两种铕标试剂测定甲胎蛋白结果的比较分析

时间分辨荧光免疫分析法(tim e-reso lved fluoro im-m unoassay,TRF IA)以其有较高的检测灵灵敏度已成为最有发展前途的非同位素标记免疫技术之一[1]。我室检测甲胎蛋白使用此方法,因使用进口试剂,价格较贵,欲选择国产试剂代替之。为此运用两种铕标试剂对同一批样本进行甲胎蛋     

蛋白质的铕标记技术

蛋白质的Ｅｕ＾３＋标记ＴＲ－ＦＩＡ法的关键技术之一。本文综合论述了螯合剂及其用量、抗原和抗体的标记方法、标记率的计算、标记物的使用和保存等问题。     

B型钠尿肽固相时间分辨免疫荧光分析法的建立及其临床应用

目的采用一种新的铕螯合物BHHCT,制备高灵敏度荧光标记物,建立B型钠尿肽(BNP)固相时间分辨荧光免疫分析法(TrFIA)。方法使用2株匹配的单克隆抗体,其中1株可以识别BNP分子C-端区,另1株生物素化单抗能识别分子内环结构,分别作为捕获抗体和检测抗体,并利用制备的SA-BHHCT-Eu3 作为示踪物,建立双抗体夹心法,检测正常对照组和心功能Ⅰ~Ⅳ级心力衰竭患者组血液BNP含量。结果本法测定BNP的灵敏度为12pg/ml,批内和批间CV分别为3.9%和5.2%,平均回收率为97.3%,线性范围为20~4000pg/ml。对照组(n=110)、心功能Ⅰ级(n=31)、Ⅱ级(n=30)、Ⅲ~Ⅳ级(n=25)各组血浆BNP浓度分别为(69±37)、(84±46)、(346±134)和(932±326)pg/ml;心衰各组BNP水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.001)。以BNP100pg/ml为cutoff值,诊断心力衰竭(HF)的特异性为82.4%,敏感性为91.6%。结论应用铕螯合物BHHCT建立的固相TrFIA法测定BNP,是一个很好的诊断心衰和监测其严重程度的实验诊断指标。     

时间分辨荧光免疫分析技术在HBV血清学标志物检测中的应用

目的评价时间分辨荧光免疫分析技术在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用。方法采用泰莱-Ⅰ型时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂（新波）对89例正常人血清及89例HBV感染者血清用TRFIA检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb，并同时用酶标方法进行比较。结果178份血清进行检测结果同ELISA方法比较：HBsAg Kappa值1．0，HBsAb Kappa值0.894．HBeAg Kappa值=0.8884，HBcAb Kappa值=0.782，HBcAb Kappa值=0．805，均显示两者之间结果高度一致性。结论时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝爽血清学五项标志物，灵敏度高、特异性强、操作简单、成本较低，可作为乙型肝炎病毒定量的另一种常规方法．     

血清甲胎蛋白和游离β绒毛膜促性腺激素双标记时间分辨荧光免疫试剂盒的研制与评价

目的 研制一种用于产前筛查的母血清甲胎蛋白(AFP)和游离β绒毛膜促性腺激素(free hCG β)双标记时间分辨荧光免疫法(TrFIA)试剂盒.方法 采用AFP单克隆抗体铕(Eu3+)标记物和free hCGβ单克隆抗体钐(Sm3+)标记物作为示踪物,以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分制备增强液,应用双抗体夹心法研制出hAFP和free hCG β双标记时间分辨荧光免疫法试剂盒,并对其进行分析性能评价,平行比对试验采用线性回归分析.结果 自制试剂盒AFP和free hCG β的剂量-反应曲线线性相关系数(r)可达0.999 0以上;批内、批间CV(%)均小于10.00%;AFP和free hCG β的灵敏度分别为0.12 U/ml和0.08 ng/ml;以国家标准品为对照,AFP和free hCG β的标准品效价比在0.900～1.100间;检测AFP和free hCG β的线性范围分别为0.25 U/ml～500 U/ml和0.2 ng/ml～200 ng/ml;试剂盒在4℃保存下可至少稳定12月;与国外同类试剂比对,AFP和free hCG β的回归方程的线性相关系数(r)分别为0.973 0和0.992 7.结论 自制试剂盒具有灵敏度高、特异性强、准确度好、线性范围宽等优点,与国外的同类产品检测结果相关性好,能满足临床需要.     

抗HBc时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的　用竞争法建立抗HBc时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)方法。方法　以基因重组HBcAg包被板 ,Eu3 -异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 (Eu3 DTTA)标记抗HBc IgG单克隆抗体 ,建立抗HBcTRFIA方法。数据采用Log Logit函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。结果　方法的批内和批间变异系数分别为 2 30 %和 6 30 % ,回收率为 96 72 % ,灵敏度为 0 2NCU/ml。本方法与抗HBs和抗HBe无交叉反应 ,Eu3 标记物稳定 6个月以上。结论　TRFIA是一种新的抗HBc免疫检测技术 ,具有灵敏度高和稳定性好等优点 ,能够用于定量测定抗HBc IgG     

时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎血清标志物分析灵敏度的建立与分析

[目的]乙型肝炎表面抗原和表面抗体定量测定试剂盒。[方法]时间分辨荧光免疫分析法的分析灵敏度进行建立与分析，以便更好的指导临床诊断和进行流行病学研究。[结果]通过实验研究，乙型肝炎病毒表面抗原定量检测试剂盒和表面抗体定量检测试剂盒的检测低限分别为0．0356ng／ml和0．548mIU／ml，生物检测限分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，功能灵敏度分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，线性范围分别为0．200ng／ml-300ng／ml和5．00mIU／ml～1200mIU／ml，并达到中国药品生物制品检定所检定要求。[结论]时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎病毒定量检测试剂盒具有灵敏度高，线性范围宽，特异性强的特点，已能有效应用于临床体外诊断和流行病学研究。     

时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎血清标志物的分析方法性能验证

目的建立时间分辨荧光免疫检测法的方法学性能验证方案和试验方法。方法采用新波ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪和雅培AxSYM免疫发光分析仪测定乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)各项目,分析前者的检测精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间及抗干扰性能,分析两者检测结果间的相关性。结果 ANYTEST2000时间分辨荧光免疫分析仪检测HBV-M各项目的精密度、准确度、交叉污染率、灵敏度、测量范围、临床可报告范围、生物参考区间均符合国际公认质量要求。血清中一定浓度的三酰甘油、总胆红素或血红蛋白对部分HBV-M项目产生不同程度的干扰。ANYTEST2000与AxSYM检测HBV-M各项目结果间差异无统计学意义(P>0.05),且具有良好的相关性。结论 ANYTEST2000分析仪测定HBV-M的主要分析性能验证结果与厂商规定的分析性能基本一致。本研究所建立的分析仪性能验证方案和方法有助于提高仪器的检测质量。     

总甲状腺素时间分辨荧光免疫分析方法的建立

目的 建立总甲状腺素(TT4)时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)竞争检测法.方法 用羊抗鼠IgG包板,对应的抗T4抗体(Anti-T4)为竞争抑制抗体,用Eu3 标记T4-BSA做标记物,以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,竞争法TrFIA检测人血清中的TT4.结果 TT4-TrFIA的灵敏度达6.895 nmol/L(1.000 nmol/L=0.7778 ng/ml);批内CV为4.12%～5.62%,批间CV为5.58%～8.61%;特异性好;平均回收率为99.16%;线性范围在11.0～300.0 nmol/L之间;热稳定性好;与TT4微粒子酶免疫分析技术(MEIA)比对,相关系数达0.9544.结论 建立的TT4-TrFIA法具有灵敏度高,特异性强,稳定性好,测定范围宽,检测时间短和非放射性等优点,具有良好的应用价值.     

进口与国产TrFIA试剂盒检测血清CEA的比较

时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TrFIA）法具有灵敏度高、稳定性好和无放射性污染等优点。     

时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物检测中的应用

目的以微粒子酶免疫分析（MEIA）为参照，探讨时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）定量测定乙肝病毒标志物的临床应用价值。方法采用TRFIA与酶免疫吸附试验技术（ELISA）对623份随机标本做5项乙肝病毒标志物测定，其中95份标本用MEIA复测。结果TRFIA法检测乙肝五项指标与MEIA法比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论TRFIA法测定乙肝五项指标的相对特异性、灵敏度及符合率较ELISA法高，为临床疗效观察及乙肝疫苗的接种提供科学依据。     

时间分辨荧光免疫分析与酶联免疫吸附分析检测血清甲胎蛋白的比较

目的比较测定甲胎蛋白（AFP）的2种方法，即时间分辨荧光免疫分析（TrF）与酶联免疫吸附分析（ELISA）。方法分别进行线性、相关性、回收与重复性试验。结果线性范围、回收率、批内CV%、批间CV％TrF分别为0．721～1089ng／L、97．03％、3．21％与5．79％；ELISA分别为4．21～530ng／L、95．68％、4．05％与6．20％。TrF与ELISA两种方法差异无统计学意义（P〉0．05），相关性好，r=0．921。结论TrF定量测定AFP，在方法学上要优于ELISA。     

甲胎蛋白与CA 19-9双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立钐(Sm3+)标记抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(单抗)和铕(Eu3+)标记抗糖类抗原19-9(CA19-9)单抗的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法将抗AFP单抗与抗CA19-9单抗混合包被96孔板作为捕获抗体,用Sm3+标记抗AFP单抗、Eu3+标记抗CA19-9单抗作为检测抗体,建立同步检测AFP/CA19-9的TrFIA法。结果建立的TrFIA法检测AFP/CA19-9的灵敏度分别为0.3 ng/mL和2.5 U/mL。AFP分析内和分析间变异系数(CV)分别为2.6%～5.9%和4.3%～8.1%,CA19-9分析内和分析间CV分别为4.9%～5.6%和5.0%～6.3%。分别用建立的TrFIA法与Perkin-Elmer公司解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)法同时测定血清样本,两法AFP与CA19-9的相关系数分别为0.99与0.98。结论建立的同步检测AFP与CA19-9的TrFIA法灵敏、简便、准确,有助于消化道肿瘤和睾丸癌等的辅助诊断。     

TRF与ELISA乙型肝炎病毒检测中的应用比较

目的 调查时间分辨荧光免疫分析技术和ELISA法在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况.方法 采用上海新波ANYIEST2000型时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对192例乙型肝炎患者血清检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗体(HBsAb)、乙肝病毒e抗原(HBeag)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)及乙肝病毒核心抗体(HBcAb),同时用ELISA法进行检测.结果 时间分辨荧光免疫分析法(TRF)检测乙型肝炎血清学5项标志物比EUSA法灵敏度高.结论 时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎血清学5项标志物,灵敏度高、稳定性好、经济、符合国情,可作为乙型肝炎病毒定量的一种常规方法.     

慢性胃炎患者血清胃蛋白酶原检测的临床意义

目的探讨474例确诊的胃炎患者胃蛋白酶原I（PGI）、PGⅡ水平及PGI／PGⅡ比值（PGI／Ⅱ）的临床意义。方法应用时间分辨荧光免疫法分别检测患者及健康者血清PGI、PGⅡ。结果浅表性胃炎患者与健康者比较,PGI水平差异无统计学意义（P〉O．05）,血清PGⅡ水平显著上升（P〈0．05）、PGI／Ⅱ的差异有统计学意义（P〈O．05）;糜烂性胃炎患者分别与健康者、慢性浅表性胃炎患者比较,血清PGI、PGⅡ水平均显著上升,其PGI／Ⅱ与健康者比较,差异有统计学意义（P〈O．05）,而与慢性浅表性胃炎组的PGI／Ⅱ进行比较,差异无统计学意义（P〉O．05）。浅表性胃炎组血清PG筛出异常者与胃镜病理结果阳性符合率为46％,糜烂性胃炎中PG异常者与胃镜病理结果符合率为23％。结论血清PGI、PGⅡ与胃黏膜炎性病变相关,可作为一种初步筛查和动态疗效评价的辅助诊断手段。     

新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析方法及其试剂盒研制

目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)技术,建立新生儿促甲状腺素(Neonatal TSH)微量检测法,并研制其检测试剂盒.方法 采用一株TSH单克隆抗体用于固相包被,另一株TSH单克隆抗体用于标记铕(Eu3+),固相双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法检测Neonatal TSH.结果 自建的Neonatal hTSH TrFIA法灵敏度高,可达2.28 μU/ml,且在测量范围内,自制试剂盒剂量-反应曲线的相关系数r达0.998 7,与hLH,hFSH,HCG无明显交叉反应.分析内或分析间质控结果在靶值±25%内,室内低质控、高质控分析内和分析间变异系数(CV)分别为7.12%和6.09%,7.82%和7.03%.与DELFIA(R) Neonatal TSH试剂标准品进行准确性比对,实测值与标示效价比平均值为1.05.与DELFIA(R) Neonatal TSH试剂比对试验符合率一致,相关系数r可达0.982 2.试剂盒室间质评能力比对成绩100%.结论 自建的Neonatal TSH TrFIA法具有灵敏度高,特异度强,准确度高,精密性好和非放射性等优点,具有良好的临床应用价值.     

国产AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的方法学评价

目的对本所研制的AFP时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒进行方法学评价。方法用精密度、灵敏度、稳定性及回收率等对AFP试剂盒进行方法学評价,并与进口试剂进行比较。结果国产AFP(TRFIA)试剂盒的批内和批间的CV分别为1.87%和7.95%,平均回收率为102.06%,灵敏度为0.43μg/L,同Roche公司Elecsys2010的所测值相关系数为0.7832,同Wallac公司Auto Delfia-1235的所测值相关系数为0.9739,阳性符合率为100%。结论国产AFP(TRFIA)试剂盒具有高精密度、高特异性、高稳定性,同进口试剂比较具有较高相关性,阳性符合率较好,值得临床推广应用。     

国产AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的方法学评价

目的 对本所研制的AFP时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒进行方法学评价.方法 用精密度、灵敏度、稳定性及回收率等对AFP试剂盒进行方法学評价,并与进口试剂进行比较.结果 国产AFP(TRFIA)试剂盒的批内和批间的CV分别为1.87%和7.95%,平均回收率为102.06%,灵敏度为0.43 μg/L,同Roche公司Elecsys2010的所测值相关系数为0.7832,同Wallac公司Auto Delfia-1235的所测值相关系数为0.9739,阳性符合率为100%.结论 国产AFP(TRFIA)试剂盒具有高精密度、高特异性、高稳定性,同进口试剂比较具有较高相关性,阳性符合率较好,值得临床推广应用.     

甲状腺球蛋白抗体竞争TRFIA技术的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)竞争检测法。方法用甲状腺球蛋白抗原包被96孔板,用铕(Eu3+)标记羊抗鼠IgG做标记物,TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;批内变异系数(CV)为3.3%～4.1%,批间CV为3.7%～4.7%;平均回收率为97.9%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.881 3;男女TgAb测定值差异无统计学意义;TgAb的正常值范围为≤110 IU/mL。结论建立的TgAb-TRFIA是一个高敏感和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。