系统性红斑狼疮患者外周血γ-干扰素和白介素-10阳性细胞的研究

目的：研究活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中，γ-干扰素(IFN-γ)、白介素(IL)-10阳性细胞在SLE病理机制中的意义。方法：采用微量全血标记法结合胞内细胞因子标记技术，以CD4、CD8分子为T细胞表面标记，经三色流式细胞仪检测未经刺激和经刺激培养后的SLE患者外周血T细胞亚群比率。结果：SLE患者外周血的CD4^ 及CD8^ T细胞中IFN-γ^-IL-10 细胞比例均显著升高，IFN-γ^ IL-10^-细胞与IFN-γ^-1IL-10^ 细胞的比值明显降低，且IFN-γ^ IL-10^-双阳性细胞显著增多；SLE外周血的CD4^ 及CD8^ T细胞中IFN-γ^ IL-10^-细胞亚群对离子霉素刺激的反应性明显降低；肾上腺皮质类固醇治疗可以降低SLE外周血CD4^ 及CD8^ T细胞中IFN-γ^-IL-10^ 细胞亚群及CD4^ T细胞中IFN-γ^ IL-10^ 细胞亚群的比例，提高IFN-γ^ IL-10^-／IFN-γ^-IL-10^ 细胞亚群比值。结论：SLE患者体内存在明显的T细胞亚群平衡失调，表现为分泌IL-10的T细胞亚群比例增高和Tr1细胞增多、Th1／Tc1细胞对刺激的反应存在缺陷。皮质类固醇对T细胞亚群数量及比例有一定的影响。     

窄谱UVB治疗对银屑病外周血Th1/Th2细胞因子的影响

目的:检测窄谱UVB照射治疗银屑病前后患者外周血IFN-γ、IL-2及IL-4、IL-10水平,探讨窄谱UVB达到银屑病改善缓解的可能免疫学机制。方法:对28名静止期银屑病患者行窄谱UVB照射治疗,观察治疗前、治疗后患者外周血γ-IFN、IL-2和IL-4、IL-10水平的变化,并对其水平和皮损严重度作相关分析。结果:银屑病患者外周血IFN-γ、IL-2水平较健康对照者水平升高,分别为(95.17±8.96)pg/mL比(33.72±3.32)pg/mL和(33.54±2.95)pg/mL比(8.61±1.97)pg/mL(P<0.01)。银屑病患者外周血IL-4、IL-10水平较健康对照者水平降低,分别为(20.70±4.43)pg/mL比(25.42±4.12)pg/mL和(17.86±2.31)pg/mL比(20.92±4.83)pg/mL(P<0.01)。经窄谱UVB照射治疗后,Th1型细胞因子由治疗前的高于健康者的高水平下调,而Th2型细胞因子水平治疗前较正常人水平低,治疗后与治疗前改变无明显差异性。Th1型细胞因子水平和银屑病皮损严重程度呈正相关,Th2型细胞因子水平和银屑病皮损严重程度呈负相关。结论:银屑病是以Th1型细胞因子水平升高Th2型细胞因子水平下降为特点的Th1/Th2免疫反应偏移的免疫性疾病,窄谱UVB可能通过抑制Th1免疫反应相对地逆转银屑病的Th1/Th2反应失衡从而达到临床上银屑病的缓解。     

干扰素诱导蛋白16在银屑病患者皮损中的表达及其调控

目的研究干扰素诱导蛋白16(interferon inducible protein 16,IFI16)在银屑病中的表达及分布,探讨其在银屑病发病中的作用。方法采用RT-PCR、免疫组化的方法分别检测10例银屑病患者皮损和10例健康人皮肤组织真皮与表皮中IFI16的表达情况;采用RT-PCR、Western印记方法检测IFN-γ,TNF-α,IL-17刺激前后Ha Ca T细胞中IFI16的表达情况。结果银屑病患者皮损处IFI16的表达明显高于健康人皮肤,并且以表皮表达为主,免疫组化结果显示IFI16主要定位于银屑病患者的角质形成细胞中。银屑病相关细胞因子IFN-γ,TNF-α和IL-17可以上调角质形成细胞中IFI16的表达水平。结论IFI16在银屑病患者皮损处表达明显高于正常人皮肤,并且IFN-γ,TNF-α和IL-17可以诱导其表达上调,可能是银屑病角质形成细胞的活化机制之一。     

补肾驱白汤联合308nm准分子激光治疗白癜风及对外周血Th17细胞与相关细胞因子的影响

目的观察补肾驱白汤联合308nm准分子激光治疗稳定期白癜风的临床疗效,并分析对患者外周血Th17细胞在CD4~+T细胞中的表达率及其相关细胞因子(IFN-γ,IL-10,IL-17和IL-23)分泌的影响。方法将60例稳定期白癜风患者随机分为2组,每组30例。两组患者均采用308nm准分子激光系统进行每周2次治疗,观察组另加服补肝肾类中药协定方——补肾驱白汤,日煎1剂分早、晚2次内服。治疗12周后,分别评定2组的临床疗效。此外,采用流式细胞术分析患者治疗前后外周血Th17细胞表达率及血浆中IFN-γ,IL-10及IL-17水平变化,采用ELISA分析外周血血浆中IL-23水平变化,并与20例健康体检者的外周血标本进行比较。结果治疗12周后,观察组显效率为86.67%,对照组显效率为63.33%,差异有统计学意义(P0.05)。治疗前,两组患者外周血Th17细胞比例、IFN-γ,IL-17及IL-23水平较健康人群组有显著性增高(P0.05),血浆中IL-10水平与健康人群组比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后,两组患者血浆中IFN-γ水平均有一定下调,与健康人群组比较差异无统计学意义(P0.05);观察组外周血Th17细胞比例、血浆中IL-17和IL-23水平较对照组显著下调。结论补肾驱白汤联合308nm准分子激光治疗白癜风疗效显著,可显著降低患者外周血Th17细胞比例及相关细胞因子水平,恢复机体免疫功能平衡。     

银屑病患者外周血干扰素γ和白介素18的表达

目的 探讨进行期银屑病患者外周血干扰素γ(IFN-γ)和白介素18(IL-18)的表达和相关性,及各型银屑病患者外周血IFN-γ的表达变化。方法 进行期寻常性银屑病20例,红皮病性银屑病19例,脓疱性银屑病10例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中IFN-γ表达水平;对进行期寻常性银屑病患者,检测血浆中IL-18表达水平;检测葡萄球菌肠毒素(SEB)刺激下,进行期寻常性银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)上清液中IFN-γ和IL-18的表达水平。结果 进行期寻常性银屑病患者血浆IFN-γ水平为8.91±2.65,红皮病性银屑病为10.19±5.93,脓疱性银屑病为17.96±10.44,各型银屑病患者均高于正常人(5.70±2.82)。进行期寻常性银屑病患者血浆IL-18水平高于正常人。进行期寻常性银屑病患者PBMC在SEB刺激组IFN-γ和IL-18表达水平均高于空白对照组,且IFN-γ与IL-18表达水平呈显著正相关,r=0.55,P<0.05。结论 在银屑病的发病和进展中,检测IFN-γ的表达量,对早期判断银屑病病情进展、转归和治疗效果有指导意义。IL-18表达增高,推测IL-18可能也参与银屑病发病。     

CTLA4Ig诱导银屑病Th1/Th2转换的体外研究

目的 研究银屑病的Th1/Th2反应模式,并观察CTLA4Ig在诱导银屑病Th1/Th2转换中的作用。方法 标本取自33例寻常型银屑病患者和20例正常人对照,利用植物血凝素(PHA)和葡萄球菌肠毒素B(SEB)单独及与CTLA4Ig协同刺激外周血单一核细胞(PBMC)增殖,通过酶联免疫吸附法检测PBMC培养上清液中白介素2(IL-2)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)水平。结果 SEB显着促进银屑病组3种细胞因子的分泌(P<0.01);进行期IFN-γ/IL-4的比值明显高于静止期(P<0.01).CTLA4Ig可以抑制IL-2、IFN-γ的分泌,并呈剂量依赖关系;而IL-4相对于IL-2及IFN-γ分泌是增强的;当CTLA4Ig浓度达到10μg/mL时,3种细胞因子的分泌均明显被抑制。结论 银屑病属于Th1型反应模式,CTLA4Ig可以下调Th1型细胞因子,上调Th2型细胞因子,提示CTLA4Ig具有诱导银屑病的Th1/Th2失衡向Th2转换的作用。     

复发性生殖器疱疹患者外周血IL-12与Th1/Th2细胞因子的检测

目的检测复发性生殖器疱疹(RGH)患者不同病期外周血CD4+T细胞内IL-12,IFN-,γIL-4的水平,探讨IL-12,Th1与Th2亚群在疾病中的可能作用。方法应用流式细胞仪对20例发作期、15例恢复期RGH患者和15名健康人外周血CD4+T细胞IL-12,IFN-γ和IL-4进行检测。结果发作期患者外周血IFN-γ+-CD4+T细胞百分率显著低于正常对照组(P<0.05),IL-4+-CD4+T细胞百分率明显高于正常对照组(P<0.01),Th1/Th2比值显著低于正常对照组(P<0.01),同时IL-12+-CD4+T细胞百分率显著降低(P<0.01)。恢复期患者外周血IL-12+-CD4+T细胞百分率仍显著低于正常(P<0.05)。结论RGH患者存在Th1/Th2比例失衡和IL-12水平低下,而后者可能是导致Th1/Th2比例失衡和病情反复发作的重要原因。     

茶多酚对白癜风患者CD8+T淋巴细胞分泌肿瘤坏死因子α、干扰素γ和白介素2受体影响

目的 检测CD8+T淋巴细胞分泌细胞因子及受体在白癜风患者外周血中的表达情况及意义,并探讨茶多酚对其表达的影响.方法 分离和培养12例进展期白癜风、12例稳定期患者和10例健康人外周血CD8+T淋巴细胞,与茶多酚100 mg/L共培养,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测茶多酚处理前后肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ和白介素-2受体(IL-2R)的浓度.用t检验和方差分析检测不同组间及处理前后各因子水平的差异.结果 进展期白癜风组、稳定期白癜风组和健康对照组外周血CD8+T淋巴细胞分泌TNF-α的浓度依次降低,分别为(191.302±6.077) ng/L、(175.966±2.467) ng/L、(173.664±3.600) ng/L,IFN-γ的浓度依次升高,分别为(280.182±36.07) ng/L、(371.670±24.352)ng/L、(447.147±8.432)ng/L,IL-2R的浓度同样依次升高,分别为(8.375±0.161) μg/L、(8.845±0.161) μg/L、(9.345±0.125) μg/L.进展期白癜风组与稳定期白癜风组和健康对照组相比较,3种指标差异均有统计学意义(P＜ 0.05或0.01).经茶多酚处理2d后,进展期白癜风组、稳定期白癜风组和健康对照组TNF-α水平均明显降低至(164.797±1.784) ng/L、(166.150±3.576) ng/L、(155.028±5.759) ng/L,与处理前比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);稳定期白癜风组IFN-γ浓度升高,而进展期白癜风组和健康对照组则有降低,各组IL-2R水平均有升高,但差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 白癜风患者外周血CD8+T淋巴细胞分泌的细胞因子及受体的变化可能与白癜风诱发或进展相关.茶多酚可能通过降低CD8+T淋巴细胞分泌TNF-α治疗白癜风.     

银屑病患者外周血中Tc17、Tc17/Tc1细胞的检测及临床意义

目的 检测寻常型银屑病患者外周血中Tc17、Tc17/Tc1细胞的变化并分析其临床意义。方法 收集本院皮肤科2017年6月—2018年6月30例银屑病患者的外周血,采用流式细胞术检测外周血中Tc17、Tc17/Tc1细胞的比例,同时酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆中白细胞介素(IL)-17的水平,30例健康人外周血作为正常对照。结果 与正常对照相比,寻常型银屑病患者外周血中CD8+IL-17+T细胞、Tc17细胞[CD8+IL-4-IL-17+干扰素(IFN)-γ]和Tc17/Tc1细胞(CD8+IL-4-IL-17+IFN-γ+)的比例以及血浆IL-17的水平均显著增加(P0.05);进一步临床分析发现,Tc17细胞、Tc17/Tc1细胞的比例以及血浆IL-17的水平与患者的银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分成正相关(P0.05)。结论 寻常型银屑病患者外周血Tc17及Tc17/Tc1细胞显著增加且与疾病的进展密切相关,监测患者外周血Tc17细胞及Tc17/Tc1细胞的水平有助于对病程的判断。     

甲氨喋呤对银屑病患者Th1细胞优势转换的影响及其作用机制探讨

目的探讨甲氨喋呤(MTX)对银屑病患者Th1细胞优势转换的影响和作用机制。方法取MTX治疗前、后银屑病患者和正常人外周血,经伊屋诺霉素和佛波酯刺激后,用流式细胞仪检测Th1,Th2细胞数;同时用酶联免疫吸附试验检测T细胞培养上清中IFN-γ,IL-4水平。结果MTX治疗前,银屑病患者外周血Th1细胞数明显高于正常对照组(P<0.01),而Th2细胞数两组间差异无显著性意义(P>0.05);MTX治疗8~12w后银屑病患者外周血Th1细胞数与正常对照组差异无显著性意义(P>0.05);MTX治疗前,银屑病患者外周血T细胞培养上清中IFN-γ水平明显高于正常对照组(P<0.01),而IL-4水平组间差异无显著性意义(P>0.05),经MTX治疗8~12w后银屑病患者外周血T细胞培养上清中IFN-γ水平与正常对照组差异无显著性意义(P>0.05)。结论MTX可能通过影响Th1细胞的活性,抑制其分泌细胞因子,恢复银屑病Th1/Th2平衡。     

利多卡因对金黄色葡萄球菌外毒素TSST-1刺激的特应性皮炎患者外周血单一核细胞的影响

目的 探讨利多卡因对金黄色葡萄球菌外毒素激活特应性皮炎患者单一核细胞的影响。 方法 抽取6例特应性皮炎患者外周血,常规分离培养单一核细胞。以金黄色葡萄球菌外毒素刺激共孵育,同时加入不同浓度的利多卡因。3H-TdR掺入法检测单一核细胞增殖,酶联免疫吸附法（ELISA）检测Th1 和Th2细胞因子的释放。Western印迹法检测利多卡因对与中毒性休克综合征毒素1（TSST-1）刺激的特应性皮炎患者单一核细胞共孵育的HaCaT细胞中间丝相关蛋白的表达。 结果 TSST-1（100 μg/L）显著刺激了特应性皮炎患者单一核细胞的增殖（SI = 75 ± 2.12,P < 0.05）,并刺激α肿瘤坏死因子、γ干扰素、白细胞介素（IL）2、IL-12、IL-4、IL-5、IL-13细胞因子的释放（均P < 0.05）。CCK-8检测结果显示,与空白对照组相比,100 μmol /L利多卡因显著抑制了TSST-1刺激的特应性皮炎患者单一核细胞的增殖（SI = 58 ± 3.14,P < 0.05）,亦显著抑制了TSST-1刺激的特应性皮炎患者外周血IL-4、 IL-5、 IL-13、α肿瘤坏死因子以及γ干扰素的释放,差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹法结果显示,100 μmol/L利多卡因阻断了HaCaT细胞中间丝相关蛋白表达的下调,差异有统计学意义（P < 0.01）。 结论 利多卡因对TSST-1刺激的特应性皮炎患者单一核细胞的激活具有明显的抑制作用。     

白芍总苷对角质形成细胞增生及ICAM-1表达的影响

目的：探讨白芍总苷（TGP）对人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）增生及分泌细胞间黏附分子（ICAM）-1的影响,探讨可能涉及的信号传导通路。方法用500 U/ml干扰素（IFN）-γ诱导HaCaT细胞,不同浓度TGP（0.5～312.5μg/ml）作用于HaCaT细胞。四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察TGP对HaCaT细胞增生活性的影响。酶联免疫吸附试验（ELISA）及荧光免疫组化法检测HaCaT细胞表达ICAM-1的水平。结果 TGP在低浓度（0.5～25.0μg/ml）时对HaCaT细胞增生活性有促进作用,在高浓度（62.5～125.0μg/ml）时对HaCaT细胞增生活性呈抑制作用。0.5～25.0μg/ml TGP可显著降低HaCaT细胞表达ICAM-1的水平（P＜0.05,P＜0.01）。结论 TGP对IFN-γ上调HaCaT细胞分泌ICAM-1有显著的抑制作用,可能是TGP抗炎作用机制之一。     

银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化的T细胞活性研究

目的 研究有家族发病倾向的银屑病患者骨髓CD34⁺细胞体外定向发育的T细胞活性.方法 免疫磁珠法分离家族史阳性银屑病患者及正常对照骨髓CD34⁺细胞,在骨髓基质细胞条件培养液构建的微环境下,在胸腺基质细胞的支持下,使其在体外向T细胞定向分化,免疫磁珠法收集CD3⁺T细胞,流式细胞仪检测CD4⁺CD8^-细胞及CD4^-CD8⁺细胞比例.分别采用MTT法及ELISA法检测自然增殖组及链球菌超抗原刺激后T细胞增殖活性及分泌细胞因子水平.结果 ①经骨髓CD34⁺细胞定向分化并扩增的CD3⁺T细胞中可检测到CD4⁺CD8^-、CD4^-CD8⁺T细胞,且银屑病患者组与正常对照组CD4⁺CD8^-及CD4^-CD8⁺T细胞比例无显著差异.②银屑病患者骨髓CD34⁺细胞定向分化的T细胞自然增殖组及链球菌超抗原刺激组增殖活性均显著高于正常人对照组.③银屑病患者T细胞自然增殖组培养上清白介素4、白介素8及干扰素γ与正常对照组差异无统计学意义,链球菌超抗原刺激后白介素4表达水平无显著改变,而白介素8及干扰素γ水平却显著高于正常人.结论 有家族发病倾向的银屑病患者外周血T细胞活性异常可能与骨髓造血细胞相关.     

当归多糖对银屑病患者外周血单一核细胞NF-κB及IFN-γ的影响

目的：确定体外当归多糖对银屑病患者外周血单一核细胞（PBMC）与角质形成细胞（KC）NF-κB表达及IFN-γ分泌的影响.方法：将正常人KC＋银屑病患者PBMC混合培养（A组）,正常人KC和正常人PBMC混合培养作为作对照（B组）.当归多糖作用于两组,采用Western Blot检测混合细胞中NF-κB的蛋白表达水平,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中IFN-γ的水平.结果：A组混合培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平明显高于B组（P＜0.01）;经当归多糖作用后,A组混合培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平较处理前降低（P＜0.05）,而B培养体系中NF-κB p65蛋白表达水平及上清液中IFN-γ水平较处理前升高（P＜0.05）.结论：当归多糖可能通过抑制NF-κB活化、减少IFN-γ分泌,对银屑病治疗发挥作用.     

寻常性银屑病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的功能研究

目的 测定银屑病患者外周血中的CD4+CD25+调节性T细胞功能的改变,探讨调节性T细胞在其发病中的作用。方法 寻常性银屑病患者12例,银屑病面积和严重度指数（PASI）评分15 ～ 34.5分,均为慢性斑块状。健康对照组6例,为健康献血者。通过免疫磁珠体外分离外周血中的CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25- T细胞,纯度达90％以上。采用［3H］-脱氧胸腺嘧啶苷方法检测CD4+CD25+ T细胞的增殖和抑制功能,ELISA法测定细胞因子和RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达。结果 多克隆刺激后CD4+CD25+ T细胞无明显增殖,IL-2可逆转此无反应状态。健康对照组CD4+CD25+ T细胞对CD4＋CD25－ T细胞增殖的抑制率可达60％,而银屑病组抑制率仅为19.5％（P < 0.01）。银屑病患者CD4＋CD25－ T细胞单独培养及与CD4＋CD25+ T细胞共培养后,分泌IFN-γ水平分别为（179.66 ± 48.97） ng/L和（109.55 ± 48.04） ng/L,健康对照组分别为（87.36 ± 33.36） ng/L和（32.55 ± 15.69） ng/L,两组比较,P值均 < 0.05;对IFN-γ分泌的抑制率银屑病患者组为40％,健康对照组为63％（P < 0.05）;健康对照组CD4＋CD25+ T细胞和CD4＋CD25－ T细胞单独培养,TGF-β分泌分别为（3025 ± 769） ng/L和（2450 ± 431） ng/L（P < 0.05）。两组之间,无论单独培养或两种细胞共培养,IL-10、TGF-β的分泌差异均无统计学意义（P > 0.05）。CD4+CD25+ T细胞表达高水平的Foxp3, 银屑病患者和健康人对照调节性T细胞和效应T细胞的Foxp3表达相似。结论 银屑病患者外周血中调节性T细胞抑制功能的减弱导致效应T细胞增殖失控,可能参与了银屑病的发病。     

Decreased IL-10 production by psoriatic peripheral blood mononuclear cells stimulated with streptococcal superantigen

The strong association of acute guttate psoriasis and streptococcal throat infection has suggested a role for streptococcal antigens in the pathogenesis of psoriasis. We have reported that psoriatic peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) showed significantly lower responses to cytoplasmic membrane-associated protein (CAP) isolated from group A beta-hemolytic streptococci, a kind of streptococcal superantigen. The objectives were to evaluate the abnormal cytokine production by psoriatic PBMCs to streptococcal superantigen, CAP. We compared the production of four different cytokines, i.e. IL-4, IL-5, IL-10, and IFN-gamma, by PBMCs between psoriatic patients and healthy controls after stimulation with CAP or two different staphylococcal superantigens, staphylococcal enterotoxin A (SEA) or E (SEE). When PBMCs were stimulated with CAP, the production of IL-10 was significantly lower by psoriatic PBMCs than by those from healthy controls, whereas those of IL-4, IL-5, or IFN-gamma were not different between the two groups. Such a significant decrease in IL-10 production by psoriatic PBMCs was not observed when they were stimulated with staphylococcal superantigens. Flow cytometric analysis of intracytoplasmic IL-10 demonstrated defective IL-10 production by psoriatic PBMCs in both CD3+ T cells and CD14+ monocytes. There was a significant positive correlation between IFN-gamma production by PBMCs and the proliferation of Vbeta8+ T cells preferentially stimulated by CAP. These data demonstrating the defective IL-10 production by psoriatic PBMCs stimulated with streptococcal superantigen seem to explain why only psoriatic patients evolve sustained and Th-1 deviated skin lesions after streptococcal upper respiratory infection.     

黑素瘤细胞培养上清液对人单核细胞体外IL-12产生和CD14、CD1a表达的影响

目的 探讨M14黑素瘤细胞培养上清液(MCS)在体外对人外周血单核细胞分泌白介素12(IL-12)以及单核细胞向树突细胞分化的影响.方法 分离并获得人外周血单核细胞,添加不同量的MCS与单核细胞共培养,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测单核细胞IL-12的分泌情况;将MCS与单核细胞连续5d共培养,用流式细胞仪分析单核细胞表面CD14、CD1a的表达情况.结果 MCS对单核细胞分泌活性的影响呈浓度依赖关系,随MCS添加量的逐渐增加(25-100μL),单核细胞分泌IL-12的量则呈逐渐降低趋势(158.40±21.37pg/mL-56.90±15.60pg/mL,P<0.05);同时MCS妨碍单核细胞由CD14表型(5.47%±1.00%-17.87%±2.40%,P<0.01)向树突细胞CD1a表型(41.00%±2.12%-20.00%±4.24%,P<0.01)转化;且MCS抑制单核细胞IL-12分泌和抑制单核细胞向树突细胞表型转化的作用均能被细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂(PD98059)所逆转(分别为:172.63±8.88pg/mL,P<0.05;8.67%±0.47%,P<0.05;36.67%±0.71%,P<0.05).结论 MCS可能通过分泌ERK刺激因子对单核细胞分泌IL-12p40和单核细胞分化起到抑制作用.     

尖锐湿疣患者γ-干扰素及白细胞介素-17水平检测

目的探讨尖锐湿疣(CA)患者CD4+T淋巴细胞、皮损组织及血清中白细胞介素-17(IL-17)、γ-干扰素(IFN-γ)的水平,以及其在CA免疫发病机制中的作用。方法采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例CA患者CD4+T淋巴细胞、皮损组织中及血清IL-17、IFN-γ的水平,并与20名正常人作比较。结果 CA患者CD4+T淋巴细胞中IL-17高于正常对照组(P0.01),IFN-γ水平也高于正常对照组(P0.01);皮损组织中IL-17高于正常对照组(P0.01),同样IFN-γ水平也高于正常对照组(P0.01);血清中IFN-γ的水平高于对照组(P0.05),而IL-17与正常对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论人乳头瘤病毒感染可引起患者细胞免疫功能异常,IFN-γ、IL-17在CA发病机制中可能起重要作用。     

尖锐湿疣皮损组织粗提蛋白对DC分泌IL-12和淋巴细胞分泌IFN-γ的影响

目的探讨尖锐湿疣(CA)皮损组织粗提蛋白对树突状细胞(DC)分泌IL-12水平及对淋巴细胞分泌IFN-γ水平的影响。方法将体外诱导培养的DC分别以细菌脂多糖(LPS)、CA粗提蛋白、包皮粗提蛋白和PBS溶液刺激,孵育2～14天,ELISA法分别检测上清液中IL-12和IFN-γ的水平。结果LPS组IL-12和IFN-γ表达水平分别为(262.0±18.5)pg/mL和(494.3±48.8)pg/mL,CA组分别为(146.0±38.0)pg/mL和(392.0±39.7)pg/mL,包皮组分别为(12.0±5.2)pg/mL和0 pg/mL,PBS组为(10.7±6.43)pg/mL和0 pg/mL。CA组的IL-12和IFN-γ的表达水平均显著高于PBS组和包皮组,差异有显著性(P<0.05)。结论CA皮损组织粗提蛋白可能作为一种免疫原,增强DC的免疫功能,进而促进淋巴细胞的激活,为今后治疗CA的DC疫苗研究提供一些理论依据。     

本维莫德对HaCaT细胞增殖、炎症因子分泌及皮肤屏障因子产生的影响

【摘要】 目的 研究本维莫德对人角质形成细胞增殖、炎症细胞因子分泌、皮肤屏障蛋白合成以及信号转导与转录激活蛋白1（STAT1）磷酸化的影响。方法 体外培养HaCaT细胞,采用0.1 ~ 1 000 μmol/L本维莫德处理24 h,用CCK8法检测细胞增殖。部分HaCaT细胞分为6组,对照组仅加入DMEM培养基,刺激剂组加入10 μg/L肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ）,本维莫德组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ以及终浓度为1 ~ 10或1 ~ 100 μmol/L本维莫德,AhR拮抗剂组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ、10或100 μmol/L本维莫德以及10 nmol/L StemRegenin1（SR1）,处理24 h后,酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL）-4、IL-10、IL-22和胸腺活化调节趋化因子（TARC）的水平,RT-PCR检测HaCaT细胞芳香烃受体（AhR）、细胞色素P450 1A（CYP1A1）、聚丝蛋白、内披蛋白、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）和TARC mRNA的表达水平,Western印迹法检测聚丝蛋白、内披蛋白、TSLP和STAT1及磷酸化STAT1（p-STAT1）的蛋白表达水平,免疫荧光检测本维莫德对HaCaT细胞中AhR核转位的影响。计量资料采用非配对Student t检验和单因素方差分析进行比较,Spearman检验分析各指标间的关系。结果 0.1、1、10、100、1 000 μmol/L本维莫德干预HaCaT细胞24 h后,细胞存活率分别为（90.2 ± 2.4）%、（85.4 ± 11.9）%、（52.8 ± 14.0）%、（39.4 ± 7.9）%、（27.5 ± 3.4）%,各组间差异有统计学意义（F = 162.5,P < 0.001）,50%抑制浓度为48.54 μmol/L。与刺激剂组相比,10和100 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞分泌的IL-10水平上升（F = 16.110,P < 0.001）,但100 μmol/L组IL-22（F = 6.884,P < 0.001）和10、100 μmol/L组 TARC水平（F = 7.052,P < 0.001）显著下降。与刺激剂组相比,1 和10 μmol/L本维莫德组CYP1A1 mRNA表达（P = 0.004）和10 μmol/L本维莫德组FLG mRNA表达（P = 0.040）水平显著增高,而10 μmol/L组 TARC mRNA和10 μmol/L组TSLP mRNA表达显著降低（均P < 0.01）,而刺激剂组和本维莫德组间AhR mRNA的表达差异无统计学意义（P = 0.193）。与刺激剂组相比,10 μmol/L本维莫德组聚丝蛋白（P = 0.020）和1、10 μmol/L本维莫德组内披蛋白表达水平（P < 0.001）显著上升,而10 μmol/L TSLP蛋白表达水平显著下降（P < 0.001）,1和10 μmol/L本维莫德组p-STAT1蛋白表达水平显著下降（P < 0.001）。与100 μmol/L 本维莫德组相比,AhR拮抗剂组IL-10分泌水平显著下降（t = 4.794,P = 0.003）,TSLP mRNA的表达显著上升（t = 3.769,P = 0.005）;与10 μmol/L 本维莫德组相比,AhR拮抗剂组 IVL蛋白表达显著下降（t = 5.117,P = 0.002）,TSLP蛋白表达显著上升（t = 3.117,P = 0.043）, p-STAT1蛋白表达无明显变化（t = 1.400,P = 0.719）。免疫荧光染色显示对照组和1 μmol/L本维莫德组中AhR绿色荧光主要表达于HaCaT细胞胞质中,细胞核中基本无荧光表达;而在10 μmol/L和20 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞的细胞质和细胞核均可见高密度绿色荧光。结论 本维莫德可通过活化AhR信号通路抑制HaCaT细胞增殖,调节炎症因子分泌,上调皮肤屏障相关因子的产生和抑制STAT1磷酸化。