STAg、蜂胶和IFN-γ联合滴鼻免疫对小鼠抗体影响

目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶和γ干扰素(IFN -γ)滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导血清IgG,粪便、鼻咽冲洗液和阴道冲洗液中IgA特异性抗体动态变化,探讨抗弓形虫感染作用机制.方法 将5～6周龄雌性BALB/c小鼠96只随机分为免疫组和对照组,免疫组以弓形虫复合黏膜疫苗(20 μg STAg+ 40 μg蜂胶+ 1000U IFN -γ)滴鼻免疫,对照组以磷酸盐缓冲液滴鼻.分别于滴鼻2次(间隔2周)后第1、2、3、4、6、8、10和12周处死小鼠,收集血清、粪便、鼻咽冲洗液和阴道冲洗液,采用酶联免疫吸附法检测血清IgG,粪便、鼻咽、阴道冲洗液中IgA抗体.结果 免疫组小鼠血清IgG,粪便、鼻咽、阴道冲洗液中IgA均高于对照组,血清IgG水平第3周达高峰(吸光度A值0.257),第1、2、3、4、6周IgG水平明显高于对照组(F=5.87,P＜0.05);粪便IgA抗体第2周达高峰(吸光度A值0.054),第2、3、4周明显高于对照组(F=5.32,P＜0.05);鼻咽、阴道冲洗液中IgA第1周即达高峰(吸光度A值分别为0.0313,0.0533),之后逐渐降低,至第12周仍明显高于对照组(F =6.15,P＜0.05).结论 STAg联合蜂胶和IFN -γ滴鼻免疫小鼠可诱导高水平特异性抗体,且可持续较长时间.     

rTgPrx蛋白滴鼻免疫小鼠抗弓形虫感染作用

目的观察重组弓形虫过氧化物还原蛋白(rTgPrx)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫感染作用。方法6周龄BALB/c小鼠75只,随机分为5组,实验组分别用10,20,30,40μg rTgPrx〔溶于20μL磷酸盐缓冲液(PBS)中〕滴鼻免疫小鼠3次,各间隔2周;对照组用等量磷酸盐缓冲液;末次免疫后14 d,用1×104个速殖子/只灌胃攻击全部小鼠;攻击后30 d,眼静脉丛采血,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA检测血清IgG和肠液IgA,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(IEL)和脾淋巴细胞,分离并计数肝、脑组织内弓形虫速殖子。结果40μg rTgPrx组血清IgG、IEL及脾淋巴细胞数量均高于对照组(P0.05),40μg组肝、脑组织内虫荷(速殖子数)明显低于对照组及10,20和30μg组(P0.05)。结论rTgPrx滴鼻免疫小鼠可诱导黏膜部位和系统免疫应答和抗弓形虫感染作用,40μg组的免疫保护作用优于其他剂量组。     

微小隐孢子虫pcDNA3.0-23重组质粒免疫效果评价

目的 比较微小隐孢子虫表面抗原CP23真核表达载体pcDNA3.0-23经不同免疫途径产生的免疫效果.方法 提取微小隐孢子虫基因组DNA,PCR扩增CP23基因片段,克隆至真核表达载体pcDNA.3.0,构建pcDNA3.0-23重组质粒,分别通过肌肉注射和滴鼻(粘膜)免疫2种途径免疫BALB/c小鼠,免疫3次,2周后检测抗CP23特异性抗体IgG滴度、小鼠脾脏、血清中CD4+和CD8+T细胞、细胞因子γ干扰素(IFN-γ);用微小隐孢子虫攻击感染被免疫小鼠,收集小鼠粪便,计算小鼠排出的卵囊量.结果 肌注组与滴鼻组小鼠血清抗CP23特异性抗体IgG滴度随免疫次数增加均明显升高,高于对照组及空质粒组(P＜0.05),肌注组高于滴鼻组(P＜0.05);肌注组与滴鼻组小鼠的CD4+T细胞、CD4+/CD8+比值均高于磷酸缓冲液(PBS)对照组及pcDNA3.0空质粒组(P＜0.05),但2种免疫途径的差异无统计学意义(P＞0.05);肌注组和滴鼻组脾细胞培养上清中IFN-γ明显高于对照组及空质粒组(P＜0.05);微小隐孢子虫攻击小鼠后,2种免疫途径的小鼠排出卵囊量明显少于对照组,且排出时间缩短,2种途径的差异无统计学意义.结论 pcDNA3.0-23重组质粒作为基因疫苗,可产生较好的细胞及体液免疫反应;不同的免疫途径可产生不同的免疫反应.     

CpG ODN联合STAg免疫小鼠诱导黏膜IgA免疫应答

目的 观察GpG寡核苷酸(CpG ODN)联合刚地弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻免疫BALB/c小鼠诱异的不同黏膜部位IgA免疫应答动态变化,探讨CpG ODN作为弓形虫复合黏膜疫苗的佐剂效应.方法 雌性BALB/c小鼠72只,随机分为实验组和对照组,每组36只.实验组以10 μg CpG ODN联合20μg STAg滴鼻免疫,对照组以磷酸盐缓冲液(PBS)滴鼻.间隔2周,免疫2次,于末次免疫后第1,2,3,4,5,6周分别随机处死小鼠(6只/组).ELISA法测定鼻咽冲洗液、肺冲洗液、小肠冲洗液、阴道冲洗液IgA.结果 实验组小鼠各部冲洗液中IgA平均水平高于对照组.鼻咽冲洗液中IgA水平在第1周时最高,各时间点虽高于对照组,但差异无统计学意义.肺冲洗液IgA在第5周达到高峰,第4,5,6周高于对照组(P<0.001).小肠冲洗液中弓形虫特异性IgA抗体水平在各个时间点均高于对照组,第2,3周(P<0.001),4周(P<0.05)差异有统计学意义.阴道冲洗液IgA在免疫后第1～6周显著高于对照组(P<0.01),第5周时水平最高.结论 CpG ODN作为STAg的佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可诱异黏膜部位产生高水平IgA抗体,且可持续较长时间.     

STAg不同途径免疫对小鼠弓形虫感染保护作用

目的 观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻、灌胃和皮下注射免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用.方法 40只6～7周龄BALB/c小鼠随机分为4组,前3组分别以20 μg STAg滴鼻、灌胃或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理.末次免疫后14 d,用速殖子2×104个/只灌胃攻击所有小鼠,观察小鼠健康状况,记录体重,计算存活率.攻虫后30 d颈椎脱位处死小鼠,计数脾和脑组织速殖子.结果 滴鼻免疫小鼠的健康状况好于其他组,存活率(70%)高于皮下(60%)、灌胃(60%)和对照组(40%).滴鼻组脾虫荷为369.48,皮下注射组脾虫荷为386.94,显著低于灌胃组(630.40)和对照组(664.93)(F=3.611,P<0.05).滴鼻组(36.45)、灌胃组(34.85)和皮下注射组(40.22)脑虫荷差异无统计学意义(F=1.999,P>0.05),但均显著低于对照组(57.32)(F=1.999,P<0.05).结论 20μgSTAg滴鼻免疫小鼠诱导了较强的抗弓形虫感染作用,优于皮下和灌胃免疫.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对狼疮样小鼠的干预性研究

目的分析CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)对狼疮样小鼠的干预效应,为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的免疫干预提供新的思路。方法采用磁活性标记的细胞分选方法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选BALB/c小鼠CD4+CD25+T细胞,应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测分选细胞纯度。将6~8w♀CB6F1小鼠随机分为3组,包括正常对照组、狼疮鼠模型组(亲代淋巴细胞免疫)、狼疮鼠干预组(亲代淋巴细胞免疫后2w,输入5×106Tregs/鼠)。分别于诱导后2、4、8、12w,采用ELISA法检测ANA和抗-dsD-NA抗体,并观察肾标本的病理学改变。结果BALB/c小鼠脾脏单个核细胞经MACS分选后,CD4+CD25+T细胞纯度达98.5%。经亲代淋巴细胞输注后,CB6F1小鼠出现体重降低、皮肤干涩;ANA和抗ds-DNA抗体上升;以及狼疮肾炎的病理学改变。而输入Tregs对已出现自身抗体的狼疮鼠有明显的逆转效应,CB6F1小鼠于输注后抗-dsDNA即...     

壳聚糖季铵盐(HTCC)载HSV-2型DNA疫苗pgD诱导小鼠免疫应答的初步研究

目的:制备了壳聚糖季铵盐-DNA疫苗(pgD)纳米粒复合物,并对其诱导BALB/c小鼠产生免疫应答的能力做了初步研究。方法:通过复凝聚法制备了HTCC-pgD纳米粒复合物并对其进行表征。60只BALB/c小鼠随机分成5组:①HTCC10对照组;②pcDNAkan空载体对照组;③重组质粒pgD组;④HTCC∶pgD=5∶1组;⑤HTCC∶pgD=10∶1组。各组小鼠后腿肌肉注射,注射剂量为100μg/(只.次),隔2周免疫1次,共免疫2次。末次免疫2周后,通过流式细胞仪检测外周血中CD4+、CD8+百分率,ELISA法检测血清中IgG抗体效价、IFN-γ、IL-4含量这4个方面来研究该纳米粒复合物对小鼠免疫反应的影响。结果:HTCC能与质粒pgD很好结合成纳米复合物,保护DNA免受核酸酶的降解。小鼠经免疫2次后,流式细胞仪检测外周血中CD4+T淋巴细胞亚群结果显示HTCC-pgD纳米粒复合物组的CD4+百分率要高于其他对照组(P<0.05)。血清ELISA检测IgG结果显示与对照组相比,HTCC-pgD纳米粒复合物可诱导小鼠机体产生较高滴度的IgG抗体。HTCC-pgD纳米粒复合物组的小鼠血清中IFN-γ水平与对照组相比有所上调,IL-4水平有下降。结论:通过复凝聚法制备的HTCC-pgD纳米粒复合物可诱导BALB/c小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫,为HSV-2型DNA疫苗研制提供科学依据。     

冬虫夏草对大鼠肠黏膜屏障免疫功能影响的研究

目的:探讨冬虫夏草对T淋巴细胞亚群及小肠黏膜屏障免疫功能的影响. 方法:将大鼠分为对照组和实验组.实验组大鼠给予冬虫夏草5g/(kg·d)灌胃;对照组给予等量的等渗盐水灌胃,两组均自由进食、饮水.于灌胃第4、7和10天分别抽取8只大鼠的血,用流式细胞仪检测外周血液中CD+、CD4+、CD8+的百分率,计算CD4+/CD8+比例.同时取大鼠小肠黏膜,行常规病理计数上皮内淋巴细胞(IEL)的比例,用免疫组化染色检测CD4+、CD8+,计算CD4+/CD8+的比例. 结果:实验组大鼠第4天外周血中CD4+淋巴细胞即有明显提高,CD4+/CD8+的比例明显升高,至第7和第10天变化更为明显.肠黏膜上皮内淋巴细胞的数量和CD4+/CD8+比例的变化也较明显,差异有显著性意义(P<0.05). 结论:冬虫夏草可使正常大鼠外周血T淋巴细胞含量增加,同时可增强小肠黏膜的免疫屏障功能.     

CD4+CD25+调节性T细胞对狼疮样小鼠的干预性研究

目的分析CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Tregs）对狼疮样小鼠的干预效应,为系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）的免疫干预提供新的思路。方法采用磁活性标记的细胞分选方法（magnetic activated cell sorting,MACS）分选BALB/c小鼠CD4+CD25+T细胞,应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测分选细胞纯度。将68w♀CB6F1小鼠随机分为3组,包括正常对照组、狼疮鼠模型组（亲代淋巴细胞免疫）、狼疮鼠干预组（亲代淋巴细胞免疫后2w,输入5×106Tregs/鼠）。分别于诱导后2、4、8、12w,采用ELISA法检测ANA和抗-dsD-NA抗体,并观察肾标本的病理学改变。结果BALB/c小鼠脾脏单个核细胞经MACS分选后,CD4+CD25+T细胞纯度达98.5%。经亲代淋巴细胞输注后,CB6F1小鼠出现体重降低、皮肤干涩;ANA和抗ds-DNA抗体上升;以及狼疮肾炎的病理学改变。而输入Tregs对已出现自身抗体的狼疮鼠有明显的逆转...     

大蒜素对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群影响的实验研究

目的观察大蒜素对小鼠脾脏指数及其T淋巴细胞亚群分化的影响。方法将80只清洁级昆明小鼠随机化分组:生理盐水对照组、大蒜素低剂量组、大蒜素中剂量组和大蒜素高剂量组,每组20只,并分别按0.1ml/(10g bw)、100mg/(kg bw)、200mg/(kg bw)、400mg/(kg bw)的剂量连续灌胃14d,每天灌胃1次并称重。灌胃结束7d后处死小鼠,无菌分离脾脏称重,计算脾脏系数,制作单细胞悬液,采用流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群中CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞和CD4~+/CD8~+的值。结果大蒜素中、高剂量组和生理盐水对照组比较,脾脏指数、脾脏淋巴细胞CD4~+T淋巴细胞比例和CD4~+/CD8~+值均升高,CD8~+T淋巴细胞比例降低,差异有统计学意义(F=5.52,P0.05),而大蒜素低剂量组与生理盐水对照组比较,脾脏指数、脾脏淋巴细胞CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞和CD4~+/CD8~+值差异无统计学意义(F=1.87,P0.05)。结论大蒜素能够使得小鼠脾脏指数、脾脏淋巴细胞CD4~+T淋巴细胞比例和CD4~+/CD8~+值均升高,CD8~+T淋巴细胞比例降低,对正常小鼠脾脏免疫功能具有正向调节作用。     

重组乙型肝炎疫苗和乙型肝炎表面抗原诱导细胞免疫应答

目的 探讨重组乙型肝炎(乙肝)疫苗和汉逊酵母菌表达的乙肝表面抗原(rHBsAg)诱导动物和人体细胞免疫应答的动态变化.方法 应用不同剂量rHBsAg免疫小鼠(BALB/c,H-2d),酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测小鼠脾单个核细胞(MNC)体外刺激诱生IFN-γ的水平;单剂rHBsAg免疫后不同时间检测MNC、CD8+T淋巴细胞产生IFN-γ水平;同时测定免疫后不同时间细胞毒T淋巴细胞反应(CTL)活性;检测免疫单剂和多剂乙肝疫苗后小鼠MNC分泌IFN-γ、IL-2、IL-5和抗-HBs抗体水平;对乙肝感染标志阴性的4名成年人按0、1、2个月程序接种乙肝疫苗,检测免疫后外周血单个核细胞(PBMC)、CD8+T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2和IL-4水平以及抗体动态.结果 应用ELISPOT法,汉逊rHBsAg免疫小鼠7 d时,可检测到IFN-γ应答,14 d时达到高峰;CTL在免疫后7 d时可检出,峰值位于28 d.在1～8μg免疫剂量范围内,MNCs IFN-γ免疫应答与剂量呈显著正相关(阳转率:Υ=0.951,P=0.049＜0.05;SFC:Υ=0.996,P=0.000＜0.05),在1～4 μg免疫剂量范围内,CD8+T淋巴细胞的IFN-γ与剂量也呈显著正相关(Υ=0.999,P=0.025＜0.05);三剂乙肝疫苗免疫小鼠诱生细胞免疫和体液免疫应答水平均显著高于单剂(P值均＜0.05);成年人接种汉逊乙肝疫苗后不同个体间细胞免疫和体液免疫应答的模式不同,IL-2、IL-4应答与个体抗体滴度有关.结论 用ELISPOT法成功测定了汉逊HBsAg免疫小鼠后不同淋巴细胞的细胞免疫剂量效应和CTL时间动态变化,并分析了成年人的细胞免疫应答特点,为规范疫苗细胞免疫评价提供了基础.     

Toll样受体7激动剂对荷瘤小鼠肾癌的抑制作用及免疫机制

目的　研究Toll样受体7激动剂Imiquimod对荷瘤小鼠肾癌的抑制作用及免疫机制。方法　用Renca肾癌细胞构建BABL/c小鼠肾癌模型,实验分为control组、imiquimod组和sorafenib组。观察3组小鼠肿瘤体积及重量、抑瘤率,qPCR法检测肿瘤组织中炎性相关因子肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、干扰素α（Interferon-α,IFN-α）、干扰素β（Interferon-β,IFN-β）、干扰素γ（Interferon-γ,IFN-γ）及Toll样受体通路相关因子Toll样受体7（Toll-like receptor 7,TLR7）、髓样分化因子88（Myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88）、核因子κB （Nuclear factor κB,NF-κB）mRNA表达,Western blot法检测瘤组织中TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达。流式细胞术检测脾脏中CD4+T、CD8+T、CD4+IFN-γ和CD8+IFN-γ细胞比例。结果　与control组比较,imiquimod组和sorafenib组小鼠的肿瘤体积及瘤体重量降低（P＜0.05）;与control组相比,imiquimod组TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-β、IFN-γ及TLR7、MyD88、NF-κB mRNA水平升高（P＜0.05）,而sorafenib组各因子略有上升（P＞0.05）;与control组和sorafenib组比较,imiquimod组CD4+T、CD8+T细胞比例有不同程度的升高（P＞0.05）,CD4+IFN-γ和CD8+IFN-γ细胞比例增加（P＜0.05）。结论　Toll样受体7激动剂通过活化TLR7-MyD88-NF-κB信号刺激多种炎性细胞因子分泌,并上调CD4+T、CD8+T比例及功能,对荷瘤小鼠肾癌发挥抑制作用。     

沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位基因的免疫原性研究

目的 构建包含沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(major outermembrsne protein,MOMP)多表位基因的真核表达质粒PcDNA3.1-Ct MOMP168,检测其诱导BALB/c小鼠产生Ct MOMP特异性体液和细胞免疫反应的水平.方法 构建包含Ct MOMP多表位基因的重组质粒PcDNA3.1-Ct MOMP168并以肌肉注射方式免疫BALB/c小鼠,同时设置pcDNA3.1组和PBS组对照(每组12只,每只100μg/次).采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳酸脱氢酶释放法及细胞内细胞因子染色-流式细胞术(ICS-FACS)分别检测免疫小鼠血清中Ct MOMP特异性抗体的滴度及其抗体亚型、脾脏中细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性及特异性分泌细胞因子,如γ-干扰素-(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)等的CD3+T细胞的水平.结果 同pcDNA3.1(A490=0.180±0.025)和PBS免疫(A490=0.110±0.015)相比,PcDNA3.1-Ct MOMP168免疫可刺激小鼠产生高效价Ct特异性IgG抗体(A490=0.973±0.136;血清滴度1:1000),且抗体亚型以IgG2a为主,差异有统计学意义(F=106.884,P<0.05);pcDNA3.1-Ct MOMP168免疫组小鼠脾细胞中CTL杀伤活性(41.71%±8.34%)高于pcDNA3.1组(18.40%±3.45%)和PBS组(14.50%±2.42%),差异有统计学意义(F=22.315,P<0.05;效靶比为50:1);pcDNA3.1-Ct MOMP168免疫组小鼠的脾细胞中Ct MOMP特异性CD3+IFN-γ+T细胞的水平(1.15%±0.16%)高于pcDNA3.1组(0.12%±0.08%)和PBS组(0.09%±0.03%),差异有统计学意义(F=99.638,P<0.05),而PcDNA3.1-CtMOMP168组IL-4+CD3+T细胞(0.13%±0.08%)和IL-10+CD3+T细胞(0.14%±0.08%)的水平与pcDNA3.1(0.07%±0.05%,0.13%±0.06%)和PBS(0.08%±0.04%,0.07%±0.04%)组比较差异无统计学意义(F值分别为0.886、1.112,P值均>0.05).结论pcDNA3.1-Ct MOMP168重组质粒能诱导BALB/c小鼠产生Ct MOMP特异性的体液免疫和细胞免疫应答.     

人巨细胞病毒pp65DNA疫苗诱导小鼠免疫效应的研究

目的探讨人巨细胞病毒pp65 DNA疫苗免疫小鼠产生的细胞免疫应答及相关的细胞因子变化,分析该疫苗是否具高度免疫性。方法将40只健康Balb/c小鼠随机分成A、B两组,每组20只。A组(对照组):注射生理盐水;B组(实验组):注射pp65 DNA疫苗;采用流式细胞仪检测CD3+、CD4+及CD8+;采用双抗体夹心ELISA法检测小鼠血清中的IFN-γ;采用放射免疫法检测小鼠血清中的IL-2。统计学处理用SPSS 10.0统计学软件,组间比较用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果B组小鼠T细胞亚群CD4+、CD8+、CD3+及细胞因子IFN-γ,IL-2水平明显高于A组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论本研究表明HCMV pp65 DNA疫苗能诱导Balb/c小鼠产生一定的细胞免疫应答及细胞因子的变化。     

外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子联合检测在早期识别嗜血细胞综合征中的应用价值

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子联合检测在早期识别嗜血细胞综合征(HPS)中的应用价值。方法回顾性分析2015年12月-2018年12月本院确诊嗜血细胞综合征为HPS组(30例),对照组为同期因发热住院非HPS患儿30例,健康组取同期体检的健康儿童30例。比较3组CD4^+和CD8^+T淋巴细胞亚群、γ-干扰素(IFN-γ)和白介素-2(IL-2)水平。结果3组IFN-γ与IL-2水平比较,差异有统计学意义(F值分别为32.97、291.49,P<0.01)。HPS不同病程IFN-γ与IL-2水平比较,差异有统计学意义(F值分别为10.91、4.14,P<0.05);3组CD4^+与CD8^+T淋巴细胞亚群水平比较,差异有统计学意义(F值分别为60.36、10.23,P<0.01);HPS不同病程CD4^+与CD8^+T淋巴细胞亚群水平比较,差异有统计学意义(F值分别为13.38、7.03,P<0.01);HPS与IFN-γ和IL-2水平呈显著相关(r值分别为0.73、-0.66,P<0.01),而与CD4^+和CD8^+T淋巴细胞亚群亦呈显著相关(r值分别为0.74、-0.57,P<0.01)。结论外周血IFN-γ和IL-2水平联合CD4^+和CD8^+T淋巴细胞亚群检测有助于早期识别嗜血细胞综合征。     

Interferon gamma (IFN-γ) negative CD4+ and CD8+ T-cells can produce immune mediators in response to viral antigens

Evaluation of antigen-specific T-cell responses to viral antigens is frequently performed on IFN-γ secreting cells. However, T-cells are capable of producing many more functions than just IFN-γ, some of which, like Perforin, are associated with immune protection in HIV-1 disease elite controllers. We evaluated the extent of missed T-cell functions when IFN-γ secretion is used as a surrogate marker for further evaluation of T-cell functions. Intracellular cytokine staining assay and flow cytometry were used to assess peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from 31 HIV-infected ART-naive individuals for the extent to which gated CD4+ and CD8+ IFN-γ producing and non-producing T-cells also secreted IL-2, Perforin, and TNF-α functions. Similarly, the extent of missed virus-specific responses in IFN-γ ELISpot assay negative T-cells from 5 HIV-1 uninfected individuals was evaluated. Cells from HIV-infected individuals were stimulated with pooled consensus group M (Con M) peptides; and those from healthy individuals were stimulated with pooled adenovirus (Ad) peptides. Overall, frequencies of virus-specific IFN-γ secreting CD4+ and CD8+ cells were low. Proportions of IFN-γ negative CD4+ expressing IL-2, Perforin, or TNF-α to Con M were significantly higher (5 of 7 functional profiles) than the corresponding IFN-γ positive CD4+ (0 of 7) T-cell phenotype, p?=?0.02; Fisher’s Exact test. Likewise, proportions of CD8+ T-cells expressing other functions were significantly higher in 4 of the 7 IFN-γ negative CD8+ T-cells. Notably, newly stimulated Perforin, identified as Perforin co-expression with IL-2 or TNF-α, was significantly higher in IFN-γ negative CD8+ T-cell than in the positive CD8+ T-cells. Using SEB, lower responses in IFN-γ positive cells were most associated with CD4+ than CD8+ T-cells. These findings suggest that studies evaluating immunogenicity in response to HIV and Adenovirus viral antigens should not only evaluate T-cell responsiveness among IFN-γ producing cells but also among those T-cells that do not express IFN-γ.     

CD4+ and CD8+ T cell- and IL-17-mediated protection against Entamoeba histolytica induced by a recombinant vaccine

Amebiasis in the murine model can be prevented by vaccination with the Gal/GalNAc lectin through a T cell-dependent mechanism. In this work we further decipher the mechanism of this protection. Mice vaccinated with the recombinant “LecA” fragment of the Gal/GalNAc lectin with alum were capable of transferring protection to naïve recipients by both CD4+ T cells and surprisingly CD8+ T cells. We then examined the cytokine profile of these cells. CD4+ T cells from PBMC of LecA-alum vaccinated mice were observed to be a major source of IFN-γ, known to be a protective cytokine with this vaccine. In contrast, CD8+ T cells produced relatively little IFN-γ but more IL-17 than the CD4 compartment. We thus examined the role of IL-17 in vaccine mediated protection and found through neutralization experiments that this cytokine contributed to LecA-alum vaccine protection. In addition we examined whether these cells exhibited direct amebicidal activity in vitro and found that both populations had amebicidal activity at high concentrations (1000:1) but CD8+ T cells appeared more potent, capable of cytotoxicity at a 100:1 ratio. In conclusion, both CD4 and CD8 T cells exert protection with this amebiasis vaccine. The mechanism of CD8 T cell-mediated protection may include direct amebicidal activity and/or IL-17 production. Both IL-17 and IFN-γ are useful surrogates for immune protection.     

丙种球蛋白被动免疫治疗原因不明性反复自然流产研究

目的:探讨静脉点滴丙种球蛋白治疗原因不明性反复自然流产(URSA)的疗效及治疗前后机体封闭抗体、T细胞亚群、胞内Th1/Th2细胞因子及外周血NK细胞含量的变化,以期初步阐明其治疗机理。方法:URSA患者治疗前均检测封闭抗体,对于封闭抗体阴性的患者给予每2周静脉点滴10g国产丙种球蛋白,连续4次治疗后再次检测封闭抗体。怀孕后改为每3周同剂量加强免疫一次,至怀孕26～30周。应用FACSCalibur流式细胞仪分析25例患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群、胞内Th1/Th2细胞因子及NK细胞的变化,并选择20例正常妊娠并选择人工流产者作为对照组。结果:25例URSA经4次被动免疫治疗后有19例封闭抗体转阳性。21例能正常怀孕并成功分娩,4例流产,成功率84%。治疗后CD3+T细胞百分比略升高但无显著性差异;CD8+T细胞百分比有明显升高;而CD4+T细胞百分比明显下降;CD4+/CD8+比率也明显下降。胞内Th2型细胞因子IL-10含量显著性升高;胞内Th1型细胞因子IFN-γ和外周血NK细胞含量明显下降。结论:静脉点滴丙种球蛋白治疗URSA具有较好疗效。治疗后机体免疫保护作用明显增强,可能是丙种球蛋白促进妊娠发展的原因之一。     

Ii-Key/HPV16 E7 hybrid peptide immunotherapy for HPV16+ cancers

Activation of antigen-specific CD4+ T cells is critical for vaccine design. We have advanced a novel technology for enhancing activation of antigen-specific CD4+ T helper cells whereby a fragment of the MHC class II-associated invariant chain (Ii-Key) is linked to an MHC class II epitope. An HLA-DR4-restricted HPV16 E7 epitope, HPV16 E7(8–22), was used to create a homologous series of Ii-Key/HPV16 E7 hybrids testing the influence of spacer length on in vivo enhancement of HPV16 E7(8–22)-specific CD4+ T lymphocyte responses. HLA-DR4-tg mice were immunized with Ii-Key/HPV16 E7(8–22) hybrids or the epitope-only peptide HPV16 E7(8–22). As measured by IFN-γ ELISPOT assay of splenocytes from immunized mice, one of the Ii-Key/HPV16 E7(8–22) hybrids enhanced epitope-specific CD4+ T cell activation 5-fold compared to the HPV16 E7(8–22) epitope-only peptide. We further demonstrated that enhanced CD4+ T cell activation augments the CTL activity of a H-2D^b-restricted HPV16 E7(49–57) epitope in HLA-DR4+ mice using an in vivo CTL assay. Binding assays indicated that the Ii-Key/HPV16 hybrid has increased affinity to HLA-DR4+ cells relative to the epitope-only peptide, which may explain its increased potency. In summary, Ii-Key hybrid modification of the HLA-DR4-restricted HPV16 E7(8–22) MHC class II epitope generates a potent immunotherapeutic peptide vaccine that may have potential for treating HPV16+ cancers in HLA-DR4+ patients.