同型半胱氨酸对血管内皮细胞功能损害的体外研究

目的：探讨高同型半胱氨酸血症对血管内皮细胞功能损伤的机制和改善其损伤的方法。方法：体外培养脐静脉血管内皮细胞，用RT-PCR方法检测血管内皮细胞在不同浓度的同型半胱氨酸或同时加入氟伐他汀孵育24h后血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的mRNA表达。结果：同型半胱氨酸实验组的LOX-1mRNA表达增多，其中100μmol／L组显著增多（P〈0．05）；各组之间eNOS的mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。同时加入氟伐他汀后，LOX-1和eNOS的mRNA表达均无显著改变（P〉0．05）。结论：高同型半胱氨酸血症可能通过提高血管内皮细胞的LOX-1水平加速动脉粥样硬化的进程，如何防治尚需进一步研究。     

桂哌齐特拮抗氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞的损伤

目的研究桂哌齐特对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤人脐静脉内皮细胞系ECV304的保护作用。方法传代培养ECV304细胞,随机分为空白对照组、模型组、桂哌齐特(200mg·L~(-1)和400mg·L~(-1))组,与ox-LDL共同孵育24h制模,观察培养上清液中一氧化氮(NO)与丙二醛(MDA)含量的变化,测定Fura-2/AM负载后的内皮细胞的游离静息钙浓度([Ca~(2+)]_i)。结果 ox-LDL诱导的模型组上清液中NO的浓度明显降低,MDA含量显著升高(均P<0.01)。桂哌齐特组NO浓度增加(P<0.01),MDA含量降低均(P<0.05)。与空白对照组相比,模型组的[Ca~(2+)]_i显著升高,桂哌齐特组能降低损伤导致的[Ca~(2+)]_i升高(均P<0.01)。结论桂哌齐特能拮抗ox-LDL对人脐静脉内皮细胞的损伤作用。     

脂蛋白（a）对血管内皮细胞损伤作用的实验研究

目的 研究脂蛋白（ａ）「Ｌｐ（ａ）」对血管内皮细胞（ＥＣ）的损伤作用和高密度脂蛋（ＨＤＬ）存在时对血管ＥＣ的损伤作用。方法 以体外培养的人脐静脉ＥＣ为模型,通过观察细胞形态、测定细胞功能了解Ｌｐ（ａ）和ＨＤＬ和Ｌｐ（ａ）对ＥＣ的损伤作用。结果 预加入ＨＤＬ再加入定量的Ｌｐ（ａ）后,ＥＣ收缩,胞浆呈分支状,乳酸脱氟酶（ＬＤＨ）释放量增高,６－酮－前列腺素Ｆｌａ（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦｌａ）合成明显关少     

吡格列酮对人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L表达的影响

目的探讨吡格列酮对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40/CD40L表达的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,给予oxLDL刺激和不同浓度吡格列酮干预。采用流式细胞技术检测CD40/CD40L在细胞上的表达,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LOX-1mRNA的表达。结果OxLDL以浓度和时间依赖的方式刺激HUVECs表达CD40/CD40L,吡格列酮以剂量依赖的方式减轻ox-LDL刺激HUVECs表达CD40/CD40L。同时我们还观察到oxLDL能刺激HUVECs上调LOX-1mRNA的表达,而吡格列酮能明显抑制这种作用。结论吡格列酮能减轻oxLDL刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达,其作用的机制可能与其抑制了HUVECs的LOX-1受体表达有关。     

苯扎贝特对内皮细胞LOX-1及抗凋亡基因Bcl-2影响

目的研究苯扎贝特对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)作用的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血凝素氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)及抗凋亡基因Bcl-2的影响。方法体外培养HUVECs,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察各组LOX-1及Bcl-2 mRNA的变化,Western-blot方法观察各组Bcl-2蛋白的变化。结果ox-LDL组与正常对照组比较LOX-1表达显著增加(P<0.05),抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P<0.05),苯扎贝特组LOX-1 mRNA表达减少(P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)且呈浓度效应依赖关系。结论苯扎贝特可通过下调LOX-1的表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达从而抑制ox-LDL引起的内皮细胞凋亡。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白对单核巨噬细胞源泡沫细胞基质金属蛋白酶-9的调控作用

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人单核巨噬细胞源泡沫细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达和活性的影响,以及此过程中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的调控作用。方法体外原代培养人单核细胞来源的巨噬细胞,传至2～6代用于实验。依不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用24h,以及ox-LDL40mg/L作用1、12、24h分组,另设LOX-1受体阻断剂多聚肌苷酸(PolyI)干预组。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定LOX-1和MMP-9mRNA表达,酶谱法分析MMP-9的活性。结果 ox-LDL作用后,LOX-1和MMP-9mRNA表达升高,MMP-9的分泌及活性升高(P<0.05),且诱导作用呈浓度-时间依赖性;多聚肌苷酸抑制后,MMP-9mRNA表达及活性明显下降(P<0.05)。结论 LOX-1作为ox-LDL的特异性受体,介导ox-LDL诱导的上调单核巨噬细胞LOX-1、MMP-9表达及活性的作用。     

前列腺素E1和E2对体外内皮细胞修饰低密度脂蛋白的作用

低密度脂蛋白(LDL)的氧化修饰是动脉粥样硬化形成(AS)的重要机制之一。细胞对LDL的修饰作用是近年来研究的热点。我们利用体外培养的免主动脉内皮细胞与LDL共同孵育,以探讨内皮细胞对LDL的氧化作用。有研究表明,大剂量前列腺素EZ(PGE2)(2～20mg/L)抑制AS,小剂量则促进AS[1];亦见有PGE1抗AS作用的报道。因此,本研究拟从抗LDL氧化修饰的角度探讨二者的抗AS机理。 材料与方法 1.家兔主动脉内皮细胞的培养　健康幼龄雌性白色家兔,体重 1.2kg,气栓处死。迅速于无菌条件下取出主动脉,洗净血迹,去除外膜及结缔组织。纵行剪开管壁,将…     

阿托伐他汀与氨氯地平对ox-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞LOX-1和eNOS表达的影响

目的以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为载体,探讨阿托伐他汀与氨氯地平对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的HUVECs内血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体(LOX-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法体外培养HUVECs,采用倒置显微镜观察内皮细胞形态变化,待细胞生长至融合状态时加入ox-LDL、阿托伐他汀、氨氯地平进行干预。随机分为:①对照组(培养基);②ox-LDL组(50mg/L);③阿托伐他汀组(10μmol/L);④氨氯地平组(10μmol/L);⑤阿托伐他汀+氨氯地平组。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组LOX-1mRNA与eNOSmRNA表达的水平。结果与正常对照组比较,ox-LDL使LOX-1mRNA表达增加,eNOSmRNA表达减少;阿托伐他汀、氨氯地平均可使ox-LDL损伤的HUVECs内LOX-1mRNA表达下调,eNOSmRNA表达上调,且二者具有协同作用;混合刺激组与对照组比较,LOX-1mRNA、eNOSmRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论阿托伐他汀和氨氯地平均可下调ox-LDL损伤的HUVECs内LOX-1mRNA的表达,上调eNOSmRNA的表达,且二者具有协同作用。     

oxLDL对人脐静脉内皮细胞通透性影响及机制研究

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox LDL）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性的影响及其可能机制。方法采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察ox LDL对单层血管内皮细胞通透性的影响以及THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;采用蛋白质印迹法及免疫荧光技术检测ox LDL对HUVECs紧密连接occludin蛋白的表达及分布改变。结果 ox LDL增加单层内皮细胞对LDL的通透性和THP-1巨噬细胞脂质的蓄积;ox LDL降低occludin蛋白的表达,同时免疫荧光染色显示,ox LDL处理后,血管内皮细胞间隙增宽,occludin染色减少或脱失,而抑制氧化应激可以减弱ox LDL对内皮细胞的高通透性反应和occludin蛋白表达和形态学的影响。结论 ox LDL可能是通过occludin蛋白表达下降使内皮细胞构改变来介导内皮通透性增加,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积。     

氧化型胆甾醇对血管内皮细胞的损伤作用

目的　观察氧化型胆甾醇3β-5α-6β-三羟胆甾烷(3-triol)对牛主动脉内皮细胞的损伤作用。方法　用MTT法检测内皮细胞的增殖活性,以硫代巴比妥酸(TBA)法测定内皮细胞丙二醛(MDA)的生成,以流式细胞仪和3′末端标记DNA降解片段原位检测(TUNEL)观察内皮细胞的凋亡。结果　3-triol呈时间和剂量依赖性地降低内皮细胞的存活率,浓度依赖性增加内皮细胞丙二醛的生成和诱导内皮细胞的凋亡。在相同剂量及相同时间的情况下,胆甾醇对内皮细胞无明显的损伤作用。结论　氧化型胆甾醇3-triol对血管内皮细胞具有明显的损伤作用,其作用与其抑制内皮细胞的增殖,增加内皮细胞的氧化和诱导内皮细胞的凋亡有关。     

脂联素对人脐静脉内皮细胞保护作用的实验研究

目的体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,加入低密度脂蛋白（LDL）建立细胞损伤模型,观察脂联素（APN）对模型细胞结构和功能的影响。方法观察对照组、LDL损伤组、APN预处理组和APN干预组内皮细胞（EC）的形态改变,测定细胞活性,测定细胞培养上清中一氧化氮（NO）、乳酸脱氢酶（LDH）和6-酮前列腺（6-keto-PGF1）的含量变化,测定细胞中一氧化氮合酶（NOS）的含量。结果与正常细胞对照组比较,LDL损伤组的细胞形态明显改变,细胞存活率明显降低,LDH释放明显增高,NO、NOS和6-keto-PGF1合成明显降低（P〈0.01）;而APN预处理组和干预组能明显降低LDH释放,促进NO、NOS和6-keto-PGF1合成（P〈0.01）。结论 APN对EC有一定的保护作用,能拮抗LDL对EC的损伤。     

Testing endodontic sealers on human umbilical vein endothelial cells

The toxic potential of the endodontic sealers ingredients, especially the unreacted monomer, that can irritate the periapical tissue and interfere with the healing process, thus having a negative impact on the biocompatibility of the material. The aim of this study was to evaluate the influence of three experimental endodontic sealers on cells viability in vitro. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were used. The experiments were done with solid samples and extracts of sealers in artificial saliva and water. The experiments evaluated the cytotoxicity of the residual monomers that resulted from the tested composites. The decrease in cell viability was quantified by colorimetric measurement of formazan. The components of the sealers dissolved in artificial saliva and water were determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The HUVEC are a novelty for testing the endodontic sealers biocompatibility, with certain advantages compared to other cell types used in the literature, e.g. HELA cells, fibroblasts. The data showed that cytotoxicity was directly linked with the unreacted monomer — 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) present in these composites. Two of the three formulations had little or no cytotoxic effect, which makes them suitable for further testing in order to be used in endodontic treatment.     

丙泊酚对体外高糖培养的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的 研究丙泊酚对高糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用.方法 根据体外培养HUVECs的条件不同随机分为六组:正常对照(C1)组、高渗对照(C2)组、高糖十脂肪乳对照(C3)组、高糖(HG)组、高糖+25μmol/L丙泊酚干预(P25)组、高糖+100 μmol/L丙泊酚干预(P100)组.检测各组细胞的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及醛糖还原酶(AR)活性.结果 与C1、C2组比较,HG组MDA含量升高,SOD活性降低,AR活性增高(P＜0.01或P＜0.05).与HG组比较,P25组和P100组的MDA含量均下降、SOD活性均升高、AR活性均降低,P100组变化又比P25组明显(P＜0.0l或P＜0.05).结论 高糖可引起内皮细胞的氧化应激,造成细胞损伤.丙泊酚可抑制高糖对内皮细胞损伤.     

人脐静脉内皮细胞的培养观察与鉴定

目的探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养、观察及鉴定方法,建立人血管内皮细胞的培养模型,为体外研究动脉硬化发病机制提供重要的实验手段。方法采用终浓度为0．125%胰蛋白酶+0．01% EDTA或0．1%Ⅱ型胶原酶消化、分离脐静脉内皮细胞进行培养,以0．25%胰蛋白酶进行消化传代,并用光镜、电镜和免疫组化等方法进行内皮细胞的形态观察和鉴定。结果原代培养的内皮细胞在接种后约1h开始贴壁生长,5～7d融合成单层。光镜下内皮细胞呈铺路石状镶嵌排列；免疫组化可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应；电镜下可见胞浆巾有W-P小体,证实培养的细胞为内皮细胞。结论用酶灌注消化法消化脐静脉可获得高纯度的内皮细胞,细胞存活率高。本方法为血管内皮细胞的研究提供了实验模型。     

蜕皮甾酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：研究一种植物成分——蜕皮甾酮（ＥＤＳ）是否能影响人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）增殖。方法：采用血管内皮细胞（ＶＥＣ）体外培养的方法，以ＭＴＴ法及流式细胞术观察细胞增殖的情况。结果：（１）ＤＥＳ能够影响ＨＵＶＥＣ代谢ＭＴＴ；（２）ＤＥＳ的浓度对ＨＵＶＥＣ的ＭＴＴ代谢物—ｆｏｒｍａｚａｎ的生成量有影响：在２５～４００ｍｇ·Ｌ－１，ＥＤＳ促进线粒体代谢ＭＴＴ、形成ｆｏｒｍａｚａｎ，并且在２００ｍｇ·Ｌ－１时可使ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量达到最高值；在８００ｍｇ·Ｌ－１以上浓度时，ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量减少，并低于正常培养的ＨＵＶＥＣ的ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量。（３）在２００ｍｇ·Ｌ－１时，流式细胞术显示，ＥＤＳ能够影响ＨＵＶＥＣ的细胞周期：ＥＤＳ可促进ＨＵＶＥＣ由静止期和（或）ＤＮＡ合成前期进入ＤＮＡ合成期、由ＤＮＡ合成期进入ＤＮＡ合成后期和（或）分裂期。结论：ＥＤＳ能够刺激ＶＥＣ分裂、增殖，并且ＶＥＣ的增殖状况与ＥＤＳ的浓度有关。     

皮质醇对人脐静脉内皮细胞迁移功能的影响及机制研究

目的 探讨皮质醇抑制血管新生的机制.方法 将体外培养G0/G1期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为皮质醇组(无血清RPMI1640培养液中加入皮质醇)和对照组(仅用无血清RPMI1640培养液),细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率,细胞迁移实验观察皮质醇对细胞迁移的影响,酶联免疫吸附法测定细胞中人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和基质细胞衍生因子1(SDF1)含量,蛋白质印迹法测定细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达.结果 皮质醇组细胞活力与对照组相比无明显差异;细胞迁移数目明显少于对照组,差异有统计学意义[ (618 ±117)个比(1200 ±57)个,P=0.00011];bFGF、SDF1与NO水平明均明显低于对照组[bFGF为(69.7 ±5.7) ng/L比(99.3±11.0) ng/L,P＜0.01;SDF1为(10.2 ±2.1)ng/L比(12.4 ±2.5)ng/L,P＜0.05;NO为(58.5±10.3)μmol/L比(97.3±6.2)μmol/L,P=0.03407].结论 皮质醇对HUVEC细胞活力无明显抑制作用,但可以明显抑制其迁移功能,并降低细胞中NO、bFGF、SDF1的含量,这可能是皮质醇抑制HUVEC迁移的作用机制.     

Apoptosis of human umbilical vein endothelial cells induced by artesunate

Artesunate (ART), a semi-synthetic derivative of artemisinin isolated from the traditional Chinese herb Artemisia annua, is an effective novel antimalarial drug. The present study investigated the apoptotic activity of artesunate in cultured human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) by means of nuclear staining, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry. The observations also indicated that artesunate induced apoptosis of HUVEC in a concentration-dependent and time-dependent manner. A Western immunoblot analysis showed down-regulation of the bcl-2 protein and up-regulation of the bax protein in the artesunate-treated HUVEC. Ca2+ in cells was evaluated by fluorescent spectrophotometer using Fura 2-AM as probe. These results suggest that artesunate may be a potential apoptosis-inducing agent for endothelial cells.     

青蒿琥酯诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的　探讨青蒿琥酯对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的诱导凋亡作用 ,以及这种诱导作用与内皮细胞增殖及细胞内游离Ca2 + 的关系。方法　采用MTT比色法测定青蒿琥酯对HUVEC增殖的影响 ,Fura 2 /AM荧光标记法测定HUVEC胞内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i) ,应用吖啶橙 /溴化乙啶荧光双染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡。结果　青蒿琥酯可抑制HUVEC增殖 ,明显诱导HUVEC凋亡 ,并呈浓度依赖性和时间依赖性效应关系。在发生凋亡的同时伴有 [Ca2 + ]i 显著升高。结论　青蒿琥酯可诱导HUVEC凋亡 ,其机制可能与[Ca2 + ]i 升高有关