急性白血病患者骨髓间隙连接蛋白43的表达及其与耐药的相关性研究

 【摘要】　目的　探讨急性白血病（AL）患者骨髓细胞中间隙连接蛋白43（Cx43）、P-糖蛋白（P-gp）及环氧合酶2（COX-2）基因表达水平及其与AL病程、预后和耐药的关系。方法　77例不同病期AL患者,其中初治36例,完全缓解20例,复发20例,同时以20例异体造血干细胞移植供体及非血液系统恶性病患者为对照。采用SYBR Green实时定量反转录聚合酶链反应（SYBR-RT-PCR）技术,检测骨髓单个核细胞中Cx43、P-gp、COX-2 mRNA的表达,并对37例初治患者进行动态随访。结果　AL初治组Cx43、P-gp、COX-2 mRNA的表达分别为0.52±0.57、1.42±1.06、1.14±0.95,复发组分别为0.20±0.40、2.29±1.11、1.69±0.81,完全缓解组分别为0.95±0.37、0.93±0.73、0.79±0.58,对照组分别为1.16±0.67、0.86±0.63、0.61±0.57。初治、复发AL患者Cx43 mRNA表达水平较对照组及完全缓解组低,差异均有统计学意义（初治组分别P＝0.001、0.005;复发组均P<0.001）;完全缓解组Cx43 mRNA表水平与对照组相比,差异无统计学意义（P＝0.185）。AL患者骨髓细胞液中Cx43 mRNA与P-gp和COX-2 mRNA表达呈负相关,且初治组、完全缓解组及复发组表达均呈负相关（与P-gp r值分别为-0.471、-0.362、-0.526;与COX-2 r值分别为-0.479、-0.344、-0.471）。36例AL初治患者随访4个月,死亡8例,生存28例,死亡患者Cx43 mRNA表达低于生存患者,差异有统计学意义（t＝2.16,P＝0.042）。结论　初治、复发难治AL患者骨髓中Cx43 mRNA的表达下调,同时多药耐药基因P-gp、COX-2 mRNA的表达上调;Cx43过度表达是预后良好因素,Cx43与AL的疗效、预后及化疗耐药密切相关。     

RNAi抑制HIF-1α基因逆转卵巢癌多药耐药的实验研究

目的 探讨靶向缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)载体表达的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)逆转卵巢癌细胞多药耐药的可行性.方法 构建靶向HIF-1α短发夹状siRNA 基因表达载体,脂质体介导转染人卵巢癌COC1/DDP细胞.Western blot法检测HIF-1α蛋白和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达;实时定量PCR(real time PCR)检测HIF-1α和多耐药基因1(mdr-1)mRNA的表达;MTT法检测COC1/DDP细胞对化疗药物顺铂的抗性.结果 转染HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体的COC1/DDP细胞,低氧条件下HIF-1α蛋白及mRNA表达水平下降,同时mdr-1基因的mRNA及其编码的P-gp蛋白水平也明显下降,对顺铂的药物敏感性增加.结论 HIF-1α短发夹状siRNA真核表达载体可有效地抑制卵巢癌COC1/DDP细胞HIF-1α和mdr-1基因的表达,逆转卵巢癌细胞的多药耐药.     

多药耐药基因 、P-糖蛋白及DNA倍体检测在浸润性膀胱癌新辅助化疗中的意义

 目的　探讨多药耐药基因（mdr-1）、P-糖蛋白（P-gp）、DNA异倍体检测在浸润性膀胱癌新辅助化疗中的意义。方法　应用RT-PCR、免疫组织化学SP法、流式细胞术（FCM）检测26例浸润性膀胱癌mdr-1、P-gp、DNA异倍体,以10例正常膀胱组织标本为对照。结果　mdr-1在新辅助化疗完全缓解组（CR）、部分缓解组（PR）、无效组及对照组A值分别为：0.61±0.75、0.71±0.11、1.68±0.28、0.745±0.13,有效病例与无效组及对照组差异均有统计学意义（P＜0.05）;P-gp免疫组织化学检测结果显示,CR组、PR组与无效组阳性表达差异有统计学意义 （P＜0.05）;DNA异倍体率各组为50 %、45 %、69 %、10 %,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论　mdr-1、P-gp、DNA异倍体检测,有助于评估新辅助化疗治疗浸润性膀胱癌的有效性     

P-糖蛋白在非霍奇金淋巴瘤组织中的表达及意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤组织中P-gp(P-糖蛋白)的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测117例非霍奇金淋巴瘤组织中P-gp的表达及其与生存率的关系。结果初治组P-gp表达的阳性率为30.26%(23/76);复发/难治组阳性率高达68.29%(28/41),2组差异有统计学意义(P﹤0.05)。P-gp表达阳性者化疗后生存时间明显低于阴性表达者,与预后显著相关(P<0.01)。结论 P-gp在非霍奇金淋巴瘤组织中高表达是多药耐药产生的基础,动态监测P-gp能指导临床治疗及预后。     

川芎嗪联合化疗对复发或耐药非霍奇金淋巴瘤的研究

目的 本研究旨在探讨耐药逆转剂川芎嗪配合化疗治疗复发、耐药非霍奇金淋巴瘤(NHL)的作用及与P-糖蛋白(P-gp)表达的关系.方法 60例经病理组织学证实的复发、耐药的NHL患者随机分入逆转剂组(川芎嗪+化疗)和对照组(化疗),分别采用上述两种方案治疗并分析结果.流式细胞仪法分析P-gp的表达.根据P-gp的表达情况进行亚组分析.结果 56例患者有完整数据可供评估,生存分析示两组间差异无统计学意义(P=0.0651),逆转剂组有效率(ORR)高于对照组(P=0.048).亚组分析P-gp(+)的41例患者,完全缓解或不确定的完全缓解率逆转剂组较对照组有显著优势(33.33%与8.70%,P=0.048);逆转剂组ORR亦优于对照组(61.11%与26.09%),差异均有统计学意义(P=0.024).Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank检验显示,逆转剂组无进展生存期较对照组延长,差异有统计学意义(P=0.0464).加用逆转剂川芎嗪仅少数患者出现血压下降,减量后缓解.结论 川芎嗪联合化疗可提高复发、耐药NHL患者化疗的疗效,不良反应较轻,可延长疾病无进展生存期,与P-gp的表达密切相关.     

COX-2和P-gp在B细胞非霍奇金淋巴瘤组织中表达的相关性研究

背景与目的:P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)高表达是复发淋巴瘤患者化疗失败的主要原因之一,有研究表明,P-gp呈环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)依赖性表达上调.本研究旨在通过检测COX-2与P-gp在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-cell non-Hodgkin's lymphoma,B-NHL)中的表达及其相关性,并初步观察两者表达与淋巴瘤临床特征之间的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应及免疫组化SP法检测COX-2及P-gp在43例初治B-NHL、27例复发B-NHL中的表达.结果:COX-2和P-gp在初治B-NHL中的阳性率分别为23.3%(10/43)和11.6%(5/43),而在复发B-NHL中的阳性率分别为74.1%(20/27)和70.4%(19/27),差异有统计学意义(P＜0.01),且两者表达在复发B-NHL中呈显著正相关(r=0.998,P＜0.01).侵袭性B-NHL中的COX-2和P-gp表达均高于惰性B-NHL(P＜0.05).结论:COX-2和P-gp在复发B-NHL中高表达,可能与肿瘤转移有关.     

RUNX1 异构体在急性白血病中的表达及临床意义

［摘要］ 目的:探讨RUNX1 异构体的表达与临床疗效、疾病预后的关系,以期为急性白血病的个体化治疗、预后判断及微小残留病（minimal residual disease,MRD）的监测提供有价值的实验依据。方法: 选择2012 年4 月至2013 年4 月于广东医学院（现为广东医科大学）附属医院血液内科住院的急性白血病初治患者88 例、复发患者10 例为研究对象。采用qPCR法检测急性白血病初治、复发患者以及对照组患者（非恶性白血病）RUNX1 异构体RUNX1a 和RUNX1b/c mRNA的表达水平,并追踪检测同一患者化疗前后RUNX1a 和RUNX1b/c mRNA表达水平的变化。结果: (1)AML初治组、复发组以及ALL初治组RUNX1a mRNA的表达水平较对照组升高(P<0.05),AML初治组RUNX1a mRNA的表达水平较ALL初治组升高(P<0.05)。(2)AML及ALL患者初治时RUNX1a 和RUNX1b/ c mRNA 的表达水平较化疗后完全缓解（complete remission,CR）时升高(P<0.05)。(3)比较初诊时的RUNX1a 和RUNX1b/c mRNA表达水平,半年内死亡与存活患者、首疗程化疗后CR组与NCR组、初诊时高白细胞组与非高白细胞组均无显著差异(P>0.05);AML-ETO 融合基因阳性患者RUNX1a 表达水平较阴性患者升高(P<0.05)。(4)急性白血病患者RUNX1a 和RUNX1b/c mRNA的表达水平随着化疗呈递减趋势,复发时又明显增高甚至超过初治状态。结论: RUNX1a 异构体参与了急性白血病的发病,并且与AML的复发相关;RUNX1a 和RUNX1b/c mRNA表达水平与临床疗效相关,与疾病预后无关,可作为疾病疗效判断的指标;动态监测RUNX1a 和RUNX1b/c 异构体的表达水平可以作为化疗后MRD监测的有效指标,用于评估疗效、早期识别复发风险。     

初治及复发急性髓细胞白血病患者BCRP基因表达的意义

目的 :探讨急性髓细胞白血病 (AML)患者初治及复发时乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)基因表达与临床耐药及预后的关系。方法 :应用半定量逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR) ,以 β2 微球蛋白 ( β2 MG)作内对照 ,检测了 5 1例初治及 1年内复发的 13例AML患者BCRP基因的表达 ,并检测了 15例正常人BCRP基因表达水平 ,将BCRP/ β2 MG≥ 0 4 6定为BCRP阳性。结果 :初治AML患者BCRP阳性率为 39 2 % ,BCRP阴性与BCRP阳性患者的首次完全缓解 (CR1)率分别为 90 3%和 35 0 %(P =0 0 0 0 0 ) ;13例一年内复发的患者BCRP基因表达水平 ( 1 0 6 5± 0 2 2 6 )显著高于初治时表达水平 ( 0 336± 0 2 0 8) (P =0 0 0 0 0 ) ;BCRP基因表达水平在AML的各亚型间无统计学差异。结论 :BCRP基因高表达可以导致临床耐药 ,是AML患者不利的预后因素。     

多药耐药功能实验对急性白血病化疗疗效的预测意义

背景与目的:多药耐药排药蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在介导急性白血病多药耐药中的作用已得到公认。多项研究显示,P-gp及其编码基因MDR1mRNA的表达与白血病化疗疗效相关,但我们在临床实践中所获得的结果却并非如此。近年来多项研究发现,多药耐药功能实验结果比P-gp的表达水平对预测化疗疗效更有价值。为了解P-gp的表达和多药耐药功能实验对判断患者预后的价值,我们对24例初诊未治急性白血病患者白血病细胞膜P-gp的表达以及功能活性进行了检测,以探讨多药耐药功能试验对化疗疗效的预测价值。方法:用流式细胞仪测定24例急性白血病患者白血病细胞的P-gp表达率以及反映MDR功能的Rh123排出实验和细胞内柔红霉素蓄积实验的MIR值,并就患者的化疗疗效进行分组比较和相关分析。结果:CR患者初诊时白血病细胞P-gp表达率为(2.16±2.42)%,与NR患者犤(15.02±25.88)%犦差异无显著性(P=0.114)。CR患者初诊时白血病细胞Rh123排出实验的MIR值:MIR(RE)(1.16±0.38)明显低于NR患者(1.43±0.26)(P=0.045)。CR患者初诊时白血病细胞内柔红霉素积蓄实验的MIR值:MIR(IDA)(1.02±0.05)亦明显低于NR患者(1.47±0.44)(P=0.005)。MIR(RE)(r=0.590,P=0.006)和MIR(IDA)(r=0.867,P=0.000)与疗效间有显著相关性。P-gp表达率与疗     

甲基莲心碱对乳腺癌MCF-7/Adr 细胞MDR逆转的研究

 目的 探讨甲基莲心碱（Neferine，Nef）对耐药人乳腺癌细胞增殖，细胞内ADM积聚浓度及mdr-1／P-gp表达的影响。方法 采用MTT法测定细胞毒作用，高效液相色谱法测定细胞内ADM积聚浓度，RT—PCR技术及蛋白质印迹技术检测mdr-1／P-gp表达。结果 10μg／ml Nef＋ADM组细胞的抑制率及细胞内ADM积聚浓度比ADM组高（P〈0.01）；20μg／ml Nef＋ADM组细胞抑制率及细胞内ADM积聚浓度较5μg／ml异博定＋ADM组及10μg／ml Nef＋ADM组均高（P〈0．01）。10μg／ml Nef＋ADM组MCF-7／Adr细胞mdr-1 mRNA及P-gp表达比ADM组明显下降（P〈0．01）。20μg／ml Nef＋ADM组细胞mdr-1mRNA及P-gp表达较10μg／ml Nef＋ADM组明显下调（P〈0．01）。结论 Nef能抑制耐药人乳腺癌细胞增殖。Nef能增加MCF-7／Adr细胞内ADM积聚浓度。Nef通过降低耐药人乳腺癌细胞mdr-1 mRNA及P-gp的表达逆转MDR。     

RT—PCR方法检测乳癌组织mdr—1基因表达标准的建立

合理制定判断多药抗药ｍｄｒ－１基因表达的标准,为其客观预测化疗疗效和预后提供依据。应用逆转录－多聚酶链式的反应技术,检测了８２例次乳癌组织的ｍｄｒ－１基因表达。用ＳＡＳ软件对数据进行单变量分析。本组瘤群ｍｄｒ－１基因表达呈明显的保偏态分布。     

EXPRESSION OF mdr-1 GENE IN CANCER TISSUE AND ITS ASSOCIATION WITH MORPHOLOGICAL INDEXES OF ESOPHAGEAL CARCINOMA IN ANYANG

Multipledrugresistance(MDR)ofcancercellsisoneofthemostinterestingareasinthecurrentcancerresearches.IthasbeenshownthatmanytumorshaveMDR.OneofthemolecularbaseofMDRistheamplificationofmdr-lgeneandoverexpressionofitsproduct,pl70,whichwerethoughtasthedirectcauseofchemothcrapyfailurebymanyinvestigators.'--'Moreover,othersicbelievethatmdr-1geneexpressionincancertissuewasamalignantbiologicalindicatorforneoplasms.UPtodate,fewresearchreportswerefoundintheliteratureonmdr-lgeneexpressioninesophaguscan…     

非霍奇金淋巴瘤多药耐药的实验研究

目的 探讨初发非霍奇金淋巴瘤(NHL)mdrl mRNA及多药耐药蛋白P糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达频率及临床意义.方法 采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)半定量方法检测41例初治NHL患者淋巴结活组织中瘤细胞mdrl mRNA的表达,采用流式细胞仪免疫荧光法检测P-gP、LRP、MRP的表达,以13例反应性增生淋巴结患者作为对照组.并分析多药耐药蛋白表达与NHL临床特征的关系.结果 41例NHL患者中,11例mdrl mRNA表达阳性,8例P-gP表达阳性,7例MRP表达阳性,15例LRP表达阳性.NHL组与对照组比较,MRP阳性率差异无统计学意义(P=0.887),LRP阳性率明显增高(P=0.047).NHL患者淋巴结组织P-gP、MRP、LRP表达两两之间均不存在相关关系,P-gP表达与mdrl mRNA表达正相关(r=0.396,P=0.01).P-gP表达与临床分期、LDH水平有关(均P<0.05),而与恶性分级无关.MRP表达与临床分期、恶性分级、血清乳酸脱氢酶(LDH)水平均无关(均P>0.05),而LRP表达与三者均有关(均P<0.05).P-gP和LRP表达阳性患者的完全缓解(CR)率分别为37.5%和53.3%,低于阴性表达者(均P<0.05),化疗疗效较差,而MRP表达与化疗疗效无关.结论 P-gP、LRP可能是NHL原发耐药的主要因素,影响NHL患者的化疗疗效,而MBP与NHL原发耐药无关,不影响NHL患者的化疗疗效.     

Analysis of mdr-1 Gene Expression in Human Leukemic Cells by Quantitative Competitive PCR

The ability to recognize the acquisition of multidrug resistance (MDR) in leukemia patients would improve our ability to predict the responsiveness of patients to chemotherapy. To quantitate the degree of MDR acquisition, we determined the amount of mdr-1 mRNA in leukemic cells from patients by competitive polymerase chain reaction (PCR) analysis. Twenty-one patients including 12 patients prior to treatment and nine relapsed patients with acute myelogenous or lymphoblastic leukemia were examined. The amount of mdr-1 gene expression in K562, K562/ADR₅₀₀ cells and their mixtures showed a proportional correlation between the ratio of resistant to non-resistant cells and the amount of the mdr-1 gene. Mean mdr-1 gene expression in relapsed patients was greater than that in pretreatment patients. Patients refractory to chemotherapy (NR) showed higher levels of mdr-1 gene expression than the patients who achieved complete remission (CR). Because of the wide variations in values, no statistical differences were observed between pretreatment and relapsed patients, or CR and NR patients. These results suggest that the competitive PCR technique is a reliable method to quantitatively determine mdr-1 gene expression, but it may be difficult to predict responsiveness to chemotherapy by using this technique alone.     

c-MET expression level in primary colon cancer: a predictor of tumor invasion and lymph node metastases.

PURPOSE: Both c-MET and vascular endothelial growth factor (VEGF)-C expression are important factors in primary carcinoma progression. We hypothesized that overexpression of c-MET and/or VEGF-C mRNA in primary colorectal cancer (CRC) can predict tumor invasion and regional metastasis. EXPERIMENTAL DESIGN: The level of c-MET and VEGF-C mRNA expression was assessed using a quantitative RT-RealTime PCR assay on early stage primary CRC tumors (n = 36). RESULTS: The c-MET mRNA copy number ranged from 1.18 x 10(2) to 1.11 x 10(6) copies (median 5.17 x 10(4)) per 250 ng of RNA from CRC specimens. c-MET mRNA copies in CRC specimens was significantly higher than that from normal colon mucosal epithelium (P = 0.0001). c-MET mRNA copies significantly correlated with the depth of invasion: T(1) versus T(2), P = 0.007; T(1) versus T(3)/T(4), P = 0.0001; T(1) versus T(2) versus T(3)/T(4), P = 0.0005; and T(1)/T(2) versus T(3)/T(4), P = 0.011. c-MET copy number in primary CRC of N(1)/N(2) staged patients was significantly higher than N(0) cases (P < 0.03). Expression levels of c-MET mRNA were verified with immunohistochemistry analysis of c-MET protein expression in CRC specimens and normal mucosal epithelium. The VEGF-C mRNA copies of primary CRC assessed ranged from 0 to 1.65 x 10(5) copies (median 580). Although VEGF-C mRNA copies in CRC primary tumors were significantly higher than normal colon mucosal epithelium (P = 0.0008), it did not correlate with any major clinicopathological parameters of CRC. CONCLUSIONS: This study indicates c-MET mRNA overexpression in primary CRC may be an important prognostic marker for early stage invasion and regional disease metastasis.     

三氧化二砷联合BSO对K562／ADM细胞P-糖蛋白的抑制作用研究

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞K562／ADM细胞中P-糖蛋白（P—gP）的抑制作用，比较单用As2O3与两药联合的作用效果。方法As2O3组（0．5μmol／L，2．0μmol／L，5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞后，分光光度法检测K562／ADM细胞内谷胱甘肽（GSH）含量变化；流式细胞术（FCM）检测P-gp蛋白水平表达变化；反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测mdr-1 mRNA的表达变化。结果As2O3临床剂量组（0．5μmol／L，2μmol／L）联合BSO24h内即可抑制P-gp和mdr-1mRNA的表达水平，在48h后，临床剂量联合组抑制mdr-1mRNA的作用效果要明显强于单用高剂量组，在72h后，临床剂量联合组抑制P—gP的作用效果要明显强于单用高剂量组。结论临床剂量As2O3联合BSO可有效抑制K562／ADM细胞P—gp及mdr-1 mRNA的表达。