急性病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1的表达及卡维地洛的干预作用

目的 探讨TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在急性病毒性心肌炎(VMC)发病中的作用及β受体阻滞剂卡维地洛对其影响.方法 将80只4周龄雄性Balb/c小鼠随机分为3组:心肌炎组(n=30)、卡维地洛组(n=30)和对照组(n=20),心肌炎组及卡维地洛组经腹腔接种柯萨奇病毒B3(CVB3)诱发急性VMC,对照组接种不含病毒的Eagle's液;卡维地洛组于接种病毒次日开始灌服卡维地洛5 mg/kg,心肌炎组和对照组灌服9 g/L盐水,每天2次.于接种后的第7、14天随机从各组抽取8只小鼠取血后处死,HE染色检测小鼠心肌病理积分,ELISA法检测血清TNF-α水平,RT-PCR检测心肌组织MCP-1 mRNA的表达.结果 心肌炎组心肌组织病理积分较对照组明显增高(P＜0.01),卡维地洛组较心肌炎组病理积分降低(P＜0.05);心肌炎组小鼠血清TNF-α水平较对照组升高(P＜0.01),且与心肌病理积分呈正相关(r=0.42,P＜0.05),卡维地洛组TNF-α水平较心肌炎组显著下降(P＜0.05);与对照组比较,心肌炎组小鼠心肌MCP-1 mRNA表达明显增加(P＜0.01),卡维地洛组小鼠心肌MCP-1 mRNA表达较心肌炎组明显下降(P＜0.05).结论 TNF-α和MCP-1参与VMC的发病过程,卡维地洛可能通过下调TNF-α、MCP-1的过表达减轻CVB3感染小鼠的心肌损害,起心肌保护作用.     

穿孔素在重组白细胞介素-12治疗小鼠病毒性心肌炎过程中的表达

目的观察重组白细胞介素-12(rmIL-12)治疗小鼠病毒性心肌炎过程中自然杀伤细胞(NK细胞)活性、穿孔素表达水平及小鼠心肌病理变化等指标,探讨rmIL-12治疗病毒性心肌炎的机制。方法选取BALB/c雄性小鼠60只,随机分成6组,分别为空白对照组,病毒对照组,干扰素对照组,rmIL-12小、中、大治疗剂量组,每组10只小鼠。除空白对照组外,余每只小鼠均腹腔注射CVB30.2mL/d,连续3d。开始接种病毒日定为第0天,从第0天开始,于接种病毒4h,空白对照组和病毒对照组腹腔注射9g/L盐水0.1mL/d,干扰素对照组腹腔注射干扰素-α400 IU/d;rmIL-12小、中、大治疗组分别注射1、10、100ng/d rmIL-12,连续5d。第5天每组分别取5只鼠,颈椎脱臼处死,取心脏,留取心脏标本用于做心肌病理学检测。应用四甲基偶氮唑蓝法检测各组小鼠脾脏NK细胞活性。Trizol试剂提取心脏组织总RNA,应用RT-PCR法检测小鼠心脏穿孔素表达水平,应用HE染色法观察小鼠心肌病理改变。结果NK细胞活性病毒对照组与rmIL-12中剂量组及大剂量组比较有显著差异(Pa<0.05),与干扰素对照组及小剂量治疗组比较无明显差异(Pa>0.05)。NK细胞活性随着rmIL-12剂量的增加而增加。空白对照组无穿孔素表达,rmIL-12中剂量组和大剂量组表达量多于小剂量组和干扰素对照组。各组心肌炎性变化以rmIL-12中剂量治疗组心肌炎性反应浸润最轻,而rmIL-12大剂量组心肌细胞变性坏死最重。结论适当增加NK细胞的活性可以减轻心肌细胞的损伤,但NK细胞活性过度增加会加重心肌细胞损伤。rmIL-12通过增加NK细胞活性而增加了穿孔素的表达。穿孔素表达量随rmIL-12治疗剂量的增加而增加。     

干扰素和黄芪对小鼠病毒性心肌炎TNF-α影响的研究

目的 研究病毒性心肌炎（VM）小鼠外周血肿瘤坏死因子仪（TNF-α）的动态变化以及干扰素、黄芪对其的影响,为临床应用干扰素、黄芪治疗病毒性心肌炎提供客观依据。方法 将小鼠随机分为正常对照组（A组）、病毒对照组（B组）、干扰素治疗组（C组）、黄芪治疗组（D组）。腹腔接种柯萨奇B3（CVB3）病毒液建立VM模型。在感染病毒24h后,C组腹腔注射干扰索1万U／（g·d）,D组用灌胃器喂服黄芪30mg／（g·d）。均连用5d;在接种病毒后第7、14、21天时留取血液、心肌标本。分别进行血清TNF-α及心肌病理检查。并分析TNFnd与心肌病理改变的关系。结果 VM小鼠TNF-α水平升高,并与心肌病理损害程度密切相关;干扰素和黄芪治疗VM,均可降低血清TNF—α水平。减轻心肌病理损害程度;干扰索对VM的治疗效果明显优于黄芪。结论 TNF—α参与了病毒性心肌炎的发生发展过程;通过降低血清TNF—α水平,调节免疫反应,可能是干扰索、黄芪治疗VM的作用机制之一。     

单核细胞趋化蛋白-1在病毒性心肌炎小鼠心肌中表达及意义

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在实验性小鼠病毒性心肌炎(VM)发病中的作用。方法 80只小鼠随机分为2组,VM组(n=70)腹腔接种0.1 ml柯萨基病毒B3(CVB3)建立VM动物模型;对照组(n=10)腹腔接种0.1 ml Eagle's液。VM组于接种后3、7、15、30 d处死,对照组于30 d处死,采用RT-PCR、免疫组织化学染色检测心肌MCP-1 mRNA及蛋白表达,HE染色检查心肌病理变化,并对MCP-1蛋白表达与心肌病变积分进行相关性分析。结果 VM组各时点心肌MCP-1 mRNA及蛋白表达均显著高于对照组(P0.05或0.01),MCP蛋白表达与心肌病变积分呈正相关(r=0.76,P0.05)。结论 MCP-1过度表达可能在VM发病机制中起重要作用。     

骨髓间充质干细胞对病毒性心肌炎小鼠的干预作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对小鼠病毒性肌炎的作用。方法 4周龄BALB/C雄性小鼠随机分为,正常对照组、心肌炎组、心肌炎不同阶段(3天、2周)BMSCs干预组,腹腔注射柯萨奇病毒B3建立病毒性心肌炎小鼠模型,干预组分别于注射病毒后3天、2周尾静脉注射小鼠BMSCs,4周后行心脏超声检查,光镜观察并计算心肌组织病理积分及胶原容积分数(CVF),q RT-PCR法检测心肌组织匀浆胶原纤维I(col1α1)和胶原纤维III(col3α1)m RNA表达。结果与正常对照组相比,心肌炎组左室前后壁变薄,左室收缩期末期内径和容积增大,左室射血分数(LVEF)及短轴缩短率(FS)降低,差异均有统计学意义(P均0.05);干预组各亚组LVEF及FS较心肌炎组均有改善,其中心肌炎2周时干预组改善更明显,差异均有统计学意义(P均0.05)。光镜下,心肌炎组心肌组织CVF较正常对照组增高,干预组CVF较心肌炎组降低,其中心肌炎2周干预组CVF较心肌炎3天干预组更低,差异均有统计学意义(P均0.05)。与正常对照组相比,心肌炎组col1α1和col3α1 m RNA表达均升高,干预组col1α1和col3α1 m RNA表达较心肌炎组降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 BMSCs可减少病毒性肌炎小鼠心脏纤维化程度及改善心功能,且病毒感染2周时干预效果更佳。     

病毒性心肌炎小鼠不同时点胰岛素样生长因子-1及其相关蛋白的表达

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其相关蛋白在病毒性心肌炎病程中的作用。方法取Balb／C小鼠60只，随机分为病毒实验组40只，腹腔感染CVB3病毒，分别于实验d3、7、15、30采血、取心肌组织；空白对组（未感染CVB3病毒小鼠）20只。用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测其血浆IGF-1的表达，用免疫组织化学法和逆转录酶多聚链反应（RT-PCR）技术检测其心肌组织IGF-1及相关蛋白的表达。结果病毒性心肌炎小鼠血浆IGF-1及相关蛋白表达均较空白对照组高，且在感染病毒后表达渐增高，15d达最高峰，30d表达降低，但仍维持一较高水平，与对照组比较仍有显著差异（F=19．53 P〈0.05），其在心肌组织中的表达与血浆中的表达变化规律一致。结论IGF-1及其相关蛋白可能参与小鼠CVB3病毒性心肌炎的病理生理过程。     

神经生长因子在小鼠病毒性心肌炎心肌中表达的意义

目的探讨病毒性心肌炎(VMC)发病过程中,心肌组织神经生长因子(NGF)表达的动态变化及发病机制中作用。方法70只4周龄雄性BALB/C小鼠腹腔接种0.1ml的CVB3建立VMC模型,10只同周龄同品系小鼠腹腔接种Eagle’s液作为对照组。VMC组于接种后3、7、15、30d,对照组于30d处死,采用RT-PCR、免疫组化检测心肌NGF mRNA及蛋白表达,并对NGF表达水平与心肌病变积分进行相关性分析。结果VMC组3~30d各时点心肌NGF mRNA及蛋白表达水平均明显增高,以7d时为最高,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.05或0.01),而且NGF蛋白表达水平与心肌病变积分呈显著正相关(r=0.90,P<0.05)。结论NGF过度表达可能在病毒性心肌炎的发病机制中起重要作用。     

黄芪甲甙对急性病毒性心肌炎小鼠IGF-1及相关蛋白表达的作用研究

目的：探讨黄芪甲甙在治疗病毒性心肌炎过程中对胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及相关蛋白的影响。方法：65只4周龄Balb/C小鼠随机分为正常对照、黄芪对照、病毒对照及黄芪小剂量、黄芪大剂量等5组。后3组腹腔接种柯萨基B组病毒（CVB3）病毒。黄芪小剂量、黄芪大剂量每日分别给予0.07、0.6 mg/kg黄芪甲甙液灌胃1次。15 d后采血、取心肌组织,用酶标免疫吸附测定法(ELISA)测血浆中IGF-1的表达,用免疫组织化学法检测心肌组织中IGF-1及相关蛋白的蛋白表达,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测心肌组织IGF-1基因表达。结果：感染CVB3病毒后小鼠心肌组织IGF-1及相关蛋白明显升高,大剂量黄芪甲甙干预可调节小鼠IGF-1及相关蛋白的表达;小剂量黄芪甲甙则无明显效果。结论：大剂量黄芪甲甙对急性病毒性心肌炎小鼠心肌组织的保护作用可能是通过影响IGF-1及相关蛋白表达的途径来实现。     

病毒性心肌炎不同时点血管内皮细胞生长因子mRNA的表达

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在BALB/c小鼠感染柯萨奇病毒B3(CVB3)所致病毒性心肌炎(VM)病程中的作用.方法 取BALB/c小鼠70只,随机分为VM组60只,腹腔感染CVB3,分别于实验第3、7、10、14、18、21天取心肌组织;正常组10只,于实验第21天取心肌组织.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测其心肌组织VEGF mRNA的表达.结果 病毒性心肌炎小鼠心肌VEGF mRNA表达较正常组高,且在感染病毒后表达渐增高,14 d达最高峰,其后表达降低,但仍维持一较高水平,与正常组比较仍有统计学意义(P<0.01).VEGF mRNA表达与心肌病理损害程度密切相关.结论 VEGF可能参与BALB/c小鼠病毒性心肌炎的病理生理过程.     

TNF配体相关分子1A在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达及意义

目的 探讨TNF配体相关分子1A(TLlA)在实验性小鼠病毒性心肌炎(VM)发病中的作用.方法 80只小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射CVB3,建立病毒性心肌炎实验模型,对照组注射生理盐水.分别于实验第3、7、15、30天随机选取存活小鼠10只处死,对照组小鼠在接种后30 d处死作为总体对照,取其心肌,采用免疫组织化学技术及RT-PCR技术检测心肌细胞TLlA表达水平,检测心肌病理变化,并对11L1A水平与心肌病变程度行相关性分析.结果 VMC小鼠在接种病毒后3 d心肌TL1A mRNA及蛋白表达水平升高,7 d表达水平最高,此后逐渐下降,但30 d仍维持在一个较高水平,各时点TLlA mRNA及蛋白表达水平与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 CVB3病毒感染可引起TLlA表达上调,TLlA表达增加可能在CVB3病毒性心肌炎发病机制中起重要作用.