肿瘤坏死因子α诱导PC12细胞凋亡及对bax和bcl-xl基因表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导PC12细胞凋亡以及对bax和bcl-xl基因表达的影响。方法以PC12细胞作为多巴胺神经元细胞模型,用MTT法测定不同浓度TNF-α对PC12细胞增殖的作用;用PI和AnnexinV进行细胞的双染凋亡检测及电镜检测PC12细胞凋亡;应用RT-PCR检测bax和bcl-xl基因mRNA表达的变化,用Westernblot检测bax和bcl-xl蛋白表达的变化。结果 TNF-α(1～100ng/ml)呈浓度依赖方式抑制PC12细胞增殖。30ng/mlTNF-α作用PC12细胞,PI双染及电镜均显示PC12细胞凋亡。RT-PCR表明药物作用后bcl-xlmRNA表达减少而baxmRNA表达增多;免疫印迹显示药物作用后bcl-xl蛋白表达减少而bax蛋白表达增多。结论 TNF-α诱导PC12细胞凋亡且呈量效关系,可能与bax和bcl-xl相关。     

尾加压素Ⅱ对大鼠及人嗜铬细胞瘤细胞体外增殖的影响

目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞及体外培养的人原代嗜铬细胞瘤细胞增殖的影响.方法 以噻唑兰法(MTT法)观察UⅡ对PC12细胞及体外培养的人原代嗜铬细胞瘤细胞增殖的影响.结果 UⅡ对PC12细胞的增殖无明显影响.10-7、10-6mol/L浓度的UⅡ可促进体外培养的原代人嗜铬细胞瘤细胞增殖.结论 UⅡ可促进嗜铬细胞瘤细胞的生长,在嗜铬细胞瘤的发病机制中可能起一定作用.     

利福平抑制α-synuclein的聚集及对MPP＋诱导细胞损伤的拮抗作用

目的： 探讨利福平对帕金森病致病蛋白α-突触共核蛋白（α-synuclein）聚集的影响，以及对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的细胞损伤的拮抗作用。 方法： 选用大鼠嗜铬细胞瘤株PC12细胞，利用MPP+诱导建立帕金森病细胞模型，利福平进行干预；采用MTT法检测细胞活性、Western blotting法检测α-synuclein表达及聚集，流式细胞仪检测细胞凋亡。 结果： 1 mmol/L MPP+组细胞活性明显低于对照组，细胞凋亡率和α-synuclein表达及聚集高于对照组；预先经过100、200和300 μmol/L各浓度利福平处理后，MPP++利福平组细胞活性明显高于1 mmol/L MPP+组，而细胞凋亡率和α-synuclein表达及聚集均低于1 mmol/L MPP+组，并具有明显的剂量-效应关系。 结论： 利福平能够抑制α-synuclein的表达及聚集，并对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有拮抗作用。     

绞股蓝皂苷减轻脂多糖诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12损伤

目的 探讨绞股蓝皂苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用及其机制。方法 LPS处理PC12细胞建立神经元炎性损伤模型;实时定量PCR检测炎性因子表达,CCK-8法检测细胞活力,蛋白印迹检测NF-κB蛋白。结果 不同剂量(0、100、300和1 000 ng/mL)的LPS刺激PC12细胞12 h后,TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平随剂量的增加而逐渐升高。LPS导致细胞活力下降到85.7%,不同浓度绞股蓝皂苷(30, 100μg/mL)预处理细胞6 h后,30和100μg/mL绞股蓝皂苷能够使细胞活力分别恢复至96.2%和97.9%。绞股蓝皂苷预处理后,LPS诱导的TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平升高都受到不同程度的抑制。LPS刺激导致NF-κB通路信号蛋白p65的磷酸化(p-p65)水平上调,但绞股蓝皂苷预处理能够使升高的p-p65下调。结论 绞股蓝皂苷通过抑制NF-κB信号通路减轻LPS诱导的PC12细胞炎性反应,从而起到保护神经元损伤的作用。     

Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤关系研究

目的:探讨不同浓度Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位相关性。方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,Aβ25-35160、80、40、20、10、5、2.5μmol.L-17个浓度刺激PC-12细胞,CCK-8法观察细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察hochest33342/PI双染后细胞形态,罗丹明染色后荧光显微镜检测细胞线粒体跨膜电位变化。结果:同正常组比较,Aβ25-35刺激PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性,20μmol.L-1以上浓度Aβ25-35刺激12 h后PC-12细胞的细胞活力呈明显下降(P<0.05),凋亡率明显增加(P<0.05)。PC-12细胞有核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象,线粒体跨膜电位下降。20μmol.L-1以下各浓度组对PC12细胞活力、细胞凋亡率、线粒体跨膜电位无明显影响(P>0.05)。结论:Aβ25-35刺激PC-12后致细胞凋亡与线粒体跨膜电位下降呈正相关,20μmol.L-1刺激12 h即可致理想的PC12细胞凋亡模型。     

TNF-α对兔软骨终板细胞增殖、凋亡及基质形成的影响

目的：探讨TNF-α对体外培养的兔软骨终板细胞增殖、凋亡及基质形成的影响。方法:分离培养并鉴定兔软骨终板细胞后，分别加入不同浓度的TNF-α，用 MTT测定不同时点软骨终板细胞增殖活性的变化；免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Fas、caspase-3 表达的变化；RT-PCR 检测培养过程中蛋白聚糖、Ⅱ型胶原 mRNA 的表达变化。结果:50 μg/L、100 μg/L浓度TNF-α可抑制细胞增殖；50 μg/L浓度TNF-α可降低 Bcl-2的表达，10 μg/L、50 μg/L浓度TNF-α均可促进Bax、Fas、caspase-3 的表达；10 μg/L、50 μg/L浓度TNF-α可降低collagen IIa mRNA 的表达，TNF-α 为50 μg/L浓度时才可降低aggrecan mRNA 的表达。结论:TNF-α可抑制软骨终板细胞的增殖及基质合成，促进软骨终板细胞促凋亡因子的生成。     

姜黄素对放线菌素D/TNF-α诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的影响

目的: 探讨姜黄素对放线菌素D(ActD)/TNF-α诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元凋亡的影响及其作用机制。方法: 将PC12细胞分为以下6组:对照组、TNF-α组、ActD组、姜黄素组、ActD/TNF-α组和姜黄素+ActD/TNF-α组。各组细胞培养24 h后进行下列处理:倒置荧光显微镜普通光观察各组细胞的形态变化;Annexin V/PI染色流式细胞术检测各组PC12细胞凋亡率; Fluo-3 AM染色流式细胞术测定细胞内Ca²⁺浓度。制备离体大鼠海马脑片,分组处理同PC12细胞,细胞外微电极记录技术观察各组海马脑片CA1区长时程增强(long-term potentiation,LTP)的变化情况。结果: 10 μg/L ActD和50 μg/L TNF-α协同处理可导致PC12细胞明显损伤,而5 μmol/L姜黄素则可以减轻这种损伤作用(P<0.05);ActD/TNF-α可诱导PC12细胞内Ca²⁺浓度升高,姜黄素可以通过降低胞内Ca²⁺浓度而减少ActD/TNF-α引起的细胞凋亡(P<0.05)。此外,LTP实验也证实ActD/TNF-α可以显著抑制大鼠海马脑片LTP的诱发,而姜黄素可以拮抗这种抑制作用,改善神经元突触可塑性(P<0.05)。结论: 姜黄素可以改善ActD/TNF-α引起的神经元损伤,其机制可能是通过降低细胞内Ca²⁺浓度,维持胞内钙稳态而发挥作用。     

姜黄素对放线菌素D/TNF-α协同诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的:观察中药单体姜黄素对ActD/TNF-α协同诱导PC12细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用MTT法确定实验药物的最佳浓度;Hoechst33258荧光染色法观察PC12细胞的凋亡;JC-1荧光分子探针检测线粒体膜电位;Real Time PCR检测凋亡基因Bcl-2/Bax的表达。结果:ActD/TNF-α协同作用可导致PC12细胞的活力降低(P<0.05);出现核固缩、核碎裂现象的细胞增多,细胞凋亡率增高(P<0.05);细胞线粒体膜电位下降;细胞内抗凋亡基因Bcl-2的表达降低(P<0.05)。经姜黄素(5μmol/L)处理后,PC12细胞的活力增强(P<0.05);细胞核固缩、核碎裂现象减少,细胞凋亡率下降(P<0.05);细胞线粒体膜电位上升;细胞内抗凋亡基因Bcl-2的表达增强(P<0.05)。结论:姜黄素可拮抗ActD/TNF-α引起的PC12细胞凋亡,可能与升高线粒体膜电位,促进抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响。方法体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的最佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达。结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P0.05)。结论 TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤。     

苯的代谢产物氢醌改变细胞氧化还原状态诱导TNF-α表达

目的:研究苯的代谢产物氢醌(HQ)对HL-60细胞TNF-α产生和细胞活性的影响,并探讨这种影响是否通过氧化还原调节来实现.方法:HL-60细胞用不同浓度HQ刺激24 h后,收集细胞及培养液上清,检测细胞内活性氧、氧化型/还原型谷胱甘肽含量,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α含量.结果:5 μmol/L HQ即可诱导GSH水平增高,抑制HL-60细胞增殖,但对GSH/GSSG比例,TNF-α表达及细胞凋亡无显著影响.50、 100 μmol/L HQ可破坏细胞内氧化还原状态,GSH/GSSG比例下降,TNF-α表达增高,显著抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸能拮抗HQ诱导的TNF-α表达、增殖抑制及细胞凋亡.结论:HQ可通过改变HL-60细胞内氧化还原状态诱导TNF-α表达,导致细胞凋亡.     

LPS对大鼠雪旺氏细胞TNF-α合成和释放的影响

目的：探讨内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）的诱导作用对大鼠雪旺氏细胞肿瘤坏死因子α（tumor nec-rosis factor-α,TNF-α）的表达。方法：不同浓度,不同时间用LPS刺激雪旺氏细胞,用酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测细胞胞液和上清中分泌的TNF-α的表达量,同时用间接免疫荧光细胞化学染色检测TNF-α的细胞定位。结果：用LPS10μg/ml刺激后2小时能显著促进雪旺氏细胞浆内TNF-α的表达,同时也检测到培养液上清中有TNF-α的释放。结论：细菌的致病因子LPS的诱导确能促进雪旺氏细胞高效表达和分泌TNF-α,从而为雪旺氏细胞作为免疫活性细胞在周围神经系统中发挥免疫调节作用提供初步依据。     

TNF-α和LPS诱导系膜细胞白细胞介素-12表达的研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和脂多糖（LPS）对系膜细胞IL-12表达的影响。方法利用细胞培养、酶联免疫吸附（ELISA）等技术，观察TNF-α及不同剂量、不同作用时间的LPS干预等不同条件下，系膜细胞IL-12蛋白表达的变化。结果静息状态的系膜细胞不表达IL-12，LPS（10μg／ml）和TNF-α（20ng／ml）均可诱导系膜细胞显著表达IL-12，且两者具有协同效应。在一定的剂量范围内，LPS呈剂量及时间依赖性诱导系膜细胞表达IL-12，但随着LPS刺激时间及浓度的增加，IL-12的表达减少。结论TNF-α及LPS均可诱导系膜细胞表达IL-12参与机体免疫炎症，但系膜细胞在表达IL-12时对LPS的长期及高浓度刺激产生耐受性。     

丙泊酚减轻低氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12炎性反应和细胞凋亡

目的 研究丙泊酚是否通过抑制miR-141-3p的表达，减轻低氧诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12炎性反应和细胞凋亡的分子机制。方法 将PC12细胞分为对照组、低氧组、(5、10、20)μmol/L丙泊酚+低氧组、anti-miR-con+低氧组、anti-miR-141-3p+低氧组、miR-con+20μmol/L丙泊酚+低氧组、miR-141-3p+20μmol/L丙泊酚+低氧组。流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡；Western blot检测活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达；相关试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性；活性氧荧光探针DCFH-DA法测定活性氧(ROS)含量；ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量；RT-qPCR检测miR-141-3p表达。结果 与对照组比较，低氧组PC12细胞的凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达水平、MDA、ROS、TNF-α、IL-1β、IL-6含量和miR-141-3p表达量均升高，SOD活性减弱(P<...     

吗啡抑制大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)增殖

目的：探讨吗啡对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞增殖的影响及作用机制。方法: 应用MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期。RT-PCR及免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果: 10 μmol/L吗啡对PC12细胞的增殖有抑制作用,G₁期细胞增多，S期细胞减少。24 h PCNA mRNA表达开始低于对照组(P<0.05),48 h和72 h明显降低(P<0.01)。免疫细胞化学也显示PCNA表达量降低(P<0.05)。纳洛酮具有逆转吗啡降低PCNA表达的作用。结论:吗啡可能通过μ受体降低PC12细胞PCNA表达，进而抑制细胞增殖。     

没食子儿茶素没食子酸酯对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的大鼠PC12细胞凋亡的作用

目的： 探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导大鼠PC12细胞凋亡及其抗氧化作用、调节胞浆钙离子稳态与其抑制细胞凋亡作用之间的关系。方法: 培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞,给予MPP+诱导细胞凋亡。EGCG（10、50及100 μmol·L-1）预处理0.5 h,再加入MPP+使其终浓度为900 μmol·L-1处理24 h后,MTT法检测细胞存活率,Annexin V-PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光酶标仪测定细胞内活性氧,激光共聚焦荧光显微镜通过检测细胞内钙的荧光强度、检测细胞胞浆［Ca2+］i的变化,透射电镜观察凋亡细胞线粒体结构形态变化,并测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。结果: MPP+呈剂量依赖性损伤PC12细胞,诱导细胞凋亡发生率达到31.0％。与模型组比较,EGCG处理后,明显提高细胞活力,降低凋亡细胞率,同时增强SOD活性、减少MDA和ROS的含量,降低胞浆［Ca2+］i浓度,减轻MPP+诱致的细胞线粒体改变。结论: EGCG具有抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡的作用,其作用机制可能与其提高细胞抗氧化能力和减少胞浆［Ca2+］i有关。     

JNK信号转导通路在NGF抗6-OHDA诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的： 以6-羟基多巴胺(6-OHDA)作用于大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cells)以诱导其凋亡,然后在其中分别加入神经生长因子（NGF）及c-Jun氨基端激酶（JNK）阻断剂SP600125,研究在加入NGF后JNK的活性与凋亡的关系。方法: 实验分为对照组、6-OHDA组、NGF组、6-OHDA+NGF组、6-OHDA+JNK阻断剂SP600125组,以流式细胞分析法检测各组PC12细胞的凋亡率,以免疫印迹（Western blotting）法检测各组PC12细胞JNK的活化情况。结果: 6-OHDA导致PC12细胞凋亡,JNK1活性提高;预孵SP600125或NGF15min后再加入6-OHDA则PC12细胞凋亡率及JNK1活性均降低。结论: JNK1参与了6-OHDA致PC12细胞凋亡作用,NGF抗6-OHDA所诱导的PC12细胞凋亡作用与其抑制JNK的活化有关。     

左旋多巴诱导PC12细胞凋亡及谷胱甘肽对细胞的保护作用

目的:研究左旋多巴(L-dopa)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的凋亡诱导作用并探讨其临床意义。方法:以PC12细胞为多巴胺(DA)神经元的细胞模型,利用电镜、DNA凝胶电泳结合图象分析仪、流式细胞术(FCM)等技术检测不同浓度L-dopa所致的凋亡率以及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)对它的影响。结果:流式术测得50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L处理组凋亡率分别为12.4%、24.4%、37.2%,与琼脂糖电泳的片断化DNA比例基本一致,与对照组(2.3%)有显著差异(P＜0.01),L-dopa与GSH合用组凋亡率2.5%与对照组比较无显著差异(P＞0.05)。结论:GSH可以阻断L-dopa 对PC12细胞的凋亡诱导作用,提示L-dopa 可能是通过氧化损害介导DA神经元凋亡,导致疗效减退。     

核心钟基因Bmal1通过JNK/caspase-3信号通路抑制缺血再灌注损伤PC12细胞的炎症及凋亡

目的：探讨核心钟基因Bmal1(brain and muscle Arnt-like 1)对脑缺血再灌注损伤后细胞炎症反应及凋亡的影响。方法：通过慢病毒转染建立Bmal1基因沉默（si-Bmal1）及阴性对照（si-NC）的稳定大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株,将细胞分为空白（blank）组、氧糖剥夺/复氧（OGD/R）组、OGD/R+si-NC组及OGD/R+si-Bmal1组。通过OGD/R诱导建立脑缺血再灌注损伤体外模型,CCK-8法检测沉默Bmal1基因对细胞活力及OGD/R后细胞活力的影响;Western blot法检测Bmal1、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）及cleaved caspase-3蛋白水平;RT-qPCR法检测Bmal1、JNK及caspase-3的mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术及TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率;免疫荧光检测JNK核内表达情况。结果：沉默Bmal1基因使PC12细胞活力及OGD/R后PC12细胞活力均显著下降（P<0.05或P<0...     

LPS诱导HUVEC细胞凋亡最适浓度与时间选择

目的：探讨脂多糖诱导HUVEC细胞凋亡的最适浓度和时间。方法：体外培养人脐静脉血管内皮细胞株（HU—VEC）,将脂多糖（LPS）分为100、10、1、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg·ml^-18个浓度,分别刺激0．5、1、2、6、12、24h后,采用CCK-8法观察细胞活力,荧光显微镜观察Hochest33342／PI双染后细胞形态。结果：同阴性对照组比较,药物浓度≥10^-2μg·ml^-1刺激24h均可引起细胞活力明显下降（P〈0．05）。100μg·ml^-1刺激1h,10μg·ml^-1与1μg·ml^-1刺激6h可引起HUVEC细胞活力下降,但12h与24hHUVEC细胞活力下降更明显（P〈O．05）,10^-1μg·ml^-1刺激12h可引起HUVEC细胞活力下降（P〈0．05）。Hochest33342／PI双染可见明显核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象。结论：LPS刺激后引起HUVEC细胞活力下降呈时间与剂量依赖性,综合时间与剂量考虑,10^-1μg·ml^-1刺激12h或24h与10^-2μg·ml^-1刺激24h可致理想的HUVEC细胞凋亡模型。     

转化生长因子α促进人内皮祖细胞增殖、迁移和黏附

目的:探讨转化生长因子α(transforming growth factorα,TGF-α)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)单克隆形成、增殖、迁移和黏附细胞功能的影响及机制。方法:分离培养人内皮祖细胞,分别用浓度为1、5、10μg/L TGF-α诱导处理细胞,并设置PBS对照组和表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂EGFR-TKI组(同时加入10μg/L TGF-α和1∶1 000的EGFR-TKI)。利用单克隆形成实验、MTT法和Ed U法、Transwell法和细胞黏附实验检测不同浓度TGF-α对各组EPCs单克隆形成能力、细胞增殖、细胞迁移能力及黏附功能的影响;并通过Western blotting法检测不同浓度TGF-α对各组EPCs中表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。结果:不同浓度TGF-α均能显著诱导EPCs单克隆形成能力、增殖、迁移和黏附细胞功能,差异有统计学意义(P0.05),并可以被EGFR-TKI抑制。Western blotting检测发现TGF-α显著诱导EPCs中EGFR和VEGF的表达(P0.05),并呈浓度依赖性。结论:TGF-α能够显著促进人EPCs细胞单克隆形成、增殖、迁移和黏附相关细胞功能,并通过与EGFR结合诱导VEGF表达来发挥作用。