用基因芯片体外研究苯暴露大鼠骨髓细胞基因的表达

目的　研究正常和苯处理后的大鼠骨髓细胞的基因表达谱 ,大规模分析苯作用后骨髓细胞基因表达水平的变化。方法　 1实验大鼠骨髓细胞分为两组 ,一组为正常对照组 ,一组为染苯组 ;2从两组骨髓细胞中抽提总 RNA ,经反转录分别用 Cy3、Cy5荧光标记 ,获得 c DNA探针 ;3c DNA探针与基因谱芯片杂交 ,结果由扫描仪扫描并用软件进行分析统计。结果　骨髓细胞暴露苯后 2 0 0条 (4 .88%)基因发生明显变化 ,其中 1 5 4条 (77%)基因已在 Gene Bank中登录。这 2 0 0条基因中 ,有 94条基因表达降低 (Cy5 / Cy3* <0 .5 ) ,1 0 6条基因表达升高 (Cy5 / Cy3* >2 .0 )。结论　利用基因芯片技术结合体外细胞培养能大规模地研究苯毒性作用的基因表达谱 ,初步筛选出苯毒性作用相关基因。对进一步阐明苯毒性在基因水平的发病机理有十分重要的作用。     

染料木黄酮对MCF-7细胞肿瘤相关基因表达的影响

目的:用基因芯片技术观察染料木黄酮(genistein,GS)对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7肿瘤相关基因表达的影响。方法:75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h,收集细胞并提取总mRNA,用Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录反应将mRNA分别标记成两种探针,与载有一组靶基因的人肿瘤相关基因表达谱芯片杂交、经计算机扫描分析得出GS处理后的差异表达基因。结果:筛选出包括与细胞增殖、细胞凋亡、雌激素反应等相关的差异表达基因共22条(7.3%,22/300)。18个下调基因(占81.8%)主要是促进细胞增殖活力的原癌基因和与肿瘤细胞逃逸、扩散有关的肿瘤细胞表面抗原基因;4个上调基因均为雌激素反应性基因。结论:GS所影响的基因多与细胞增殖和肿瘤细胞免疫逃逸调节有关,调节此类基因的表达可能是GS发挥抗癌防癌作用的主要机制;GS上调的4个基因均属于雌激素上调基因,表明GS与雌激素受体结合后,除产生抗雌激素样效应外,还能激活雌激素反应元件而表现一定的雌激素效应。     

糙叶败酱总木脂素对K562细胞基因表达的影响

[目的]研究糙叶败酱总木脂素对白血病K562细胞基因表达的影响.探讨糙叶败酱治疗白血病的药理作用机制.[方法]分别提取药物治疗组表模型组K562细胞总RNA, Cy3和Cy5荧光标记,反转录分别合成cDNA探针后,与基因表达谱芯片杂交,ScanArray Lite扫描仪扫描芯片,Quantarray软件分析表达信号.[结果]总木脂素处理前后比较差异表达的基因共有147个,其中表达上调的有68个,表达下调的有79个.[结论]糙叶败酱总木脂素对K562细胞基因表达具有调控作用,从分子水平阐释了糙叶败酱治疗白血病的药理作用机制.     

用基因芯片检测不同程度苯中毒细胞凋亡相关基因的差异表达

目的用基因芯片研究不同程度苯中毒细胞凋亡相关基因的差异表达。方法选取7名诊断为不同程度接苯中毒的工人（疑似1例、轻度2例，中度2例和重度2例）并设年龄、工龄匹配的健康者做对照，从其外周血中分离单个核细胞，用Trizol试剂盒抽提总RNA，纯化、逆转录生成cDNA产物，分别用荧光染料Cy3和Cy5标记后与含177条细胞凋亡相关基因的微阵列芯片进行杂交。结果共有4l条细胞凋亡相关的基因表达异常，其中有3条基因的表达在轻、中度苯中度工人中一致性上调，1条基因在所有苯中毒工人中均表达上调，随苯中毒程度加重，细胞凋亡相关基因差异表达总数有减少趋势。结论苯中毒病人细胞凋亡相关基因的差异表达参与了苯血液毒性的发生、发展。     

二十二碳六烯酸对人树突状细胞基因表达谱的影响

目的:研究二十二碳六烯酸(DHA)对人树突状细胞(DCs)成熟过程中基因表达谱的影响. 方法:采用GM-CSF及IL-4诱导人外周血单核细胞获得非成熟DCs,经DHA( 50 μmol/L)孵育24 h后,再予以LPS (100 ng/ml)作用48 h,用cDNA芯片检测人DCs基因表达谱.用RT-PCR法验证相关差异表达基因的结果.分别将未经脂肪酸处理的DCs和硬脂酸(SA)处理的DCs作为对照. 结果:经DHA预处理后,成熟的DCs与未经脂肪酸处理的成熟DCs相比,共有20条基因差异表达 ,约占芯片中基因总数的29.4%.其中18条基因表达下降,2条基因表达增加.在差异表达的基因中,涉及细胞因子、趋化因子(受体)及其抗原呈递相关分子基因等.而采用饱和脂肪酸(SA)处理的DCs的表达谱未见明显变化. 结论:50 μmol/L DHA对DCs成熟过程中的基因表达具有显著的影响 ,涉及到细胞因子、趋化因子(受体)及其抗原呈递相关分子基因的调节.     

1,25-二羟基维生素D3对大鼠脾辅助性T细胞分化基因表达谱的影响

目的:研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对大鼠脾辅助性T细胞(Th细胞)分化基因表达谱的影响.方法:采用近交系大鼠,随机分成实验组和对照组.实验组以1,25(OH)2D3 1μg/(只·d)连续灌胃14 d;对照组以同等体积赋形剂代替,第15天腹腔注射致死剂量脂多糖(LPS) 10 mg/kg,6 h后处死,用功能分类Th1-Th2-Th3芯片检测脾Th细胞的基因表达谱.用Realtime-PCR法验证差异表达的相关基因的结果.结果:功能分类Th1-Th2-Th3芯片共有99条基因,实验组与对照组对比,共有35条基因差异表达,占芯片基因总数的35.35%,其中12条基因上调,23条下调.差异表达的基因主要是细胞因子(受体)和调控Th细胞分化的转录因子.结论:1,25(OH)2D3抑制大鼠脾Th1型免疫反应,使免疫反应向Th2方向偏移.1,25(OH)2D3主要通过调节细胞因子基因和Th细胞分化信号通路中转录因子基因表达.     

EGCG和红茶多酚对HepG_2细胞脂质代谢相关基因表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和红茶多酚对人肝细胞癌HepG2细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法:HepG2细胞经EGCG(5μmol/L),红茶多酚(5μg/ml)或0.1%二甲亚枫(对照组)处理8h后,抽提RNA,并杂交至人14kcDNA芯片进行基因表达谱分析。应用实时RT-PCR技术对芯片结果进行验证。结果:HepG2细胞经EGCG和红茶多酚处理后表达差异的脂质代谢相关基因数分别为13条和29条,其中表达差异一致的基因有6条。实时RT-PCR结果与芯片结果一致。结论:EGCG和红茶多酚影响脂质代谢的机制是复杂的,此次实验发现的新靶标为今后茶多酚降脂作用研究提供了新的依据。     

用cDNA微阵列芯片检测苯中毒细胞色素P450基因表达差异

目的 利用cDNA芯片技术检测苯中毒细胞色素P450的基因表达谱差异。方法 选取7名诊断为不同程度接苯中毒的工人（疑似1例、轻度2例、中度2例和重度2例）,并设年龄、工龄匹配的健康者做对照,分离外周血白细胞,用Trizol试剂盒抽提总RNA,纯化、逆转录生成cDNA产物,分别用荧光染料Cy3和Cy5标记后与含32条细胞色素P450基因的微阵列芯片进行杂交。结果 共有6条细胞色素P450基因呈差异性表达,包括CYP4F3、CYP1A1、CYP27A1、CYP1B1、CYP286、CYP51,其中CYP4F3基因在所有苯中毒工人中均表达上调。结论 苯中毒工人细胞色素P450基因的表达异常可能在苯诱导的血液毒性中起重要作用．     

二十碳五烯酸对人树突状细胞成熟过程中基因表达谱影响的研究

目的研究二十碳五烯酸(EPA)对人树突状细胞成熟过程中基因表达谱的影响。方法采用GM-CSF及IL-4诱导人外周单核细胞获得非成熟树突状细胞,然后将细胞分为三组处理,A组,维持树突状细胞的未成熟状态;B组,LPS(100ng/ml)作用48h诱导树突状细胞的成熟;C组,经EPA(50μmol/L)预处理24h后再予以LPS(100ng/ml)诱导树突状细胞的成熟。用低通量的cDNA表达谱芯片检测三组细胞基因表达谱的情况。RT-PCR法验证相关差异表达基因的结果。结果在LPS诱导树突状细胞成熟的过程中共有29条基因表达增加,9条基因表达下降。但是经EPA孵育24h后再予以LPS诱导"成熟"的人树突状细胞其基因表达水平发生明显变化,与未经EPA处理的成熟树突状细胞比较,共有15条基因出现差异表达,其中在29条本该上调的基因中有11条基因表达出现下降,1条基因出现上调。在9条本该表达下调的基因中有1条基因出现上调,2条明显下调。RT-PCR验证了其中6条基因的芯片结果。结论 EPA对树突状细胞的成熟过程中多种基因的表达具有明显的抑制作用,其范围涉及细胞因子及抗原提呈分子等不同基因。     

三氧化二砷对HepG2细胞表达基因调节作用

目的 应用基因芯片技术，阐明低剂量三氧化二砷作用于肝HepG2细胞之后，无机砷对差异表达基因的调节作用。方法 应用基因表达谱芯片技术，对5μmol／L三氧化二砷诱导的HepG2细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行差异显示分析，研究三氧化二砷诱导人HepG2细胞后的差异表达基因。结果 HepG2细胞经5μool／L三氧化二砷诱导后。所检测的4096条目的基因中有123条产生差异表达，其中48条基因表达上调，75条基因表达下调。结论 应用基因表达谱芯片成功筛选了低剂量三氧化二砷诱导肝细胞后的差异表达基因，无机砷对肝细胞有双向调节作用。     

用cDNA微阵列分析苯中毒肿瘤相关基因表达谱

目的运用cDNA微阵列技术对苯中毒肿瘤相关基因表达谱进行分析研究。方法对7例接苯中毒工人及7例正常对照者全血中淋巴细胞分别进行RNA抽提，纯化后的mRNA配对进行逆转录制备杂交探针，利用7张含有2780个cDNA克隆的微列阵肿瘤相关基因芯片进行杂交，杂交信号用扫描仪进行扫描，然后将图像转化为基于荧光强度的数字信号，随后进行数据分析和处理。结果在7张肿瘤相关基因中共发现特异性差异表达基因44个，其中GRO1、TGFBR3、LYN等16个基因表达上调，FOSB、DJ-1、MCT-1等28个基因表达下调。结论苯暴露患者肿瘤相关基因的表达异常，提示其可能为致白血病的关键基因，在苯致白血病中起着重要的作用；采用基因芯片检测技术有利于全面揭示苯中毒肿瘤相关基因表达模式，快速高效地发现新的研究目标和基因治疗途径。     

硫化镍与苯并芘转化人支气管上皮细胞基因差异表达谱的研究

目的用cDNA微阵列技术探讨经硫化镍(NiS)与二羟环氧苯并芘(dihydroxyepoxy benzo pyrene,BPDE)转化后的人支气管上皮细胞(16HBE)基因的差异表达;以了解不同种类和性质的化合物在转化细胞及致癌分子机制方面的异同;为预防人类生存环境不同外来化合物对人类健康的危害和影响提供科学依据.方法取16HBE分为NiS处理组,BPDE处理组和16HBE(对照组)三组同步培养,传代至第35代;提取三种细胞的总RNA,逆转录合成cDNA并以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP荧光素分别标记制作探针.探针混合后与含4000个人类基因的芯片杂交.以ScanArray 4000扫描仪扫描芯片,以GenPix Pro3.0软件分析荧光信号,对三组差异表达的基因进行生物学信息分析.结果 NiS转化的16HBE细胞与BPDE转化的16HBE细胞经分析比较,呈现差异表达的基因有22个,其中11个(50%)下调,另11个(50%)上调.结论 NiS与BPDE对16HBE细胞株的转化作用在抑癌基因,细胞周期蛋白相关基因,细胞凋亡和应激反应基因相关基因,DNA合成、修复和重组蛋白相关基因,DNA结合、转录和转录因子类基因,细胞受体相关基因,代谢相关基因,蛋白翻译和合成相关基因等多类基因上呈现差异表达.认为基因芯片技术在筛选不同种类和性质的化合物转化细胞相关基因的改变上,具有高通量、高敏感、快速等特点,对化合物在细胞、分子毒作用和致癌机制的研究中意义重大.     

中药复方理冲生髓饮对Casp-8和CXCL2基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响

目的:采用基因芯片技术研究理冲生髓饮对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清。提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与基因表达谱芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因。结果:共筛选出显著表达差异基因136种,其中16种基因表达水平下调,120种基因表达上调。结论:理冲生髓饮对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有抑制作用,促进肿瘤细胞凋亡和抑制血管生成可能是其作用机制。     

S-生物丙烯菊酯处理人淋巴细胞基因表达谱的变化

目的运用基因芯片技术研究S-生物丙烯菊酯对正常人淋巴细胞基因表达谱的变化。方法取3名正常人外周血淋巴细胞,加入S-生物丙烯菊酯刺激后提取总RNA,合成cRNA并分别用Cy3和Cy5标记,与AgilentHum an1B寡核苷酸基因芯片杂交,研究基因表达谱变化。结果正常淋巴细胞在S-生物丙烯菊酯刺激后共有346个基因表达发生变化,其中16个免疫和防御相关基因表达下调。结论S-生物丙烯菊酯可导致正常淋巴细胞基因表达谱改变,某些免疫和防御相关基因表达下调。     

基因芯片筛选BPDE转化16HBE相关基因

目的 采用基因芯片技术筛选二羟环氧苯并芘（BPDE）转化的人支气管上皮细胞（16HBE）相关基因，探讨该技术在分子毒理学研究中的应用。方法 将实验组（BPDE-16HBE）和对照组（16HBE）的mRNA逆转录合成cDNA掺入荧光分子为探针，杂交于H40S基因芯片。分析2组基因的差异表达。结果 在4096种人类基因中。BPDE转化的16HBE和正常16HBE问存在差异表达的基因有143条，其中高表达52条，低表达41条。结论 基因芯片技术在筛选BPDE转化的16HBE相关基因改变上，具有高通量、高敏感、快速等特点，在毒物的分子致癌机制研究中意义萤大．     

叶绿酸抑制细胞恶性转化的基因表达分析

目的 采用cDNA微阵列技术探索人支气管上皮细胞经叶绿酸抗转化处理后基因的差异表达。方法 人支气管上皮细胞株16HBE分别经二羟环氧苯并芘（BPDE）单独处理及叶绿酸与BPDE联合处理后，提取2种细胞的总RNA，逆转录合成cDNA并以Cy3-dCTP和Cy5-dCTP荧光素分别标记制作探针。探针混合后与含4000个人类基因的芯片杂交。以ScanArray4000扫描仪扫描芯片，以GenPixPro 3．0软件分析荧光信号，然后对差异表达的基因进行生物学信息分析。结果 叶绿酸与BPDE联合处理的细胞样与BPDE单独处理的细胞样比较呈显差异表达的基因有106个，其中67个(63．9％)下调，另39个(36．8％)上调。结论 叶绿酸的抗转化活性与应激反应基因，免疫相关基因，DNA合成和修复基因，代谢相关基因等多类基因的调节有关。     

杀草强影响Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞甲状腺球蛋白的机制研究

目的 探讨杀草强影响Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRTL-5细胞)甲状腺球蛋白(TG)的机制.方法 1、10和100μg/ml杀草强处理FRTL-5细胞后,用3H掺入法测杀草强的细胞毒性;放免法和免疫细胞化学法测杀草强对TG、甲状腺转录因子1(TTF-1)的影响;免疫荧光法检测杀草强对细胞表面促甲状腺素受体(...