染色体脆性位点抑癌基因FHIT和WWOX与消化道肿瘤关系的研究进展

癌基因的激活和抑癌基因的失活是近年来肿瘤研究的热点,其中DNA损伤是恶性肿瘤的重要发病机制,染色体脆性位点抑癌基因对DNA损伤高度敏感。消化道肿瘤的发生发展与环境致癌物密切相关,这些致癌物诱导的改变多发生在染色体常见脆性位点上,引起相关基因的失活。定位于染色体脆性位点FRA3B和FRA16D的脆性组氨酸三联体（FHIT）基因和含WW域的氧化还原酶（WWOX）基因在多种肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。     

PTEN基因和FHIT基因在膀胱尿路上皮癌中的表达和意义

目的 探讨磷酸酶和张力蛋白同源(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因及脆性组氨酸三联体(fragile histindine triad,FHIT)基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达水平及临床意义. 方法 采用免疫组织化学S-P法检测14例正常膀胱黏膜及37例膀胱尿路上皮癌组织中的PTEN及FHIT基因的表达水平. 结果 在14例正常膀胱组织中PTEN与FHIT基因均表达阳性或强阳性.在37例膀胱尿路上皮癌组织中PTEN 基因阳性表达率为56.8%(21/37),其中阳性9例,强阳性12例,FHIT基因阳性表达率为48.6%(18/37),其中阳性8例,强阳性10例.随着肿瘤分期、分级的增加PTEN和FHIT基因表达均显著减少;PTEN基因的表达与FHIT基因的表达呈正相关(P＜0.01). 结论 PTEN与FHIT基因可能成为估计膀胱尿路上皮癌恶性程度及肿瘤侵袭性的一项有用的指标,联合检测PTEN和FHIT基因在膀胱尿路上皮癌中的表达,有助于对膀胱肿瘤的细胞分化程度及诊断做出正确评价.     

人FHIT基因的克隆及其真核表达质粒的构建

目的克隆人脆性组氨酸三联体（FHIT）基因,构建其真核表达质粒pRcCMV-FHIT。方法提取人外周血总RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术扩增人FHITcDNA全长开放阅读框序列,PCR产物与中间载体pGEM-T连接后转化到大肠杆菌DH5α。然后对单菌落进行菌落PCR、限制性内切酶酶切鉴定和测序。用EcoRI将目的片段切下,插入真核表达载体pRc／CMV2的相应位点,构建表达质粒pRc／CMV2-FHIT,将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α后进行菌落PCR、酶切鉴定。结果测序结果表明从正常人外周血单个核细胞中所获得的FHITcDNA含有781个碱基,与Genbank（NM_002012．1）序列完全一致。pRc／CMV2-FHIT经酶切鉴定与预期结果一致。结论成功构建重组真核表达质粒pRcCMV-FHIT,为进一步研究脂质体转染FHIT基因对结肠癌细胞株SW480凋亡作用的影响奠定基础。     

肺鳞癌组织中脆性组氨酸三联体基因的表达

目的探讨肺鳞癌组织中脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学(Streptavidin peroxidase,SP)法检测FHIT在42例肺鳞癌患者癌组织及13例癌旁组织中的表达,并研究FHIT蛋白阳性表达与肺癌临床病理特征、临床病理分期的关系。结果肺癌组织中FHIT蛋白阳性表达率显著低于癌旁组织(47.6%vs.92.3%,P<0.05)。中/高分化患者FHIT蛋白阳性表达率显著高于低分化患者(54.2%vs.38.9%,P<0.01);有淋巴结转移患者FHIT蛋白阳性表达率显著低于无淋巴结转移患者[45.9%(17/37)vs.60.0%(3/5),P<0.05];期 期患者FHIT蛋白阳性表达率显著高于期患者[55.0%(11/20)vs.45.5%(10/22),P<0.05]。结论FHIT基因在肺鳞癌的发生、发展中起重要作用,对其蛋白的检测有望作为判定肺鳞癌发生及转移能力的客观指标之一。     

脆性组氨酸三联体基因甲基化与前列腺癌的相关性及临床意义

目的:检测前列腺癌患者血清中脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad, FHIT)甲基化状态,探讨FHIT甲基化与前列腺癌患者临床病理特征及5年生化复发和临床进展之间的关系。方法:采用MSP法检测78例前列腺癌和45例前列腺增生患者血清中FHIT甲基化表达状态,分析FHIT甲基化率与前列腺癌患者临床病理的关系,采用Kaplan-Meier生存分析FHIT甲基化率与前列腺癌5年生化复发和5年临床进展之间的关系。结果:前列腺癌患者血清中FHIT基因甲基化率为48.72%,高于前列腺增生患者的4.44%,差异有显著意义(P<0.05)。FHIT甲基化与前列腺癌患者年龄、术前PSA、TNM分期、Gleason分级有关;在前列腺癌Gleason分级≤7和Gleason 8~10分级中,FHIT甲基化率分别为59.18%和31.03%,在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期前列腺癌患者中,FHIT甲基化率分别为37.50%和66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)。甲基化组5年复发率和5年累计临床进展率高于非甲基化组(P<0.05)。结论:FHIT甲基化与前列腺癌临床病理有关,检测FHIT甲基化状态有助于评估前列腺癌患者的临床预后。     

FHIT mRNA在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT mRNA)在结直肠癌组织中的表达以及与结直肠癌细胞凋亡的相关性。方法应用组织芯片技术制作正常直肠痔组织、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例石蜡标本,采用原位分子杂交检测FHIT mRNA,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)正常直肠组织平均FHIT mRNA阳性细胞率为45.67%±9.39%,腺瘤组织平均阳性细胞率为23.45%±5.06%,结直肠癌组织平均阳性细胞率为15.1%±4.11%,三者比较,差异有统计学意义(P<0.01),结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的FHIT mRNA阳性细胞率无统计学差异(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移的FHIT mRNA阳性细胞率有统计学差异(P<0.05);(2)FHIT mRNA表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)间存在显著性差异(P<0.01);(3)FHIT mRNA阳性细胞率高患者平均生存期为42.7个月,阳性细胞率低患者为29.8个月,前者的年累计生存率(88.10%,37/42)显著低于阳性细胞率低者(74.19%,23/31)(P<0.01)。结论FHIT基因可能参与结直肠癌细胞凋亡的调节,FHIT基因表达下降可能与结直肠癌的发生密切相关。     

脆性组氨酸三联体基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480（实验组）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞作为阴性对照,以正常SW480细胞作为空白对照.应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 转染96 h后,实验组和阴性对照组细胞生长抑制率分别为71.7%和16.9%,G0/G1细胞比例分别为（63.3±3.5）%和（50.6±2.1）%,细胞凋亡率分别为（40.5±3.1）%和（18.6±2.6）%,caspase-8 mRNA条带光密度积分值分别为107和41,caspase-8蛋白相对活性分别为0.43和0.25;上述差异均有统计学意义（P＜0.05）.当加入FHIT抑制剂后,caspase-8蛋白相对活性恢复至对照组水平（0.22）.结论 FHIT基因转染能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G0/G1期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达及活性上调有关.     

大肠癌中脆性组氨酸三联体基因和Survivin基因的表达及临床意义

目的检测脆性组氨酸三联体（FHIT）基因和Survivin基因在大肠癌、正常大肠黏膜上皮组织中的表达，探讨FHIT基因和Survivin基因与大肠癌．发生发展及转移的关系，探讨其与大肠癌临床病理特征的关系。方法利用免疫组织化学法对56例大肠癌和33例正常大肠黏膜组织检测FHIT、Survivin基因的表达。结果FHIT蛋白在33例癌旁正常大肠黏膜上皮和56例发癌中的阳性表达率分别为93．9％、48．2％，原发癌中FHIT蛋白的阳性表达率明显低于癌症正常大的黏膜上皮（P〈0，01）。Survivin在56例大肠癌的表达率为48．2％，显著高于33例癌症正常大肠黏膜上皮（P〈0．01）。结论FHIT基因表达的下调与Survivin基因表达的上调可能促进了大肠癌的发生。这样临床上通过检测FHIT、Survivin的基因的表达率对患者的预后有重要的指导意义。     

脆性组氨酸三联体基因蛋白在直肠癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白(FHIT)在直肠癌组织中的表达情况及其与细胞凋亡间的关系。方法利用组织芯片和免疫组织化学技术,检测16例正常直肠和16例腺瘤组织标本及80例直肠癌组织中的FHIT、Bax、Bcl-2和survivin基因蛋白的表达,并运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测直肠癌细胞凋亡。结果(1)直肠癌组织FHIT蛋白异常表达率为53.8%(43/80),其表达减弱与患者年龄、性别及肿瘤组织分型无关(P>0.05);而与肿瘤Dukes分期、淋巴结转移和患者的5年生存率关系密切(P<0.05,P<0.01)。(2)Bax、Bcl-2和survivin在直肠癌组织中的表达率分别为72.5%、51.3%和77.5%;survivin蛋白高表达与FHIT蛋白低表达密切相关(P<0.05);FHIT蛋白表达下降的同时,Bcl-2上调及Bax下调(P<0.01)。(3)FHIT蛋白表达减弱时细胞凋亡指数(AI)也下降;FHIT蛋白不同表达组间的AI比较,P<0.01。结论FHIT基因表达下降可能与直肠癌的发生密切相关,FHIT基因可能参与肿瘤细胞凋亡的调节。     

脊索瘤与脆性组氨酸三联体基因的相关性研究

目的 探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因改变与脊索瘤发生的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学（SP）方法对18例脊索瘤和瘤旁正常组织FHIT基因RNA转录本和蛋白表达进行检测。结果 RT-PCR检测可见11例（61．1％）存在FHIT基因RNA转录本缺失．1例还同时含有正常和异常转录本。对其中2例进行测序，证实1例转录本缺失全部E5～E7外显子及部分E8外显子和部分E10外显子等2个片段；另1例转录本缺失全部E5～E9外显子及绝大部分E10外显子。脊索瘤中FHIT蛋白表达阳性百分比为55．6％（10／18）．瘤周正常组织为100．0％（18／18），差异有统计学意义（P〈0．05），FHIT蛋白在脊索瘤中表达减低。结论 FHIT基因表达缺失是脊索瘤发生的重要事件之一，可能与脊索瘤的发生机制有关。     

FHIT和p53在结肠癌中的表达及其意义

目的探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因和p53基因在结肠癌中的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学链菌素亲生物素一过氧化酶法（SP法）法检测74例结肠癌组织中FHIT和p53的表达。结果FHIT和p53在结肠癌中表达率分别为52．7％和56．8％。FHIT蛋白的丢失在结肠癌中占47．3％,FHIT蛋白低表达癌在癌组织学分级中的分布为低分化癌10／12,高中分化癌25／62,;在Dukes分期中的分布为C、D期癌23／37,A、B期癌12／37;在有淋巴转移组中为23／37,无淋巴转移组中为12／37。30例获访病例中,FHIT蛋白低表达癌在5年随访病例组中的分布为5年生存组为6／17,5年死亡组为10／13。两者与结肠癌的分化程度、病理分期（Dukes分期）、淋巴转移情况和五年生存率均有明显相关（P〈0．05）。结论结肠癌组织中FHIT蛋白的丢失是频发事件,FHIT可能是结肠癌发生中重要的抑癌基因;FHIT和p53的表达。可作为评估结肠癌高危因素和恶性生物学行为的参考指标。     

体外培养胆管癌细胞中FHIT基因的表达及其意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因在胆管癌细胞株QBC939中的表达及其对细胞生物学行为的影响。方法将构建的FHIT真核表达质粒转染入QBC939细胞,采用荧光定量RT-PCR检测转染前后FHIT基因表达的变化,并采用光镜直接计数法观察转染前后细胞生物学行为的变化。结果转染后QBC939细胞的FHIT基因表达提高了2.53倍,细胞克隆数量明显下降[(11.2±1.3)vs.(10.5±1.1)vs.(6.3±1.0),P0.05]。结论FHIT基因在QBC939细胞中表达减弱,恢复表达后能抑制细胞克隆形成。     

FHIT基因与乳腺癌

抑癌基因FHIT位于染色体3p14．2区，其内包含染色体脆弱位点FRA3B。乳腺癌中FHIT基因突变以缺失和易位为主，二次打击学说能较完善地解释其失活机制。乳腺癌FHIT基因转录异常，FHIT蛋白表达下降。FHIT基因的改变影响乳腺癌的多项临床病理指标及预后。据此以为，FHIT基因改变对乳腺癌的发生发展有重要影响，有可能成为乳腺癌判断预后新的指标。     

原癌基因Bmi-1在消化道肿瘤研究进展

原癌基因Bmi-1（B-cell-specific moloney murine leukemia virus integration site 1）是多梳基因家族（polycomb group genes, PcG）中的成员之一, 其编码蛋白是一种广泛表达的核蛋白, 调节同源盒基因（homeobox-containing genes, Hox）的转录。Bmi-1可以通过INK4a/ARF阻断细胞周期相关蛋白P16Ink4a和P19Arf（人类为P14Arf）抑制细胞增殖的作用,并与C-myc起协同作用参与调节细胞的增殖和分化,成为成体干细胞和肿瘤干细胞的自我更新和分化所必需。Bmi-1在肿瘤细胞表达普遍上调, 在肿瘤启始和进展阶段发挥重要作用。近来针对Bmi-1基因的研究已越来越多, 本文就Bmi-1 与消化道肿瘤关系的研究进展作一综述。     

抑癌基因FHIT在肝细胞癌中的研究

目的　探讨原发性肝细胞癌 (HCC)中FHIT基因的表达。方法　采用免疫组织化学技术 (SP法 )检测 4 0例HCC及其癌旁组织、32例肝外伤后正常肝组织中FHIT的表达情况。结果　 4 0例HCC中有 1 1例FHIT表达缺失 ,而相应的癌旁组织中只有 2例FHIT蛋白表达缺失 ;正常肝组织中全部呈阳性表达 ;HCC组织中FHIT蛋白缺失率显著高于相应癌旁及正常肝组织 (P <0 .0 1 ) ,并与肿瘤的病理学分级、TNM分期、门静脉癌栓及HBsAg阳性表达有密切关系 (P <0 .0 5 )。结论　FHIT蛋白的缺失与HCC的发生、发展有关     

Differential apoptosis gene expression in pediatric tumors of the kidney

BACKGROUND/PURPOSE: Apoptosis, or programmed cell death, is essential in maintaining normal homeostasis of tissues. The process of apoptosis is controlled by numerous pro- and antiapoptotic factors. Variations in expression of such factors may account for some variations in tumor behavior. This study evaluates the expression of apoptotic mRNA species in pediatric renal tumors to determine whether a pattern of differential apoptosis gene expression correlates with tumor grade and type. METHODS: Twenty-five frozen tissue specimens were obtained from patients undergoing biopsy or resection of pediatric renal tumors before chemotherapy: Wilms' tumor stage II (WT-II, n = 4); Wilms' tumor stage III/IV (WT-III/IV, n = 4); clear cell sarcoma of the kidney stage III (CCSK, n = 2); rhabdoid tumor of the kidney stage III/IV (RTK, n = 4); and normal kidney (NK, n = 11). An RNase Protection Assay (RPA) was performed for 19 pro- and antiapoptotic mRNA species to detect and quantify expression (percentage of GAPDH expressed). Expression of specific mRNAs of interest were confirmed by Western Blot (WB). RESULTS: The expression of apoptotic mRNA species varied markedly between tumors. WT-II expressed greater amounts of proapoptotic receptor mRNA than CCSK or RTK. (Fas, 17.0+/-2.7% v. 2.5+/-0.5% v. 3.3+/-0.9%; P<.02; DR5, 77.0+/-8.8% v. 13.5+/-0.5% v. 27.0+/-4.8; P<.001; TNF-R, 71.3+/-17.0% v. 21.0+/-4.0% v. 29.0+/-5.0%; P<.07, respectively). Surprisingly, antiapoptotic factors (e.g., bcl-2 and bcl-xl) were not overexpressed in poor prognostic tumors (CCSK, RTK) compared with those with good prognosis (WT). Expression of TRAIL (a ligand for DR4 and DR5) was significantly lower in CCSK and RTK than in normal kidney (9.5+/-1.5% v. 56.1+/-10.1%; P = .01). CONCLUSIONS: Proapoptotic receptors are expressed at greater levels in good prognostic tumors, and this finding is compatible with their clinical behavior. Knowledge of differential apoptotic gene expression is of potential value in predicting prognosis and treating such tumors with targeted ligands.