miR-101在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌(CRC)是个多因素、多步骤,并同多种基因相关联所致的疾病。近年来研究表明micro RNA(miRNA)与CRC的发病中基因表达调控方面关系密切,miRNA可以通过靶基因进而调控蛋白,这些受其调控的蛋白也能反过来调控miRNA的表达,从而在体内形成了一个复杂的调控网络,在肿瘤的发生发展过程中起到了重要的作用。miR-101在CRC中表达水平下调,并且通过多个靶向位点及通路调控CRC细胞增殖、侵袭和转移。笔者就miR-101在CRC发生发展中的作用作一综述。     

SELENBP1在结直肠癌中的表达及其与肿瘤分化的关系

目的：通过蛋白质组学技术筛选出结直肠癌（CRC）组织中差异表达最显著的蛋白,并探讨其与CRC疾病特征的关系。方法：收集83例CRC患者手术标本,包括患者的CRC组织,正常大肠黏膜组织,转移的淋巴结以及部分患者同时长有的大肠良性息肉。用二维差异凝胶电泳（2D DIGE）及基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）对新鲜的CRC与正常黏膜组织以行蛋白质组学分析。找出兴趣蛋白后,用Western blot法在新鲜的CRC与正常黏膜组织,以及不同的CRC细胞株中验证;用免疫组化检测石蜡包埋的CRC、正常黏膜、良性息肉和转移淋巴结组织中该蛋白的表达。用Western blot法检测CRC细胞株在丁酸钠（NaB）诱导分化后该蛋白的表达改变。结果：2D-DIGE分析和MALDI-TOF-MS鉴定结果显示,CRC组织中硒结合蛋白1（SELENBP1）表达丰度比正常黏膜组织明显降低2.54倍（P<0.01）。Western blot示,CRC组织中SELENBP1的表达水平明显低于其配对的正常黏膜组织[（0.76±0.37） vs. (1.46±0.56）]（P<0.001）,SELENBP1的表达在CRC细胞株中普遍降低。免疫组化示,SELENBP1的表达评分在CRC组织与正常黏膜组织中分别为1.25±0.78和2.02±0.77,组间差异有统计学意义（P<0.001）;在高、中、低分化的CRC组织中分别为1.75±0.53,1.29±0.41,0.89±0.49,组间差异有统计学意义（P<0.05）;在不同分期的CRC组织间、良性息肉与正常黏膜间、转移淋巴结与其配对的原发癌间,差异均无统计学意义（均P>0.05）。各CRC细胞株经NaB分化诱导后,SELENBP1表达均明显增高（均P<0.05）。结论：CRC组织SELENBP1表达降低,SELENBP1表达降低与CRC低分化程度有关,但与疾病进展及淋巴结转移无关。

     

microRNA-25高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系

目的:探讨micro RNA-25(mi R-25)在直肠癌细胞中的表达及作用。方法:检测多种不同直肠癌细胞中mi R-25的表达,并检测直肠癌细胞转染mi R-25前体(pre-mi R-25)上调mi R-25的表达或转染mi R-25抑制剂(anti-mi R-25)下调mi R-25的表达后生物学行为的变化。结果:与正常直肠黏膜组织比较,不同的直肠癌细胞中mi R-25的表达均不同程度的明显升高(均P0.05)。在mi R-25表达水平相对较低的直肠癌HR-834细胞中转染pre-mi R-25,在mi R-25高表达的直肠癌SW-837细胞中转染anti-mi R-25后,两种细胞的增殖、细胞周期、凋亡无明改变(均P0.05),但侵袭及迁移能力在HR-834细胞的明显增强,SW-837细胞减弱(均P0.05)。结论:mi R-25在直肠癌细胞中的表达升高,且其升高程度与细胞的侵袭和迁移能力密切相关。     

结直肠癌组织中miR-142-3p及RAC1基因的表达及其意义

目的 研究结直肠癌组织中miR-142-3p、RAC1基因及蛋白的表达与临床病理特征的关系,并探讨miR-142-3p及RAC1二者表达的相关性.方法 用实时荧光定量PCR技术测定50例结直肠癌组织及其对应的正常黏膜组织中miR-142-3p和RAC1mRNA的表达;用免疫组化SP法检测RAC1蛋白的表达.结果 结直肠癌组织中miR-142-3p的表达低于对应的癌旁组织[-(0.714±2.876)比-(2.116±3.179),Z=-2.882,P=0.004];RAC1 mRNA表达显著高于癌旁组织[(8.973±1.940)比(10.093±2.069),Z=-4.204,P=0.000].miR-142-3p的表达与结直肠癌的淋巴结转移和临床分期有关(均P＜0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置、浸润深度、组织分化程度、有无远处转移等无关(均P ＞0.05);RAC1 mRNA的表达与结直肠癌患者的分化程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有关(均P ＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、浸润深度无关(均P＞0.05);RAC1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期有关(P＜0.05),而与其他临床病理特征无关.miR-142-3p的表达与RAC1 mRNA的表达无相关性(P＞0.05),而与RAC1蛋白的表达存在负相关(P＜0.05).结论 在结直肠癌组织中RAC1mRNA及RAC1蛋白高表达和miR-142-3p的低表达可能与其预后有关.     

microRNA-139-5p及其靶基因Notch1在结直肠癌中的作用

目的：探讨microRNA-139-5p（miR-139-5p）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞转移和侵袭的影响。 方法：用荧光定量PCR方法检测miR-139-5p在结直肠癌组织与不同结直肠癌细胞株中的表达变化;用Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miR-139-5p转染及miR-139-5p抑制对结直肠癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miR-139-5p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证,Western blot方法检测miR-139-5p转染对靶基因表达的影响。 结果：与各自的正常对照组比较,结直肠癌组织与结直肠癌细胞系中miR-139-5p表达均明显降低（P<0.05）。结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞转染miR-139-5p后,转移与侵袭能力均明显降低（均P<0.05）,而miR-139-5p抑制剂处理后,两种细胞的的侵袭能力均明显增强（均P<0.05）。生物信息学预测显示,Notch1是miR-139-5p的靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示,转染miR-139-5p后,结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞中Notch1蛋白表达均明显下调（均P<0.05）。 结论：miR-139-5p可能通过调节Notch1的表达而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭,而下调的miR-139-5p可能在结直肠癌的发生发展中起了重要作用。     

miR-150 和miR-134 在结直肠癌及腺瘤中的表达

目的：探讨miR-150和miR-134在结直肠癌与结直肠腺瘤中的表达及意义。 方法：采用实时定量荧光PCR（qRT-PCR）检测40例结直肠癌组织及其癌旁正常组织与29例结直肠腺瘤组织中miR-150和miR-134表达,并分析两者与结直肠癌临床病理因素之间的关系。 结果：与癌旁正常组织比较,miR-150在腺瘤组织中表达明显升高,而在癌组织中表达明显降低（均P<0.05）;miR-134在腺瘤组织中表达明显降低（P<0.05）,但在癌组织中表达差异无统计学意义（P>0.05）;miR-150表达水平与结直肠癌的组织学类型及分化程度有关（P=0.033,P=0.041）;miR-134表达水平与结直肠癌的各项临床病理因素均无明显关系（均P>0.05）。 结论：miR-150在结直肠癌中表达下调,提示其可能有潜在的抑癌作用,miR-150和miR-134在结直肠腺瘤中的表达均发生异常,提示两者均可能与结直肠腺瘤的发生密切相关。     

CXCR3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨CXCR3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用SP免疫组织化学方法检测52例结直肠癌组织CXCR3的表达,Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR3在大肠癌细胞株SW480、SW620、HT29细胞的表达及迁移能力.结果 CXCR3的阳性表达率为88%(46/52),CXCR3的高表达与结直肠癌患者的年龄、性别、结直肠癌组织类型、分化程度无关,而与临床转移(肝脏、淋巴结转移)有关(x2=12.1、21.5,P＜0.01).SW480、SW620及HT29的CXCR3表达均呈阳性,其中大肠癌细胞HT29和SW620 CXCR3高表达,大肠癌细胞SW480 CXCR3低表达.在体外迁移实验中,大肠癌细胞HT29和SW620发生体外迁移细胞明显增多(75±6比147±8、63±5比9l±6,P＜0.01),而大肠癌细胞SW480体外迁移无明显变化(47±4比45±3,P>0.05).结论 CXCR3上调表达与结直肠癌转移有关.     

CD157蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究CD157蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测CD157蛋白在50例结直肠癌和对应癌旁正常结直肠黏膜组织中的表达水平,并分析CD157蛋白表达与患者的临床病理指标及预后的关系.结果 与正常结直肠黏膜组织相比,结直肠癌组织中CD157蛋白呈高表达(20％比72％,x2=25...     

结直肠癌组织中CD44v6和β-catenin蛋白的表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中CD44v6和β-catenin蛋白表达及其意义。方法采用微波-EliVisionTM免疫组化染色方法检测60例结直肠癌组织中CD44v6和β-catenin的表达情况,并分析其与临床病理参数尤其与结直肠癌浸润转移的关系。结果阳性表达物质CD44v6主要在细胞膜和细胞质,β-catenin主要在细胞质。60例结直肠癌CD44v6和β-catenin蛋白阳性表达率分别为71.7%和81.7%。两者均与肿瘤的临床TNM分期、浸润程度、淋巴结转移及术后复发有关;上述参数各分组间差异有统计学意义(P0.05)。结论联合检测CD44v6-和β-catenin蛋白表达对了解结直肠癌的生物学行为和判断患者预后有一定的实用价值。     

Pleiotrophin的表达及其在血清水平与结肠癌的关系

目的：探讨pleiotrophin（PTN）的表达及其血清水平与结肠癌的关系。 方法：应用real time-PCR、Western blot方法检测46例结直肠癌组织及其对应癌旁组织中PTN mRNA及蛋白表达水平;ELISA方法检测76例结直肠癌患者和58例健康体检者血液样本中的PTN表达水平。 结果：PTN mRNA在结直肠癌组织中表达量以及PTN蛋白的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有统计学意义（均P<0.05）;无论是PTN mRNA表达水平还是蛋白阳性率均与患者年龄、肿瘤组织类型无关（均P>0.05）,而与肿瘤的分化程度呈负向关系、与TNM分期呈正向关系（均P<0.05）。结直肠癌患者血清PTN水平明显高于正常人群（P<0.05）。 结论：PTN在结直肠癌组织中表达增高;血清PTN水平检测可作为诊断结直肠癌参考指标之一。

     

microRNA-224在结肠癌细胞中的表达及意义

目的：探讨microRNA-224（miR-224）对结肠癌细胞中的表达及意义。 方法：用real-time PCR检测4种结肠癌细胞株（Caco-2、HCT116、HT-29、LoVo）和正常结肠黏膜组织中miR-224的表达水平;将HCT116细胞分别转染miR-224模拟物和阴性对照组序列,以未处理的HCT116细胞作为空白对照,用real-time PCR法检测各组细胞miR-224的表达水平,用MTT法和平板克隆实验法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测各组细胞周期情况。 结果：4种结肠癌细胞株miR-224的表达均明显高于正常结肠黏膜组织（均P<0.05）;与空白对照组HCT116细胞比较,miR-224模拟物转染组HCT116细胞miR-224的表达水平明显升高,增殖活力明显增强,细胞克隆数量明显增高（均P<0.05）;细胞周期G1到S期转换的趋势增强（P=0.074）;阴性对照组序列转染组HCT116细胞的各项指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：miR-224在结肠癌细胞中表达上调,miR-224可能通过促进细胞增殖与细胞周期的演进,而在结肠癌发生发展的过程中发挥促癌基因的作用。     

趋化因子CXCL9在结直肠癌组织中的表达及意义

目的：通过检测趋化因子CXCL9在结直肠癌中的表达情况,探讨CXCL9与结直肠癌临床病理特征之间的关系。方法：72例结直肠癌患者按Dukes分期分为A、B、C、D 4组,应用Elisa法检测4组及对照组20例志愿者血清CXCL9的含量;应用免疫组织化学方法、Western Blot法检测72例结肠癌组织及癌旁组织中的CXCL9表达,探讨CXCL9与结直肠癌临床病理特征之间的关系。结果：4组结肠癌患者血清CXCL9的平均含量分别为10.21 ng/L1、7.12 ng/L、30.57 ng/L、56.26 ng/L,对照组血清CXCL9平均含量为7.83 ng/L,差异具有统计学意义（P〈0.05）。65.3%（47/72）的结肠癌组织CXCL9表达阳性;其中43.1%（31/72）为高表达,56.9%（41/72）为低表达,差异具有统计学意义（P=0.023）。11.1%（8/72）的癌旁组织CXCL9表达阳性,为低表达,与结肠癌比较,差异有统计学意义（P=0.000）。CXCL9的表达与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织类型无关（P〉0.05）;而与肿瘤的分化程度、淋巴转移、Dukes分期有关（P〈0.01）。结论：CXCL9在结直肠癌组织中呈较高表达,且表达水平与结直肠癌的浸润、转移等有关。     

Prognostic significance of E-cadherin expression in human colorectal cancer tissue

The expression of E-cadherin was determined by immunohistochemical staining in tumor tissue and in adjacent normal mucosae taken from 100 resected specimens of colorectal carcinomas. The expression of E-cadherin was preserved in all normal mucosae, but in the tumor tissue specimens it was preserved in 43, heterogeneous in 32, and lost in 25 samples. The lost or heterogeneous expression of E-cadherin correlated closely to the following: an advanced clinical stage of colorectal cancer, advanced tumor penetration, undifferentiated tumor histology, widespread lymph node involvement, liver metastasis, and permeation into the lymphatic and venous channels. The lost or heterogeneous expression of E-cadherin in tumor tissue was also significantly associated with an increased incidence of tumor recurrence after apparently curative resection, a reduced overall survival rate, and a reduced disease-free patient survival rate. A multivariate analysis disclosed that the expression of E-cadherin in tumor tissue was a significant prognostic variable independent of other clinicopathological features.     

CXCR4在结肠直肠癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨CXCR4在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用S-P免疫组织化学方法检测63例结肠直肠癌组织、25例癌旁正常组织、17例肝转移灶和15例淋巴结转移灶中CXCR4的表达。结果：与癌旁正常组织相比，结肠直肠癌组织表达较高水平的CXCR4。CXCR4的高表达与结肠直肠癌患者的年龄、性别、结肠直肠癌组织类型、分化程度无关，而与临床转移有关。结论：CXCR4上调表达与结肠直肠癌的发生和转移有关。     

p73 expression and its clinical significance in colorectal cancer

Objective  To explore p73 mRNA and p73 protein expression and their clinical significance in colorectal cancer.
Method  p73 mRNA and p73 protein expression were detected using hybridization in situ and immunohistochemical method in cancerous tissue from 60 patients of colorectal cancer and in paracancerous tissue from 23 patients among the corresponding 60 patients of colorectal cancer. Quantitative analysis was performed using Smartscape image analysis system.
Results  Compared with paracancerous tissue, p73 mRNA and p73 protein expression in cancerous tissue was increased with a statistically significant difference ( P  <   0.01) and was associated with differentiation level and lymphatic metastasis.
Conclusion  High expression of p73 mRNA and p73 protein in colorectal cancer may be involved in the progression of colorectal cancer and p73 mRNA and p73 protein may serve as a potential index to predict differentiation level and prognosis of colorectal cancer.     

抑癌基因PTEN在结肠直肠癌中表达的研究

目的：探讨PTEN蛋白在结肠直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学技术检测1998年1月至1999年8月间于我院收治的122例结肠直肠癌组织标本中frrEN蛋白的表达。结果：在122例结肠直肠癌组织标本中有39例为阴性表达，正常结肠直肠黏膜组织、腺瘤组织均为阳性表达（P〈0．01）。无论阳性面积抑或强阳性面积，PTEN蛋白表达与结肠直肠癌病人的性别、年龄无显著相关性（P〉0．05）；而与结肠直肠癌周径、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分化程度和Dukes分期存在显著相关（P〈0．01）。肿瘤分化各组两两比较显示，在阳性面积中除高分化与中分化腺癌、在强阳性面积中除低分化与未分化腺癌（P〉0．05）外，其余各组间统计学检验均存在显著性差异（P〈0．01）。Dukes分期各期两两比较，无论是阳性面积还是强阳性面积，除B期与C期（P〉0．05）外，其余各组间统计学检验均存在显著性差异（P〈0．01）。结论：PTEN抑癌基因的蛋白表达低下或丢失与结肠直肠的癌变有关，可能是结肠直肠的癌变过程中一种较晚发生的事件，是进展期结肠直肠癌的一种信号。     

microRNA-497 在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨microRNA-497(miR-497)在肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法:收集40例肝细胞癌及对应癌旁组织标本,用qRT-PCR方法检测标本中miR-497的表达;人肝癌SMMC-7721细胞经miR-497模拟物转染后,用MTT和流式细胞术检测其增殖能力与凋亡水平的变化,并用qRT-PCR和Western blot检测miR-497潜在靶点Bcl-w的mRNA与蛋白的表达.结果:miR-497在肝癌组织中的表达水平明显低于其癌旁组织[(1.181±0.779)vs.(14.599±5.266),P＜0.05];转染miR-497模拟物的SMMC-7721细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡增加,Bcl-w的mRNA与蛋白表达均明显降低(与未转染的SMMC-7721细胞比较,均P＜0.05).结论:肝癌组织中miR-497表达下调,该下调可能导致靶基因Bcl-w表达升高,从而促进肿瘤的发生与发展.     

癌性锚蛋白重复序列在结直肠癌组织的表达及临床意义

目的：探讨癌性锚蛋白重复序列（gann ankyrin repeats, Gankyrin）在结直肠癌和正常黏膜组织的表达情况及与各临床病理因素之间的关系。方法通过免疫组织化学SP法对55例结直肠癌组织、30例癌旁黏膜组织检测Gankyrin蛋白的表达,检测所得的数据采用SPSS13．0统计软件包进行分析,各组资料的比较均采用卡方检验,以P＜0．05表示差异具有统计学意义。结果 Gankyrin蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为78．2％,在癌旁黏膜组织中的阳性表达率为23．3％,其癌组织的阳性表达率明显高于癌旁黏膜组织（χ2＝24．109, P＜0．01）;Gankyrin蛋白在同一结直肠癌患者的癌组织阳性表达高于癌旁黏膜组织的阳性表达（χ2＝6．722, P＜0．05）;在伴有淋巴结转移的组织中Gankyrin蛋白的阳性表达率明显高于无淋巴结转移的癌组织（χ2＝6．139, P＜0．05）,在TNM分期中,（Ⅲ＋Ⅳ）期的癌组织Gankyrin蛋白的阳性表达率明显高于（Ⅰ＋Ⅱ）期阳性表达率（χ2＝5．130, P＜0．05）;Gankyrin蛋白在结直肠癌的阳性表达与年龄、性别、有无浆膜浸润和肿瘤的分化程度无显著关系（P＞0．05）。结论 Gankyrin蛋白在结直肠癌组织中呈阳性表达,可能与肿瘤的发生发展有密切关系,对判断预后的意义有待进一步研究。     

Stathmin蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Stathmin蛋白在结直肠癌组织中的表达及与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学SP法对58例结直肠癌组织、30例患者癌旁5cm的正常黏膜组织中Stathmin蛋白的表达进行了检测,两组采用卡方检验连续性校正,以P〈0．05有统计学意义。结果Stathmin蛋白在结直肠癌组织中阳性率为69．0％（40／58）,在正常黏膜中的阳性率为33．3％（10／30）,Stathmin在癌组织表达明显高于正常黏膜（r=6．87,P〈0．05）;Stathmin蛋白表达与患者年龄、性别以及肿瘤组织的分化程度、浸润深度、是否有淋巴结转移关系不明显（χ^2=0．26,P〉0．05）,与肿瘤的远处转移有关（χ^2=9．83,P〈0．05）。结论Stathmin蛋白在结直肠癌组织中呈阳性的表达,除了与远处转移有一定关系,尚不能作为判断其余结直肠癌临床病理特性的依据。