小活络丸中乌头类生物碱成分含量测定方法的建立

目的：建立小活络丸中生物碱成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱与苯甲酰新乌头原碱的含量测定方法，以完善其质量标准。方法：采用高效液相色谱法， 选择PICKERING C₁₈（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱，以甲醇、乙腈和0.1%磷酸水为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，柱温25 ℃，检测波长232 nm，进样量15 μL。结果：乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及苯甲酰新乌头原碱分别在各自范围内线性关系良好（r=0.9999），平均加样回收率分别为99.8%（RSD=0.8%）、99.9%（RSD=1.0%）、100.6% （RSD=1.4%）、100.8%（RSD=1.5%）、100.9%（RSD=1.5%）、100.6%（RSD=0.8%）。5批样品中上述6个成分含量范围分别为0.5~2.9、5.4~27.4、0.5~10.5、18.8~24.6、18.8~30.2及142.4~181.6 μg·g^-1。 结论：所建立的同时测定6个生物碱含量的测定方法可准确测定小活络丸中生物碱成分的含量，有助于提高小活络丸的质量标准。     

不同配伍对芍药甘草附子汤中苯甲酰类乌头碱含量变化的影响

目的探讨芍药甘草附子汤不同配伍对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱3种成分含量变化的影响。方法采用HPLC法对不同配伍样品煎液中的3种苯甲酰乌头碱进行含量测定,并分析比较不同煎煮时间不同配伍对其含量变化的影响。色谱条件:BDS Hydedsil C_(18)(250mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈∶四氢呋喃(25∶15)-0.1 mol·L~(-1)醋酸铵溶液梯度洗脱,检测波长235 nm,柱温35℃,流速1.0 mL·min~(-1)。结果芍药甘草附子汤中各配伍与单味附子相比,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量均升高。结论附子与甘草、白芍配伍后能有效地起到减毒增效的作用,体现了中医药配伍用药的合理性和科学性。     

三七伤药片中6种乌头类生物碱含量测定及化学计量学分析

目的：采用高效液相色谱法，建立三七伤药片中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱6种生物碱类成分的含量测定方法，并根据测定结果进行化学计量学分析。方法：采用混合型阳离子交换反相吸附树脂(MCX)固相萃取小柱对供试品进行纯化，高效液相色谱法测定，使用COSMOSIL C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 mL·min^-1，柱温为25℃，检测波长为232 nm。采用SIMCA软件对结果进行处理，运用主成分分析法分析影响产品差异的关键因素。结果：乌头碱、次乌头碱、新乌头碱与苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱分别在各自范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均加样回收率(RSD)分别为101.8%(1.6%)、100.6%(1.4%)、97.8%(1.1%)、100.8%(1.5%)、101.0%(1.6%)、100.7%(0.8%)。17批次样品测定结果显示不同批次之间6种生物碱含量存在较大差异；单酯型生物碱的含量是影...     

HPLC法测定强筋健骨丸中3种乌头原碱的含量

目的建立强筋健骨丸的含量测定方法。方法以君药制川乌、制草乌中苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱及苯甲酰新乌头原碱为目标成分,采用HPLC法,色谱柱Ultimate XB-C_(18)(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1mol·L~(-1)醋酸铵溶液(B);流速:1.0mL·min~(-1);检测波长:235nm。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰次乌头原碱质量浓度分别在7.580～121.280(r_1=0.999 9),1.576～25.216(r_2=0.999 8)和7.732～123.712(r_3=0.999 9)mg·L~(-1)范围内线性关系均良好,回收率分别为100.1%,100.0%和99.8%,RSD值分别为0.8%,1.5%和0.6%。结论该方法结果准确、稳定、可靠,能用于强筋健骨丸中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱及苯甲酰次乌头原碱的含量测定,可有效控制产品质量。     

SPE-HPLC测定复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量

目的：建立复方羊角颗粒中苯甲酰新乌头原碱等3个单酯型生物碱的含量测定方法。方法：采用强阳离子吸附树脂MCX固相萃取小柱对复方羊角颗粒进行净化,高效液相色谱法测定,色谱柱：SVEATM C18 Opal（4.6 mm × 250 mm,5 μm）;流动相A为乙腈-四氢呋喃（25∶12）,流动相B为0.1 mol·L-1醋酸铵溶液（含0.05%冰醋酸）,梯度洗脱;检测波长：235 nm;柱温：25℃;流速：1.0 mL·min-1;进样量：20 μL。结果：苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的线性范围分别为2.27 ～ 98.61（r = 1.000 0）、0.61 ～ 26.53（r = 1.000 0）、1.00 ～ 43.50 μg·mL-1（r = 0.999 9）;平均回收率及RSD分别为93.9%及2.4%、95.0%及2.6%、91.0%及3.0%。结论：本方法可为复方羊角颗粒的质量控制提供依据。     

一测多评法测定小活络丸中9种乌头类生物碱的含量

摘 要 目的：建立一测多评法同时测定小活络丸中9种乌头类生物碱含量。方法: 采用高效液相色谱四级杆飞行时间串联质谱（HPLC QTOF MS）法,采用Agilent ZORBAX Extend C18 RRHT（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）色谱柱;流速为0.21 ml·min-1;柱温为30 ℃;以甲醇为流动相A,以水（含0.1%甲酸和2.5 mmol·L^-1醋酸铵溶液）为流动相B,梯度洗脱。以乌头碱为内参物,测定次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱对于其的相对校正因子,并对相对校正因子进行重现性考察。利用相对校正因子计算其他8种生物碱成分的含量,同时利用外标法测定这9种成分,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的准确性和可行性。结果: 在线性范围内,次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱对乌头碱的相对校正因于分别为1.736、1.979、1.0471、0.9242、1.2901、1.3078、1.2859、1.0948,建立了QAMS法测定小活络丸中9种生物碱的含量,其测定值与计算值无显著差异。结论: 本文方法可用于小活络丸中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱的含量测定。     

HPLC法同时测定经痛舒颗粒中3种单酯型生物碱的含量

目的:建立同时测定经痛舒颗粒中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Shimadzu C18,流动相为乙腈-四氢呋喃(25∶15,V/V)-0.1 mol/L醋酸铵溶液(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为235 nm,柱温为35℃。结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的进样量分别在0.371 4~2.228 4、0.041 8~0.251 0、0.074 2~0.445 3μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r分别为0.999 9、0.999 6、0.999 8);精密度、重复性、稳定性试验的RSD均<2%;平均加样回收率分别为97.8%、98.2%、98.0%,RSD分别为2.1%、1.7%、2.2%(n=6)。结论:该方法操作简便,结果准确可靠,可作为经痛舒颗粒中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量测定方法。     

虎力散片中乌头类生物碱成分HPLC特征图谱及多成分含量测定

目的 建立虎力散片中乌头类生物碱的HPLC特征图谱，并同时测定6种生物碱含量。方法 采用Kromasil 100-5-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.2%乙酸溶液（三乙胺调pH至6.20）（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^–1，柱温35℃，检测波长235 nm。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对结果进行分析，并结合聚类分析、主成分分析等模式识别技术对样品的总体质量进行分析评价，并对主要有效成分进行定量测定。结果 11批虎力散片的乌头类生物碱特征图谱中共确认10个共有峰，与混合对照品比较确定6个生物碱：苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱。来自3个厂家的11批虎力散片中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的含量分别在231.190~1 002.977，17.022~105.744，21.962~48.406，5.436~39.678，2.692~97.854，1.707~43.342 μg·g^–1。结论 所建立的HPLC特征图谱方法和多成分含量测定方法，简便可行，结果准确可靠，重现性好，可有效评价虎力散片的质量。     

反相高效液相色谱法同时测定骨刺消痛胶囊中3种单酯型生物碱的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定骨刺消痛胶囊中3种单酯型生物碱含量。方法色谱柱为Inert Sustain C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶8),流动相B为0.1mol·L-1醋酸铵溶液(每1000 m L加冰醋酸0.5 m L),梯度洗脱;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:234nm;柱温:30℃。结果苯甲酰新乌头原碱在进样量为0.0246~0.615μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9997),低、中、高浓度平均加样回收率分别为96.8%、98.9%、97.8%,RSD分别为0.94%、0.88%、0.95%;苯甲酰乌头原碱在进样量为0.0987~2.4675μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9999),低、中、高浓度平均加样回收率分别为100.1%、99.8%、100.3%,RSD分别为0.43%、0.25%、0.19%;苯甲酰次乌头原碱在进样量为0.0118~0.295μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9998),低、中、高浓度平均加样回收率分别为97.7%、99.8%、98.1%,RSD分别为0.91%、1.2%、0.97%。结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为骨刺消痛胶囊中单酯型生物碱的含量测定方法。     

佳蓉片中6种乌头类生物碱的定量研究

目的分析佳蓉片中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱6种乌头类生物碱的含量。方法采用HPLC法。色谱条件:Kromasil C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-四氢呋喃(25∶15)以及0.1 mol·L^-1醋酸铵溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5 mL),梯度洗脱;流速为0.8 mL·min^-1;柱温为25℃;检测波长为235 nm。结果苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱分别在4.32~432.40,1.29~128.83,1.08~108.46,1.77~177.30,0.78~78.40和1.19~119.04μg·mL^-1范围内与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为96.46%,98.26%,98.03%,98.23%,98.86%和98.70%;RSD值分别为1.50%,1.20%,1.27%,1.06%,1.50%和1.19%;10批制剂中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱的含量范围分别为100.32~119.18,9.35~16.02,7.99~10.87,1.54~1.85,0.87~0.99和2.21~3.27μg·g^-1。结论该方法简单、准确、灵敏、重复性好,可作为佳蓉片中乌头类生物碱成分的定量方法。     

胶束电动毛细管色谱法快速分析人血浆中的抗癫痫药物

目的建立胶束电动毛细管色谱(MECC)法分析人血浆中的多种抗癫痫药物的方法。方法运行缓冲液为50 mmol·L^-1 SDS-8 mmol·L^-1 Na₂HPO₄-3 mmol·L^-1 Na₂B₄O₇ (pH 8.0)-乙腈(18%)。毛细管总长50 cm，有效长度45.5 cm，内径50 μm。操作电压25 kV，运行温度30 ℃。检测波长210 nm。考察了各种因素对MECC分离的影响。结果线性范围：扑米酮1.0～40.0 μg·mL^-1，苯巴比妥1.0～60.0 μg·mL^-1，苯妥英1.0～60.0 μg·mL^-1，卡马西平1.0～40.0 μg·mL^-1，氯硝西泮0.2～8.0 μg·mL^-1，线性良好，相关系数均大于0.999 1；精密度良好，日内、日间RSD均小于15.0%；提取回收率80.0%～100.0%，RSD均小于10.0%。结论胶束电动毛细管色谱法可同时检测人血浆内多种抗癫痫药物的含量，方法成本低、操作简便、快速准确、干扰因素少。     

毛细管电泳-电喷雾-质谱-质谱分离鉴定粉防己生物碱

目的以非水毛细管电泳对粉防己甲醇提取物中的生物碱进行分离,并利用在线电喷雾离子阱质谱得到的准分子离子及碎片信息对其进行鉴定。方法使用未涂层毛细管(86 cm×75 μm ID,紫外检测器距进样端21 cm),50 mmol·L^-1醋酸铵-4%HAc-甲醇溶液为运行缓冲液,分离电压为25 kV。质谱接口为同轴鞘液接口;电喷雾电压为4.5 kV。铝毛细管温度为170 ℃;鞘液组成为60%异丙醇-39%水-1%HAc,鞘液流速为5 μL·min^-1。MS-MS的碰撞能量为30%,所要求的最小信号计数为1×10⁵。结果与结论毛细管电泳-质谱及质谱-质谱联用技术对粉防己甲醇提取物中生物碱进行了分离鉴定,比传统的根据迁移时间或淌度定性更加准确,可用于研究中药复杂成分。     

液相色谱电化学法检测猪肉及肝中残留的盐酸克伦特罗

目的　建立高效液相色谱 库仑阵列电化学系统检测猪肉及肝中残留的克伦特罗。方法　猪肉及肝脏样品经处理后,用高效液相色谱法 电化学检测器测定残留的克伦特罗。流动相A为50mmol·L^-1磷酸 30mmol·L^-1三乙胺(pH 4.0 ) ;流动相B为甲醇 乙腈(3.0∶45) ;组成为A∶B =80∶20。实验中选用了4个电极,电势分别为450 ,600 ,650和680mV。结果　校正曲线在1.88～60.16ng·g^-1,线性良好,最低检测限均为1 2ng·g^-1。结论　该法实用且精密准确,为盐酸克伦特罗的检测提供参考     

HPLC法同时测定人血浆中的伪麻黄碱和氯苯那敏

目的建立同时测定血浆中盐酸伪麻黄碱、马来酸氯苯那敏的方法。方法采用反相HPLC法,以右美沙芬为内标,血浆中的被测药物经甲基叔丁基醚提取、1.5%盐酸溶液反萃后同时测定。色谱柱:C₁₈(250 mm×4.6 mm ID,5 μm);流动相:乙腈-水-三乙胺(46∶54∶0.2,内含10 mmol·L^-1十二烷基硫酸钠,60 mmol·L^-1磷酸二氢钠,以磷酸调pH为2.6);检测波长:200 nm。结果伪麻黄碱、氯苯那敏的线性范围分别为1.5～0.01 mg·L^-1和75.0～0.5 μg·L^-1, 检测限分别为10.0和0.5 μg·L^-1;日内、日间RSD小于12.4%,方法平均回收率为97.3%～109.4%。结论该法简便、快速,重现性好,灵敏度高,可用于盐酸伪麻黄碱、马来酸氯苯那敏复方制剂的临床药代动力学研究。     

毛细管电泳法分离测定血浆样品中盐酸多奈哌齐对映体

目的分离、测定血浆样品中盐酸多奈哌齐对映体的含量。方法建立高效毛细管电泳法血浆中加入内标L-酒石酸布托菲诺后，碱化并以异丙醇-正己烷(3∶97)提取血浆样品，采用未涂层熔融石英毛细管柱(70 cm×50 μm ID)，以25 mmol·L^-1磷酸-三乙胺(pH 2.5)为运行缓冲液，2.5%磺化β-环糊精为手性添加剂，进样电压为-20 kV，进样时间为15 s，运行电压为-20 kV。对盐酸多奈哌齐对映体进行电泳分离，并进行家兔血浆样品中盐酸多奈哌齐对映体定量分析的方法验证。结果在上述电泳条件下，盐酸多奈哌齐对映体可达基线分离。测得血浆样品中R(-)-多奈哌齐的回归方程为：A_s/A_i=0.024 2+0.289 2C，r=0.999 2，S(+)-多奈哌齐的回归方程为：A_s/A_i=0.010 8+0.273 7C，r=0.999 7，线性范围为0.1～5 mg·L^-1，检测限为0.05 mg·L^-1。结论本法与手性柱HPLC法相比，有高效、快速和经济等优点。     

High performance liquid chromatography analysis of canthinone alkaloids from Eurycoma longifolia

A reversed phase-high performance liquid chromatography method with a photodiode array detector was developed for the simultaneous determination of three major alkaloids, 9-methoxycanthin-6-one (1), 3-methylcanthin-5,6-dione (2) and its 9-methoxy analogue (3) in Eurycoma longifolia Jack. These alkaloids were easily separated by a gradient elution protocol of 20 - 42 % acetonitrile in 0.1 % acetic acid. Compound 1 showed characteristic absorption at 350 nm only whereas its dione analogues, 2 and 3 displayed strong absorptions at both 350 and 451 nm. The linear calibration ranges were 0.7 - 50 microg x mL(-1) for 1, 1.5-50 microg x mL(-1) for 2 and 3.1 -100 microg x mL(-1) for 3. The recoveries of the three alkaloids were 90.8-101.0% with relative standard deviations from 0.35 to 6.31 % (n = 3). The limits of detection for all the alkaloids were within the range of 0.35 - 0.7 microg x mL(-1). This method was successfully applied to the phytochemical analysis of E. longifolia roots obtained from different sources.     

Interaction between hydrogen sulfide/cystathionine gamma-lyase and carbon monoxide/heme oxygenase pathways in aortic smooth muscle cells

AIM: To investigate the interaction between hydrogen sulfide (H2S)/cystathionine gamma-lyase (CSE) and carbon monoxide (CO)/heme oxygenase (HO) pathways in aortic smooth muscle cells (ASMC). METHODS: The ASMCs were divided into the following groups: (1) the control group; (2) the zinc protoporphyrin (ZnPP) 20 micromol/L group; (3) the propargylglycine (PPG) 2 mmol/L, 4 mmol/L and 10 mmol/L groups; and (4) the sodium hydrosulfide (NaHS) 1 x 10(-5) mol/L, 1 x 10(-4) mol/L and 1 x 10(-3) mol/L groups. Each of the groups was further divided into 6 h, 12 h, 18 h and 24 h subgroups. The CO level, represented by carboxyhemoglobin (HbCO) content was measured using a spectrophotometric method and H2S content was detected by a sensitive electrode method. CSE and HO-1 expressions were detected by Western blotting. RESULTS: The H2S content in the medium and CSE expression by ASMC were markedly increased by ZnPP compared with the control group. HbCO content in the medium and HO-1 expression by the ASMC started strengthening following 24 h treatment with PPG at 2 mmol/L, but were further strengthened following 18 h and 24 h treatment with PPG at 4 mmol/L compared with the controls (P < 0.01). PPG at 10 mmol/L increased the HbCO level in the medium following 18 h treatment and increased HO-1 expression by the ASMC following 12 h treatment. Moreover, NaHS at 1 x 10(-5) mol/L and 1 x 10(-4) mol/L decreased the HbCO level in the medium and HO-1 expression by the ASMC after 6 h and 12 h treatment, while NaHS at 1 x 10(-3) mol/L decreased them at all time points of the treatments. Conclusion: The results suggested that endogenous CO/HO and H2S/CSE pathways inhibited each other in ASMC under physiological conditions.     

格列美脲蛋白结合作用的高效液相色谱-迎头分析法

目的研究格列美脲与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)结合作用。方法采用高效液相色谱-迎头分析法(high performance liquid chromatography-frontal analysis, HPLC-FA)。色谱柱为内表面反相(internal-surface reversed-phase,ISRP)硅胶柱Pinkerton GFF II-S5-80(150 mm×4.6 mm ID, 5 μm)；流动相为 67 mmol·L^-1磷酸盐等渗缓冲液 (pH 7.4, I=0.17 mol·L^-1)；流速0.2 mL·min^-1；检测波长230 nm；进样量900 μL；柱温37 ℃。结果 应用非线性回归参数估算求得HSA分子上两类结合位点结合的格列美脲分子数及相应的结合平衡常数：n₁=1和K₁=5.1 (μmol·L^-1)^-1；n₂=7和K₂=0.017 (μmol·L^-1)^-1。结论HPLC-FA法操作简便，适用于研究格列美脲与HSA的结合作用。     

LC-MS/MS 法测定人血浆中倍他米松

建立测定人血浆中倍他米松的LC-MS/MS方法。采用Venusil XBP C₈ (200 mm×3.9 mm ID, 5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-水(含甲酸铵5 mmol·L^-1)(80∶20)，流速0.4 mL·min^-1；质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI)，正离子模式检测，监测离子为393.3→355.2(倍他米松)和361.3→343.2(泼尼松龙,内标)。血浆样本用乙酸乙酯处理。倍他米松在0.5~80.0 ng·mL^-1线性关系良好(r=0.999 2)， 血浆低、 中、 高3种浓度(1.0， 10.0， 60.0 ng·mL^-1)平均提取回收率为88.24%，定量限为0.5 ng·mL^-1。本方法操作简便、准确、灵敏，适用于复方倍他米松注射液人体药代动力学研究。     

Determination of icariin and metabolites in rat serum by capillary zone electrophoresis: rat pharmacokinetic studies after administration of icariin

A simple and rapid method for determination of icariin (ICA) and its two metabolites, icaritin (ICT) and desmethylicaritin (DICT), by capillary zone electrophoresis has been developed and validated. Optimum separation of ICA, ICT, and DICT was obtained on 43.6 cm x 50 microm capillary using sodium tetraborate (30 mmol/L), monobasic sodium phosphate (50 mmol/L)-acetonitrile (50:50, v/v) (pH 10.0) as running buffer. Carbamazepine (CMP) was used as internal standard (IS). The temperature and voltage were optimized at 25 degrees C and 12 kV, respectively. The limit of detection of ICA was 1.0 mg/L (S/N = 3) by UV detection at 270 nm. The elaborated method was tested in vivo after administration of a single dose of 120 mg ICA/kg to healthy rats. Calculated parameters confirmed usefulness of the method in rat pharmacokinetic studies on ICA.