绞谷蓝皂苷含药血清对谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究绞股蓝皂苷（gypenosides,GP)含药血清对谷氨酸(glutamic acid ,Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法采用中药血清药理学方法，收集GP含药血清，以体外培养的胎鼠大脑皮层神经元为研究对象，采用倒置相差显微镜观察细胞形态；MTT法测定细胞存活率；Ho33342/PI荧光双染法鉴定细胞死亡方式；生化法检测细胞内超氧化物歧化酶（Super Oxide Dismutase，SOD）活性和谷胱甘肽（L-Glutathione，GSH）含量；流式细胞仪测细胞内游离Ca²⁺变化，综合评价GP含药血清对谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用。结果谷氨酸可导致神经细胞发生凋亡和坏死；GP含药血清能明显拮抗谷氨酸的细胞损伤作用，提高细胞的存活率，维持细胞内较高GSH含量和SOD活性，抑制细胞内游离Ca²⁺浓度的升高。结论GP含药血清能明显拮抗Glu诱导的氧化性神经毒性，以400mg· kg^-1·d^-1GP灌胃含药血清作用最显著。     

羟基红花黄色素Ａ抗谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对谷氨酸(Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法以体外原代培养Wistar胎鼠大脑皮层神经元为实验材料，进行形态学观察，采用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst33342/PI双荧光探针染色、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量检测、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及免疫细胞化学法检测细胞色素C（CytC）荧光强度，综合评价HSYA对Glu氧化性神经损伤的保护作用。结果与Glu损伤组相比，HSYA能显著提高细胞相对存活率，维持细胞内较高SOD和GSH水平，降低Glu引起的细胞凋亡率及线粒体内CytC向胞质的释放，以160μg/mL浓度的 HSYA保护效果最为显著。结论HSYA对Glu氧化性神经损伤有显著的保护作用，其机制与抗氧化、抑制细胞凋亡有关。     

吡格列酮对脂多糖引起的体外培养大脑皮层神经元NO释放的影响

目的探讨吡格列酮（pioglitazon，Pio）能抑制脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）引起的培养大脑皮层神经元一氧化氮释放增加，并探讨其抑制作用信号转导机制。方法以体外培养6—7d的乳鼠大脑皮层神经元为研究对象，建立脂多糖损伤和吡格列酮保护模型。采用Griess法测定细胞培养上清液中NO含量。结果脂多糖可导致神经细胞损伤，培养液中NO含量升高；吡格列酮（1umol／L）可明显抑制脂多糖引起的NO含量的升高。结论吡格列酮可明显拮抗脂多糖诱导的神经细胞损伤。     

人参蛋白对β淀粉样蛋白1-40和H2O2损伤神经元的保护作用及其机制

目的：探讨人参蛋白(GP)对β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）和过氧化氢（H2O2）诱导神经元损伤的影响,阐明GP对神经元的保护作用及其机制。方法：从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,培养12 d后,分别采用Aβ1-40（30 μmol•L-1）和H2O2 （200 μmol•L-1）诱导神经元损伤,并随机分为模型组（Aβ1-40模型组与H2O2模型组,不加药物）、GP组和GP含药血清组。采用MTT法检测各组神经元存活率;试剂盒法检测细胞培养上清液中一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮（NO）水平;Hoechst 33342/PI荧光染色检测细胞凋亡与坏死率。结果：倒置荧光显微镜,Aβ1-40和H2O2处理后,神经元数量明显减少,轴突缩短或消失,
胞体变圆、缩小,大小不等,核固缩,核染色质聚集;Heochst 33342染色呈现高蓝光;部分细胞PI染色呈现高红光。加入GP及其含药血清后,神经元数量增多,胞体增大,细胞核着色形态为圆形、淡蓝色,PI阳性细胞数量减少。MTT法,GP组细胞存活率明显高于模型组（P<0.05或P<0.01）,GP含药血清组与模型组无显著差异（5％GP含药血清组除外,P>0.05）;试剂盒法,GP组细胞培养上清液中NOS活性与NO水平明显低于模型组（P<0.05　或P<0.01）
;Hoechst 33342/PI法,GP及其含药血清组细胞凋亡率低于模型组,以GP组差异更明显（P<0.05或P<0.01）,GP及其含药血清组细胞坏死率与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：GP具有神经保护作用,作用机制与减少NOS活性、降低NO水平、抑制神经元凋亡有关。
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绞股蓝皂甙抗谷氨酸诱导的氧化性神经毒性

目的：探讨绞股蓝皂甙(gypenoside，GP)对谷氨酸(glutamate，Glu)介导的氧化性神经毒性的拮抗作用。方法：体外培养胎鼠大脑皮层神经细胞，建立Glu氧化性损伤模型，用MTT法测定细胞活力，透射电镜观察Glu所致的神经细胞死亡方式，流式细胞术分析细胞凋亡率。结果：GP以时间依赖性方式明显拮抗谷氨酸介导的氧化性神经毒性，于Glu损伤前达到最佳保护效果，Glu氧化性毒性导致神经细胞发生凋亡兼具坏死特征的死亡，Glu损伤组细胞凋亡率(21．63％)明显高于正常对照组(0．09％)及GP保护组(8．94％)。结论：GP可明显拮抗Glu介导的氧化性神经毒性。     

羟基红花黄色素A抗心肌细胞缺氧复氧损伤的线粒体相关机制

目的：探讨羟基红花黄色素A（hydroxysafflor yellow A,HSYA）能否通过阻止线粒体通透性转换孔的开放从而保护心肌缺氧复氧损伤以及一氧化氮（NO）在线粒体机制中的作用。方法：采用酶解法分离大鼠心肌细胞模型,台盼蓝拒染法测定心肌细胞存活率;荧光染料四甲基罗丹明乙酯测定线粒体膜电位,分离线粒体测定其通透性转换孔开放程度。结果：HSYA（0.1 mmol/L）预处理5 min可明显提高缺氧复氧心肌细胞的存活率,对抗缺氧复氧引起的线粒体膜电位的去极化。在分离心肌线粒体模型上,HSYA（0.1 mmol/L,5 min）显著减弱CaCl2诱导的线粒体肿胀。一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯减弱了HSYA对缺氧复氧心肌细胞、线粒体肿胀和对线粒体膜去极化的保护作用。结论：HSYA预处理具有抗缺氧复氧损伤的作用,这种保护作用可能与其抑制线粒体通透性转换孔的开放有关。NO机制参与了HSYA的抗缺氧复氧损伤的保护作用。     

刺五加多糖对氧化应激损伤的海马神经元iNOSmRNA表达的影响

目的研究刺五加多糖（Acanthopanacis senticosi polysaccharides，ASPS）对氧化应激损伤的海马神经元iNOSmRNA表达的影响，并探讨其可能机制。方法运用海马神经细胞原代培养技术，采用H2O2诱导建立细胞氧化损伤模型。观察细胞形态学变化MTT法测定细胞活性；化学比色法检测细胞匀浆液中一氧化氮（NO）的含量；RT-PCR法检测iNOSmRNA的表达。结果形态学观察显示：与模型组比较，ASPS组细胞损伤程度明显减轻，NO的含量和iNOSmRNA的表达显著降低，ASPS组细胞活性（0．46）比模型组细胞活性（0．36）高（P〈0．01）。结论ASPS能够下调iNOSmRNA的表达，并对海马神经元氧化损伤有保护作用。     

PI3K/Akt信号转导通路在绞股蓝皂苷拮抗谷氨酸诱导胎鼠大脑皮层神经元氧化性损伤中的作用

目的应用磷脂酰肌醇3位羟基激酶(PI3K)的特异性阻断剂LY294002,研究PI3K/Akt信号转导通路在绞股蓝皂苷(GPs)拮抗谷氨酸(Glu)诱导胎鼠大脑皮层神经元氧化性损伤中的作用。方法以体外原代培养的14～15d胎鼠大脑皮层神经元为研究对象,用相差显微镜进行形态学观察,MTT法检测神经元存活率,流式细胞仪检测神经元凋亡率,Western blot法检测磷酸化Akt和总Akt的表达,分析PI3K/Akt信号转导通路在GPs拮抗Glu诱导神经元氧化性损伤中的作用。结果 GPs可抑制Glu诱导的胎鼠大脑皮层神经元氧化性损伤,使神经元存活率上升,凋亡率降低,磷酸化Akt表达增加,PI3K的特异性抑制剂LY294002明显抑制了GPs对神经元的保护作用。结论绞股蓝皂苷激活了PI3K/Akt信号转导通路,拮抗谷氨酸诱导的胎鼠大脑皮层神经元氧化性损伤。     

隐丹参酮对谷氨酸诱导的皮层神经元凋亡的保护作用

目的:观察隐丹参酮(Cryptotanshinone,CTN)对谷氨酸(Glutamate,Glu)损伤体外原代培养大鼠皮层神经细胞的保护作用并探讨可能的机制.方法:体外培养大鼠大脑皮层神经细胞,建立Glu损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率,DCFH-DA染色法检测细胞氧自由基水平,Hoechst荧光染色检测细胞凋亡...     

培养大鼠皮层神经元创伤性损伤后NADPH—d组化反应研究

目的：研究创伤性损后大脑皮层细胞NADPH-d组化反应变化情况。探讨继发性脑损伤的某些机制。方法：用机械划痕法创伤性损伤混合培养10d的大鼠大脑皮层神经细胞，采用NADPH-d组化染色和NSE免疫组化染色法观察神经元和胶质细胞中的一氧化氮（NO）产生情况。结果：正常培养皮层神经元中有少量NADPH-d阳性反应神经元，创伤性损伤后阳性反应神经元数量增加；胶质细胞中有NADPH-d阳性反应，在创伤性损伤混合培养皮层神经元创道周围，NADPH-d阳性反庆明显强于其它部位。结论：创伤可致神经元和胶质细胞过量产生和释放NO并在继发性脑损伤中可能具有重要意义。     

吡咯喹啉醌对谷氨酸损伤大鼠海马神经元Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察吡咯喹啉醌(PQQ)对谷氨酸损伤海马神经元存活和Bcl-2、Bax表达的影响。方法:原代培养胚鼠海马神经元,谷氨酸损伤15min后加入不同浓度的PQQ(50、100、200μmol/L)孵育24小时,采用MTT法检测细胞活性;Western blot法检测Bcl-2、Bax的表达。结果:不同浓度PQQ均可明显改善谷氨酸损伤后细胞的活力,增加Bcl-2/Bax的比值,且随浓度增加比值增高。结论:PQQ对谷氨酸损伤的海马神经元具有一定保护作用。     

CBD和尼莫地平对培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 研究一种神经营养物质CBD和尼莫地平（Nimodipine,Nim）联合应用对培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用。方法 分别采用谷氨酸化学或机械划痕创伤性损伤培养大鼠皮层神经元,根据培养细胞台盼蓝活力计数和培养上清乳酸脱氢酶（LDH）检测评估损伤程度。结果 CBD和Nim单独应用时,对谷氨酸和创伤介导的培养皮层神经元损伤有中等程度的保护作用,与单独损伤未加保护性药物组相比较有显著性差异（P<0.01）。CBD和Nim联合会用时,保护作用比单独应用明显增强（P<0.01）。结论 CBD和Nim联合应用有明显的协同作用。     

抗精神病药奥氮平的神经保护作用

目的：探讨抗精神病药物奥氮平对谷氨酸损伤的海马神经元存活率、乳酸脱氢酶（LDH）的释放及凋亡和坏死的影响。方法：采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制谷氨酸损伤模型,实验分为正常对照、谷氨酸损伤和奥氮平给药组,在体外通过MTT法检测奥氮平对神经元存活率的影响,分光光度法测定LDH的释放情况,流式细胞术（FCM）测定奥氮平应用前后神经元凋亡和坏死的改变情况。结果：谷氨酸的兴奋性神经毒性使神经元存活率降低,约为正常的50% (P<0.05);与谷氨酸损伤组比较,奥氮平浓度为200和500 μmol•L^-1时其存活率升高 (P<0.05),100 μmol•L^-1时明显升高 (P<0.01)。谷氨酸损伤组LDH的释放急剧升高,是正常组的7.4倍;奥氮平组与谷氨酸损伤组比较,LDH释放减少（P<0.05或P<0.01）。谷氨酸损伤组与正常对照组比较,细胞凋亡率增加 ( P<0.01 );而奥氮平作用后凋亡细胞百分数显著低于谷氨酸损伤组。谷氨酸的神经毒性使体外培养的神经元坏死细胞比例升高 ( P<0.05 );而奥氮平组与谷氨酸损伤组比较,坏死细胞比例降低（P<0.05或P<0.01）。 结论：奥氮平能够抵抗谷氨酸诱导的神经元损伤,提高神经元存活 率,减少LDH的释放,维持细胞膜的完整性,减少神经元的凋亡和坏死,具有神经保护作用 。     

慢性VNS对点燃大鼠大脑皮质及海马神经元兴奋性的影响

目的：探讨迷神经刺激（VNS）抗癫痫作用的细胞机制。方法：用戊四氮（PTZ）行大鼠腹空注射点燃制作癫痫模型,行迷走神经刺激抗癫痫,应用荧光分光光度法测定不同浓度谷氨酸（Glu）对正常、PTZ点燃及VNS治疗动物大脑皮质及海马神经元胞内游离钙升高的影响,同时观察VNS对动物癫痫行为的影响。结果：VNS组动物胞内游离钙浓度较PTZ点燃组明显降低,并对外源性Glu的升谪胞内游离钙有明显抑制作用,行为观察显示VNS能明显抑制癫痫发作的严重程度,延长癫痫的发作的潜伏期。结论：VNS能明显抑制大鼠PTZ的点燃效应,降低Glu对神经元胞内游离钙的升高作用。VNS可能通过调节神经元兴奋性／抑制性受体的活性来发挥抗癫痫作用。     

脑溢安含药血清对谷氨酸致培养大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的 :研究中药复方脑溢安对培养大鼠皮层神经元谷氨酸兴奋毒损伤的保护作用 ,为脑溢安用于治疗中风提供实验依据。方法 :建立谷氨酸致离体培养的大鼠皮层神经元兴奋毒损伤模型 ,用中药脑溢安浸膏粉含药血清进行干预 ,检测各组细胞培养液中的乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果 :脑溢安浸膏粉含药血清能显著地对抗培养皮层神经元的谷氨酸兴奋毒损伤 ,培养液中LDH活性明显降低 (P <0 .0 1)。实验过程中 ,含药血清加入量 5 %至 2 0 %均可。致神经元损伤的谷氨酸浓度以 1mmol·L- 1 以下为宜。结论 :脑溢安含药血清对谷氨酸致培养皮层神经元损伤具有明显保护作用     

纳洛酮对离体人脑神经元缺氧损伤谷氨酸释放的影响

目的建立原代培养人脑神经元缺氧模型,探讨纳洛酮对神经元缺氧损伤中谷氨酸释放的影响.方法应用无血清原代培养人胚胎大脑神经细胞,经神经微丝染色证实可获得富含神经元的混合培养细胞.将神经元细胞随机分为对照组、缺氧组和给药组(纳洛酮终浓度分别为0.25、5、10 μg/ml).对照组为正常培养,缺氧组和给药组细胞进行缺氧结合无糖处理(氧糖剥夺)l h并继续复氧培养24h.于复氧24 h后观察细胞形态学变化,测定细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)浓度,应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)观察细胞存活率,应用高效液相色谱法测定细胞外液谷氨酸浓度.结果缺氧组细胞外液LDH、谷氨酸浓度显著高于对照组(P＜0.01),MTT法测得光密度(OD)值则显著低于对照组(P＜0.01);应用纳洛酮后,随药物浓度增加,各组细胞外液谷氨酸浓度与缺氧组比较呈现逐渐降低趋势(P＜0.05,P＜0.01),MTT法测得OD值呈现逐渐升高趋势(P＜0.01),至纳洛酮10μg/ml时恢复至对照组水平(P＞0.05).结论纳洛酮可以减少缺氧神经元的谷氨酸释放,减轻兴奋性神经毒性,对神经元缺氧损伤具有保护作用.     

银杏内酯B对谷氨酸诱导大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的影响

【目的】探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对谷氨酸(glutamate)引起原代培养的脑皮质神经元氧化损伤的保护作用。【方法】采用改良的方法原代培养胎鼠脑皮质神经元,用噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶法分别检测神经元的存活率和损伤情况;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化的程度;并同时检测了细胞内抗氧化酶的活性。【结果】银杏内酯B(10～100μmol/L)能剂量依赖性地抑制谷氨酸(0.8 mmol/L)引起的细胞存活率下降和细胞损伤,同时提高细胞内抗氧化酶活性和减轻细胞脂质过氧化。【结论】银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能提高神经细胞内抗氧化酶活性和清除氧自由基有关。