肿瘤抑制基因HTPAP单体型构建及其与肝癌转移潜能的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肿瘤组织DNA的HTPAP基因单体型与肝癌转移潜能的关系。方法提取864例HCC手术样本DNA,应用焦磷酸测序行SNPs检测,并予单体型构建,分析其与肝癌转移潜能的关系。构建HTPAP启动子单体型pGL3质粒,并分别转染MHCC-97H、HepG2肝癌细胞和正常的肝Hela细胞,分析不同HTPAP启动子单体型对基因转录活性的影响。结果共发现6个SNPs位点[-1053A/G、+64G/C、+357C/G、+1648-/TAAG(无插入和插入TAAG等位基因分别以T/G示,后同)、+1838A/G、+3528C/T]。单体型构建发现HTPAP中共存在11个单体型,其中AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC、GCGGAT四种单体型占94.75%。临床病理特征分析提示单体型GCGGGT与高转移潜能正相关(P=0.0003)。启动子序列中两个SNPs(-1053AG和+64GC)存在完全LD,故只有三种启动子单体型(-1053AA/+64GG、-1053AG/+64GC GC和-1053GG/+64CC);双荧光报告法发现三种单体型的HTPAP启动子都具有显著转录活性,其中-1053AA/+64GG单体型启动子转录活性较-1053GG/+64CC和-1053AG/+64GC单体型启动子强,差异具有统计意义(P=0.005,0.009)。结论肿瘤转移抑制基因HTPAP的GCGGGT单体型与HCC高转移潜能正相关。HTPAP启动子单体型对基因的转录活性有显著影响并与术后复发密切相关,提示HCC中HTPAP的不同SNP单体型可能是潜在侵袭转移和复发预后的预测指标。     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

人肝癌转移抑制基因存在的功能研究

目的 寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据.方法 前期通过微细胞介导的染色体转移方法(MMCT),将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Ne08/C5F-1～10和大鼠肝癌细胞株CSF,分别被接种到6～7周龄雌性BALB/CA裸鼠皮下进行自发转移实验,观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况,肺组织连续切片并计数镜下转移灶,结果进行单因素方差分析.结果 所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤,微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制(P<0.05),其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制.结论 人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株CSF的成功导入改变了CSF的转移表型,提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据.     

抑癌基因PTEN与人大肠癌转移的相关性研究

目的　探讨抑癌基因PTEN的表达在大肠癌转移侵袭过程中的作用。方法　 (1)应用Nothernblot和免疫组织化学的方法检测 47例大肠癌组织中PTENmRNA和蛋白的表达 ,分析其与大肠癌转移的关系。 (2 )利用Westernblot法检测不同转移潜能的大肠癌细胞系内PTEN蛋白的表达水平 ,说明PTEN蛋白的表达对大肠癌细胞转移潜能的影响。 (3 )用阳离子脂质体作载体 ,将PTEN基因转染大肠癌细胞株LOVO后 ,采用计数细胞悬液加到粘附底物后 2 0和 12 0min的细胞贴壁数用以测定细胞粘附能力 ,采用Costar的浸润小室检测PTEN基因转染前后细胞的浸润能力。结果　 (1)在有淋巴结及远处转移的大肠癌组织中 ,PTENmRNA和蛋白的表达显著低于无转移者 ;(2 )转移潜能高的LOVO细胞PTEN的表达量通过显著低于转移潜能较低的HT 2 9、LS 174T ;(3 )LOVO、转染 pcDNA3 .0 PTEN的细胞 (LOVO/pcDNA3 .0 PTEN )在特异性粘附底物(Laminin)上 2 0min时贴壁率分别为 (18.6± 1.4) %和 (13 .9± 0 .5 ) % (P <0 .0 5 ) ,12 0min时贴壁率分别为 (71.2± 2 .5 ) %和 (5 6.0± 1.6) % (P <0 .0 5 ) ;(4 )采用Costar的浸润小室对LOVO、LOVO/pcDNA3 .0 PTEN细胞的浸润能力分析结果显示 :细胞悬液静置培养 6h后 ,对照细胞LOVO浸润穿透多聚碳膜的细胞数为 (1     

Mapping of metastasis suppressor genes for prostate cancer by microcell-mediated chromosome transfer

Aim: To identify the metastasis suppressor genes for prostate cancer. Methods: A copy of human chromosomes was introduced into the highly metastatic Dunning R-3327 rat prostate cancer cells by the use of microcell-mediated chromosome transfer. Relationships between the size of human chromosomes introduced into microcell hybrid clones and the number of lung metastases produced by the clones were analyzed to determine which part of human chromosomes contained the metastasis suppressor gene (s) for prostate cancer. To determine portions of human chromosomes introduced, G-banding chromosomal analysis, fluorescence in situ hybridization analysis, and polymerase chain reaction analysis were performed. Results: Each of microcell hybrid clones containing human chromosomes 7, 8, 10, 11, 12, or 17 showed decreased ability to metastasize to the lung without any loss of ttmaorigenicity. This demonstrates that these human chromosomes contain metastasis suppressor genes for prostate cancer. Spontaneous deletion of portions of human chromosomes was observed in the human chromosome 7, 10, 11, 12, and 17 studies. In the human chromosome 8 study, irradiated microcell-mediated chromosome transfer was performed to enrich chromosomal ann deletions of human chromosome 8. Molecular and cytogenetic analyses of microcell hybrid clones demonstrated that metastasis suppressor genes on human chromosomes were located on 7q21-22, 7q31.2-32, 8p21-12, 10q11-22, 11p13-11.2, 12p11-q13, 12q24-ter, and 17pter-q23. KAI1 and MKK4/SEKI were identified as metastasis suppressor genes from 11p11.2 and 17p12, respectively. Conclusion: This assay system is useful to identify metastasis suppressor gene (s) for prostate cancer.     

乳腺癌转移抑制基因BRMS1真核表达载体的构建及鉴定

目的构建乳腺癌转移抑制基因(BRMS1)真核表达载体pcDNA3.1/myc-BRMS1,为研究抑制恶性肿瘤转移的机制奠定基础。方法设计含有HindⅢ和XhoⅠ酶切位点的一对引物,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从人乳腺癌细胞株MCF-7中扩增到BRMS1的cDNA基因片断,经回收、纯化、酶切后,连接到质粒pcDNA3.1/myc-His( )A上,鉴定正确后并转染人胚肾细胞HEK-293进行Western blot验证其是否表达。结果琼脂糖凝胶电泳及基因测序证实重组的pcDNA3.1/myc-BRMS1cDNA的碱基组成与GenBank中的人BRMS1cDNA的基因片断组成相同。结论成功构建了乳腺癌转移抑制基因BRMS1真核表达载体并测序鉴定。     

可调控性人PTEN基因重组腺病毒的构建与表达

目的　体外构建和表达可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒。方法　将人PTEN基因全长cDNA约 1.4kb经过穿梭载体 ,与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,得到重组人PTEN基因腺病毒 (Ad PTEN) ,酶切与聚合酶链反应 (PCR)鉴定后 ,在HEK2 93细胞包装、扩增 ,空斑试验测定病毒滴度 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblot法分别在mRNA、蛋白水平检测PTEN的表达。Ad X TRE βgal病毒作为对照。 结果　构建的Ad PTEN病毒滴度为 1.8× 10 7pfu/ml ,转染前列腺癌细胞株PC 3后RT PCR扩增出特异条带 ( 4 62bp) ,Westernblot检测PTEN蛋白 ( 60×10 3 )有高表达 ,对照病毒转染后未测到PTEN的表达。结论　用体外连接法成功地构建了可调控性人抑癌基因PTEN重组腺病毒载体 ,并得到了正确、特异的表达。     

Protein partners of the BRCA1 tumor suppressor

The primary amino acid sequence of BRCA1 offers few clues about the mechanism by which it suppresses tumor formation in normal breast and ovarian tissues. In an effort to unravel its biological functions, investigators have sought to identify the proteins that interact with BRCA1 in vivo. These efforts have already uncovered two interacting proteins: the BRCA1-associated RING domain (BARD1) protein, a novel polypeptide that bears a striking structural resemblance to BRCA1, and hRAD51, a human homolog of the bacterial recA gene product. As proliferating cells enter S phase of the cell cycle, the BRCA1, hRAD51, and BARD1 polypeptides aggregate in discrete nuclear domains, commonly described as "BRCA1 nuclear dots'. However, when S phase cells sustain DNA damage, the dots are mobilized such that BRCA1 and its associated proteins relocate to sites of replicating DNA. Thus, as a participant in the cellular response to DNA damage, BRCA1 may suppress tumor formation by preserving the integrity of genomic DNA.     

骨水泥椎体成形在治疗脊柱转移瘤中的临床应用

目的:探讨骨水泥椎体成形在脊柱转移瘤治疗中的应用价值。方法:2000年11月～2011年6月我院应用骨水泥椎体成形治疗脊柱转移瘤患者155例,共251个椎体。颈椎1个,胸椎149个,腰椎101个。男性88例,女性67例,平均年龄63.5岁(36~87岁)。采用两种手术方式:应用经皮穿刺椎体成形术或经皮椎体后凸成形术110例,181个椎体;开放性手术椎管减压脊柱内固定,结合术中骨水泥椎体成形或联合其他部位椎体成形45例70个椎体。所有患者术前有严重的腰背痛或合并不同程度的下肢神经功能损害症状。平均VAS评分7.6分(5～10分),术后第3d根据VAS评分评估患者的疼痛缓解情况,术后2周时根据Frankel分级评估神经损害和ECOG评估活动能力的改善。出院后每3个月门诊随访一次,行X线片、CT或MRI检查,每次随访均进行疼痛、神经功能和活动能力的评估。结果:术中无1例出现肺栓塞、截瘫或围手术期死亡,所有患者术后3d内疼痛缓解,平均VAS评分降至2.6分(1～4分),术后2周评估,有神经功能损害者39例,Frankel分级除2例外均有1级及以上的恢复。ECOG分级4级者18例,其中15例改善为3级;3级者92例,其中63例改善为2级;2级45例中13例改善为1级。椎体成形术中骨水泥的平均注入量为4ml(3~7ml)。108(43%,108/251)个椎体术中出现骨水泥渗漏,19个在椎间隙,86个在椎旁或椎旁静脉,3个椎管内渗漏,但均无临床症状。术后患者均接受化疗和(或)放疗,平均随访20个月(3～36个月),122例死于原发病,33例带瘤存活。结论:对脊柱转移瘤患者选择合适方式的骨水泥椎体成形安全、简单,效果显著,减少了椎体置换或前路开放手术的创伤。     

Mesangial cell hypertrophy by high glucose is mediated by downregulation of the tumor suppressor PTEN

Diabetic nephropathy is characterized early in its course by glomerular hypertrophy and, importantly, mesangial hypertrophy, which correlate with eventual glomerulosclerosis. The mechanism of hypertrophy, however, is not known. Gene disruption of the tumor suppressor PTEN, a negative regulator of the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway, in fruit flies and mice demonstrated its role in size control in a cell-specific manner. Here, we investigated the mechanism of mesangial hypertrophy in response to high extracellular glucose. We link early renal hypertrophy with significant reduction in PTEN expression in the streptozotocin-induced diabetic kidney cortex and glomeruli, concomitant with activation of Akt. Similarly, exposure of mesangial cells to high concentrations of glucose also decreased PTEN expression and its phosphatase activity, resulting in increased Akt activity. Expression of PTEN inhibited high-glucose-induced mesangial cell hypertrophy, and expression of dominant-negative PTEN was sufficient to induce hypertrophy. In diabetic nephropathy, the hypertrophic effect of hyperglycemia is thought to be mediated by transforming growth factor-beta (TGF-beta). TGF-beta significantly reduced PTEN expression in mesangial cells, with a reduction in its phosphatase activity and an increase in Akt activation. PTEN and dominant-negative Akt attenuated TGF-beta-induced hypertrophy of mesangial cells. Finally, we show that inhibition of TGF-beta signal transduction blocks the effect of high glucose on PTEN downregulation. These data identify a novel mechanism placing PTEN as a key regulator of diabetic mesangial hypertrophy involving TGF-beta signaling.     

MiR-622 acts as a tumor suppressor to induce cell apoptosis and inhibit metastasis in human prostate cancer

Growing evidence indicating the critical modulator roles of microRNAs (miRNAs) involved in prostate cancer (PCa) metastasis that holds great promise as therapeutic targets. Herein, we transfected the miR-622 mimic into PC3 cells and evaluated the effects of this interference on these tumour cells' growth and the expression of specific metastatic genes. Transfecting of miR-622 mimic and inhibitor, negative control (NC) inhibitor and NC was established using Lipofectamine 2000. The mRNA levels of miR-622 and metastatic genes were evaluated using the qRT-PCR and Western blot. Cytotoxic effects of miR-622 were assessed by MTT. Apoptosis was detected using an ELISA cell death assay kit. miR-622 is down-regulated in PC3 cells. As expected, cell viability effects after transfection were described as miR-622 inhibitor >NC and NC inhibitor >miR-622 mimic (p < .01). Importantly, we showed that transfected miR-622 mimic could enhance the apoptosis of PC3 cells, while transfected miR-622 inhibitor could decrease cell apoptosis (p < .01). Furthermore, miR-622 overexpression could increase significantly down-regulated the MMP2, MMP9, CXCR-4, c-Myc and K-Ras expression levels. Findings demonstrate a novel mechanism by which miR-622 modulates PCa cells' metastasis by targeting metastatic genes. These data confirm the tumour-suppressive function of miR-622 in PCa cells by enhancing apoptosis and reducing metastasis.