苦豆子总碱对大鼠实验性结肠炎CD4^＋CD25^＋,CD8^＋CD28^-表达的影响

目的：观察苦豆子总碱对实验性结肠炎大鼠的外周血和结肠组织中调节性T细胞CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-表达的影响。方法：实验于2006—03／08在南方医科大学实验室进行。①分组：将72只SD大鼠数字表法随机分成正常对照组，模型组，5-氨基水杨酸组，苦豆子15，30，60mg／kg组共6组，每组12只。②造模：除正常对照组外，其他5组采用三硝基苯磺酸灌肠法制备结肠炎大鼠模型，正常对照组给予等量生理盐水灌肠。③给药：造模第2天开始灌胃给药，2mL／只，1次／d。5-氨基水杨酸组灌胃5-氨基水杨酸400mg／kg，苦豆子15，30，60mg／kg组灌胃酸苦豆子总碱15，30，60mg／kg，其他2组灌等量生理盐水。④取材：在第1周和第3周各组分别取6只大鼠处死，测定结肠黏膜组织和外周血中CD4^＋CD25^＋，CD8^＋CD28^-的表达水平，观察苦豆子总碱对模型大鼠急慢性期T细胞亚群的影响。结果：72只大鼠进入结果分析。①建模第1周：模型组结肠内T细胞亚群CD4^＋CD25^＋，CD4^＋CD25＋／CD25^-，CD8^＋CD28^-及CD8^＋CD28^-／CD28^＋高于正常对照组（P〈0．05，0．01），苦豆子各剂量组数据虽低于模型组，但经统计学处理后差异不显著（P〉0．05）。②建模第3周：模型组大鼠外周血中的CD8^＋CD28和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28：（11.3&;#177;1．3）％，（5．4&;#177;2．2）％，（5．8&;#177;3．2）％，（6．0&;#177;4．2）％；CD8^＋CD28^＋／CD28^＋：（1．2&;#177;0．8）％．（0．4&;#177;0．1）％，（0．5&;#177;0．2）％，（0．5&;#177;0．4）％；P〈0．05，0．01]；结肠组织中的CD8^＋CD28^-和CD8^＋CD28^-／CD28^＋的表达也高于正常对照组和苦豆子30，60mg／kg组[CD8^＋CD28^-：（17．4&;#177;4．2）％，，（3．8&;#177;4．5）％，（3．9&;#177;4．0）％．（4．2&;#177;3．6）％；CD8^＋CD28^-／CD28^＋：（1．8&;#177;0．3）％，（0．7＋0．3）％．（0．7＋0．2）％，（0．7&;#177;0．3）％：P〈0．05，0．01]。结论：苦豆子总碱30，60mrg／kg能下调实验性结肠炎大鼠慢性期高表达的CD8^＋CD28-T细胞。     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎CD4+,CD8+的改变及意义

目的:观察实验性变态反应性脑脊髓炎模型大鼠外周血CD4 ,CD8 的改变及免疫调节剂左旋咪唑的作用。方法:实验于2005-05/07在遵义医学院附属医院神经科实验室和贵州省细胞工程重点实验室完成。取Wistar大鼠23只单纯随机分为4组:①正常组(n=5):不干预。②模型组(n=8):每只大鼠一次性注入0.5mL豚鼠脊髓匀浆(相当髓鞘碱性蛋白3.5mg)和完全福氏佐剂混合乳剂,其中0.4mL注入双后足掌皮下,0.1mL注入尾近端。在注入抗原乳剂后即刻、24,48h共3次腹腔注射左旋咪唑10mg/kg。③完全福氏佐剂组(n=5):注射无豚鼠脊髓匀浆生理盐水 完全福氏佐剂混合液0.5mL,用法同模型组,不注射左旋咪唑。④左旋咪唑组(n=5):每间隔24h腹腔注射左旋咪唑,用法同模型组。将注射日规定为第0天,每日观察2次记录大鼠神经体征变化,所有大鼠于注射第16天取材,流式细胞仪检测外周血CD4 ,CD8 的变化,苏木精-伊红染色观察病理变化,Loyez氏髓鞘染色法观察髓鞘改变。结果:23只大鼠全部进入结果分析。①神经体征变化:正常组、完全福氏佐剂组和左旋咪唑组均未出现症状,模型组8只大鼠中有7只于第14天出现症状,发病率为87.5%。②CD8 的变化:左旋咪唑组和模型组低于正常组犤(31.24±7.01)%,(20.64±5.52)%,(41.73±7.28)%,P<0.05,0.01犦,且模型组低于左旋咪唑组(P<0.05)。③CD4 的变化:左旋咪唑组和模型组高于正常组犤(45.21±5.35)%,(43.30±5.47)%,(34.44±7.01)%,P<0.05犦,但前2组比较差异不显著。④CD4 /CD8 :左旋咪唑组和模型组高于正常组(1.53±0.49,2.33±1.04,0.86±0.32,P<0.05,0.01)。⑤模型组苏木精-伊红染色见大脑白质及脊髓血管周围有大量炎性细胞浸润;Loyez氏染色见部分脱髓鞘改变。结论:①大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎是通过降低CD8 、增高CD4 及CD4 /CD8 介导的免疫性疾病。②左旋咪唑破坏了机体的免疫平衡,是诱导实验性变态反应性脑脊髓炎发生的重要免疫调节剂。     

酸性肽对阿尔茨海默病模型大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体、神经生长因子和β淀粉样蛋白水平的调节作用

背景:一些研究已经证实酸性肽对痴呆模型大鼠有良好的治疗作用,但其发挥作用的途径尚需探讨。目的:观察酸性肽能否抑制阿尔茨海默病大鼠脑内N-甲基-D-天冬氨酸受体和淀粉样β蛋白的产生以及促进神经生长因子的产生和分泌。设计:随机对照动物实验。单位:郑州大学医学院生物化学与分子生物学教研室。材料:实验于2005-03/2006-05在郑州大学生物活性肽研究所第一实验室和郑州大学基础医学院细胞培养中心完成。选取10周龄的健康且经Y-迷宫测定无痴呆症状的雄性SD大鼠70只,单纯随机分为7组,正常对照组、模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组、酸性肽15,30,60mg/kg组,每组10只。方法:正常对照组不干预,其他6组用鹅膏蕈氨酸损毁大鼠双侧迈内特基底核,建立阿尔茨海默病病的动物模型,造模后谷氨酸0.3g/kg组灌胃谷氨酸0.3g/kg,酸性肽15,30,60mg/kg组灌胃相应剂量酸性肽(自制),生理盐水组灌胃等量生理盐水,1次/d,2mL/次,连续20d。主要观察指标:①灌胃期满后各组大鼠即做Y-迷宫实验以检测大鼠的学习记忆能力,以正确反应次数为指标。②学习记忆测试结束后,各组大鼠断头取脑,免疫组化染色,再用BiosensDigitalImagingSystem灰度扫描仪扫描以检测大鼠脑内神经生长因子、N-甲基-D-天冬氨酸受体、淀粉样β蛋白的水平。结果:70只大鼠全部进入结果分析。①Y-迷宫实验中正确反应次数:其他6组均低于正常组(P<0.01);酸性肽30,60mg/kg组高于模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组及酸性肽15mg/kg组(P<0.01)。②基底前脑神经生长因子灰度值:模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组及酸性肽15mg/kg组低于正常对照组(69.60±2.41,69.62±1.46,69.62±1.46,69.73±1.87,80.77±2.72,P<0.01),酸性肽30,60mg/kg组与正常对照组比较差异不显著(79.39±2.23,80.20±1.7,P>0.05),但高于其他几组。③大脑皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体和淀粉样β蛋白表达的灰度值:模型组、生理盐水组、谷氨酸0.3g/kg组及酸性肽15mg/kg组高于正常对照组(N-甲基-D-天冬氨酸受体:81.01±1.38,81.31±2.06,81.37±1.39,79.38±1.23,69.50±1.04;淀粉样β蛋白:74.26±1.39,74.89±8.66,74.88±1.46,74.16±2.48,67.40±3.06,P<0.01),酸性肽30,60mg/kg组与正常对照组比较差异不显著(N-甲基-D-天冬氨酸受体:70.55±2.89,69.78±1.24;淀粉样β蛋白:67.66±2.25,67.58±2.21,P>0.05),但低于其他几组。结论:30,60mg/kg的酸性肽能明显改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,其治疗作用途径可能是通过上调基底前脑中的神经生长因子水平,下调大脑皮质中N-甲基-D-天冬氨酸受体和β淀粉样蛋白的水平实现的。     

HBV-LP阳性患者CD4+CD25+Treg细胞表达的研究

目的 探讨HBV-LP(乙肝病毒大蛋白)阳性患者CD4+CD25+Treg细胞数量的变化规律及其意义.方法 将HBV感染者标本,采用ELISA方法检测HBV-LP,PCR方法检测HBV-DNA,按照HBV-LP阴、阳性患者及正常血清共170例,其中男87例,女83例,平均年龄43(23~61)岁.分成四个实验组,第一组为HBV-LP阳性46例,第二组为正常组(非HBV感染者)50例,第三组为HBV-LP阴性及HBV-DNA阴性HBV感染者43例,第四组为HBV-LP阴性而HBV-DNA阳性的HBV感染者31例.各组之间在性别、年龄上分布均衡,差异无统计学意义.各组分别采用淋巴细胞分离液梯度离心法分离研究对象外周血,FCM术检测CD3+T,CD4+T,CD8+T,CD4+CD25+Treg细胞数量,进行分析.结果 ①各实验组之间CD3+T,CD8+T细胞数量无显著性差异,各组CD3+T分别为(65.38±4.85)%,(67.07±5.04)%,(64.94±5.26)%,(63.58±4.81)%(P＞0.05),CD8+T分别为(53.41±4.28)%,(54.71±5.05)%,(54.09±5.13)%,(52.59±4.88)%(P＞0.05).②结果以CD4+CD25+Treg来评价:HBV-LP阳性组(5.22±1.81)%分别高于正常对照组(3.13±1.12)%,HBV-LP阴性及HBV-DNA阴性组(3.24±1.22)%,HBV-LP阴性而HBV-DNA阳性组(3.23±1.61)%(P<0.01),而HBV-LP阳性组CD4细胞数量(32.63±3.93)%却低于其他三个实验组(39.32±5.55%),(37.53±4.72)%,(34.03±5.71)%,差异有统计学意义(P<0.05),③值得注意的是,HBV-DNA阳性而HBV-LP阴性组的各项指标几乎与正常组十分接近,之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HBV-LP阳性的HBV感染者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平明显增高,CD4+CD25+Treg细胞的过度表达在乙肝的发病机制及病程的转归中可能起着重要的作用.     

外周血中CD4~+CD25~+与CD8~+CD28~-调节性T细胞与Graves病的关系研究

目的分析Graves病(GD)患者外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-调节性T(Tr)细胞的变化。方法选择该院内分泌科门诊或住院部43例GD患者为研究对象,其中内分泌科门诊确诊的19例GD患者为试验初发组。接受治疗且甲状腺功能恢复正常的24例GD患者为治疗缓解组;选择同期健康体检者20例为健康对照组。采用流式细胞术检测3组外周血中CD4+CD25+和CD8+CD28-Tr细胞水平。结果试验初发组外周血CD4+CD25+Tr细胞水平为(4.56±4.14)%,明显低于健康对照组的(8.84±4.45)%,差异有统计学意义(P0.05),CD8+CD28-Tr细胞水平为(14.95±5.38)%,与健康对照组的(10.65±6.37)%比较,差异无统计学意义(P0.05)。治疗缓解组外周血中CD4+CD25+Tr细胞水平为(6.99±6.35)%,与健康对照组比较,差异无统计学意义(P0.05),但其CD8+CD28-Tr细胞水平为(20.48±6.07)%,高于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 CD4+CD25+Tr细胞水平可能与GD发病有关,CD8+CD28-Tr细胞可能与GD病程发展有关。     

大鼠卵巢组织中早期卵泡发育及卵母细胞凋亡与白藜芦醇的影响

目的:观察白藜芦醇对大鼠卵巢组织中早期卵泡发育及凋亡的影响。方法:实验于2006-07/12在汕头大学医学院细胞衰老实验室完成。成年SD大鼠合笼,所生的新生雌鼠分为3组:①对照组:正常出生者,不干预。②腹腔注射组:正常出生后12h内开始腹腔注射白藜芦醇25mg/(kg·d),1次/d。③母鼠灌胃组:正常怀孕的母鼠在孕12d(以发现阴道栓为怀孕0.5d)开始进行白藜芦醇25mg/(kg·d)灌胃,1次/d,直至分娩后生下的雌鼠。各组大鼠分别在出生2,4d处死取卵巢,应用苏木精-伊红染色观察大鼠早期卵泡发育情况(计算卵母细胞巢中卵母细胞及原始卵泡和发育卵泡的比率),应用TUNEL染色观察卵母细胞凋亡的情况。结果:①腹腔注射组和母鼠灌胃组大鼠卵母细胞巢内卵母细胞比例高于对照组[2d龄:(39.78±9.22)%,(53.20±5.08)%,(15.76±6.68)%;4d龄:(9.39±1.82)%,(5.39±2.12)%,(2.62±1.18)%;P均<0.05];2d龄母鼠灌胃组和腹腔注射组大鼠原始卵泡和发育卵泡比例低于对照组[原始卵泡:(57.64±7.23)%,(46.40±5.20)%,(74.57±9.36)%;发育卵泡:(2.58±2.41)%,(4.51±4.60)%,(9.67±4.70)%;P均<0.05]。②生后第2天是大鼠卵母细胞凋亡的高峰期,母鼠灌胃组和腹腔注射组卵泡凋亡率高于对照组,但差异不显著[(9.88±3.30)%,(12.95±3.34)%,(8.50±4.13)%,P>0.05]。结论:白藜芦醇可以延缓大鼠卵巢组织中卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动;但是对于卵母细胞的凋亡没有明显影响。     

白细胞介素-2和10 mRNA表达差异在CD4+CD25+T细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受中的意义

目的 探讨白细胞介素-2(IL-2)mRNA及IL-10 mRNA表达水平对大鼠肝移植耐受的影响.方法 将实验大鼠随机分3组:Ⅰ组为急性排斥组; Ⅱ组为CD4+CD25+T细胞处理组,供体Wistar大鼠,受体SD大鼠;Ⅲ组为移植对照组,供体、受体均为SD大鼠.每组12对.肝移植前7 d,Ⅱ组受体大鼠经阴茎背静脉注射含供体脾淋巴细胞的培养液,Ⅰ组、Ⅲ组注射等量生理盐水;术后7 d随机取6只大鼠用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝组织中细胞因子IL-2 mRNA及IL-10 mRNA的表达,用流式细胞仪检测各组移植肝内分离出的淋巴细胞含量,同时检测肝脏病理学的变化;另6只观察移植大鼠的生存期.结果 IL-2mRNA在Ⅰ组大鼠移植物内出现高表达,Ⅱ组仅有微弱表达,Ⅲ组则未见表达,IL-10 mRNA仅在Ⅱ组中表达,且表达程度较强.Ⅱ组和Ⅲ组大鼠存活期均超过30 d,与Ⅰ组(8～11 d)比较差异有统计学意义(P均＜0.01).Ⅰ组大鼠移植后肝脏有大量淋巴细胞浸润,数量明显高于Ⅱ组和Ⅲ组[(14.31±3.41)×106 /g比(5.04±1.13)×106 /g和(1.55±0.40)×106 /g,P均＜0.01],且显示中度排斥反应.Ⅱ组大鼠有中等量淋巴细胞浸润,病理为无排斥或不确定性排斥,且淋巴细胞中CD4+百分比[(43.31±8.07)%]和CD4+CD25+百分比C(11.39±1.92)%]均显著高于Ⅰ组[(33.65±7.25)%,(3.05±0.62)%]和Ⅲ组[(31.18±6.52)%,(3.37±0.72)%],差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).Ⅲ组未见明显淋巴细胞浸润,病理为无排斥反应.结论 IL-2参与了移植排斥的发生,而IL-10在CD4+CD25+T细胞诱导免疫耐受中具有非常重要的作用.     

骨关节炎大鼠关节软骨修复与橄榄叶提取物的干预效应

目的:观察橄榄叶提取物对白陶土及鹿角菜胶诱导的大鼠骨关节炎组织炎症的预防作用及对关节软骨的修复作用。方法:试验于2005-11/12在大连医科大学中日合作医药科学研究所进行。实验动物:选择健康雄性SD大鼠80只。实验材料:受试物橄榄叶提取物[由日本国Eisai食品与化学有限公司(日本国东京市)提供]。实验分组及给药:按体质量将大鼠随机分为5组,每组16只。模型对照组,灌胃给予蒸馏水,消炎痛组,灌胃给予消炎痛2mg/kg体质量,其余3组为橄榄叶提取物组,分别给予橄榄叶提取物(活性成分为以羟基酪醇为主的多酚)25,50,100mg/kg体质量灌胃,连续5d。第1天给药后1h,采用白陶土与鹿角菜胶诱发大鼠单发亚急性关节炎。实验评估:①诱发关节炎后1,3,5d,用容积测量法测定每组8只大鼠的左右后肢足跖体积,计算肿胀度,并同时用游标卡尺测定其胫跗骨关节最大径。②诱发关节炎后第5天,测定大鼠足跖伊文思蓝含量。每组的另8只大鼠,在诱发关节炎第5天麻醉后处死,剪下右足跖做组织病理学检查,观察橄榄叶提取物对大鼠骨关节炎中组织炎症的预防作用及对关节软骨的修复作用。结果:80只大鼠全部进入结果分析。①足跖肿胀度及胫跗骨关节径:诱发关节炎后1,3,5d,橄榄叶提取物50mg/kg组和100mg/kg组大鼠的右后足跖肿胀度均明显小于模型对照组大鼠[1d:(46.7±4.2)%,(44.8±6.8)%,(52.5±4.0)%;3d:(40.4±4.8)%,(37.4±5.7)%,(45.0±2.9)%;5d:(34.5±4.8),(31.7±5.3)%,(40.4±4.0)%,P<0.05],橄榄叶提取物25mg/kg体质量组,50mg/kg体质量组,100mg/kg体质量组大鼠的右后胫跗骨关节径与模型对照组大鼠比较差异无显著性(P>0.05)。②足跖伊文思蓝含量:诱发关节炎后第5天,橄榄叶提取物50mg/kg,100mg/kg组大鼠的右后足跖伊文思蓝含量均明显小于模型对照组大鼠(P<0.05)。③组织病理学检查及评分:组织病理学检查可见,与模型对照组比较,橄榄叶提取物50mg/kg组,100mg/kg组大鼠骨关节炎中组织炎症浸润明显减少,软骨组织无破坏,且组织病理学评分也明显小于模型对照组(P<0.05)。结论:橄榄叶提取物在50mg/kg体质量及以上剂量能有效地预防白陶土与鹿角菜胶诱发的大鼠骨关节炎中组织炎症,且对软骨有修复作用。     

银杏叶提取物干预实验性肺纤维化大鼠线粒体膜流动性的变化

目的:观察银杏叶提取物对肺纤维化大鼠线粒体膜流动性的影响,以探讨其治疗肺纤维化的作用机制。方法:实验于2005-05/11在湖北中医学院中心实验室完成。取健康Wistar大鼠96只,体质量180～240g,随机抽签法分为正常对照组、模型组、强的松组和银杏叶提取物组,每组24只。模型组、强的松组和银杏叶提取物组经气管注射博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,造模第2天起正常对照组与模型组每日1次灌胃生理盐水10mL/kg,银杏叶提取物组每天用银杏叶提取物混悬液6.75mg/kg灌胃,强的松组用醋酸强的松混悬液3.6mg/kg灌胃,每日1次。各组分别于7,14和28d随机处死8只大鼠采集肺组织,剪碎过筛后制成细胞悬液,分别用PI和Rhl23染色,流式细胞仪检测大鼠肺组织中线粒体膜流动性,线粒体膜流动性以稳态细胞占总细胞数的百分比表示。结果:纳入大鼠96只,模型组造模后第2,3,17天各死亡1只,其余93只大鼠全部进入结果分析。与正常对照组比较,模型组各时间点膜流动性处于稳态者均降低,差异有显著性意义[(54.74±15.78)%,(65.93±21.13)%,(67.34±28.57)%;(34.68±28.94)%,(30.69±20.27)%,(38.23±19.17)%,P<0.01];与模型组比较,强的松组、银杏叶提取物组各时间点膜流动性处于稳态者升高[(34.68±28.94)%,(30.69±20.27)%,(38.23±19.17)%;(45.03±27.55)%,(39.77±29.38)%,(42.25±22.74)%;(45.10±10.17)%,(43.81±21.23)%,(48.68±19.80)%,P<0.01,P<0.05];强的松组与银杏叶提取物组组间比较,第7天膜流动性处于稳态者无显著性差异[(45.03±27.55)%,(45.10±10.17)%,P>0.05],第14天与28天,银杏叶提取物组较强的松组高[(43.81±21.23)%,(39.77±29.38)%;(48.68±19.80)%,(42.25±22.74)%,P<0.05]。结论:银杏叶提取物能够通过保护肺组织细胞线粒体膜结构完整性来降低线粒体损伤程度,维持细胞正常的能量代谢。     

CD4+CD25+和CD8+调节性T细胞的作用机制

调节性T细胞（Treg）主要在机体免疫系统中发挥负向调节作用,既能抑制不恰当的免疫反应,又能限定免疫应答的范围、程度及作用时间,对CD4^＋和CD8^＋效应性T淋巴细胞的增殖起抑制作用,因此在移植物抗宿主病、自身免疫病、过敏性疾病等的发病机制和临床治疗中有潜在的应用价值.本文重点介绍CD4^＋CD25^＋Treg和CD8^＋Treg的作用机制,并简述调节性T细胞研究面临的挑战与展望.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与CD34+CD59-细胞生物学性能的研究

目的 探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患CD34^ CD59^ 细胞的特性及PNH克隆呈优势造血的可能原因，以探索PNH发病的内在机制。方法 用免疫磁珠吸附法富集纯化CD34^ 细胞，再用流式细胞仪分选出PNH患的CD34^ CD59^ 细胞、CD34^ CD59^ 细胞及正常对照CD34^ 细胞。分别进行体外扩增液体培养2周，并对扩增前、后的细胞进行半固体培养。结果 ①PNH患CD34^ CD59^ 细胞与正常对照CD34^ 细胞形成集落形成单位(CFU)均在第7天达到扩增高峰，并且扩增后的细胞仍能保持CD59抗原，无GPI锚连蛋白的丢失。②正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于FHN患的CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^-细胞.③PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，其形成CFU的能力无明显差异。④PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞在SCF IL3 IL6 FL Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异。但在SCF IL3 IL6 FL Tpo Epo GM-CSF组合下液体培养，CD34^ CD59^ 细胞的生存、增殖、扩增能力均明显强于CD34^ CD59^ 细胞。结论 ①正常对照的CD34^ 细胞在生存、增殖、形成CFU及扩增能力上均明显强于PNH患的CD34^ CD59^ 细胞。②PNH患CD34^ CD59^ 细胞及CD34^ CD59^ 细胞体外半固体培养，以及在SCF IL3 IL6 LF Tpo及SCF IL3 IL6 FL Tpo Ep组合下液体培养，其生存、增殖、扩增等能力上均无明显差异，说明CD34^ CD59^ 细胞在造血能力上并无内在的优势。GM—CSF或许是使PNH克隆呈造血优势的原因之一。     

Selective apoptosis of CD4+CD8+ thymocytes by the anti-Fas antibody

Fas is a cell surface protein that mediates apoptosis. A mouse mutant, lpr (lymphoproliferation), has a mutation in the Fas gene. In this report, we studied the expression and function of Fas in various subpopulations of mouse thymocytes. Abundant expression of Fas was detected on CD4+CD8+ double positive as well as CD4+ or CD8+ single positive thymocytes in wild-type mice. Little or low levels of Fas were expressed in CD4-CD8- double negative thymocytes except for the CD4-CD8- CD3+ phenotype, which expresses Fas as abundantly as double positive or single positive subsets. On the other hand, no Fas expression was detected in any population of thymocytes from lpr mice. When the wild- type thymocytes were treated with the agonistic anti-Fas antibody, double positive cells from the wild-type mice were selectively killed by apoptosis, whereas, the single positive cells were resistant to its cytolytic activity despite their abundant expression of Fas. Unlike the apoptosis of thymocytes induced by glucocorticoid or T cell activator, the Fas-induced apoptosis of thymocytes was enhanced by metabolic inhibitors such as cycloheximide. Furthermore, intraperitoneal administration of the anti-Fas antibody into mice caused rapid apoptosis of thymocytes in vivo.     

哮喘患儿CD8+CD28+、CD8+CD28-T淋巴细胞检测及其临床意义

目的通过对哮喘患儿CD4、CD8和CD28的联合检测,探讨哮喘患儿淋巴细胞免疫功能状态及其临床意义.方法采用流式细胞术检测哮喘患儿外周血的总T细胞(CD3+)、辅助/诱导T淋巴细胞(CD4+)、抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD8+)、细胞毒T细胞(CD8+CD28+)、抑制T细胞(CD8+CD28-).结果哮喘患儿组与对照组比较;CD3+、CD4+、CD8+CD28-细胞均低于对照组(P＜0.01,P＜0.05),CD8+CD28+细胞增高(P＜0.05),CD4+/CD8+比值、CD8+与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05).结论哮喘患儿存在T淋巴细胞亚群免疫功能紊乱,而CD8+CD28+、CD8+CD28-T细胞失衡可能是导致机体免疫功能紊乱的主要因素.     

microRNA在人脐血CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞中的差异性表达

为进一步探讨microRNA（miRNA）在造血调控中的作用奠定基础,比较了miRNA在人脐血CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞中的差异性表达。从人脐血中分离单个核细胞（MNC）,应用FACSVantage分选流式细胞仪分选CD34^＋CD38^-、CD34^＋CD38^＋细胞;抽提miRNA后与miRNA芯片杂交,应用生物信息学技术分析miRNA芯片的表达结果。结果发现,miRNA在人脐血CD34^＋CD38^＋细胞的表达水平比在CD34^＋CD38^-细胞的表达水平降低至1／2以下者共11个,表达水平升高至2倍以上者共73个,以上84个miRNA被称为“干细胞性”miRNA。经比较Georgantas等和芯片表达结果,发现有12个（14、29％,12／84）相同的miRNA。部分miRNA经历了类似于CD34在造血细胞表面的发展历程。应用生物信息学技术可寻找到新的与造血调控相关的miRNA簇及miRNA的下游靶基因。结论：“干细胞性”miRNA在正常造血中发挥着重要作用,即miRNA的系统表达模式一造血干／祖细胞基因表达谱一造血干／祖细胞的自我更新和系列定向分化。     

Regulatory CD4+CD25+ T cells restrict memory CD8+ T cell responses

CD4+ T cell help is important for the generation of CD8+ T cell responses. We used depleting anti-CD4 mAb to analyze the role of CD4+ T cells for memory CD8+ T cell responses after secondary infection of mice with the intracellular bacterium Listeria monocytogenes, or after boost immunization by specific peptide or DNA vaccination. Surprisingly, anti-CD4 mAb treatment during secondary CD8+ T cell responses markedly enlarged the population size of antigen-specific CD8+ T cells. After boost immunization with peptide or DNA, this effect was particularly profound, and antigen-specific CD8+ T cell populations were enlarged at least 10-fold. In terms of cytokine production and cytotoxicity, the enlarged CD8+ T cell population consisted of functional effector T cells. In depletion and transfer experiments, the suppressive function could be ascribed to CD4+CD25+ T cells. Our results demonstrate that CD4+ T cells control the CD8+ T cell response in two directions. Initially, they promote the generation of a CD8+ T cell responses and later they restrain the strength of the CD8+ T cell memory response. Down-modulation of CD8+ T cell responses during infection could prevent harmful consequences after eradication of the pathogen.     

Increased percentage of CD4+CD25+ regulatory T cells during septic shock is due to the decrease of CD4+CD25- lymphocytes

OBJECTIVE: The elevation of the percentage of regulatory CD4+CD25+ T lymphocytes (Treg) has been recently described during septic shock. The objective of the present study was to investigate whether this increased percentage was due to Treg proliferation. DESIGN: Observational study. SETTING: Adult intensive care units in a university hospital. SUBJECTS: Patients with septic shock (n = 54) and healthy individuals (n = 30). INTERVENTIONS: None. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: In patients, we first confirmed the increased percentage of Treg among CD4+ lymphocytes in comparison with healthy individuals. Surprisingly, regarding absolute counting, we demonstrated that both T CD4+ lineages (CD25+ and CD25-) were diminished immediately after the onset of shock. Then, whereas Treg returned rapidly to healthy donors values, CD4+CD25- T lymphocytes remained dramatically reduced. Finally, Foxp3 (Treg-related gene) messenger RNA quantification enabled us to definitively rule out a lack of proliferation since it was not increased during shock. CONCLUSION: The increased percentage of Treg after shock is due not to their proliferation but to a decrease in CD4+CD25- T lymphocyte number. We hypothesize that it might be due to a resistance of Treg to apoptosis processes occurring during septic shock.     

不同试剂检测北京地区健康献血者淋巴细胞CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比参考值调查

目的探讨北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比的参考值范围，并对国产和进口的淋巴细胞免疫表型双染试剂进行比较。方法收集北京地区500例健康献血者全血标本，分别使用进1：3和国产的CD3FITC／CD4PE和CD3FITC／CD8PE双染试剂，应用同一台流式细胞仪进行检测，并对不同性别、民族和年龄段的结果以及不同试剂的结果进行比较。结果进口试剂检测的北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋百分比以及CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋的范围（95％可信限）分别为22．92～49．96、14．86～41．70、0．37～2．47，不同年龄段（18-29、30～39与40岁以上组）各项指标均值的差异有统计学意义（P〈0.05），而不同性别的比较仅CD3^＋CD4^＋（％）的差异有统计学意义（P〈0.01），比较汉族（n=484）与少数民族（n=16）中各项指标的差异均无统计学意义（P〉0.05）。国产与进口试剂的检测结果显著相关，CD3^＋CD4^＋（％）、CD3^＋CD8^＋（％）以及CD3^＋CD4^＋／cD3^＋CD8^＋的r值分别为0．970、0．953、0．967。u检验结果显示CD3^＋CD4^＋（％）的差异无统计学意义（P〉0．05），而CD3^＋CD8^＋（％）、CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论初步建立北京地区健康献血者CD3^＋CD4^＋（％）、CD3^＋CD8^＋（％）的参考值，参考值受年龄、性别、民族、检测试剂和仪器等多种因素的影响。国产和进口淋巴细胞免疫表型双染试剂检测结果基本一致，相关性具有显著性。     

CD4+CD25+调节性T细胞的研究进展

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能，其功能紊乱或数目下降是导致自身免疫性疾病的重要原因之一。近年来，研究发现Foxp3在调控CD4^＋CD25^＋Treg细胞的发育和功能上起着重要作用。本文就CD4^＋CD25^＋Treg细胞的免疫抑制机制、Foxp3在其发育和功能上的作用、IL-2和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）等对其产生、维持及活化的作用等方面作一综述。