生长激素受体靶向siRNA联合5-FU对人结肠癌肝转移的影响

目的：探讨小分子干扰RNA（siRNA）靶向抑制人生长激素受体（hGHR）联合5-FU对人结肠癌细胞肝转移的影响。
方法：建立人结肠癌细胞SW480 BALB/c小鼠肝转移模型,并针对hGHR基因靶点构建siRNA干扰质粒,将荷瘤小鼠随机分成6个不同处理组,分别为生理盐水组、质粒组、生长激素（GH）组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组、5-FU+质粒组、5-FU+质粒+GH组,观察各组肿瘤的肝转移情况。
结果：各组小鼠均有肝转移瘤形成,质粒组肝转移瘤数较生理盐水及GH组明显减少（2.67±1.37 vs. 10.17±1.94,10.50±1.38）（P＜0.05）;干扰质粒与5-FU联用后肝转移瘤数略低于两者单独使用（2.33±1.03 vs. 3.17±0.98,2.67±1.37）,但差异无统计学意义（P＞0.05）;在5-FU+质粒的基础上加用GH并不增加肝转移瘤的发生（P＞0.05）,但能改善小鼠由GHR抑制和化疗药物的毒性引起的体质量降低（P＜0.05）。
结论：siRNA靶向抑制hGHR可降低小鼠中人结肠癌细胞SW480肝转移的发生,GHR在肿瘤转移中可能起了重要作用。

     

白桦脂醛对裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制研究

背景与目的 白桦脂醛是一种天然的RORγt激动剂,研究发现RORγt激动剂是潜在的肿瘤免疫治疗药物,提示白桦脂醛可能具有抗肿瘤的作用。本文通过体内实验探讨白桦脂醛对A549细胞裸鼠成瘤的影响及可能机制。方法 将A549细胞按2×10⁶个/100 μL通过腋下皮下注射植入裸鼠,成瘤后将裸鼠随机分为对照组和低、中、高3个剂量的白桦脂醛处理组,每组7只,分别给与溶剂DMSO、50 mg/kg白桦脂醛、100 mg/kg白桦脂醛、200 mg/kg白桦脂醛腹腔注射,1次/d。随后每周进行2次瘤体测量;处理3周后,取移植瘤行HE染色观察瘤体组织形态,TUNEL染色检测细胞凋亡水平,Western blot检测细胞内增殖信号通路Akt、ERK、STAT3蛋白及自噬相关蛋白LC3和P62的表达。结果 与对照组比较,各剂量白桦脂醛处理组肿瘤的生长被明显抑制（均P<0.05）;瘤体组织均出现大小不等的坏死区,TUNEL染色阳性细胞数明显增加（均P<0.05）;瘤体组织p-Akt、p-ERK、p-STAT3、p62的表达水平明显下调,LC3 II/I表达水平明显上调（均P<0.05）。以上作用均呈一定的剂量依赖趋势。结论 白桦脂醛能够降低A549细胞的成瘤能力,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,机制可能是其与对种瘤细胞内多条促增殖信号通路的抑制以及促进细胞自噬作用有关。     

生长激素和生长抑素对人结肠癌裸鼠移植瘤模型的影响

目的观察外源性生长激素（GH）和生长抑素（SS）对人结肠癌细胞株HT-29裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和裸鼠血清蛋白水平的影响。方法接种结肠癌细胞株HT-29建立裸鼠移植瘤模型。比较移植肿瘤体积、细胞周期分布、增殖指数（PI）、凋亡率、bcl-2和bax mRNA水平．以及裸鼠血清蛋白水平。结果生长抑素能够明显抑制移植瘤的生长（P〈0．05）、降低移植瘤PI（P〈0．05）、促进移植瘤细胞凋亡（P〈0．01）、降低移植瘤bcl-2mRNA表达（P〈0．05）、提高移植瘤baxmRNA表达（P〈0．05），生长激素则表现出相反的作用。生长激素能够改善移植瘤导致的低蛋白血症（P〈0．05）。结论外源性生长抑素能够显著抑制人结肠癌裸鼠移植瘤生长，外源性生长激素单独或联合生长抑素应用能够改善荷人结肠癌移植瘤裸鼠低蛋白血症，但具有潜在的促进肿瘤生长的作用。     

重组人生长激素对人结肠癌移植瘤裸鼠CEA,cAMP及cGMP的影响

目的　建立人结肠癌细胞株COLO 3 2 0裸鼠移植瘤模型 ,探讨重组人生长激素 (γ hGH )对血清癌胚抗原 (CEA)、移植瘤中CEA、环磷酸腺苷 (cAMP)及环磷酸鸟苷 (cGMP)的影响。方法　经 4次传代 ,将生长稳定的 2 0只荷瘤裸鼠随机分为 4组 :( 1)对照组 ;( 2 )γ hGH组 ;( 3 )羟基喜树碱 (CPT )组 ;( 4 )γ hGH +CPT组 (联合组 )。接种次日开始给药 ,连续用药 3 5d后处死裸鼠 ,留取裸鼠血及移植瘤标本 ,测定血清及瘤组织中CEA ,瘤组织中cAMP及cGMP的含量。结果　γ hGH组移植瘤与对照组移植瘤比较 ,所有指标的差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;γ hGH组与CPT组及联合组比较 ,所有指标的差异均有统计学意义 (P <0 .0 0 1) ;而GPT组与联合组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　γ hGH对人结肠癌细胞株COLO 3 2 0移植瘤模型的CEA ,cAMP ,cGMP无影响。     

人胃癌细胞原位移植裸鼠原发灶与肝转移灶体外化疗药敏性差异

目的：比较人胃癌原位移植裸鼠肝转移模型原发灶、肝转移灶肿瘤细胞对化疗药物敏感性。 方法：将裸鼠皮下传代的SGC-7901细胞株实体瘤组织块移植于裸鼠胃壁,建立人胃癌裸鼠原位移植模型,待其发生肝转移后取胃原发灶、肝转移灶肿瘤细胞,SRB法检测肿瘤细胞对氟尿嘧啶（5-FU）,顺铂（CDDP）,奥沙利铂（L-OHP）,表阿霉素（eADM）,丝裂霉素（MMC）,长春新碱（VCR）,氨甲喋呤（MTX）7种化疗药物的体外敏感性。 结果：成功建立裸鼠原位移植胃癌转移模型,肿瘤原位移植成瘤率100%,肝转移率75%;7种药物中L-OHP,VCR对原发灶肿瘤细胞的抑制率高于肝转移灶,而eADM,MMC对肝转移灶肿瘤细胞的抑制率高于原发灶（均P<0.05）;5-FU,L-OHP,MTX对原发灶与肝转移灶的抑制率具正相关性（r=0.5203;0.4424;0.3851,均P<0.05）。 结论：胃癌原位移植动物的原发灶和肝转移灶细胞的对化疗药物药敏性存在差异,以原发灶药敏检测结果指导针对肝转移灶的治疗可能是不准确的。     

汉黄芩素对胰腺癌作用的体外、体内实验研究

目的：探讨汉黄芩素对胰腺癌Panc-1细胞体内外生长的影响。方法：将不同浓度（1,10,100 μmol/L）汉黄芩素作用胰腺癌Panc-1细胞24 h,用MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖与凋亡情况。将20只荷Panc-1细胞移植瘤裸鼠随机均分为对照组,汉黄芩素组（汉黄芩素60 mg/kg,1次/d）,吉西他滨组（吉西他滨150 mg/kg,1次/周）与联合用药组（汉黄芩素+吉西他滨）,连续给药2周并停药7 d后,比较各组移植瘤生长情况,用免疫组化法检测瘤组织微血管密度（MVD）与血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：与无处理的对照细胞比较,3个浓度汉黄芩素处理后的Panc-1细胞OD值均明显降低,凋亡率均明显升高,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。与对照组比较,汉黄芩素组,吉西他滨组与联合用药组移植瘤的生长均被明显抑制,抑瘤率分别为24.8%,30.5%,66.1%,联合用药组的抑制率明显大于两个单药组（均P<0.05）,但两单药组间差异无统计学意义（P>0.05）;3个治疗组肿瘤组织CD31（反映MVD）与VEGF的表达均明显减少,且吉西他滨组,汉黄芩素组,联合用药组减少程度依次明显,组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论：汉黄芩素能抑制胰腺癌细胞的增殖并促进凋亡;能一定程度抑制胰腺癌在体内的生长,并增加肿瘤对化疗药物的敏感性,该作用的机制部分与抑制肿瘤的血管生成有关。

     

人源肿瘤异种移植模型的研究进展

肿瘤细胞系培养技术的出现有力地推动了肿瘤生物学研究地发展,但在肿瘤新疗法地临床转化研究中,细胞系肿瘤模型地预测能力有限,且不稳定.人源肿瘤异种移植模型能高度保留原肿瘤内基质异质性、组织学特性和分子多样性,引起研究者关注并被广泛应用于肿瘤新疗法研究,有望为肿瘤患者个体化治疗带来新突破.     

结肠癌淋巴结转移程度与预后关系的研究

目的：探讨淋巴结转移程度对结肠癌根除术后患者预后的影响。方法：回顾分析3年余符合筛选标准的82例行结肠癌根除术患者的临床资料。根据淋巴结转移数目进行分组,N0组（0个）36例,N1组（1~3个）31例,N2组（≥4个）15例。比较各组术后3年生存率、复发率及远处转移率;比较不同浸润深度和N1~N4站淋巴结转移率的关系。结果：N0组,N1组,N2组术后3年生存率分别为80.5%,67.7%,20.0%,组间差异有统计学意义（P<0.05）。N0组及N1组复发率和远处转移率显著低于N2组,差异有统计学意义（P<0.05）。随着结肠癌浸润深度的增加,淋巴结转移率也逐渐升高,且N1站淋巴结转移率明显高于其余站淋巴结转移率。结论：无淋巴结转移的患者术后3年生存率显著高于有淋巴结转移的患者,淋巴结转移数目与结肠癌患者预后有关,前者是影响预后的重要因素。

     

内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在结肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨结肠癌组织内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法： 选择82例结肠癌患者的结肠癌组织与相应的癌旁正常结肠组织（距癌组织>5 cm）制作蜡块后构建组织芯片,分别用免疫组化法及Western blot法检测CHOP/GADD153蛋白的表达,并分析其表达与患者临床病理特征分关系。结果：免疫组化与Western blot结果均显示,结肠癌组织CHOP/GADD153蛋白的表达水平明显癌旁正常结肠组织（P<0.05）;与临床病理特征的关系分析显示,结肠癌组织中CHOP/GADD153蛋白的表达水平随结肠癌组织分化程度的降低而增强（P<0.05）,而与患者的年龄、性别、肿瘤的大小、肿瘤的浸润深度和淋巴结转移等因素无关（均P>0.05）。结论：结肠癌组织中CHOP/GADD153蛋白的表达增高,并与结肠癌织的分化程度密切相关,提示内质网应激可能参与了肿瘤分化的调控。

     

结肠癌同时性肝转移同期手术与分期手术的疗效比较

目的：对比结肠癌同时性肝转移行同期手术与分期手术切除转移灶的疗效。方法：回顾性分析36例结肠癌同时性肝转移患者的临床资料,其中16例行结肠癌根治术同时切除肝转移病灶（同期手术组）;20例先行结肠癌根治性切除、二期行肝转移病灶切除（分期手术组）。比较两组患者的1,3,5年生存率。结果：同期手术组患者1,3,5年生存率分别为87.5%,37.5%,18.8%,分期手术组患者1,3,5年生存率分别为65%,10.0%,0.0%。两组比较,1年生存率差异无统计学意义（P>0.05）,同期手术组3,5年生存率明显高于分期手术组（均P<0.05）。结论：结肠癌同时性肝转移行同期手术可延长患者生存时间。

     

COX-2特异性抑制剂NS-398对胰腺癌生长及肿瘤血管 生成影响

目的:探讨COX-2特异性抑制剂NS-398对胰腺癌生长的影响及其机制。方法:分别用q RT-PCR与Western blot检测不同人胰腺癌细胞株(Bx PC-3、SWl990、Capan-2、Aspc-1、PANC-1)中COX-2及VEGF表达,并用MTT法检测NS-398在体外对人胰腺癌细胞增殖抑制作用;用体外实验最敏感细胞株建立裸鼠胰腺癌原位移植瘤模型,并随机将荷瘤鼠分为实验组和对照组,分别用NS-398与生理盐水处理,比较两组移植瘤的生长情况,并检测肿瘤组织中COX-2、VEGF蛋白表达及肿瘤微血管密度(MVD)。结果:各胰腺癌细胞中均有COX-2及VEGF表达,NS-398呈时间与浓度依赖性抑制各胰腺癌细胞的体外增殖,其中Bxpc-3细胞COX-2与VEGF表达量最高,且对NS-398最敏感。用Bxpc-3细胞建立原位移植瘤的实验组与对照组裸鼠比较,平均肿瘤体积明显减小(20.215 2 mm~3 vs.204.444 4 mm~3),瘤组织中COX-2与VEGF表达及MVD均明显降低(均P0.05)。结论:NS-398对胰腺癌的生长有抑制作用,其机制可能是通过COX-2途径降低VEGF基因表达从而抑制肿瘤血管生成有关。     

CDX2基因干扰对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨CDX2基因表达对结肠癌细胞生长的影响。方法:将体外转染CDX2-shRNA慢病毒、空慢病毒载体及无转染的人结肠癌细胞系SW480和HT29接种到裸鼠皮下,制备皮下移植瘤模型,观察各组移植瘤的生长情况,28d后处死裸鼠,剥取移植瘤称重,并分别用免疫组化、Westernblot检测各组移植瘤组织Ki-67与CDX2的表达。结果:与各自空白对照组(无转染的SW480或HT29细胞移植)比较,两个干扰组(转染CDX2-shRNA慢病毒的SW480或HT29细胞移植)移植瘤生长速度均明显加快、移植瘤质量明显增加(SW480:679.11mgvs.379.36mg;HT29:715.78mgvs.427.07mg),瘤组织Ki-67蛋白表达水平明显升高、CDX2蛋白表达明显下调(均P0.05)。两个阴性对照组(转染空慢病毒载体的SW480或HT29细胞移植)的各指标与各自空白对照组间均无明显差异(均P0.05)。结论:抑制CDX2基因的表达能促进人结肠癌细胞的裸鼠体内的生长,故CDX2可能是一种重要的抑癌基因。     

siRNA靶向抑制GHR对人结肠癌SW480细胞增殖的影响

目的利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人结肠癌SW480细胞人生长激素受体(GHR)基因的表达,观察GHR基因沉默对SW480细胞增殖的影响。方法设计特异性siRNA,构建针对人GHR真核质粒的表达载体(pcDNATM6.2-GW/EmGFP-siRNA-GHR),用电转染法转染人结肠癌SW480细胞,培养48~72 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;Western Blot检测GHR蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测GHRmRNA水平变化。结果转染siRNA后,与对照组相比,转染组细胞增殖速率、GHR的蛋白表达量、GHRmRNA水平均明显降低(均P<0.05)。结论构建的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-GHRsiRNA能有效地下调SW480细胞中GHR的表达,从而抑制SW480细胞的增殖。     

槲皮素对内分泌耐药乳腺癌三苯氧胺治疗增敏作用的体内研究

目的:探讨槲皮素(QUE)对内分泌耐药乳腺癌三苯氧胺(TAM)治疗的增敏作用。方法:用大剂量TAM冲击法构建TAM耐药乳腺癌细胞株MCF-7/TAM-R并移植裸鼠后,将荷瘤鼠随机分为4组,分别给予溶媒(对照组)、QUE 50 mg/kg 1次/2 d(QUE组)、TAM 5 mg/kg 1次/d(TAM组)、QUE 50 mg/kg 1次/2 d+TAM 5 mg/kg 1次/d(QUE+TAM组)处理,动态观测各组荷瘤鼠的一般情况与瘤体体积的变化,于给药21 d后,处死各组荷瘤鼠,检测瘤体质量及瘤组织ERα、HER-2、pMAPK、MAPK、pAkt、Akt蛋白的表达。结果:给药过程中,QUE+TAM组和QUE组裸鼠摄食减少、体质量减轻,对照组与TAM组裸鼠无明显异常;至第12天开始,QUE+TAM组瘤体生长呈下降趋势,且第21天明显下降(P0.05),其余各组瘤体均呈持续增长。与对照组比较,QUE+TAM组瘤体质量明显减轻(P0.05),而其余两组均无统计学差异(均P0.05);QUE+TAM组和QUE组瘤组织中ERα蛋白高表达,HER-2、pMAPK、pAkt蛋白低表达,而TAM组上述蛋白表达均无明显差异,各组非磷酸化的MAPK、Akt蛋白表达均无明显差异。结论:QUE能恢复内分泌耐药乳腺癌对TAM的敏感性,可能与其下调HER-2及其下游信号pMAPK、pAkt的表达,并上调ERα的表达有关;QUE有潜在的毒副作用,其安全范围及有效剂量有待进一步探讨。     

氯喹对肝癌细胞体内外生长的影响及其与自噬的关系

背景与目的:氯喹是一种广泛应用于疟疾、类风湿性疾病治疗的药物,同时还是一种自噬抑制剂,而且多项研究表明,氯喹能抑制包括肝癌在内的多种肿瘤细胞的生长。本研究在体外细胞实验与荷瘤鼠模型上进一步观察氯喹对肝癌的抑制作用及其与自噬的关系。方法:不同浓度的氯喹(0、25、50 μmol/L)体外作用于肝癌Huh7细胞后,用MTT法检测细胞的增殖情况。将75只裸鼠皮下接种Huh7细胞建立肝癌裸鼠移植瘤模型后,随机均分为3组,于接种后7 d(均已成瘤)分别腹腔注射生理盐水(对照组)、25 mg/kg氯喹(低剂量氯喹组)、50 mg/kg氯喹(高剂量氯喹组),1次/d,连续30 d。期间记录各组肿瘤生长情况,实验结束时,收集移植瘤标本,分别用免疫组化与Western blot法检测移植瘤内自噬相关蛋白(LC3、p62)的表达。结果:MTT检测结果显示,与对照组比较(0 μmol/L),两个浓度氯喹均能明显抑制肝癌Huh7细胞的增殖,并呈明显的时间、浓度效应(均P0.05)。荷瘤鼠模型中,两个剂量氯喹组的肿瘤生长均较对照组明显抑制,且高剂量氯喹组较低剂量氯喹组的肿瘤生长抑制更为明显(均P0.05);免疫组化与Western blot结果显示,两个剂量氯喹组肿瘤组织中LC3、p62的表达水平均较对照组明显升高,且高剂量氯喹组的升高水平明显大于低剂量氯喹组(均P0.05)。结论:氯喹体外与体内均能抑制肝癌细胞的生长,其作用机制可能与其调节自噬相关蛋白的表达抑制肝癌细胞自噬有关。     

沉默RhoA基因对结肠癌LoVo细胞体内生长的抑制作用

目的：RNA干扰使RhoA基因沉默后对结肠癌LoVo细胞在裸鼠体内生长的影响。 方法：构建靶向RhoA基因的shRNA真核表达载体,转染LoVo细胞,筛选RhoA基因沉默的稳定克隆。采用Western blot法检测RhoA蛋白的表达水平。将稳定转染RhoA shRNA表达载体、转染空载体和未转染的LoVo细胞分别接种于裸鼠皮下,4周后测量瘤体的体积和重量;免疫组化检测肿瘤组织RhoA,VEGF和MMP-2蛋白的表达。 结果：RhoA shRNA转染组瘤体的体积与瘤重明显低于其他两对照组（P<0.01）。免疫组化结果显示,RhoA shRNA染组瘤体组织RhoA,VEGF和MMP-2蛋白表达均较两对照组显著降低（P<0.01）。 结论：沉默RhoA可以抑制结肠癌LoVo细胞移植瘤的生长。     

白藜芦醇对小鼠甲状腺乳头癌细胞移植瘤的抑制作用及机制研究

背景与目的 白藜芦醇具有广泛的抗肿瘤作用,其可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖和迁移,但是其发挥作用的相关机制尚不清楚。因此,本研究探讨白藜芦醇对甲状腺乳头状细胞癌移植瘤的抑制作用以及其作用机制。方法 将40只裸鼠背部皮下接种甲状腺乳头状癌细胞（TPC-1）悬液建立移植瘤模型后,随机分为模型对照组和3个不同剂量白藜芦醇（2.5、5、10 mg/kg）治疗组,每组10只。白藜芦醇各剂量组裸鼠分别腹腔注射相应剂量的白藜芦醇,模型对照组裸鼠腹腔注射等体积生理盐水,1次/d,连续21 d。记录移植瘤的生长情况,绘制生长曲线。21 d后处死各组小鼠,称量肿瘤质量,计算抑瘤率;行肿瘤组织HE染色和TUNEL染色检测肿瘤细胞形态和凋亡情况;用qRT-PCR法与Western blot法分别检测肿瘤组织中凋亡相关蛋白（caspase-3、Bax、Bcl-2）与上皮-间充质转化（EMT）相关分子（E-cadherin、N-cadherin、vimentin）的mRNA与蛋白表达。结果 与模型对照组比较,3个剂量白藜芦醇治疗组的移植瘤生长速度均被抑制,21 d后的移植瘤质量均明显减小,且抑瘤率随白藜芦醇剂量的增加而加大（均P<0.05）。HE染色结果显示,模型对照组肿瘤组织中癌细胞呈片状,形态大小不一,胞浆丰富,核大,可见核分裂象,极性紊乱;3个剂量白藜芦醇治疗组细胞数量均不同程度减少、细胞排列疏松、细胞核固缩、核分裂较少、不同程度片状坏死。与模型对照组比较,3个剂量白藜芦醇治疗组的肿瘤组织中肿瘤细胞凋亡增加;E-cadherin和Bax mRNA和蛋白表达量升高,N-cadherin、vimentin和Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低;caspase-3 mRNA水平降低,切割型caspase-3蛋白表达量升高,且以上变化在3个剂量白藜芦醇治疗组均呈剂量依赖性（均P<0.05）。结论 白藜芦醇可促进甲状腺癌细胞凋亡从而抑制其在小鼠体内的生长,其作用机制可能与逆转EMT过程有关。