南水北调东线山东段沿线土壤的放射性水平

目的 摸清南水北调东线山东段通水前沿线土壤的放射性水平。方法 采用厚层法、硫酸盐EDTA络合沉淀法和γ能谱法。结果 土壤中的总α、总β、¹³⁷Cs、⁴⁰K、²³⁸U、²²⁶Ra、²³²Th、⁹⁰Sr和⁶⁰Co的活度浓度算术均值范围分别为7.30×10²(0.63~50.76)×10²、6.57×10²(5.10~8.58)×10²、4.80×10-1(2.53~9.10)×10-1、5.01×10²(2.81~6.97)×10²、2.40×10¹(1.35~3.50)×10¹、3.14×10¹(2.55~4.27)×10¹、3.47×10¹(2.71~5.44)×10¹、6.14(3.26~8.35)和0 Bq·kg^-1。结论 南水北调东线山东段沿线土壤的放射性核素的平均活度浓度总体上处在本底水平。     

小清河干流悬浮物的放射性水平

目的 掌握小清河干流水中的悬浮物放射性水平及变化规律。方法 采用相对饱和法、γ谱法测定。结果 小清河水中悬浮物总α、总β比活度均值分别为10.43×10²,5.96×10² Bq·kg^-1;²³⁸U、²³²Th、²²⁶Ra、⁴⁰K比活度均值分别为3.32×10¹,3.84×10¹,2.65×10¹,4.20×10² Bq·kg^-1;¹³⁷Cs的比活度均值为17.94×10^-1 Bq·kg^-1。结论 小清河悬浮物的放射性水平处在正常本底范围以内,其放射性变化规律一般是丰水期高于枯水期。     

小清河底部沉积物的放射性水平及其变化规律

目的 探讨山东省小清河干流治理后底部沉积物中的放射性水平及其变化规律。方法 采用厚层法、γ能谱法。结果 底部沉积物中的总α、总β、⁴⁰K、²³²Th、²²⁶Ra、²³⁸U和¹³⁷Cs的比活度均值分别为9.12×10²、6.55×10²、4.29×10²、36.3、29.4、25.1和1.11 Bqkg^-1。结论 小清河底部沉积物中的放射性物质水平属正常本底范围,其变化规律显示为枯水期大于丰水期。     

辽宁徐大堡核电站运行前周边食品放射性水平调查

目的 调查辽宁徐大堡核电站运行前周边地区食品放射性本底水平,掌握当地居民主要食品中放射性核素水平。方法 通过采集核电站周边30 km范围的食品样品,采用高纯锗（HPGe）能谱仪对样品进行γ核素分析。结果 当地食品中的放射性核素主要为天然核素²³⁸U、²²⁶Ra、²³²Th、⁴⁰K以及人工核素¹³⁷Cs,其中天然核素²³⁸U、²²⁶Ra、²³²Th、⁴⁰K的平均活度水平为（1.2×10⁻¹ ±2.6×10⁻¹）、（9.2×10⁻² ±1.6×10⁻¹）、（3.6×10⁻¹ ±6.5×10⁻²）、（9.0×10¹ ±5.8×10¹）Bq/kg,人工核素 ¹³⁷Cs平均活度水平（1.2×10⁻² ±9.0×10⁻³）Bq/kg。结论 核电站周边地区采集的食品中除微量¹³⁷Cs外,未发现其他人工γ核素,食品中放射性核素水平均低于国家标准限值,居民由食入¹³⁷Cs所致年有效剂量为6.0×10⁻² μSv/a。     

南水北调东线山东段通水前主要湖区水放射性水平

目的 调查南水北调东线山东段通水前沿线主要湖区水中的放射性水平。方法 总α、总β采用饱和厚度相对测量法,²²⁶Ra采用射气法,¹³⁷Cs、⁶⁰Co、²³⁸U、²³²Th、⁴⁰K用高纯锗γ谱仪测量,⁹⁰Sr用硫酸盐EDTA络合沉淀法。结果 总α、总β活度浓度均值分别为9.69×10^-2、2.82×10^-1 Bq·L^-1;⁹⁰Sr、¹³⁷Cs活度浓度均值分别为5.50×10^-3、7.60×10^-4 Bq·L^-1,⁶⁰Co未测出;²³⁸U、²²⁶Ra、²³²Th和⁴⁰K的活度浓度均值分别为1.37×10^-2、6.48×10^-3、13.95×10^-4和1.21×10^-1 Bq·L^-1。结论 流经位于微山湖东侧郗山村的河水中总α、²³⁸U的放射性水平偏高,南水北调山东段主要湖区水中的放射性总体处在本底水平。     

海阳核电厂周边地区食品中放射性核素调查

目的 获得海阳核电厂运行前周边地区食品中关键核素的放射性活度水平数据,为评价或解释该核电厂在正常运行期间、事故及事故后期间对周边食品影响提供本底数据。方法 采集海阳核电厂周边的小麦、白菜、海鱼及牛奶等食品样品,样品预处理和制备均采用《辐射环境监测技术规范》HJ/T61-2001的方法,核素活度水平使用HPGe-γ谱仪测量系统测量。结果 海阳核电厂周边的食品样品,小麦中²²⁶Ra、²³²Th、¹³⁷Cs和⁴⁰K活度浓度算术平均值分别为7.4×10^-2、1.8×10^-1、5.5×10^-2和8.2×10¹ Bq/kg,范围分别为2.7×10^-2~2.1×10^-1、1.1×10^-1~3.0×10^-1、1.9×10^-2~1.0×10^-1和3.5×10¹~1.2×10²Bq/kg;白菜中226 Ra、¹³⁷Cs和40 K活度浓度算术平均值分别为1.8×10^-2、1.8×10^-2和5.0×10¹ Bq/kg,范围分别为1.3×10^-3~2.7×10^-2、1.1×10^-2~3.3×10^-2和4.0×10¹~8.6×10¹Bq/kg;鱼样品中²³²Th、¹³⁷Cs和⁴⁰K活度浓度算术平均值分别为3.7×10^-2、1.4×10^-2和2.1×10¹ Bq/kg;牛奶中²²⁶Ra、¹³⁷Cs和⁴⁰K活度浓度为1.2×10^-2、1.8×10^-2和3.8×10¹ Bq/kg;其他核素放射性水平均低于相应的方法探测下限。结论 海阳核电厂30km范围内部分食品中的人工和天然放射性核素活度浓度处在本底水平,食用后对居民造成的剂量负担较少。     

居民主要食入蔬菜中210Po含量及所致公众内照射剂量估算

目的 为了调查市售蔬菜中²¹⁰Po的放射性水平,评价其对居民的影响。方法 通过市场购买叶菜类、果菜类等14种蔬菜,使用湿式消解与银片自沉积结合的方法测量各种蔬菜中²¹⁰Po活度浓度水平,与相关文献中的参考值进行对比,并进行内照射剂量估算。结果 此次研究所选取的14种蔬菜中,活度浓度范围在8.34×10^-3～1.27 Bq/kg（鲜）。菌类的香菇²¹⁰Po含量最高,为1.27 Bq/kg,高于其他几类蔬菜,叶菜类²¹⁰Po含量其次,范围在1.30×10^-2～1.74×10^-1 Bq/kg,根茎类的两种蔬菜活度浓度范围在1.77×10^-2～3.51×10^-2 Bq/kg,果菜类六种蔬菜范围在8.34×10^-3～6.19×10^-2 Bq/kg。经估算居民通过这14种蔬菜摄入²¹⁰Po的量为24.3 Bq/a,所致内照射剂量29.2 μSv/a。结论 此次调查的市售蔬菜中²¹⁰Po水平属于正常水平,不会对居民健康产生影响。     

重组沙门菌载体HIV-12F5表位疫苗毒力及分布

目的研究表达Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)2F5表位的重组沙门菌(SA-2F5)对BALB/c小鼠的半数致死量(LD₅₀),并观察其在小鼠体内的生物学分布。方法BALB/c小鼠随机分8组,以0,104~1010菌落形成单位(CFU)重组菌灌胃,30d后用改良寇氏法测定LD₅₀;BALB/c小鼠随机分2组,灌胃给予107CFU重组沙门菌或磷酸盐缓冲液(PBS),分别于感染后第3,9,16,30 d,无菌操作取各组肝、脾、肠系膜淋巴结,检测重组沙门菌在小鼠体内的分布。结果SA-2F5对BALB/c小鼠的LD₅₀为1.45×10⁹CFU;感染后第3d,肝、脾、肠系膜淋巴结活菌数依次为5.38×10⁴,4.87×10⁴,9.08×10³CFU。第9d各脏器活菌数分别降至7.35×10²,7.50×10²及3.00×10²CFU。第16d各脏器活菌数基本与第9d相当。之后各脏器中活菌数持续下降,至第30d肝、脾内检测不到活菌,肠系膜淋巴结内活菌为2.1×10²CFU。结论重组沙门菌SA-2F5毒力显著降低,在小鼠体内具有良好的生物学分布。     

醋酸甲羟孕酮间接竞争ELISA检测方法建立

目的 建立以单抗为基础的醋酸甲羟孕酮间接竞争ELISA检测方法。方法 将羧甲基羟胺盐酸盐和醋酸甲羟孕酮(MPA)反应生成MPA-3-(O-羧甲基)肟(MPS),MPS与牛血清白蛋白(BSA)偶联生成免疫原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备MPA单克隆抗体(MPA-McAb),建立水产品中MPA残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果 经飞行质谱法测得MPS-BSA分子量为76 045.656 3,MPS与BSA偶联比为25.17;MPA-McAb最佳稀释倍数为1:400 00;包被抗原最佳质量浓度为1μg/mL;标准曲线呈线性,相关系数R²=0.983 7,IC₅₀=3.630 ng/mL;最低检测限为0.133 ng/mL;批内和批间变异系数分别为3.125%和3.557%;黄鳝鱼肉样的平均添加回收率为80.46%~101.00%;检测方法与甲羟孕酮、甲地孕酮的交叉反应(CR%)分别为0.26%,10.67%,与其他抗生素药物无交叉反应。结论 醋酸甲羟孕酮间接竞争ELISA检测方法可用于水产品中醋酸甲羟孕酮残留量检测。     

AFB1和DON对大鼠原代肝细胞DNA损伤的研究

目的 为了解AFB₁(黄曲霉毒素B1)与DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)对DNA损伤作用,以便对其联合遗传毒性进行综合评价,并为采取相应的对策提供科学的依据.方法 应用SCGE试验体外检测了AFB₁和DON对SD大鼠肝细胞造成的DNA的损伤.结果 1、0.1、0.01μg/ml的AFB₁和DON可以引起肝细胞DNA单链断裂,并且AFB₁和DON对于DNA损伤的单独作用均为在第一作用水平时最高,在第三作用水平时最低;AFB₁与DON对DNA的损伤未发现有交互作用.结论 AFB₁和DON可以引起离体肝细胞DNA损伤.     

抗黄曲霉毒素B_1蛋黄抗体的制备及其性质的研究

将黄曲霉毒Ｂ１－牛血清白蛋白（ＡＦＢ１Ｏ—ＢＳＡ）连接物免疫注射４只（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）产蛋鸡。研究了抗ＡＦＢ１蛋黄抗体的产生进程,除鸡Ｂ外,其它３只鸡从第一次注射抗原后的第９０天开始有较明显的抗体产生,第１３５天达到高峰,从第１６５天开始下降。在抗体产生高峰期,蛋黄抗体Ａ、Ｃ、Ｄ的间接ＥＬＩＳＡ效价分别为１∶８０００、１∶６０００、１∶６０００。以蛋黄抗体Ａ为材料,研究了抗体的特异性,结果表明：该抗体有较好的特异性。但是抗体与ＡＦＢ１的结构类似物（ＡＦＢ２、ＡＦＧ２、ＡＦＧ１、ＡＦＭ１）除ＡＦＭ１外都有不同程度的交叉反应,达到５０％的竞争抑制率时,ＡＦＢ１、ＡＦＢ２、ＡＦＧ１、ＡＦＧ２的灵敏度分别为６、２５、１２５和２４９５ｎｇ／ｍｌ。     

人胰岛素生长因子1的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的原核表达、纯化人胰岛素样生长因子1（hIGF-I）,并制备其单克隆抗体（mAb）。方法通过RT-PCR方法从人体肝脏组织中扩增得到hIGF-I基因片段,构建重组原核表达质粒pET-28a（＋）/hIGF-I,在大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。将表达蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾脏和小鼠杂交瘤细胞融合制备针对hIGF-I的特异性单克隆抗体。结果成功表达出了hIGF-I蛋白。SDS-PAGE电泳显示所表达蛋白质的相对分子量（Mr）大小约为18 KD。获得了1株能够稳定表达抗hIGF-I抗体的杂交瘤细胞株（8F2）,其分泌的mAb的IgG亚类（型）为IgG2b,ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1∶7.5×10^5。Western-blot结果显示抗hIGF-I mAb具有良好的特异性。结论成功制备了抗hIGF-I mAb,为进一步研究IGF-I在肿瘤治疗中的作用提供了有力的工具。     

抗黄曲霉毒素B_1兔抗体和鸡抗体的产生及其性质比较

以黄曲霉毒素B1 肟与牛血清蛋白的连接物 (AFB1 O BSA)注射免疫兔和产蛋鸡 ,比较了 2种动物抗AFB1 O BSA抗体的产生过程、效价和特异性。兔在抗原注射 6 0天后开始有较明显的抗体产生 ,第 12 0天达到高峰 ,维持 15天左右后开始下降 ;而产蛋鸡在注射抗原 90天后才开始有较明显的抗体产生 ,第 135天达到高峰 ,维持 30天左右开始下降。兔的最高效价达 1∶30 0 0 0 ,而产蛋鸡只有 1∶80 0 0。在灵敏度和特异性方面两者没有明显的差异。两种抗血清都能很好地分析检测玉米和小麦等粮食中污染黄曲霉毒素B1 的含量。     

雌二醇完全抗原及多克隆抗体的制备

目的 改造雌二醇半抗原,合成雌二醇完全抗原,并经免疫家免得到抗雌二醇多克隆抗体,为建立雌二醇的酶联免疫吸附方法及其在动物性食品安全快速检测中的应用奠定基础.方法 改造雌二醇-3-羧甲基醚(E2-3-CME),碳二亚胺(EDC)法合成免疫原(E2-BSA)和包被原(E2-OVA),采用SDS-PAGE电泳和质谱(MS)对其鉴定,免疫家兔2只,制备多克隆抗体;间接ELISA测定效价、灵敏度和特异性.结果 成功合成雌二醇免疫原和包被原,6次免疫后E2-T1和E2-T2抗血清的效价分别达到1∶128000和1∶32000,E2-T1抗体和E2-T2抗体的半数抑制浓度(IC50)分别为44.00 ng/ml和45.59 ng/ml,与雌二醇类似物没有明显交叉反应.结论 合成的雌二醇完全抗原具有较好的免疫原性,产生的抗雌二醇多克隆抗体具有较好的特异性.     

抗黄曲霉毒素B1蛋黄抗体的制备及其性质的研究

将黄曲霉素Ｂ１－牛血清白蛋白（ＡＦＢ１Ｏ－ＢＳＡ）妆物免疫注射４只（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）产蛋鸡。研究了抗ＡＦＢ１蛋黄抗体的产生进程，除鸡Ｂ外，其它３只鸡从第一次注射搞后的第９０天开始有较明显的抗体产生，第１３５天达到高峰，从第１６５天开始下降。在抗体产生高峰期，蛋黄抗体Ａ、Ｃ、Ｄ的间接ＥＬＩＳＡ效价分别为１：８０００、１：６０００、１：６０００。以蛋黄抗体Ａ为材料，研究了抗体的特异性，结果表明，该抗体     

结核分枝杆菌Lsr2蛋白原核重组表达及其多克隆抗体制备

目的 利用原核系统获得重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备抗Lsr2多克隆抗体。 方法 以临床标准株 H37Rv DNA为模板,合成引物PCR扩增Lsr2核酸序列,插入原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,柱上复性纯化后,重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备并纯化抗Lsr2多克隆抗体,采用间接ELISA和Western-blotting实验对抗体进行验证。 结果 成功构建pET28a-Lsr2表达质粒,重组蛋白Lsr2经SDS-PAGE电泳鉴定分子量为14 kD。亲和层析及柱上复性后,纯化的重组蛋白纯度在95%左右。制备的抗Lsr2多克隆抗体效价在1:5.5×10⁶以上,并能特异性识别纯化的重组蛋白和结核分枝杆菌菌体蛋白。 结论 成功在原核系统内表达并纯化了重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备了高效价的抗Lsr2多克隆抗体,为进一步研究Lsr2蛋白的功能,筛选其下游相互作用蛋白以及相关分子机制研究奠定了基础。     

酶联免疫吸附试验与中和抗体试验检测麻疹抗体比较研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和抗体试验(NT)在麻疹抗体检测中的应用价值。方法以NT为"金标准",同时用德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒检测364份麻疹抗体滴度,将两种方法测定的结果进行比较。结果 NT的阳性率为57.69%,几何平均滴度(GMT)为1∶5.48,ELISA的阳性率为42.86%,平均抗体活性值为48.57IU/L。定性结果发现,ELISA特异度为99.35%,其敏感度即阳性符合率为73.81%,且阳性符合率随着滴度增加呈现增高的趋势(z=-5.99,P<0.001)。Fisher精确概率法发现,滴度1∶2组、滴度1∶4组与其他各组阳性符合率差异均有统计学意义(P<0.05),滴度1∶8组与滴度≥1∶64组阳性符合率差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P>0.05)。定量结果发现,ELISA抗体活性值与NT滴度呈明显正相关,相关系数r=0.884,P<0.001。结论德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒在检测低滴度麻疹抗体时易出现假阴性,检测高滴度麻疹抗体时,两种方法敏感性接近;滴度临界值为1∶8～1∶16。该试剂可推荐用于健康人群麻疹抗体水平监测。     

Development of a multi-mimotope peptide as a vaccine immunogen for infectious bursal disease virus

To explore the mimotope vaccine approach against infectious bursal disease virus (IBDV), five IBDV-specific monoclonal antibodies (mAbs) were prepared and their binding peptides were screened against a phage-displayed 12-mer peptide library. After three rounds of biopanning, 12 phages were selected for each mAbs and their specificity to IBDV was verified by sandwich and competitive inhibition ELISAs. Seven phages per mAb were sequenced and their amino acid sequences were deduced. The five representative sequences of mimotopes corresponding mAbs were determined. An artificial gene, designated 5epis (5 epitopes) and consisting of the five mimotopes arranged in tandem (F1-F7-B34-2B1-2G8) with four GGGS spacers, was chemically synthesized and cloned into a prokaryotic expression plasmid pET28b. The protein, designated r5EPIS, was efficiently expressed in Escherichia coli and showed a size of 10kDa in SDS-PAGE. The r5EPIS protein reacted with anti-IBDV mAbs and polyclonal antibodies in Western blot immunoassays. Immunization of SPF chickens with r5EPIS protein (with Freund adjuvant, 50mug per injection on day 0 and 14) evoked high levels of antibody (12,800 by ELISA/1600 by virus neutralizing assay at day 21) and protected 100% of the chickens against a challenge of 200 ELD(50) of IBDV GX8/99 strain, which sharply contrasted with the, respectively, 13.3% and 6.6% survival rate in the adjuvant group and the untreated group. The multi-mimotope protein r5EPIS promises to be a novel subunit vaccine candidate for IBDV.     

Development of a phage displayed disulfide-stabilized Fv fragment vaccine against Vibrio anguillarum

Anti-idiotype monoclonal antibody 1E10 can mimic the protective epitope of Vibrio anguillarum and be used as vaccine to prevent fish infection of V. anguillarum. In this study, the variable heavy (V(H)) domain and variable light (V(L)) domain of mAb1E10 were cloned by RT-PCR and were linked to each other by a disulfide bond engineered at position 44 of V(H) and position 105 of V(L) that lie between structurally conserved framework positions. Mutated V(H) 44 and V(L) 105 were inserted into phagemid pCANTAB5E. When co-transfected by recombinant pCANTAB5E and helper phage M13KO7, the host Escherichia coli cells secreted disulfide-stabilized Fv fragment (dsFv) which displayed on the surface of filamentous phage. The binding specificity of the phage-displayed dsFv was proved by ELISA method. Protection experiment showed that Japanese flounders can develop high titer of antibody against the dsFv and survival ratio of vaccinated group was significantly different from control groups. Thus, this phage-displayed dsFv may be used as vaccine against V. anguillarum in fishery.     

抗黄曲霉毒素B1兔抗体和鸡抗体的产生及其性质比较

以黄曲霉毒素B1肟与牛血清蛋白的连接物(AFB1O-BSA)注射免疫兔和产蛋鸡,比较了2种动物抗AFB1O-BSA抗体的产生过程、效价和特异性。兔在抗原注射60天后开始有较明显的抗体产生,第120天达到高峰,维持15天左右后开始下降;而产蛋鸡在注射抗原90天后才开始有较明显的抗体产生,第135天达到高峰,维持30天左右开始下降。兔的最高效价达1∶30000,而产蛋鸡只有1∶8000。在灵敏度和特异性方面两者没有明显的差异。两种抗血清都能很好地分析检测玉米和小麦等粮食中污染黄曲霉毒素B1的含量。