或滋养体 ) ,与PCR ELISA检测扩增产物结果比较。　结果　两种方法检测大鼠肺组织DNA阳性率及BALFDNA阳性率 ,结果相同 ,均分别为 96.4% (27/28)和100% (28/28)。Giemsa染色镜检P.c包囊 (或滋养体 ) ,结果为阳性的大鼠 ,PCR ELISA检测扩增产物结果也均为阳性。阴性对照组 ,两种大鼠的肺组织和BALF各10份标本 ,均有1只大鼠阳性。　结论　PCR ELISA检测大鼠卡氏肺孢子虫DNA ,敏感性较高 ,特异性较好 ,操作简便 ,具有实用价值。     

大鼠实验性卡氏肺孢子虫肺炎中IL-2,IL-6的变化

目的 建立大鼠实验性卡氏肺孢子虫肺炎的模型,观察血清和肺泡灌洗液中IL-2和IL-6的变化.方法 给SD大鼠皮下注射地塞米松磷酸钠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型,酶免法检测支气管肺泡灌洗液中IL-2和IL-6含量及血清中IL-6含量;放免法检测血清中IL-2含量.结果 感染组大鼠血清和肺泡灌洗液中IL-2和IL-6含量均显著高于正常对照组.结论 卡氏肺孢子虫肺炎大鼠血清和肺泡灌洗液中IL-2和IL-6升高.     

用漱口液PCR法无创伤性诊断卡氏肺孢子虫性肺炎

除了艾滋病患者外,血液病或骨髓移植患者也好发卡氏肺孢子虫性肺炎(PCP)。PCP的诊断通常需要患者支气管肺泡灌洗 液或吸痰液,而支气管肺泡的灌洗比较困难,吸痰液的诊断敏感性差别较大。 对HIV-1阳性合并卡氏肺孢子虫性肺炎的患者,曾用标准PCR法检测到漱口液中的卡氏肺孢子虫的DNA,敏感性为78％。本文作者检测了26名血液病和有呼吸道症状     

PCR技术对大鼠卡氏肺孢子虫DNA的检测

目的　探讨诊断卡氏肺孢子虫感染的最佳方法。方法　建立大鼠动物模型,肺涂片用吉氏染色法查肺孢子虫包囊,支气管灌洗液、肺组织和血液标本,用ＰＣＲ技术进行卡氏肺孢子虫ＤＮＡ的检测,共计实验组大鼠１２ 只及对照组８ 只。结果　实验组大鼠,吉氏染色法卡氏肺孢子虫包囊检出率为６６－７％ ,ＰＣＲ技术支气管灌洗液、肺组织和血液标本,卡氏肺孢子虫ＤＮＡ检出率分别为８１－８ ％ 、５０％ 和５０％ 。比肺印片提前２ 周检出。对照组大鼠,吉氏染色法未检出卡氏肺孢子虫包囊,在支气管灌洗液和血液标本中,ＰＣＲ技术测出了卡氏肺孢子虫ＤＮＡ。结论　在血液标本中ＰＣＲ的成功应用,为卡氏肺孢子虫感染的流行病学调查及人类卡氏肺孢子虫肺炎的诊断,提供了一种有用的、非创伤性的方法。     

用液化剂二硫苏糖醇处理痰液进行卡氏肺孢子虫病的诊断

作者采用二硫苏糖醇(Sputasol)处理卡氏肺孢子虫肺炎的痰液、支气管引流液和气管肺泡洗净液及患者死后的肺部组织,用Gomori's Methenamine Silver(GMS)染色,用光镜和电镜来观察卡氏肺孢子虫的包囊。     

艾滋病合并耶氏肺孢子虫(菌)肺炎的实验室诊断

采用吉氏染色法检查艾滋病患者有耶氏肺孢子虫(菌)肺炎临床表现者痰液和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的耶氏肺孢子虫(菌)。抽取部分留痰患者(500例)血液,检测CD4+淋巴细胞。结果显示,痰液标本耶氏肺孢子虫(菌)的阳性率(46.8%,845/1 806)显著低于BALF标本(55.8%,106/190)(P<0.05)。耶氏肺孢子虫(菌)阳性患者有临床症状的比例(96.6%,816/845)显著高于阴性者(64.0%,615/961)(P<0.05)。患者血液中CD4+淋巴细胞数量越少,耶氏肺孢子虫(菌)阳性率越高,CD4+细胞数量>200×106/L组、200×106/L～100×106/L组和<100×106/L组的耶氏肺孢子虫(菌)阳性率分别为12.0%(6/50)、39.0%(39/100)和54.6%(191/350)(P<0.05)。吉氏染色法是较好的检查耶氏肺孢子虫(菌)的方法,简单易行,容易推广,但需积累经验。     

卡氏肺孢子虫感染大鼠血清中酶学变化及意义

目的探讨卡氏肺孢子虫(PC)感染大鼠血清中酶学变化的意义。方法应用地塞米松诱导建立卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠模型(PCP组),于造模前(0周)及造模后3、6、9、12周断尾取血,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;于12周后采集肺泡灌洗液(BALF)检测ALT、AST、ALP、LDH水平。结果PCP组血清ALP、AST水平从造模第3周以后显著高于正常对照组(P<0.05),ALT及LDH水平无明显规律性变化。结论ALP、AST可作为PCP感染的辅助诊断指标。     

PCR检测大鼠卡氏肺孢子虫的研究

目的探讨PCR技术检测大鼠卡氏肺孢子虫的应用价值。方法SD大鼠和Wistar大鼠均随机分成实验组和对照组,实验组每周两次皮下注射醋酸可的松,诱导产生卡氏肺孢子虫;8week后,收集肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),用PCR技术检测卡氏肺孢子虫DNA,并与Giemsa染色法比较。结果实验组两种大鼠肺组织卡氏肺孢子虫DNA阳性率分别为9643%和100%,BALF阳性率亦分别为9643%和100%,它们之间均无显著性差异(P>005);BALF的PCR阳性检出率显著高于Giemsa病原染色法,肺组织的两种方法检出率无显著性差异。结论PCR是一种检出率较高的方法,可作为早期诊断PCP的常规方法,特别适用于BALF检测卡氏肺孢子虫DNA。     

卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究

目的 研究卡氏肺孢子虫包囊抗原的纯化方法。方法 肌肉注射地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎，瑞姬氏染液复合染色法获肺组织中的肺孢子虫包囊，用改进的胶原酶消化法，Percoll不连续密度梯度离心分离，超声粉碎纯化卡氏肺孢子虫包囊抗原。结果 采用浓度为0．05％胶原酶消化2次，30min/次，在1.030g/ml密度层可获得相对纯净与而而完整的卡氏肺孢子虫包囊抗原。结论 本研究可提价蒿纯度卡氏肺孢子虫抗原，为进一步建立对卡氏肺孢子虫肺炎的有效诊断方法具有十分重要的意义。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的比较研究

目的　比较用SpragueDawley(SD)大鼠和Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)模型的差异。 方法　选用SD大鼠和Wistar大鼠 ,随机分为实验组和对照组 ,免疫抑制诱导建立动物模型 ;收集肺组织和支气管肺泡灌洗液 (BALF) ,分别制成肺印片和BALF涂片 ,作Giemsa染色 ,镜检卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。结果　共收集实验组SD大鼠和Wistar大鼠的肺组织及BALF标本各 2 8份 ,经Giemsa染色后 ,在肺印片中查见Pneumocystiscarinii(Pc)虫体的阳性率分别为 89.2 9%和10 0 % ,两者之间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;BALF阳性率分别为 6 0 .71%和 78.5 7% ,两者之间亦无显著性差异 (P >0 .0 5 )。而同种大鼠的肺印片与BALF涂片 ,其阳性率之间有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,且肺印片的检出率均显著高于BALF涂片。同种大鼠不同肺叶的肺印片 ,其阳性率之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　SD大鼠与Wistar大鼠作为PCP模型动物无明显差别     

对单克隆抗体诊断卡氏肺孢子虫肺炎的展望

卡氏肺孢子虫是获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的重要致病原,估计1986年在美国将会增加1万例卡氏肺孢子虫肺炎患者。目前诊断该病是用特殊染色法检出肺孢子虫。作者研究了用单克隆抗体间接免疫荧光法(IFA)检测肺孢子虫,并对此进行了评价。研究对象为1985年12月至1986年2月在临床中心接受支气管镜检查的所有AIDS患者,这些患者都作了支气管肺泡灌洗(BAL),灌洗液被用作IFA和微生物学检查。以甲苯胺蓝染色结果作为判定有无该虫的标准。此外,对取自AIDS患者的两份肺活检标本和两份尸检标本的印片也作了IFA检查。取卡氏肺孢子虫包囊免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP_2-O细胞融合,用IFA筛选出分泌抗卡氏肺孢于虫抗体的杂交瘤细胞2G2。灌洗液经离心沉淀后制成涂片。试验标     

99例AIDS患者痰液卡氏肺孢子虫PCR检测结果分析

目的 采用巢式PCR检测对AIDS患者痰液标本进行卡氏肺孢子虫检测,为AIDS患者合并卡氏肺孢子虫肺炎的临床诊断提供参考价值.方法 将我院感染科2008年1月至10月收治的具有呼吸道症状的99例AIDS患者痰液标本进行收集,将痰标本进行镜检,巢式PCR扩增卡氏肺孢子虫基因,并且对99例患者进行临床诊断和实验室诊断.结果 99例AIDS患者中,临床诊断卡氏肺孢子虫仅2例;油镜下观察到卡氏肺孢子虫4例;PCR痰阳性共43例,取其中4例成功扩增出耶氏肺孢子菌基因.结论 采用巢式PCR对AIDS患者痰液标本进行检测,可以早期诊断卡氏肺孢子虫,减少卡氏肺孢子虫肺炎患者的漏诊率.     

聚合酶链反应方法检测诱导排痰标本对卡氏肺孢子虫肺炎的诊断价值

目的 评价聚合酶链反应方法检测诱导排痰标本中卡氏肺孢子虫DNA对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）的诊断意义。方法 分别用姬姆萨和六胺银（GMS）两种染色方法和mt-rRNA-PCR方法检测痰液中的卡氏肺孢子虫。结果 化学染色法检测16例临床拟诊PCP的患者痰标本。结果 8例阳性,20例非PCP患者痰标本均为阴性,化学染色方法的敏感性和特异性分别为50％和100％。PCR方法检测16例临床拟诊PCP患者痰液中卡氏肺孢子虫,14例阳性,20例非PCP患者痰标本均为阴性,mt-rRNA-PCR方法的敏感性和特异性分别为88％和100％。结论 姬姆萨和GMS两种细胞化学染色方法联合检测痰标本卡氏肺孢子虫,特异性高,但敏感性偏低。mt-rRNA-PCR检测痰标本中卡氏肺孢子虫DNA方法敏感性高于化学染色法且特异性高,更适于临床应用。     

卡氏肺孢子虫包囊抗原纯化方法的研究

目的　研究卡氏肺孢子虫包囊抗原的纯化方法。　方法　肌肉注射地塞米松诱发大鼠卡氏肺孢子虫肺炎 ,瑞 -姬氏染液复合染色法检获肺组织中的肺孢子虫包囊 ,用改进的胶原酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心分离、超声粉碎纯化卡氏肺孢子虫包囊抗原。　结果　采用浓度为 0 .0 5 %胶原酶消化 2次 ,30 min/次 ,在 1.0 30 g/ ml密度层可获得相对纯净而完整的卡氏肺孢子虫包囊抗原。　结论　本研究可提供高纯度卡氏肺孢子虫抗原 ,为进一步建立对卡氏肺孢子虫肺炎的有效诊断方法具有十分重要的意义。     

肺孢子虫病实验与临床研究 Ⅱ．免疫印迹试验检测人血清肺孢子虫抗体

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析鼠源卡氏肺孢子虫包囊可溶性抗原呈现２０条以上多肽区带，主带分子量分别为＞１００、８５－９４、６７、５２和３４ｋＤａ。ＥＩＴＢ检测表明重庆地区健康人血清中存在识别１１０、１０５、８５、６７、５２和４６ｋＤａ的ＩｇＧ型抗体，抗体阳性率为５６．７％（５９／１０４）。其中８５ｋＤａ抗原能与抗人源肺孢子虫单克隆抗体２Ｇ２起反应。健康人血清抗８５ｋＤａ抗原的抗体阳性率为３７．５％（３９／１０４），但ＩｇＭ型抗体均为阴性。另外检测７例确诊的卡氏肺孢子虫病患者，４例血清ＩｇＧ型抗体阳性，其中３例抗８５ｋＤａＩｇＧ型抗体阳性。