抗白介素10单克隆抗体抗小鼠系统性白念珠菌感染的研究

目的 探讨抗白介素10单克隆抗体在抗系统性白念珠菌感染中的作用。方法 建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型,设置对照组(单纯白念珠菌感染组)与处理组(白念珠菌感染同时注射抗白介素10单克隆抗体)。用平皿稀释法检测肾脏,脾脏组织菌落形成单位(cfu)数目;制作肝、肾、脾脏组织病理学标本,评估其病理学分级;并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脾脏干扰素γ分泌水平。结果 感染后2d、3d、7d,处理组肾脏cfu值明显低于对照组(P<0.05);脾脏组织cfu值也低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。肾脏组织病理学评分处理组低于对照组,处理组较对照组感染程度减轻,差异有显著性(P<0.01);脾脏组织病理学评分处理组也低于对照组,但差异无显著性(P>0.05)。同时检测脾脏干扰素γ分泌水平处理组明显高于对照组,具有统计学意义。结论 抗白介素10单克隆抗体在小鼠系统性白念珠菌感染中具有治疗作用。     

小鼠白念珠菌系统性感染中白介素 4 表达的研究

目的了解白介素4（IL－4）在白念珠菌系统性感染中所起的作用。方法建立健康小鼠及地塞米松诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染模型,用酶联免疫吸附试验（ELISA）及逆转录－聚合酶链反应分别检测脾内IL－4及mRNA水平,用平皿稀释法检测肾内菌落形成单位（CFU）,并记录平均生存时间。结果健康鼠致死量感染后3d、7d脾中IL－4蛋白水平分别为(124.8±24.1)pg/g、(262.8±21.8)pg/g(P<0.01),肾内带菌量分别为（21.25±6.13）×102CFU、（57.52±10.41）×102CFU（P<0101）;免疫抑制鼠组感染后3d、7d脾中IL-4蛋白水平分别为（85.3±18.8）pg/g、（140.7±37.2）pg/g（P<0.05）,肾内带菌量分别为（12.00±2.80）×102CFU、（68.75±13.81）×102CFU（P<0.01）。上述两组感染后3d、7d脾中mRNA水平表达趋势与其IL-4蛋白水平个似。致死量组平均生存时间16d,免疫抑制鼠组平均生存时间12.4d。结论IL-4可能参与实验性小鼠白念珠菌系统性感染的发病。     

系统性白念珠菌感染小鼠白介素12的表达

本研究在建立致死量及亚致死量白念珠菌小鼠系统性感染模型的基础上,通过研究不同处理组小鼠感染后脾脏白介素12(IL-12)蛋白质及mRNA的表达,肾脏带菌量及小鼠生存时间,探讨IL-12在系统性白念珠菌感染中的作用。     

抗原致敏树突状细胞抗小鼠白念珠菌系统感染的实验研究

目的研究不同形态白念珠菌致敏的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)对免疫抑制小鼠白念珠菌系统感染的免疫保护作用及所对应的细胞因子改变。方法孢子相和菌丝相白念珠菌在体外分别致敏小鼠骨髓来源的DC(BM-DC),测定混合培养上清IL-12水平;尾静脉回输免疫抑制小鼠体内后,ELISA法测定各组小鼠脾IFN-γ及IL-4水平,并检测肾携菌量。结果DC孢子致敏组上清IL-12水平(380.2±104.13)pg/mL明显高于DC菌丝致敏组和对照组(P<0.05);而DC菌丝致敏组(74.79±23.47)pg/mL与单纯DC培养组上清IL-12水平(19.71±9.21)pg/mL差异无统计学意义(P>0.05)。孢子致敏DC、菌丝致敏DC分别过继免疫小鼠后,前者脾脏IFN-γ水平(269.43±17.34)pg/g明显高于其他组(P<0.05),IL-4水平(6.23±0.37)pg/g则明显低于其他对照组(P<0.05);荷菌一周后孢子致敏DC回输组小鼠肾携菌量(3.58±2.32)×102CFUs与健康小鼠荷菌组比较无统计学意义(P>0.05);其他各组间肾携菌量比较则有统计学意义(P<0.05)。结论尾静脉回输白念珠菌孢子体外致敏的小鼠骨髓来源DC可有效诱导免疫抑制小鼠抗白念珠菌保护性免疫。     

Toll样受体4在小鼠系统性白念珠菌感染中的作用

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在小鼠系统性白念珠菌感染中的作用.方法 ①建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染动物模型,设置实验组,即C3H/HeJ组(TLR4基因突变),及对照组,即C3H/HeN组(TLR4正常).②用平皿稀释法检测肾脏、脾脏组织菌落形成单位(cfu).③制作肾脏组织病理学标本PAS染色,评估其真菌感染程度.④酶联免疫吸附试验检测肾脏组织肿瘤坏死因子α分泌水平.结果 ①实验组感染后第1、6天,肾脏cfu值明显高于对照组;感染后第1天,实验组脾脏cfu值亦明显高于对照组,差异有统计学意义.②感染后第1、6天,实验组肾脏真菌感染程度评分高于对照组,差异有统计学意义.③感染后第1、6天,实验组肾脏分泌肿瘤坏死因子α水平低于对照组,且有统计学意义.结论 TLR4在宿主抗系统性白念珠菌感染中发挥保护作用.     

系统性白念珠菌感染宿主预后与肾脏脾脏免疫反应类型的关系

目的：探讨系统性自念珠菌病宿主预后与不同类型器官内免疫反应类型的关系。方法：经小鼠尾静脉接种不同剂量白念珠菌以建立系统性白念珠菌病模型，观测小鼠的生存时间，逆转录一多聚酶链式反应（RT-PCR）方法检测小鼠脾脏及肾脏相关细胞因子（IFN-γ、IL-4）的表达，研究小鼠的预后与其脾脏、肾脏内免疫反应类型的关系。结果：无论接种致死量还是非致死量的白念珠菌，脾脏IFN-γ无明显改变，而IL-4表达明显升高，即呈现Ⅱ型免疫反应；而肾脏在接种非致死量时IFN-γ显著升高，而IL-4无明显改变，即呈现Ⅰ型免疫反应，接种致死量时IFN-γ无明显改变，而IL-4显著升高，即呈现Ⅱ型免疫反应。结论：本研究提示系统性白念珠菌病宿主的预后可能主要与肾脏内的免疫反应类型有关，而与脾脏内免疫反应类型无明显相关性。     

系统性白念珠菌感染小鼠IL-12和IL-23的表达

目的了解系统性白念珠菌感染小鼠IL-12和IL-23的表达特征,探讨IL-23在抗白念珠菌系统感染中的作用,并重新认识和评价IL-12的作用。方法通过尾静脉接种白念珠菌建立小鼠白念珠菌系统感染模型,观察小鼠肾脏的病理变化,RT-PCR法检测小鼠肾脏IL-23及IL-12mRNA的相对表达水平,平皿稀释法检测肾脏内菌落形成单位(CFU)。结果IL-12mRNA表达水平在初次感染后第1、3天明显升高(P<0.05),感染后第7天基本正常。IL-23mRNA水平在初次感染后的第1天无明显改变(P>0.05),感染后第3、7天明显升高(P<0.05),而再次感染中其mRNA始终呈现高表达(P<0.05)。结论IL-12和IL-23均参与I型免疫反应,有效抵御白念珠菌系统感染,IL-12可能在炎症反应的早期发挥重要作用,而IL-23可能在炎症反应的后期发挥重要作用。     

白念珠菌诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞焦亡的初步研究

【摘要】 目的 探讨白念珠菌对小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）焦亡的影响。方法 通过活细胞工作站实时观察白念珠菌［感染复数（MOI） = 50,下同］体外诱导BMDM后是否发生焦亡;将BMDM分为对照组、白念珠菌组,分别用磷酸盐缓冲液和白念珠菌酵母诱导BMDM 6 h,实时荧光定量PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 （NLRP3）、白细胞介素1β （IL-1β）、IL-18 mRNA表达水平,Western印迹法检测NLRP3、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）的表达及剪切水平。用白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后,酶联免疫吸附试验检测IL-1β、IL-18分泌水平。白念珠菌体外诱导野生型（WT）BMDM及 GSDMD 敲除（KO）BMDM 15 min,采用流式细胞仪比较WT、GSDMD KO BMDM对白念珠菌的吞噬率;诱导6 h后,采用流式细胞仪及乳酸脱氢酶（LDH）释放法分别检测WT、GSDMD KO BMDM的死亡率。分别设置空白对照组、对照组、样品最大酶活性对照孔组、IL-1β组、白念珠菌组、IL-1β + 白念珠菌组,用IL-1β和/或白念珠菌酵母诱导BMDM后用LDH释放法分析WT及GSDMD KO BMDM死亡率。采用非配对t检验、Kruskal-Wallis 检验、方差分析等统计学方法进行统计分析。结果 白念珠菌体外诱导BMDM后细胞可出现气球样变及出泡现象,证实焦亡发生;与对照组相比,白念珠菌组诱导BMDM 6 h后NLRP3、IL-1β的mRNA表达水平明显升高（t = 13.02、17.51,P = 或＜0.001）,而IL-18 mRNA表达水平无明显变化（P = 0.486）,且白念珠菌诱导可引起炎症小体NLRP3表达增多及Caspase-1、GSDMD剪切。白念珠菌诱导BMDM不同时间（0、10、15、20及25 h）后IL-1β的分泌水平随时间逐渐升高（H = 12.90,P = 0.012）,而IL-18的分泌水平无明显变化（F = 0.48,P = 0.753）,且GSDMD KO组BMDM的IL-1β分泌水平低于WT BMDM组（F = 24.22,P = 0.008）。白念珠菌体外诱导15 min后,GSDMD KO BMDM［（50.3 ± 1.10）%］对白念珠菌的吞噬率低于WT BMDM［（58.53 ± 1.19）%,t = 5.09,P = 0.007］;白念珠菌体外诱导6 h后,流式细胞仪检测显示GSDMD KO组BMDM的死亡率（38.40% ± 0.50%）高于WT组BMDM（34.37% ± 0.52%）,t = 4.72,P = 0.009;LDH检测同样显示GSDMD KO BMDM的死亡率（22.52% ± 0.18%）高于WT BMDM（12.48% ± 0.15%）,t = 42.36,P＜0.001;IL-1β预处理后予白念珠菌体外诱导的WT BMDM及GSDMD KO BMDM 的细胞死亡率均较单纯白念珠菌诱导组降低（均P＜0.001）。结论 白念珠菌可诱导BMDM发生焦亡,焦亡的发生可促进IL-1β释放,并通过提高巨噬细胞的免疫活性,降低巨噬细胞死亡率。     

白介素-27在小鼠白念珠菌性阴道炎局部的表达及其意义

目的：了解小鼠白念珠菌性阴道炎阴道局部白介素-27（IL-27）的水平变化特点和在感染中的作用以及与小鼠机体免疫状况的关系。方法：建立免疫系统正常（A组）与免疫抑制雌激素化（B组）感染小鼠模型，另设未雌激素化免疫系统正常感染对照组（c组），用逆转录聚合酶链检测鼠模型阴道组织中IL-27p28mRNA水平的变化。结果：A组在感染后第4、第7和第14dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）；B组在感染后第7dIL-27p28mRNA的表达高于C组，差异有显著性（P〈0．01）。A组在第4和第14dIL-27p28mRNA的表达水平较B组高（P〈0．01）。A组和B组在感染的第2和第4dCFU与局部IL-27p28mRNA水平成负相关（P〈0．01或P〈0．05）。结论：阴道局部IL-27可能参与实验性小鼠白念珠菌阴道感染的发病，并起到一定的保护作用。免疫抑制状态下白念珠菌易感性的增加可能与IL-27局部组织含量减少有一定关系。     

Busse-Buschke型念珠菌性肉芽肿伴肺部感染一例

患儿男,14个月.因左侧颞、颈、胸部相继发生红斑片、丘疹、结节、脓肿、溃疡伴反复发热、咳嗽9个月,门诊疑诊皮肤结核、深脓疱疮、孢子丝菌病收住院.左上胸皮损组织病理检查,显示为炎性肉芽肿,PAS染片内有大量孢子和菌丝.左颈坏死组织压片PAS染色镜检,发现大量菌丝,真菌培养及鉴定均为白念珠菌.超敏C反应蛋白(14.4 mg/L)显著高于正常.总T细胞比例40.21%,CD3/CD4(26.41%)下降;抗获得性免疫缺陷病毒抗体阴性.胸部X线片及CT检查均显示双肺感染.先后给予氟康唑和伊曲康唑抗真菌治疗,经抗生素、免疫调节剂和支持治疗3个月皮损痊愈,伊曲康唑维持治疗8个月肺部炎症减轻.     

系统性白念珠菌病患者血清中芽管抗体的检测

目的 探讨一种诊断深部白念珠菌病的新方法.方法 以间接免疫荧光法测定白念珠菌系统感染患者血清中芽管抗体的滴度,并与常规真菌检测结果及菌株磷脂酶活性相比较.结果 血清中芽管抗体检测与常规检测方法(镜检+培养)阳性率比较,有较好的一致性(P<0.001).磷脂酶活性测定结果显示,感染组患者分离株较定植组的磷脂酶活力差异有统计学意义(P<0.05);磷脂酶活性与芽管抗体滴度具有相关性,P<0.001.结论 检测白念珠菌芽管抗体在系统件白念珠菌感染诊断中具有一定的诊断意义.     

慢性湿疹患者皮损IL-18的表达及意义

目的 探讨IL-18在慢性湿疹发病中的作用。方法 采用RT-PCR方法测定慢性湿疹患者皮损中IL-18、IFN-γmRNA表达水平,ELISA方法测定血清中IL-18、IFN-γ蛋白水平。用EASI标准对慢性湿疹患者病情进行评分。结果 慢性湿疹患者皮损和健康对照组皮肤组织IL-18 mRNA分别为（1.04 ± 0.29） pg/mL、（0.52 ± 0.15） pg/mL,IFN-γ mRNA分别为（0.96 ± 0.34） pg/mL、（0.47 ± 0.12） pg/mL。慢性湿疹患者皮损中IL-18 mRNA、IFN-γ mRNA高于正常对照组,差异具有统计学意义（P < 0.01）,二者与慢性湿疹病情评分呈正相关。慢性湿疹患者和健康对照血清中IL-18蛋白分别为（475.8 ± 59.4） pg/mL、（123.6 ± 29.5） pg/mL,IFN-γ蛋白水平分别为（10.1 ± 7.0） pg/mL、（11.1 ± 3.4） pg/mL。血清中IL-18蛋白水平高于正常对照组,差异具有统计学意义（P < 0.01）,IFN-γ蛋白水平低于正常对照组,但差异无统计学意义（P > 0.01）,二者与慢性湿疹病情评分无明显相关性。结论 IL-18可能参与慢性湿疹的发病过程,在皮损局部,可能与其诱导产生IFN-γ等Th1型细胞因子,介导超敏反应有关。     

外阴阴道念珠菌病小鼠模型阴道组织趋化因子MCP-1和MIP-2 mRNA水平测定

目的 探讨趋化因子在白念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道组织中的表达情况.方法 采用雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型,另以雌激素化但未接种白念珠菌组、接种等量白念珠菌但未雌激素化组为对照组,动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌生长情况,并在接种后不同时间随机摘取小鼠的阴道组织,半定量RT-PCR方法检测组织内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)mRNA的表达情况.结果 与未雌激素化的小鼠比较,雌激素化并接种白念珠菌小鼠阴道灌洗液自第2天开始即可发现念珠菌生长并持续到接种后21d,自第4天起阴道组织内有高水平的MCP-1 mRNA表达,并持续高于另外两组直到观察期末.3组小鼠的MIP-2 mRNA表达水平在接种后第2天明显高于完全阴性对照组,但以后各时间点3组间两两比较差异无统计学意义.结论 MCP-1 mRNA高水平表达可能与白念珠菌持续的阴道感染过程有关,而MIP-2在感染过程中的作用不明显.     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子与伊曲康唑联合对白念珠菌抗菌作用的实验研究

目的 研究重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)与伊曲康唑联合抗白念珠菌的作用。方法 体内实验:制备系统性白念珠菌感染小鼠模型,用不同剂量伊曲康唑单独或与rhGM-CSF联合应用于感染小鼠,观测其28d内的存活情况。体外实验:分离鼠外周血中性粒细胞及腹腔巨噬细胞,分别将其与不同浓度的伊曲康唑及伊曲康唑加rhGM-CSF与白念珠菌共同培养,通过计数菌落形成单位(cfu)来判定伊曲康唑单独或与rhGM-CSF联合应用的抗白念珠菌效果。结果 伊曲康唑1.0mg/kg与rhGM-CSF25μg/kg联合应用能显著延长小鼠28d内的存活期,效果与单用伊曲康唑2.5mg/kg相等,而rhGM-CSF25μg/kg与伊曲康唑5mg/kg联合应用时效果相当于单用伊曲康唑10mg/kg。体外实验亦显示rhGM-CSF与伊曲康唑联用能减少白念珠菌数量。结论 rhGM-CSF与伊曲康唑联合应用对抗小鼠系统性白念珠菌感染有较好的协同作用。     

来氟米特治疗BXSB狼疮鼠的实验研究

目的 探讨来氟米特是否可改善BXSB小鼠的免疫状况和肾脏损害,为临床治疗系统性红斑狼疮(SLE)提供实验依据。方法 3月龄雄性BXSB小鼠分为4组,治疗前后测定尿蛋白;治疗后检测血清尿素氮、肌酐、抗dsDNA抗体以及肾脏免疫复合物。结果 ①各组小鼠治疗前的尿蛋白差异无显著性(P>0.05);②治疗后,来氟米特组的尿蛋白、抗dsDNA抗体明显低于地塞米松组和生理盐水组(P<0.01),而且低于环磷酰胺组,但其组间差异无统计学意义(P>0.05);③来氟米特组的血清尿素氮、肌酐及肾脏免疫复合物均低于其他治疗组(P<0.05或P<0.01)。④与生理盐水组相比,来氟米特组小鼠的生存期明显延长(x²=4.56,P<0.05)。结论 来氟米特可显著改善BXSB小鼠的免疫状况和肾脏功能,能延缓BXSB狼疮鼠的疾病进程。