改良三套管法建立大鼠左肺原位移植模型

背景：肺移植是治疗终末期肺部疾病的惟一方法。建立肺移植动物模型是肺移植基础研究的首要条件。 目的：建立一种简便、稳定和有效的同种大鼠异体左肺原位移植模型。 方法：50只雄性SD大鼠随机分为供体以及受体,采用改良三套管法进行大鼠左肺原位移植。首先完成供肺制备,并将供肺置于受体原左肺上方并保持供肺于4 ℃ LPD液环境中。按照左肺动脉-左肺静脉-左肺支气管的顺序依次完成供肺与受体相应结构的吻合。然后依次开放左肺静脉-肺动脉,调整潮气量,离断受体原左肺。观察手术成功率、手术时间,5周后对受体行血气分析。 结果与结论：手术成功率92%,手术时间为(55±3) min,术后存活均达5周。5周后阻断右肺门15 min前、后左肺静脉取血,血气分析差异无显著性意义(P > 0.05)。提示新改良的三套管法是一种简便稳定有效的大鼠原位左肺移植模型。     

小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型的建立*☆

目的：闭塞性细支气管炎是引起肺移植后移植物功能异常的主要并发症，原位肺移植动物模型技术难度高且费时，限制了其在闭塞性细支气管炎研究中的应用。通过小鼠的气管异位移植来建立模拟肺移植慢性排斥反应模型，以期为国内的闭塞性细支气管炎研究提供一种新的模型选择。 方法：①实验材料及分组：实验于2007-07/08在上海市肺科医院动物实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。实验组采用10只C57BL/6小鼠为供体，10只BALB/c小鼠为受体；对照组10只供体、10只受体均采用BALB/c小鼠。②实验方法：取供体小鼠的气管、左右主支气管连续气道作为供体，两端结扎后异位移植到受体小鼠背部皮下。③实验评估：移植28 d后获取移植气管标本，石蜡包埋，行苏木精-伊红染色观察移植气管病理变化；比较两组小鼠的移植气管闭塞性细支气管炎发生率。 结果：20例模型动物全部存活，无感染。①模型动物手术时间（12±2）min。②苏木精-伊红染色病理切片示实验组小鼠移植气管管腔闭塞，慢性炎细胞浸润广泛，气管上皮完全脱落，纤维组织增生明显，呈现闭塞性细支气管炎表现；对照组小鼠移植气管的组织形态未见明显异常。③实验组小鼠移植气管闭塞性细支气管炎发生率高于对照组（P=0.000）。 结论：小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型作为研究闭塞性细支气管炎的动物模型具有诸多优点。     

大鼠原位肾移植模型的移植技巧及并发症预防

背景：大鼠器官移植模型可重复性好，可稳定模拟临床缺血再灌注损伤、急性排斥反应及慢性排斥反应等情况，是免疫耐受以及新型免疫抑制剂开发不可缺少的组成部分。 目的：探讨稳定的大鼠原位肾移植模型的移植技巧及并发症的预防。 设计、时间及地点：显微外科操作实验，于2002-10/2008-03在中山大学附属第一医院动物中心、蒙特利尔大学实验中心及河南省动物中心完成。 材料：健康、雄性、清洁级Wistar大鼠、SD大鼠，分别为供、受体；Lewis大鼠、F344大鼠，分别为供、受体。 方法：在Fisher的移植方法的基础上进行改良，采用大鼠左侧原位肾脏移植，动、静脉及输尿管均采用端端吻合方式，实验在德国产Carl Zeiss手术显微镜下进行。 主要观察指标：监测移植后大鼠一般情况及尿量，大鼠尿量 < 1 mL认为移植肾脏功能差，活检确认原因。 结果：共实施大鼠原位肾移植500次。供体手术时间（15.5±2.1）min，受体移植时间（40.6±5）min，移植成功（移植后存活 > 5 d）率93.2%（466/500），一组慢性排斥模型大鼠达到长期存活（> 180 d）。 结论：施行多次肾移植可建立稳定、快速的大鼠原位肾移植模型，娴熟的动物外科解剖和精湛的显微外科技术是预防移植后并发症的先决条件。     

碱性磷酸酶对大鼠自体原位肝移植后急性肺损伤的保护作用★

目的: 肝移植术后并发症不仅包括肝脏本身的损害，亦能导致肝外多个器官功能衰竭，其中肺脏是较易且较早受累的器官。文章通过建立大鼠自体原位肝移植模型，观察肝移植术后肺部急性损伤情况及碱性磷酸酶的干预作用。 方法:①实验于2007-05/10在南方医科大学附属南方医院实验动物中心、消化内科实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。②选用SD大鼠24只，按随机数字表法分为对照组、自体原位肝移植组和碱性磷酸酶组，每组8只。后两组建立大鼠自体原位肝移植模型，对照组开腹后游离肝叶后即关腹，碱性磷酸酶组于肝脏恢复血供前5 min自舌静脉注入碱性磷酸酶。③手术结束后2 h检测肺组织髓过氧化物酶活性、丙二醛含量、肺组织表面活性蛋白A含量及肺组织干湿重比值，并行肝脏、肺脏病理检查。 结果:大鼠24只全部进入结果分析。①自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均高于对照组（P﹤0.01），碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均低于自体原位肝移植组（P﹤0.01）。②碱性磷酸酶组、自体原位肝移植组肺组织表面活性蛋白A含量较对照组低，而碱性磷酸酶组较自体原位肝移植组有所升高。③自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值均低于对照组（P﹤0.01），碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值高于自体原位肝移植组（P﹤0.05）。④病理结果显示，肝移植后大鼠肝、肺组织受到明显损害，而碱性磷酸酶能减轻损伤程度。 结论:肝移植术后肺部确实存在急性损伤，而碱性磷酸酶对其具有保护作用。     

经改进同种异体大鼠原位肾移植模型的建立

背景：大鼠肾移植模型是研究人体肾移植后排斥反应最好的方法,但因其需要精细外科技术,难度较大,限制了这一模型的应用。 目的：通过阅读大量相关文献,对多种造模手术方式和术中某些操作进行改进,建立稳定、可靠的大鼠原位肾脏移植模型显微外科手术方法。 设计、时间及地点：动物观察实验,于2008-09/11在天津市人民医院动物实验室完成。 材料：40只健康成年雄性SD大鼠,体质量250~300 g,随机选取20只作为肾移植供体,剩余20只为受体。 方法：①对供、受体进行肾血管游离时尽量采用钝性分离。②将供肾原位低温重力灌注,修剪、摘除后低温保存。③受体摘除左肾后行采用肾动、静脉端-端吻合,供体输尿管-受体膀胱浆肌层隧道术进行尿路重建,两点间间断缝合采用6针法吻合。术后小剂量环孢素抗急性排斥反应。 主要观察指标：通过对手术时间、术后死亡率及死亡原因分析,评价术式的合理性及可靠性。 结果：总手术时间(150±17) min,热缺血时间(15±2) s,冷缺血时间(55±5) min。3只于1周内死亡,其中麻醉意外1只,吻合口出血死亡1只,输尿管狭窄死亡1只,手术成功率为85%。术后第8天对存活受体鼠行剖腹探查,移植肾均颜色饱满,吻合口无栓塞、狭窄。 结论：通过对以往手术方式进行改进,采用肾动、静脉端-端吻合,供体输尿管-受体膀胱浆肌层隧道术进行尿路重建的术式建立了可靠的大鼠原位肾移植模型。     

骨髓单个核细胞移植治疗急性脊髓损伤*

目的：研究已证实，各种干细胞移植治疗损伤脊髓，都可以一定程度的恢复脊髓中枢神经的功能。但对骨髓单个核细胞移植治疗损伤脊髓以及长期效果的研究少见。利用大鼠抽取新鲜分离的骨髓单个核细胞,将其移植入脊髓损伤大鼠模型,评价脊髓功能恢复情况、神经再生和新生血管形成及长期预后效果。 方法：实验于2005-10/2006-04在上海第二医科大学发育生物学研究中心实验室完成。实验室级别：生物安全一级。①实验材料：8周龄SD雌性大鼠，体质量200~220 g，清洁级，由中国科学院实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：从大鼠胫骨及股骨采集骨髓细胞,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞备用。制作大鼠脊髓损伤动物模型，将造模成功22只大鼠随机分成2组:模型+细胞组（n =11）：脊髓完全横断T9~10后，椎管内注射骨髓单个核细胞；模型+DMEM组（n =11）：脊髓完全横断T9~10后在损伤邻近区注射DMEM。假手术组（n =9）：仅剪除T9-10棘突和椎板后，不损伤脊髓，逐层缝合。③实验评估：采用原位杂交和免疫组织化学技术检测移植细胞在宿主脊髓内的存活情况，BBB评分评估大鼠脊髓神经功能恢复情况。 结果：①假手术组在术后各时间点观察中评分无明显差异，属评分正常。模型+DMEM组评分为0分，其脊髓功能无明显恢复。模型+细胞组在2，4，6，8周脊髓功能处于逐渐恢复的过程。与模型+DMEM组及假手术组比较，差异有显著性意义 (P < 0.01)。②原位杂交和免疫组织化学检测显示，移植的细胞能在宿主体内存活，并嵌合到宿主脊髓组织表达血管标志。 结论：骨髓单个核细胞移植后8周，不仅能够在损伤脊髓内存活，而且还能分化新生血管，促进脊髓功能的恢复。     

高压氧治疗复合烧伤大鼠移植皮片的生长成活：随机分组对照★

目的：如何改善创面的缺血缺氧状态是烧伤治疗及植皮存活的关键。文章在常规植皮基础上采用高压氧治疗，观察高压氧对化学复合性烧伤大鼠移植皮片生长及成活情况的影响。 方法：①实验材料：实验于2007-03/07在兰州大学病理生理实验室完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。选用Wistar大鼠50只，按随机数字表法分为3组，复合烧伤模型组10只，常规植皮组20只，高压氧加常规植皮组20只。②实验方法：建立大鼠II度烧伤的动物模型，常规植皮组伤后经过清创处理并植皮；高压氧加常规植皮组给予高压氧治疗，压力为0.1 MPa，1次/d，共治疗7次。③实验评估：植皮术后7，10，14，21，30 d取材，检测移植皮片生长及成活情况。 结果：纳入50只大鼠，复合烧伤模型组死亡6只，常规植皮组死亡4只，高压氧加常规植皮组死亡1只。①高压氧加常规植皮组大鼠创面的红肿消退早于常规植皮组和复合烧伤模型组。②高压氧加常规植皮组大鼠创面肉芽床生成早，皮片成活后7 d左右达高峰，常规植皮组肉芽组织生成的高峰期为术后14 d。③高压氧加常规植皮组大鼠死亡率低于复合烧伤模型组、常规植皮组（χ2=11.593，P= 0.003）。　 结论：化学复合烧伤后应用高压氧治疗，移植皮片生长及成活情况良好，创面愈合快，感染率明显降低，治疗效果满意。     

骨髓间充质干细胞定向移植局灶性脑缺血大鼠的行为学变化*☆○

背景：骨髓间充质干细胞移植已经应用到神经损伤修复领域，脑内立体定位移植和经血管移植均为其移植途径。 目的：经立体定位将骨髓间充质干细胞注入大鼠脑梗死灶周边区，通过前肢不对称应用试验及姿势反射试验观察大鼠神经功能障碍的改善情况。 设计：随机对照动物实验。 单位：吉林大学第一医院神经内科。 材料：实验于2006-10/2007-04在吉林大学人兽共患病研究所，人兽共患病教育部重点实验室进行。健康雄性Wistar大鼠由吉林大学实验动物中心提供，体质量250~280 g，清洁级，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。 方法：采用密度梯度分离法、贴壁筛选法体外培养扩增健康成人志愿者骨髓间充质干细胞，采用流式细胞仪鉴定其免疫表型。将Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、模型+无血清DMEM组、模型+骨髓间充质干细胞组，每组10只。采用Longa等改良线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉闭塞脑缺血再灌注模型，正常对照组无任何处理，假手术组手术操作至暴露颈内外动脉后即缝合，其余处理同模型组。骨髓间充质干细胞立体定向移植：缺血90 min再灌注后1 h，采用立体定位仪取大鼠右侧大脑缺血周边区为移植点：前囟旁开3 mm、尾侧1 mm、深4 mm。缓慢注入5 μL经BrdU标记的骨髓间充质干细胞(4×1011 L-1)无血清培养基悬液于模型+骨髓间充质干细胞组大鼠，模型+无血清DMEM组大鼠注射5 μL无血清培养基，注射后留针5 min，缓慢退针，防止液体随针道返流。采用免疫组化技术检测骨髓间充质干细胞在大鼠体内存活情况，并于移植后1，3，7，28 d采用前肢不对称应用试验及姿势反射试验观察大鼠行为学变化。 主要观察指标：①以流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞免疫表型。②移植大鼠脑内骨髓间充质干细胞的存活情况。③大鼠行为学变化。 结果：50只大鼠全部进入结果分析。①实验获得了高纯度的骨髓间充质干细胞，流式细胞仪检测显示，CD44、CD29均呈阳性，CD34、CD45、CD31均呈阴性。②模型+骨髓间充质干细胞组移植的骨髓间充质干细胞在脑缺血周边区聚集并存活。③模型+骨髓间充质干细胞组大鼠行为学评分较其他各组降低明显 (P < 0.05)，并随着细胞移植后时间延长逐渐降低，并且移植后7 d行为学评分低于同组内其他时间点(P < 0.01)。 结论：除正常对照组外，其他组大鼠神经功能均有所恢复，但各组恢复情况明显不同，脑梗死周边区域注射骨髓间充质干细胞组大鼠功能恢复明显好于各对照组。     

丹参对原位肝移植大鼠供肝冷保存再灌注损伤的保护作用☆

目的: 研究表明，丹参对心、脑、肝等重要器官的缺血再灌注损伤有保护作用。制备大鼠异体原位肝移植模型，验证丹参对大鼠肝移植缺血再灌流损伤的保护作用。 方法：实验于2006-10/2007-08在南方医院中心实验室及动物实验中心完成，动物实验方法符合动物伦理学要求。①实验材料及分组：选用SD大鼠40只，按随机数字表法分为假手术组、模型对照组和丹参注射液组，假手术组8只，模型对照组、丹参注射液组各8对（供体与受体）。②实验方法：建立原位肝移植模型，在供肝灌注冷保存时，以4 ℃ 乳酸林格氏液为基液，丹参注射液组灌注保存液中加60 mL/L丹参注射液；模型对照组不加丹参。③实验评估：移植术后6 h处死各组大鼠取样，检测血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶及乳酸脱氢酶活性；测定肝组织中丙二醛含量及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性，并对比观察移植肝病理形态学改变。 结果：模型对照组和丹参注射液组16只受体大鼠及假手术组8只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①丹参注射液组和模型对照组移植肝再灌注后血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及乳酸脱氢酶活性均高于假手术组(P < 0.01)；丹参注射液组低于模型对照组(P < 0.01)。②丹参注射液组肝组织中丙二醛含量较模型对照组明显下降(P < 0.01)，超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性则明显升高 (P < 0.01)。③丹参注射液组较模型对照组肝组织肝细胞坏死程度减轻，炎性细胞浸润减少，肝组织再灌注损害程度减轻。 结论：丹参对原位肝移植肝脏的缺血再灌注损伤有保护作用，从而减轻氧自由基及脂质过氧化，保护细胞膜，改善肝功能。     

人脐血CD34+细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响*☆

目的：CD34+造血干细胞具有自我更新、多向分化及重建长期造血和免疫的生物学功能，针对心肌缺血性损伤、肢体血管闭塞引起的组织缺血等治疗有显著的疗效。由于中枢神经系统缺血性损伤临床治疗康复效果不佳，观察人脐带血CD34+细胞移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及CD34+细胞的存活、迁移以及向神经细胞分化的情况。 方法：实验于2002-05起在天津市中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所进行。①实验材料：雄性SD大鼠由解放军军事医学科学院第四研究所提供，体质量250~350 g，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。人脐带血由天津脐血干细胞库提供，产妇及家属对实验知情同意，并符合医学伦理学标准。②实验方法：将大鼠随机分为3组：CD34+细胞移植组：用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型后24 h移植CD34+细胞；生理盐水组：左侧大脑中动脉栓塞后24 h后注射等量的生理盐水；假手术组：仅行左侧大脑中动脉栓塞。③实验评估：采用改良神经功能损害评分观察大鼠神经功能恢复情况，应用免疫组织化学和免疫荧光双标记技术检测BrdU标记的CD34+细胞存活、迁移及其GFAP蛋白和NeuN蛋白的表达。 结果：①CD34+细胞移植组与其它各组在移植完成24 h 改良神经功能损害评分差异无显著性（P > 0.05）; 移植后1周到第4周，各组动物均有神经功能不同程度的恢复，CD34+细胞移植组神经功能恢复明显优于另两组（P < 0.05）。②CD34+细胞移植组与另两组比较，大鼠脑梗死体积无明显变化。③移植的CD34+细胞可在大鼠脑组织中存活，部分CD34+细胞同时表达GFAP蛋白或NeuN蛋白，并向缺血区域迁移。 结论：CD34+细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向星形胶质细胞或神经元分化，同时促进神经功能恢复。