水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的免胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞，在与凝血酶(4．0ku／L)共同孵育的条件下，分别给予水蛭素(6．0ku／L)和肝素(6．0ku／L)进行干预。通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性，流式细胞术检测细胞周期，免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达。结果发现，重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖，其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关。     

凝血酶对血管内皮细胞核因子κB活化及基质金属蛋白酶2表达的影响

研究凝血酶是否通过激活核因子κB信号传导途径，诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2表达，以及重组水蛭素对该途径是否有拮抗作用。体外培养人脐静脉内皮细胞，用免疫细胞化学和免疫印迹法分析核因子κB活化时由细胞浆至细胞核的动态改变，用逆转录聚合酶链反应法评价基质金属蛋白酶2mRNA的表达。结果发现，凝血酶诱导脐静脉内皮细胞后15min即有核因子κB的活化，30min核内大量活化；凝血酶诱导脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2mRNA，较高表达在6～24h。重组水蛭素可以抑制该过程。结果提示，通过参与核因子κB激活传导信号途径，凝血酶诱导脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2mRNA表达。水蛭素可以有效地抑制凝血酶诱导脐静脉内皮细胞上调基质金属蛋白酶2表达，但不能完全抑制核因子κB的活化。     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制.选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞,在与凝血酶(4.0 ku/L)共同孵育的条件下,分别给予水蛭素(6.0 ku/L)和肝素(6.O ku/L)进行干预.通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期,免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达.结果发现,重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖,其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关.     

水蛭与慢性肺心病的抗凝治疗

水蛭属活血化瘀中药。近几年来,它的临床应用范围更加广泛。现仅就水蛭的研究有关近况及其在慢性肺心病抗凝治疗中的应用综述如下。1.水蛭的研究及有关抗凝抗栓近况从水蛭及其分泌的唾液中,已经提取出多种活性成分,其中最重要、研究得最多的则是水蛭素。它有很强的抗凝作用和抗栓作用。在抗凝方面,研究结果表明,它是迄今为止,世界上发现的最强的天然凝血酶特效抑制剂,与凝血酶的亲和力极强,在很低浓度下,就能中和凝血酶。1μg水蛭素可以中和5μg的     

水蛭素的药理学及临床医学研究概述

<正> 水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,它是凝血酶的特异抑制剂。因其产量少,在研究和应用等方面受到限制。目前国内外正开展基因工程方面的研究,已能大量制备水蛭素,水蛭素的药理学及临床应用有了进一步的发展。本文就其药理学及临床医学方面作一简单的综述。一、结构特点水蛭素是由65或66个氨基酸残基组成的单链多肽,分子量为7000。肽链中不含精氨酸、甲硫氨酸及色氨酸。肽链中部有一个由Pro-Lys~(47)-pro组成的特殊序列,不被一般蛋白酶水解。这个特殊的结构在水蛭素与凝血酶的相互作用中具有重要作     

凝血酶导致肾小球内皮细胞增殖与脱壁机制的研究

为了探讨凝血酶通过损伤肾小球内皮细胞（ＧＥＣ）介导肾小球疾病的机制，观察了纯化的α凝血酶对体外ＧＥＣ增殖、生长状况以及表达纤溶酶原激活物（ＰＡ）、纤维连接蛋白（ＦＮ）的影响，并用水蛭素和抑肽酶进行了阻滞试验。采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测细胞增殖，纤维蛋白平板法测总ＰＡ活性，发色底物法测组织型纤溶酶原激活物（ｔ－ＰＡ）活性，ＥＬＩＳＡ和间接免疫荧光法检测ＦＮ含量。结果表明：（１）０．４～３．２ＮＩＨＵ／ｍｌ凝血酶显著促进ＧＥＣ的增殖和代谢，Ｐ＜０．０５；（２）３．２ＮＩＨＵ／ｍｌ凝血酶刺激３２小时后可诱导ＧＥＣ脱壁，这种作用可被水蛭素和抑肽酶阻断；（３）凝血酶明显增高培养上清中ＰＡ及ｔ－ＰＡ活性，Ｐ＜０．０１；（４）凝血酶显著减少ＧＥＣ培养上清中的ＦＮ含量，Ｐ＜０．０１。同时，细胞外基质中的ＦＮ含量也减少，且可被抑肽酶和水蛭素阻断。结论：凝血酶可导致ＧＥＣ增殖、脱壁，后者可被抑肽酶阻断，因而很可能与细胞贴壁所必需的ＦＮ等细胞外基质被升高的ＰＡ活性过度降解有关。     

抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建与表达

目的：通过间接实验探讨抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建效果与抗凝溶栓活性表达情况。方法：在间接实验中，选择pBV-重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质质粒进行酵母大量表达，然后进行两级纯化分析；去纯化的单位进行抗凝溶栓的检测。结果：工程菌酵母发酵培养诱导1 h 后就可以检测到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达，表达量随发酵时间的增加而递增。两级纯化的重复性非常好，纯度经RP-HPLC检定在98%以上。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的溶栓活性明显高于水蛭素与葡激酶的单纯溶栓活性(P<0.05)。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白具有更强的纤溶酶原激活活性，明显高于水蛭素与葡激酶的单纯纤溶酶原激活活性(P<0.05)。结论：通过间接实验建立的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白生产工艺具有很好的诱导与纯化效果，而重组葡激酶-水蛭素融合蛋白能发挥比较好的抗凝与溶栓作用。     

水蛭素在深静脉血栓治疗中的作用

水蛭素是凝血酶特异性抑制剂,能与血浆中游离的凝血酶和纤维蛋白结合的凝血酶结合,以防止血栓形成。深静脉血栓是外科手术后最严重和常见的并发症,并可导致肺栓塞和长期的血栓后综合征。本文综述了水蛭素在深静脉血栓治疗中的作用。     

水蛭肽研究应用进展

水蛭素(hirudin)由活血化淤中药水蛭的唾液腺分泌,1955年Markwardt[1]从医用水蛭咽周腺体中成功分离出的水蛭素纯品是迄今为止最强的直接凝血酶抑制剂.80年代末,Dodt等[2]测定出水蛭素的氨基酸全序列,使基因重组表达水蛭素的研究取得成功.     

水蛭素的抗凝抗血栓形成作用

水蛭素是从医用水蛭(蚂螨)的唾液腺中分离纯化的一种多肽物质。通过家兔的体内急性实验,即耳静脉注射230ATU/kg,观察到水蛭素明显地延长凝血酶原时间和凝血酶凝结时间。耳静脉注射后二小时,其作用效果达到高峰。且水蛭素具有明显的抑制血栓形成作用。     

新的凝血酶抑制剂Hirulog在冠脉疾病病人中的抗凝作用

Hirulog系基于对水蛭的天然提取物水蛭素的结构研究基础上人工合成的20氨基酸肽,能直接和凝血酶形成特异可逆的结合,是新一代凝血酶抑制剂。体外和动物模型研究表明水蛭素和Hirulog有可能成为肝素的替代物。本研究通过对冠心病心导管检查病人随机临床试验观察Hirulog的抗凝作用及     

抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建与表达

目的:探讨抗凝溶栓重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的构建效果与抗凝溶栓活性表达情况。方法:在间接实验中,选择p BV-重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质质粒进行酵母大量表达,再进行两级纯化分析;去纯化的单位进行抗凝溶栓的检测。结果:工程菌酵母发酵培养诱导1 h后就可以检测到重组葡激酶-水蛭素融合蛋白表达,表达量随发酵时间的增加而递增。两级纯化的重复性非常好,纯度经RP-HPLC测定在98%以上。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的溶栓活性明显高于水蛭素与葡激酶的单纯溶栓活性(P0.05)。重组葡激酶-水蛭素融合蛋白具有更强的纤溶酶原激活活性,明显高于水蛭素与葡激酶的单纯纤溶酶原激活活性(P0.05)。结论:重组葡激酶-水蛭素融合蛋白生产工艺具有很好的诱导与纯化效果,重组葡激酶-水蛭素融合蛋白能发挥较好的抗凝与溶栓作用。     

治疗动脉血栓直接凝血酶抑制剂优于肝素

凝血酶在动脉血栓形成中起重要作用 ,因此治疗冠脉综合症时 ,抑制凝血酶的产生或阻断其激活具有重要意义。尽管肝素已被广泛应用 ,但其作用有很大局限性 ,表现在肝素不能使结合凝血酶 (结合在纤维蛋白上的凝血酶 )失活 ,而结合凝血酶正是血栓形成的主要刺激物。此外不同人对肝素有不同反应 ,治疗效果因人而异 ,需要仔细实验室监测 ,以确保其足够的抗凝血活性。直接凝血酶抑制剂 ,例如水蛭素、bivalirudin,无肝素局限性 ,即它们能同时灭活结合凝血酶及流动相凝血酶。其中 bivalirudin比水蛭素更安全有效 ,应用范围更广 ,而且不需要实验室监测…     

静脉注射肝素与重组水蛭素治疗急性冠状动脉综合征的随机试验比较

急性冠状动脉综合征——包括不稳定型心绞痛,无Q波心肌梗塞和ST段抬高的心肌梗塞——静脉注射肝素是常规方法,但肝素并不是一个完美的抗凝剂,它需要抗凝血因子Ⅲ作为辅助因子。重组水蛭素是一种从医用水蛭素中提取的65-氨基酸肽,是典型的直接凝血酶抑制剂,它具有天然的最强的抗凝作用。在小范围的研究中,已证明水蛭素与肝素相比较,抗凝作用更为持久。本文报道大范围肝素与水蛭素的双盲随机试验。     

r-水蛭素促进溶栓疗法的随机预初试验(HIT)中的安全性观察

急性心肌梗塞(AMI)采用溶栓疗法中的辅助药物包括血小板抑制剂阿斯匹林和凝血酶抑制剂肝素。实验和临床二期研究提示水蛭素可进一步促进凝血酶的抑制。在HIT-Ⅲ期研究中的预初试验拟对1000例AMI进行观察,在收集302例时由于水蛭素组出血并发症明显高于肝素组,试验被终止。本文报告此预初试验有关出血的结果。     

大鼠脑出血后IL-1β表达及凝血酶的干预作用

目的观察在大鼠实验性脑出血(ICH)后不同时间点血肿周围白细胞介素-1β(IL-1β)表达情况及凝血酶对其影响。方法采用自体血、凝血酶注入法分别制作大鼠模型,应用免疫组化法观察不同时间点各组大鼠IL-1β的表达情况及凝血酶对其表达的影响。结果在造模后1h,脑出血组和凝血酶组病灶周围即可见IL-1β表达,6h达高峰,以后逐渐下降,48h阳性细胞基本消失。在相应时间点,ICH 水蛭素组血肿周围IL-1β的表达水平均明显低于ICH组(P<0.01),且细胞着色浅,凝血酶 水蛭素组病灶周围IL-1β的表达水平均明显低于凝血酶组(P<0.01),且细胞着色浅。假手术组仅有少量阳性细胞表达。结论IL-1β参与了ICH后脑损伤,凝血酶可能通过促进IL-1β的表达而发挥脑损伤作用。     

无ST段抬高的急性心肌梗死患者中使用重组水蛭素与肝素的比较

水蛭素是一种强大而特殊的凝血酶抑制剂,最初是从医用水蛭中分离出来,现在已能通过DNA重组技术获得。在本文中作者探讨水蛭素是否在减少7d内心血管死亡、心肌梗死(第一终点)和7d内合并心血管死亡、心肌梗死或难治性心绞痛(第二终点)危险方面优于肝素。     

水蛭素对脑出血大鼠血肿周围脑组织CD34阳性微血管、RCA-1阳性细胞和中性粒细胞数量的影响

目的 观察大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)不同时间点血肿周围组织CD34阳性微血管、蓖麻凝聚素(Ricinus communis agglutinin,RCA-1)阳性细胞和中性粒细胞数量的动态变化和凝血酶特异性抑制剂水蛭素对上述指标的影响,探讨水蛭索对脑出血后脑损伤的保护机制.方法 采用立体定向法将自体不凝全血注入大鼠脑基底节区制作实验性ICH模型,随机分为假手术组、ICH组、水蛭素干预组和生理盐水干预组.CD34和RCA-1免疫组织化学染色和常规HE染色观察CD34阳性微血管、RCA-1阳性细胞和中性粒细胞.结果 ICH 12 h CD34阳性微血管数量开始下降,72 h降至最低,7 d后缓慢恢复至正常水平;在ICH6 h时可见RCA-1阳性细胞,48 h达高峰,持续2周仍可见少量细胞;ICH 12 h可见中性粒细胞,48 h达高峰,2周时消失.ICH早期(5 min)应用水蛭素能显著减少RCA-1阳性细胞和中性粒细胞数量,同时显著抑制CD34阳性微血管数量的减少(P均＜0.01);水肿形成期(ICH 24 h)应用水蛭素亦可显著减少血肿周围RCA-1阳性细胞和中性粒细胞数量(P均＜0.05),但不能显著增加CD34阳性微血管数量.结论 凝血酶介导的炎症反应参与了ICH后的脑损伤过程,早期应用水蛭素可显著减轻血肿周围组织损伤.     

老年人尸检正常肾肾小球系膜区Ⅳ型胶原定量研究

目的肾小球系膜区细胞外基质进行性积聚是肾小球硬化的重要特征，Ⅳ型胶原是系膜基质的重要成分。本研究评估老年人尸检正常肾肾小球系膜区基质中Ⅳ型胶原的分布。方法应用标记的链亲和素－生物素（ＬＳＡＢ）免疫组化技术，检测了８１例老年人尸检肾的肾小球系膜基质中Ⅳ型胶原分布情况，并且采用真彩色图像分析系统对Ⅳ型胶原进行定量研究。结果显示肾小球系膜Ⅳ型胶原的数量及染色强度随年龄的增长而增加。结论老年人肾小球已具有肾小球硬化的早期病理基础。     

重组水蛭素治疗急性冠脉综合征的研究

重组水蛭素为直接凝血酶抑制剂，本文综述了其分子生物学和药理学特性、作用机理及其在急性冠脉综合征中的应用进展。