β-淀粉样蛋白对培养神经细胞的毒性作用及神经节苷脂的保护作用

向培养液中加入15mmol／L的β-AP1-40，48h后，发现原代培养的海马细胞内Ca2+的浓度明显增高，对照组为23．9±3．6（n=51）而β-AP组为36．5±15．8（n=30），两组比较P＜0．001，有非常显著性的差别。对照组的乳酸脱氢酶没有明显变化，而β－AP组在加β－AP1－4048h后乳酸脱氢酶明显增加，从52iu／L增加到105iu／L，实增加了101％。实验结果表明，β－AP1-40对培养的神经细胞有明显的毒性作用，但没有发现形态学的变化和对细胞的特异性。如在培养液中加β－AP1-40的同时再加25mg／ml的神经节苷脂（GAs）可明显减弱β-AP1-40引发的胞内Ca2+浓度和培养液中LDH浓度的升高。β-AP＋GAs组胞内Ca2+浓度为27.7±5.58，与β-AP组比较，有显著性差异（P＜0．01）。β-AP组海马细胞培养液中乳酸脱氢酶的浓度增高为101％，而β-AP-GAs组培养液中乳酸脱氢酶的浓度增高仅为67％。在NG108－15细胞上也获得了相同的结果。单唾液酸神经节苷脂虽有与GAs类似的作用，但较弱。这些实验结果指出，神经节苷脂和单唾液酸神经节苷脂均能拮抗β-AP1-40的毒性作用，从而对细胞可起到保护作用。     

β-淀粉样肽对人SH-SY5Y神经细胞膜性脂质和胆碱能受体的影响

目的研究β-淀粉样肽对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞膜性脂质和胆碱能受体的影响及其意义。方法选择不同浓度B一淀粉样肽。处理SH—SY5Y细胞,用比色法测定细胞四甲基偶氮唑盐（MTT）还原率、脂质过氧化产物（丙二醛）、蛋白氧化产物（蛋白羰基）及磷脂含量,高效液相色谱法测定细胞胆固醇及辅酶Q水平,放射性配体一受体结合实验测定胆碱能受体．配体结合率,Western印迹方法测定细胞膜神经型尼古丁受体亚单位α3及α7蛋白表达水平,并对照研究维生素E的抗氧化作用。结果用低浓度（0．1μmol／L）β-淀粉样肽处理细胞后即出现MTT还原率和磷脂水平的下降,丙二醛及蛋白羰基水平升高,用较高浓度（1μmol／L）β-淀粉样肽处理细胞后胆碱能受体．配体结合密度、尼古丁受体亚单位α3,胡蛋白水平及辅酶Q含量降低,但未引起细胞胆固醇含量的改变。维生素E能明显对抗B-淀粉样肽的细胞毒性作用。结论β-淀粉样肽引起细胞膜脂质成分改变以及胆碱能受体水平降低,这些改变可能与其诱导的氧化应激增强有关。     

二苯乙烯苷对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质多巴胺转运体的影响

目的:研究2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-gluco-side,TSG)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)表达的影响。方法:将1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)注入小鼠腹腔制作PD模型,然后采用爬杆实验和悬挂实验检测小鼠的行为学变化,免疫荧光组织化学法观察黑质DAT阳性神经元数目。结果:行为学检测结果表明:模型组小鼠较正常对照组爬杆时间延长,悬挂能力下降(P<0.01),而TSG干预后可有效缩短小鼠的爬杆时间,并提高其悬挂能力(P<0.05,P<0.01)。免疫荧光结果显示:模型组小鼠黑质DAT阳性神经元的数目明显少于正常对照组(P<0.01),而TSG干预后,小鼠DAT阳性神经元数目的减少降低(P<0.05,P<0.01)。结论:TSG可改善PD小鼠的行为学、提高黑质DAT阳性神经元的存活数目,表明TSG对黑质多巴胺能神经元有一定的保护作用。     

雷公藤内酯醇对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白后星形胶质细胞及胆碱能纤维的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(TP)对大鼠大脑皮质内注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后星形胶质细胞及胆碱能纤维的影响.方法:采用GFAP免疫组织化学方法、AChE组织化学方法检测各组大鼠大脑皮质星形胶质细胞和胆碱能纤维的表达.结果:Aβ组大鼠大脑皮质GFAP阳性星形胶质细胞数量、平均面积和平均光密度明显高于对照组,用药组大鼠大脑皮质GFAP阳性星形胶质细胞数量、平均面积和平均光密度较Aβ组明显减少;Aβ组大鼠大脑皮质胆碱能纤维密度明显低于对照组,用药组大鼠大脑皮质胆碱能纤维密度较Aβ组明显升高.结论:TP能抑制Aβ诱导的星形胶质细胞的活化,减轻Aβ所致的胆碱能纤维损害.     

氨基胍对去卵巢大鼠大脑皮质、海马晚期糖化终末产物及β-淀粉样肽含量的影响

老年性痴呆(Alzheimer’sdisease,AD)在女性的患病率为男性的1．5～3倍,提示雌激素缺乏在女性AD发生发展中具有重要意义。AD的发病学说较多,其中晚期糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)在老年性痴呆发病中的作用倍受国内外学者关注。AGEs生成路径复杂,主要与糖代谢紊乱、氧化反应、自由基的发生有关…。绝经后由于     

石菖蒲不同提取部位对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的影响

目的:探讨石菖蒲不同提取部位灌服对β淀粉样蛋白致学习记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力和Aβ沉积的影响。方法:雄性NIH小鼠分为AD模型组、生理盐水模型组和正常对照组。AD模型组又分为生理盐水灌胃组、水提液灌胃组、去油水煎液灌胃组和挥发油灌胃组。共6组,每组6只。AD模型组小鼠双侧海马CA1区内注射Aβ1-42(2μg/μl,2μl/侧)。模型制备后,进行第1次水迷宫测试,检测并比较各组小鼠的学习记忆能力。然后,每天1次的石菖蒲不同提取部位分别进行灌胃(0.2 g石菖蒲/10 g体重),连续3周,以生理盐水灌胃组为对照。灌胃结束后,进行第2次水迷宫测试,免疫组织化学检测Aβ在小鼠海马的沉积情况。结果:第1次水迷宫检测显示,与生理盐水模型组和正常对照组模型小鼠比较,AD模型组逃避潜伏期明显延长,差异具有显著性(P<0.05)。第2次水迷宫检测表明,与生理盐水灌胃组相比,石菖蒲灌胃三组模型小鼠其逃避潜伏期均明显缩短(P<0.05)。其中挥发油灌胃组逃避潜伏期最短,但与其它两组相比差异无显著性(P>0.05)。免疫组化染色结果显示,AD模型小鼠灌服后Aβ沉积明显减少(P<0.01)。但石菖蒲不同部位灌服组与生理盐水灌服组Aβ沉积相比,差异无显著性(P>0.05);石菖蒲三组之间比较,差异也无显著性(P>0.05)。结论:石菖蒲水溶性部位与挥发油部位一样含有改善学习记忆功能的药效成分,应引起研究者的重视;但这种改善功效是否与减少Aβ沉积有关,尚待进一步研究。     

Aβ(1-40)及192-IgG-saporin联合作用对大鼠学习记忆以及海马区锥体细胞和胆碱能纤维的影响

目的探讨Aβ(1-40)及192-IgG-saporin联合应用对大鼠学习记忆及海马区锥体细胞及胆碱能纤维的影响。方法采用Aβ(1-40)和192-IgG-saporin侧脑室内注射方法建造老年性痴呆(AD)动物模型。2周后,Y迷宫检测大鼠学习记忆能力并观察海马区形态学变化。结果Y迷宫结果显示联合组,Aβ(1-40)组及192-IgG-saporin组学习记忆能力与正常组均有下降(P<0.05)。刚果红染色阳性结果证明Aβ(1-40)以及联合组海马区内有类老年斑样物质沉积.尼氏染色表明,与正常组和192-IgG-saporin组相比Aβ(1-40)以及联合组,海马区锥体细胞数量均出现减少(P<0.05)。免疫组织化学显示,与正常组以及Aβ(1-40)比较,192-IgG-saporin以及联合组胆碱能纤维数量均出现明显减少(P<0.01)。结论 Aβ(1-40)及192-IgG-saporin联合应用制造的AD模型能够更全面的模拟AD病理特征,是较理想的模型。     

慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽的影响

目的 研究慢性脑血流低灌注对大鼠脑内β-淀粉样肽(Aβ)及淀粉样前体蛋白(APP)表达和分布的影响. 方法双侧颈总动脉结扎大鼠制作慢性脑血流低灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40、Aβ1-42的表达与分布;刚果红染色检测血管的淀粉样变;放射免疫分析法检测手术后10d、30d、90d和180d大鼠脑皮质及海马的Aβ含量;免疫印迹法检测大脑皮质和海马的APP含量. 结果 免疫组织化学染色显示低灌注90d模型组海马CA1区APP、Aβ1-40的表达较对照组明显增加(两者均P<0.05),低灌注180d模型组皮质和海马CA1区APP、Aβ1-40和Aβ1-42的表达均增加(除皮质Aβ1-40P<0.01外,其余均P<0.05);Aβ1-40阳性反应产物均匀分布于胞质内,Aβ1-42阳性反应产物在神经元胞质内呈颗粒状聚集.刚果红染色显示,术后180d脑实质内小血管发生淀粉样改变.放射免疫分析法和免疫印迹法结果显示,大鼠术后90d海马Aβ和APP含量开始增高(两者均P<0.05),180d皮质Aβ和APP的含量增高(Aβ P<0.05,APP P<0.01). 结论 慢性脑血流低灌注可引发大鼠脑内Aβ含量的升高,可能在阿尔茨海默病(AD)早期发病过程中有重要意义.     

二苯乙烯苷对大鼠癫(癎)引发的学习记忆功能的影响及保护作用

目的:研究二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbene glucoside,TSG)对癫(癎)大鼠脑损伤的保护作用及可能机制.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TSG干预组,应用立体定向脑室内微量注射的方法建立海人藻酸(KA)诱导的大鼠癫(癎)模型.5d后通过Morris水迷宫实验测定大鼠学习记忆功能;取脑行Nissl染色观察大鼠海马神经元的形态及数目改变.结果:与假手术组相比,模型组大鼠学习记忆能力明显降低,海马CA1区神经元大量丢失,结构紊乱.而TSG干预组可使癫(癎)引发的学习记忆能力降低的情况得到改善,抑制海马CA1区神经元的丢失,改善神经元结构.结论:TSG对癫(痫)引发的脑损伤,尤其是对海马区神经元迟发性凋亡具有明显的改善作用.     

普兰林肽对5×FAD小鼠和WT小鼠认知行为及脑和视网膜β淀粉样蛋白6E10、炎症因子和神经细胞形态的影响

目的 探讨普兰林肽对5×FAD小鼠和WT小鼠认知行为及脑和视网膜的β淀粉样蛋白(Aβ)6E10、炎症因子和神经细胞形态的影响。方法 实验选取5×FAD小鼠32只、WT小鼠16只,均为雌性。随机将5×FAD小鼠分为空白组、治疗组;WT组不进行任何处理;空白组腹腔注射PBS溶液;治疗组每天腹腔注射1次普兰林肽[200μg/(μ·d)],治疗8周。Morris水迷宫实验测定其认知行为的变化;采用免疫组织化学检测小鼠海马组织细胞、视网膜中Aβ6E10蛋白的表达;ELISA测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)炎症因子的含量。HE染色测定小鼠海马组织中神经细胞的排列和形态。结果 治疗组的潜伏时间短于5×FAD组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组的穿越平台次数和目标象限停留百分比高于5×FAD组,差异有统计学意义(P<0.05);5×FAD组脑内和视网膜内的Aβ6E10面积高于治疗组,差异具有统计学意义(P<0.05);视网膜和脑内的Aβ6E10具有正相关(P<0.05)。治疗组与5×FAD组脑中和视网膜中的TNF-α和IL-1β比较,差异无...     

外源性神经节苷脂对大鼠脑内注入β-淀粉样蛋白导致的行为损伤的改善作用(英文)

本研究探讨了将β-AP分别注入大鼠海马、隔核和基底巨细胞核后学习和记忆功能的变化。行为测试在β-AP注入 1周后进行。双侧海马 (背部 )注入β-AP后 ,大鼠的分辨学习能力明显下降 ,对照组达到学会标准所需的次数为 2 5± 10 .7;而β-AP组为3 6.7± 9.8,两组差别非常显著 (P<0 .0 0 5 ) .在注射 β-AP后每天给予 40 mg/kg(i.p.)的神经节苷脂 (GAs) ,连续 6d,则大鼠的学习能力可明显改善 ,达到标准所需次数为 2 6.3± 9.2。隔核内注入 β-AP后大鼠的分辨学习能力没有明显的变化 ,而一次性平台测试成绩明显下降 ,同样外源性神经节苷脂可改善这种记忆功能的损伤。本研究还观察了 β-AP注入基底巨细胞核所造成的工作记忆损伤以及 GAs对其的改善作用     

雷公藤多甙对大鼠海马内注射β-淀粉样蛋白后小胶质细胞反应的影响

老年性痴呆(Alzheimer‘s disease,AD)的病因和发病机理至今尚未完全明了,亦缺乏公认有效的治疗方法。近年来,AD的免疫炎症学说受到了越来越多的关注。β-淀粉样蛋白(beta—amyloid protein,Aβ)的沉积激活小胶质细胞是这一学说的核心病理机制,激活的小胶质细胞可释放炎性介质引起神经毒作用。雷公藤多甙具有抗炎与免疫抑制作用,是我国独创的新型抗炎中药,其对Aβ所致的小胶质细胞激活是否有影响,尚未见报道。     

17α雌二醇对转基因细胞株(APP/PS1N2a)β-淀粉样蛋白生成的影响

目的 探讨17α雌二醇（ESUB>2/SUB>α）对稳定表达人β-淀粉样前体蛋白（APP）/早老因子-1（PS1）即APP /PS1基因的神经母细胞瘤细胞株（Neuro-2a）（APP/PS1 NSUB>2/SUB>a）β-淀粉样蛋白（Aβ）产生的影响及可能机制。方法 将APP/PS1 NSUB>2/SUB>a细胞用10×10SUP>-9/SUP> mol/L E2α预处理2d,更换培养液后,分别进行如下处理：1.加入不同浓度ESUB>2/SUB> a（25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L）和溶媒（对照组）,用免疫印迹法(Western blotting)检测APP/PS1 NSUB>2/SUB> a细胞内和细胞外的Aβ蛋白水平及细胞BACE1蛋白水平;2.加入 100nmol/L ESUB>2/SUB>α、20nmol/L葡萄糖和5mIU葡萄糖氧化酶（GOX）。24h后,进行二氢乙啶(DHE)染色观察APP/PS1 N2a细胞中活性氧（ROS）含量的变化。结果 不同浓度E2α（25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L）处理后,细胞外Aβ蛋白水     

Tau195-213肽段对阿尔茨海默病小鼠的免疫治疗作用及对Wnt/β-catenin通路相关因子表达的影响

目的探讨Tau195-213肽段对阿尔茨海默病小鼠(JNPL3小鼠)的免疫治疗作用,同时探究其对Wnt/β-catenin通路相关因子表达的影响。方法 JNPL3转基因小鼠30只,随机分为对照组(C组)、佐剂CFA-PT免疫组(CFA组)、tau195-213(P202/205)肽段免疫组(tau组),每组10只,3组小鼠每3周免疫1次,共进行5次免疫,每次免疫前取血清,ELISA检测tau抗体的滴度、检测IFN-γ和IL-4含量;Morris水迷宫检测小鼠的空间学习记忆功能;Western检测Wnt/β-catenin通路相关因子的表达。结果 tau195-213(P202/205)肽段免疫的小鼠血清中能够诱导出较高滴度的抗tau抗体,其免疫的小鼠体外脾细胞培养上清液中IL-4含量较高(P0.05,VS C组和CFA组),IFN-γ含量未见明显差异(P0.05)。Tau组小鼠平均逃避潜伏期低于CFA组和C组,而在目标象限花费的时间多于CFA组。Tau195-213(P202/205)肽段可以激活机体脑组织β-catenin、c-Myc蛋白的表达升高,降低GSK-3β蛋白表达。结论 Tau195-213(P202/205)肽段免疫JNPL3小鼠后,产生了具有治疗水平的抗体,并且该抗体可通过血脑屏障,其机制与Wnt/β-catenin通路相关。