全面性癫痫伴热性惊厥附加症家系致病基因的连锁定位和突变分析

目的 筛查中国全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系的致病基因.方法 采集2个GEFS+家系所有成员的外周静脉血提取基因组DNA,选取GEFS+的候选基因(SCN1B、SCN1A、SCN2A和GABRG2)附近10个微卫星位点用于遗传连锁分析,连锁分析所用的软件为LINKAGE软件包5.1版,根据两点间的LOD值判断连锁关系,以确定两家系致病基因的大致位置.限定性定位后筛选候选致病基因,并对家系所有成员进行候选基因突变分析.结果 标记SCN1A、SCN2A和SCN1B基因的多个微卫星位点在两家系患者中均没有共享等位基因,基本排除两家系与上述3个基因连锁可能.田氏家系在标记GABRG2基因的微卫星位点D5S820、D5S422和D5S1403均有共享等位基因.经两点间连锁分析,在外显率为70%,重组率为0时,D5S820、D5S422和D5S1403处的LOD值分别为0.67,1.00和0.79,提示可能有连锁关系.邸氏家系仅在标记GABRG2基因的微卫星位点D5S1403有共享等位基因.对两家系GABRG2基因9个外显子测序结果 显示,第5号外显子出现一个单核苷酸同义多态位点(c.588C>T),第3号外显子出现一个单核苷酸多态位点(c.604C>T),第7号外显子的非编码区出现一个单核苷酸多态位点,为G/A杂合性改变,未发现GABRG2基因致病突变.结论 我国新发现的两个GEFS+家系的致病基因与目前已知候选基因SCN1B、SCN1A、SCN2A和GABRG2无关.GEFS+家系的常见致病基因仍不清楚.     

瘢痕疙瘩家系17号染色体易感基因位点的定位分析

目的定位中国汉族瘢痕疙瘩家系的易感基因位点。方法采集2个4代发病的中国汉族瘢痕疙瘩家系51名成员的外周静脉血样,提取基因组DNA;假定p53基因为该瘢痕疙瘩家系易感基因位点,选取位于17号染色体区域的10个微卫星标记位点D17S849,D17S938,D17S1852,D17S799,D17S921,D17S1857,D17S1868,D17S787,D17S949,D17S784,对这些微卫星位点进行PCR扩增,产物片断基因分型,再进行连锁分析。结果在重组率θ=0~0.5时,这些微卫星标记的两点LOD值绝大部分都小于1,可以排除连锁关系存在。结论研究发现中国汉族瘢痕疙瘩家系易感基因位点不在17号染色体区域。     

两个房间隔缺损家系的GATA4基因分析

目的探讨GATA4基因变异与房间隔缺损遗传的相关性.方法采集云南省心血管病医院心脏外科2个房间隔缺损（ASD）家系,共4名ASD患者和11名成员,选择GATA4基因编码区内4个可引起氨基酸改变的cSNP和GATA4基因附近的11个STR位点以及5个GATA4基因内STR位点,进行PCR和DNA测序分析.结果 D8S258、D8S552两个位点存在多态性,Q19E（rs1139240）、L39V（rs1139241）、P66A（rs1139244）和G377S（rs3729856）位点未发现多态性及突变.结论 D8S258、D8S552在本文人群中检测到多态但未检测到突变,4个cSNP位点未检测到突变。     

瘢痕疙瘩家系17号染色体易感基因位点的定位分析研究

目的 定位中国汉族瘢痕疙瘩家系的易感基因位点。方法 采集2个4代发病的中国汉族瘢痕疙瘩家系51名成员的外周静脉血样，提取基因组DNA；假定p53基因为该瘢痕疙瘩家系易感基因位点，选取位于17号染色体区域的10个微卫星标记位点D17S849, D17S938, D17S1852, D17S799, D17S921, D17S1857, D17S1868, D17S787, D17S949, D17S784，对这些微卫星位点进行PCR扩增，产物片断基因分型，再进行连锁分析。结果　在重组率θ=0～0.5时，这些微卫星标记的两点LOD值绝大部分都小于1，可以排除连锁关系存在。结论　研究发现中国汉族瘢痕疙瘩家系易感基因位点不在17号染色体区域。     

银屑病易感基因位点的检测

目的：寻找中国人群银屑病的易感基因位点。方法：选取19个多态性微卫星标记,采用由荧光标记PCR、MegaBACE测序仪和与之配套的Genetic Profiler分析软件建立的荧光标记的自动基因分型体系对38个银屑病家系中的银屑病患者与亲属的外周血白细胞中提取的DNA进行 基因扫描,并用参数和非参数分析方法进行连锁分析。结果：在参数连 锁分析中,D6S1610的最大两点连锁（LOD值）为1．18（θ＝0．2）,D17S944的两大两点LOD值为1．60（θ＝0．1）;在非参数单点和多点连锁分析中,D6S1610、D17S944和D17S785的单点非参数（NPL）值均大于1．6,相应P值也小于0．05。结论：位点D6S1610、D17S944和D17785可能与中国人群银屑病相连锁。     

应用遗传连锁分析法对伴传导功能障碍的扩张型心肌病家系致病基因的定位

目的: 对一个常染色体显性遗传扩张型心肌病(familial dilated cardiomyopathy,FDCM)家系进行基因定位。方法: 收集FDCM 家系, 对该家系成员进行详细心血管内科检查确诊为扩张型心肌病,且伴发有传导功能障碍;采集外周血3～5 mL,并抽提基因组DNA;选取与该表型相关的已定位区间CMD1A(1q21.2-q21.3),CMD1H(2q14-q22), CMD1E(3p22-p25)和CMD1F(6q22-23)内的共计18个微卫星DNA标记,在该家系中进行排除性定位分析;最后,进行全基因组扫描及连锁分析。结果：①已定位区间的18个微卫星DNA标记位点的LOD值均<-2,证实该家系与已知DCM位点不连锁;②全基因组扫描及两点连锁分析结果显示,该家系致病基因位点与遗传标记D3S1614(3q26)连锁, 在θ= 0时得到最大LOD值2.68。结论: 该家系与已知的4个DCM位点均不连锁,其致病基因位于D3S1614（3q26）附近的一个新位点。     

家族性胆固醇血症患者LDLR基因新突变位点的鉴定与分析

【目的】 家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia, FH)主要是由于低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor, LDLR)基因突变而导致的常染色体显性遗传性疾病,其临床表现为多发黄色瘤、高水平血浆、低密度脂蛋白(LDL-C)、早发性冠心病等。本研究拟通过收集FH家系,并对其先证者及家系成员进行相关致病基因(LDLR、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶PCSK9)的检测和分析,明确这些家系的血脂基因型,同时为血脂类疾病诊断、治疗和临床遗传学的开展提供理论基础。 【方法】 收集20个左右FH家系先证者及家系成员的血标本,测定所有研究对象的总血脂(TC)、甘油三酯(TG)、LDL-C以及高密度脂蛋白(HDL-C)含量,记录患者及家系的详实临床数据资料。用Qiagen试剂盒从外周血提取基因组DNA并鉴定,运用多聚酶链式反应(PCR)结合直接测序方法,检测LDLR基因、PCSK9基因,将核苷酸序列分析结果与GenBank比对,运用MutationTaster、Poluphen-2、SIFT等软件对突变位点进行预测和鉴定,分析突变所导致的蛋白结构变化及其与血脂表型的相关性。 【结果】 (1) 临床收集了20个FH家系,每个家系中均存在多个(≥3)血浆TC和LDL-C水平明显增高的患者。 (2) 在13个家系中检测到LDLR基因突变,1个家系中检测到PCSK9基因突变(p.E670G)。(3) LDLR突变中,1个是新的缺失突变(c.2000_2000delG),1个是新的纯合点突变(p.F202S)。 (4)预测软件预测发现的LDLR新突变(c.2000_2000delG、p.F202S)均为致病突变,Swissmodel 建模显示c.2000_2000delG突变导致LDLR蛋白胞内区发生截断,而p.F202S突变导致LDLR配体结合域发生了改变,且患者血脂异常、黄色瘤等临床表现较其他家系患者更为明显。 【结论】 FH中60%左右为LDLR的突变。本研究发现了2个新的LDLR基因致病突变位点,且基因型和血脂表型密切相关。我们的发现扩充了LDLR基因的突变数据库,并为血脂临床遗传学的开展提供了理论支持。     

精神分裂症高发家系13q的连锁分析

目的在中国人群中验证精神分裂症易感基因是否与13q连锁。方法收集4个精神分裂症高发家系,采集家系成员外周血,提取DNA。在13q14-13q33选取7个微卫星标记,进行部分基因组扫描,采用GENEHUNTER2.1软件进行单点和多点的参数、非参数连锁分析。结果单点非参数连锁分析D13S156、D13S170、D13S265、D13S159、D13S158位点NPL值分别为1.40、2.25、2.06、1.71和1.39。多点非参数连锁分析得到约50cM的阳性区域。单点和多点参数连锁分析也在一些位点得到阳性结果。结论13q22.1-13q33.1染色体区域可能存在精神分裂症的易感基因。     

一常染色体显性遗传寻常型鱼鳞病家系致病基因的定位

目的 研究一常染色体显性遗传寻常型鱼鳞病家系的致病基因。方法 采用基因组扫描方法,利用1号染色体上的微卫星标记对该家系进行连锁分析,然后对候选基因FLG的部分编码区及外显子与内含子交界处进行突变检测。结果 在D1S2696得到最大两点连锁LOD值3．46（0=0）,单体型分析将疾病基因定位在D1S2726-D1S305之间约15cM范围内;在FLG基因的外显子非重复序列及部分重复序列未发现与疾病相关的突变。结论 该寻常型鱼鳞病家系的致病基因位于D1S2696附近,其致病基因可能是除FLG以外的其他基因。     

甘肃地区一遗传痉挛性截瘫家系致病基因的定位

目的：对中国甘肃地区一个常染色体显性遗传痉挛性截瘫家系致病基因的初步定位研究．方法：用常见的常染色体显性遗传痉挛性截瘫的3个基因区域内的10个微卫星位点D14S264、D14S75、D14S69、D14S266、D14S66、D2S2347、D2S2255、D2S2351，D15S128、GABRB3对该家系致病基因进行等位基因共享分析及连锁分析．结果：该家系致病基因在SPG4基因区域的D2S2351位点连锁(θ=0，最大LOD值为2．71)．结论：该家系致病基因在SPG4基因座，疾病基因是spastin．     

高度近视汉族家系的基因位点筛查

【目的】对汉族原发性高度近视家系进行全基因组扫描及遗传连锁分析,筛选鉴定新致病基因位点和／或新致病基因,以确认原发性高度近视新的致病位点及基因。【方法】收集汉族原发性高度近视家系,选取382个微卫星标记物对家系进行全基因组扫描,采用二点连锁分析,对高度近视家系进行已知基因位点的筛查和寻找新的遗传连锁位点。【结果】排除了所有的高度近视已知基因位点,完成了家系的全基因组扫描,发现了1个阳性位点,进一步连锁分析排除了该阳性位点。【结论】本研究未找到高度近视新的基因连锁位点,该家系部分成员的发病可能与后天因素有关,应增加新的标记物继续对其进行遗传连锁分析,以找到新的连锁位点。     

常染色体显性多囊肾疾病行胚胎植入前遗传学诊断的实验研究

目的：建立由PKD1突变所致常染色体显性多囊肾疾病（autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD）的胚胎植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis,PGD）方法。方法：①通过微卫星连锁分析确定2个多囊肾家系的ADPKD致病基因。检测的微卫星包括为与PKDI连锁的KG8、SM6、CW4和CW2以及与PKD2连锁的D4S1534、D4S1563、D4S414和D4S423。②对18个淋巴细胞和1个PKD1突变所致ADPKD成员行常规体外受精胚胎移植后的5个废弃胚胎15个卵裂球行多重巢式PCR和毛细管电泳检测与PKD1连锁的微卫星分型。结果：①KG8、CW4和CW2可作为连锁微卫星分析外周血和单个细胞的PKD1突变;②2个家系的致病基因均为PKD1;③单个卵裂球扩增成功率为86.67％（13／15）,单个淋巴细胞扩增成功率为88.89％（16／18）,CW4等位基因脱扣率为25％（4／16）,CW2未发现等位基因脱扣,均未发现污染,2个胚胎携带致病基因。结论：PKD1连锁的微卫星分型可作为PKD1突变所致ADPKD的PGD诊断方法。     

应用改良连锁分析初筛家族性高胆固醇血症的候选基因

目的 应用改良连锁分析方法对2个纯合子家族性高胆固醇血症（FH）家系进行候选基因初筛,为后期测序明确方向,早期发现致病基因。方法 2010年6月和2010年7月首都医科大学附属北京安贞医院收治2例FH先证者,所有家系成员进行血脂测定、心电图、超声心动图及颈动脉超声检查,记录家系成员的其他临床资料（年龄、性别、发病年龄、病程、家族史及治疗情况）。选择新的微卫星位点和毛细管电泳仪进行连锁分析初筛,高度连锁者进一步测序明确致病基因。结果 先症者1心电图示左心室肥厚;先症者2心电图大致正常。先证者1超声心动图示主动脉瓣反流;先证者2超声心动图示左房室瓣反流。先证者1颈动脉超声示颈动脉内中膜增厚,颈动脉内斑块形成;先证者2颈动脉超声示颈动脉内中膜增厚。家系1中胆固醇增高者总胆固醇（TC）水平〔（6.98±1.99）mmol/L〕高于血脂正常者〔（3.20±1.02）mmol/L〕（t=7.023,P＜0.001）;胆固醇增高者低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平〔（3.02±2.26）mmol/L〕高于血脂正常者〔（1.98±0.93）mmol/L〕（t=3.497,P=0.004）。家系2中胆固醇增高者TC水平〔（8.12±3.65）mmol/L〕高于血脂正常者〔（4.37±1.01）mmol/L〕（t=4.355,P=0.001）;胆固醇增高者LDL-C水平〔（5.72±3.92）mmol/L〕高于血脂正常者〔（2.72±0.62）mmol/L〕（t=3.293,P=0.005）。改良连锁分析发现先症者1的致病基因与低密度脂蛋白受体（LDL-R）基因高度连锁,进一步核苷酸序列分析发现该患者LDL-R突变是中国罕见致病突变。先证者2的致病基因与已知致病基因均不连锁,推测可能存在第4种新的未知致病基因。结论 FH应用改良连锁分析方法成功发现1例中国罕见突变,推测可能还有新的未知致病基因存在。     

KIF21A基因p.Arg954Trp突变引起先天性动眼神经麻痹

目的 在先天性动眼神经麻痹家系中定位相关致病基因并克隆该基因. 方法对1个先天性动眼神经麻痹家系(3代共16人)通过血液基因组提取和微卫星连锁分析寻找基因突变所在区域,计算有利连锁优势比的对数值(logarithm of the odds of linkage,LOD),并对该区域内的可能致病基因进行突变筛选和突变验证. 结果微卫星标记连锁分析发现位于12p11-12p12区域的D12S85和D12S345区域显示与该家系疾病紧密连锁,LOD值为2.4.对家系KIF21A基因全部外显子进行的突变检测分析显示21号外显子存在c.2680C＞T(p.Arg954Trp)的碱基改变. 结论 KIF21A基因c.2680C＞T(p.Arg954Trp)突变是导致该先天性动眼神经麻痹的致病因素.     

一性连锁智障家系AGTR2基因新突变位点的检测

目地 探讨AGTR2基因突变与智障的关联关系。方法 通过PCR和直接测序对一性连锁智障家系13个受检个体血管紧张素-Ⅱ2型受体基因（AGTR2）的全长序列进行检测。结果 在AGTR2基因第3外显子3550位点，2个男性患儿均存在C／T碱基替换，该基因第182位编码氨基酸由谷氨酰氨变为终止密码（nt3550C／T．Q182Stop／E3）。正常男性家系成员无此突变，而女性家系成员存在杂合子。结论 nt3550C／T可能为引起该家系学床病变的突变位点，不是多态性位点。在伴性连锁智障疾病中，AGTR2基因的这个单碱基替换突变位点为首次报道。     

常染色体显性先天性白内障大家系致病基因定位的初步研究

目的:报道1个涉及5代17例患者的常染色体显性先天性白内障(ADCC)大家系,并进行致病基因的定位. 方法:对家系中8例患者进行眼科检查后明确临床表型,并提取所有血样的基因组DNA.首先对已报道的中国ADCC家系致病位点(9个基因的16个突变位点)进行DNA测序,然后根据已报道的17个ADCC候选基因和13个染色体区域,选取27个微卫星分子标记,应用LINKAGE软件进行连锁分析. 结果:8例患者均为先天性核性白内障.直接DNA测序未发现有已报道的中国家系基因突变.所选取的27个微卫星分子标记与该家系致病基因均不连锁. 结论:该ADCC家系致病基因不在已报道的17个ADCC候选基因和13个染色体区域,该家系中可能存在一个新的ADCC致病基因.     

糖及脂代谢调节基因与高血压病的连锁分析

目的 观察糖、脂代谢调节基因的微卫星位点与高血压病间是否连锁,以识别高血压易感基因位点。方法 以18个糖、脂代谢调节基因附近的微卫生为标记,采用微卫生光标记－基因扫描及分型技术,对95个EH家系477名成员进行标记位点与EH表型连锁分析。统计采用GENEHUNTER软件包两点非参数连锁（NPL）分析、计算优势对数记分（Lod）值及传递不平衡检验（TDT）。结果 NPL分析及Lod值均不支持所测微卫星位点与高血压病连锁,但TDT则提示D8S261、D11S1347位点与高血压病间存在连锁不平衡（P＜0.01）。两位点附近分别有脂蛋白酶（LPL）基因和（aplA1-C3-A4）基因簇。结论 TDT提示D8S261、D11S1347两位点与高血压病间存在连锁,其位点附近基因（LPL基因及载脂蛋白基因簇）是否为高血压病相关基基值得进一步研究。     

中国人HNPCC家系中hMSH2基因新突变及其功能分析

目的:报道1个在中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系中发现的基因突变,并对其功能进行分析.方法:抽提1组符合Amsterdam标准的HNPCC家系先证者和其他家系成员的基因组DNA,PCR扩增先证者hMLH1 19个外显子和hMSH2 16个外显子,利用变性高效液相技术(dHPLC)筛查,对异常峰型利用DNA测序方法检测基因突变.发现先证者hMSH2基因存在错义突变后,对家系中其他成员和50名散发性大肠癌患者和100名正常成年人进行相同位点的检测,以判定是单核苷酸多态性位点(SNP)还是突变.利用5对微卫星标记对该家系中的2例肿瘤进行微卫星不稳定分析,免疫组化检测蛋白表达,利用同源建模方法对发现的突变位点进行功能分析,以研究突变的病理意义. 结果:在该家系的2例结肠癌患者中均发现hMSH2基因第13外显子2 108位出现C-A的错义突变,导致703位Ser变异为Tyr,即C.2 108C>A(p.Ser703Tyr),微卫星结果显示2例肿瘤均为微卫星高度不稳定(MSI-H),肿瘤免疫组化结果显示hMSH1基因表达正常而hMSH2基因不表达.同源建模发现该位点与目前报道的hMSH2基因突变不同,突变位于第Ⅳ结构域,Ser突变为Tyr后空间位阻增大,影响了蛋白的正常折叠和功能.结论:Ser703Tyr是中国人HNPCC的一个新的病理性突变.     

Linkage analysis of a region on chromosome 2 with essential hypertension in Ch inese families

目的：在一项全基因组扫描研究中,我们曾报道2号染色体上三个微卫星标记（D2S168、D2S151和D2S142）与原发性高血压间存在提示连锁关系。本研究进一步验证中国人家系中上述候选区域的连锁关系。方法：在有856名原发性高血压患的240个中国人家系中,对2号染色体进行遗传连锁研究。用9个位于2号染色体候选区段内的高度多态性的微卫星标记,对1080名家系成员进行基因分型,两个相邻微卫星标记的间距为5cM。用GENEHUNTER软件进行非参数连锁分析（NPL）、参数连锁分析和传递-不平衡检验（TDT）以判定有否连锁证据。结果：不同方法（NPL、LOD分数值和TDT）的统计结果均证实2号染色体上D2S151和D2S142位点及其附近区段与高血压间存在连锁关系,但D2S168位点与高血压的连锁关系在本研究中未能证实。结论：本研究结果揭示在中国人中,2号染色体上D2S151和D2S142位点及其附近区段可能存在与原发性高血压发病有关的基因。     

优选短串联重复序列应用于脊肌萎缩症产前诊断的连锁分析

目的 建立完整的适合汉族人群的脊肌萎缩症(SMA)产前基因诊断体系.方法 对30名正常汉族人的外周血样本进行基因多态性分析,评估位于运动神经元存活基因1(SMN1)两侧的短串联重复序列(STR)位点的多态信息含量;并通过在6个SMA产前诊断家系连锁中的应用,优选出STR位点,并结合PCR-酶切法(PCR-RFLP)进一步评价STR位点与SMN1基因的连锁紧密性.结果 从7个STR位点中优选出D5S435、D5S629、D5S610和D5S351四个STR位点用于家系连锁分析,联合PCR-RFLP,在6名待检胎儿中检出2例患者和4例携带者.结论 通过优选出的4个多态性强、与SMN1基因紧密连锁的STR位点,联合家系连锁和PCR-RFLP,建立起稳定可靠的适合汉族人群的SMA产前基因诊断体系.