三氧化二砷上调Maspin表达的初步研究

目的对三氧化二砷(As2O3)作用人食管癌细胞株Ec109前后Maspin蛋白的表达进行比较研究。方法采用免疫组化的方法检测As2O3处理Ec109前后Maspin蛋白的表达。结果未经As2O3处理的Ec109细胞Maspin蛋白表达水平较低(9.74%),经As2O3作用后Ec109细胞Maspin蛋白表达水平增加(23.16%),两者有显著性差异(P<0.05)。结论As2O3抗肿瘤作用可能与上调maspin表达有关。     

三氧化二砷在诱导非小细胞肺癌NCI-H157细胞凋亡过程中对Survivin基因表达Caspase-3的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）在诱导非小细胞肺癌NCI-H157凋亡过程中时Survivin基因表达及Cas-pase-3的影响．探讨As2O3，诱导肿瘤细胞凋亡的作用机理研究，方法：首先对NCI-H157细胞培养和增殖测定，然后采用RT-PCR法检测Surviv inⅡ1RNA表达；WestemBlot检测Survivin及Caspase-3蛋白，结果：RT-PCR结果显示，10txmol／LAs203作用于NCI-H157细胞12h，24h．48h同对照组相比，Survivin mNA表达分别降至85．7％，59．4％，22．5％，处理72h后几乎检测不到Survivin mNA的表达。，WesternBlot解析结果显示．Survivin蛋白表达在5txmol／LAs203处理后分别下调至75．2％（12h），54．3％（24h），37．5％（48h）及20．3％（72h）。分别用不同浓度的As2O3，5220moL／L作用NCI-H157细胞24h．Survivin蛋白表达随着A蜘0、浓度的增加逐渐下降．As2O3，作用12h之内只能检测到非激活状态32KD的proCaspase-3，处理24h后出现17KD的活性亚基，直至72h。结论：As2O33以时间、剂量依赖的方式抑制NCI-H157细胞增殖，诱导细胞凋亡过程中下调Survivin mNA及蛋白表达，并活化Caspases-3．提示As2O3、诱导的NCI-H157细胞凋亡机制可能与下调Survivin基因表达及激活Caspase-活性有关、     

三氧化二砷对食管癌细胞株Eca109的放射增敏作用及机制

目的探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide, As2O3）及As2O3与放射线联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用;分析二者联合对Eca109细胞周期和凋亡的影响,为As2O3的临床应用提供理论依据。方法MTT法观察放射线及As2O3单独及二者联合对食管癌Eca109细胞的增殖抑制作用,利用直线相关及直线回归拟合出照射组、As2O3组及联合组的直线,计算增敏比（sensitizing enhancement ratio, SER）;流式细胞术检测As2O3联合放射线对Eca109细胞周期和凋亡的影响;Western blot印记技术观察As2O3联合放射线对锰超氧化物歧化酶（Manganese superoxide dismutase, MnSOD）和细胞色素C（cytochrome C, cyt-C）蛋白表达的影响。结果As2O3能抑制食管癌Eca109细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系;As2O3对食管癌Eca109细胞有明显的放射增敏作用;As2O3与放射线联合作用于Eca109细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD蛋白表达下降,而cyt-C蛋白表达未见明显变化。结论As2O3可能通过G2/M期阻滞,降低MnSOD蛋白的表达,从而诱导细胞凋亡来增强放射线对细胞的杀伤作用。     

三氧化二砷诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对EWS—FLil融合蛋白的影响

目的：探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）诱导尤文肉瘤细胞凋亡及对融合蛋白EWS—FLi1表达的影响，．方法：应用噻唑蓝（MTF）法、形态学观察、原位末端标记法（TUNEL）、流式细胞术（FCM）观察As2O3对体外生长的尤文肉瘤RD—ES细胞系生物行为的影响：应用半定量RT—PCR测定应用As2O3前后c—mye基因mRNA水平的变化；应用免疫细胞化学及固定化蛋白印迹法（Western blot）观察用药前后EWS—FLi1融合蛋白表达水平的变化、结果：As2O3对体外生长的RD—ES细胞系具有明显抑制作用，并可诱导细胞凋亡、c-mye基因mRNA表达水平和EWS—FLil融合蛋白表达量随As2O3作用时间延长逐渐降低结论：常规治疗浓度的As2O3对体外生长的尤文肉瘤细胞具有明显的杀伤作用，其作用机制与改变线粒体膜通透性和抑制EWS—Flil融合蛋白、降低c一myc基因表达有关。     

低氧下三氧化二砷对食管癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的： 观察三氧化二砷（As 2O 3）在低氧条件下对食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其发挥放射增敏作用的可能机制。 方法： CoCl 2处理模拟肿瘤细胞模拟低氧微环境,MTT法分别检测常氧和低氧条件下不同浓度As2O3及不同剂量放射线对食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测低氧下As 2O 3、放射线单独及两者联合对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测经As 2O 3、放射线单独及两者联合作用后Eca109细胞中HIF-1α、p27蛋白的表达情况。 结果： 在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间和剂量依赖方式抑制Eca109细胞增殖,相同时间和相同剂量条件下,其抑制水平相当（P>0.05）;而低氧下放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用较常氧下明显减弱（P<0.05）。低氧下Eca109细胞周期出现G 0/G 1期阻滞、G 2/M期细胞比例明显减少（P<0.05）,As 2O 3在低氧条件下可诱导G 2/M期阻滞、G 0/G 1期细胞比例减少。As 2O 3与放射线联合作用时,Eca109细胞的凋亡率大于两者单独作用之和。低氧条件下,Eca109细胞HIF-1α、p27蛋白表达均明显增强,As 2O 3可逆转HIF-1α、p27表达水平的升高。 结论： 低氧条件下,As 2O 3对食管癌Eca109细胞有放射增敏作用,其机制可能与下调HIF-1α进而降低p27表达水平、解除G 0/G 1期细胞周期阻滞和促进细胞凋亡有关。     

三氧化二砷重新激活PC-3前列腺癌细胞雄激素受体基因的表达

目的探讨三氧化二砷（As2O3）重新激活PC-3前列腺癌细胞雄激素受体（AR）基因的表达。方法用免疫组织化学的方法，对用浓度为2mg／L的As2O3处理前后的PC-3前列腺癌细胞和阳性对照的LNCaP前列腺癌细胞（AR）基因的表达情况进行检测分析。结果As2O3处理过的PC-3前列腺癌细胞AR的阳性表达率明显增高（P〈0．05）。结论As2O3可以重新激活PC-3前列腺癌细胞（AR）基因的表达。     

三氧化二砷对HL-60细胞hTERT基因表达和端粒酶活性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)处理HL－60细胞前后人类端粒酶逆转灵酶（hTERT)基因表达和端粒酶活性的改变。方法：采用姬姆萨染色及碘化丙锭染色置流式细胞仪检测来观察细胞的凋亡，以RT－PCR分析hTERT 基因的mRNA表达水平；应用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量；利用多聚酶链反应－酶联免疫反应（PCR－ELISA）方法检测As2O3处理HL－60前后端粒酶活性的改变。结果：2umol/L As2O3诱导HL－60细胞凋亡的过程中，hTERT mRNA表达水平显著下降，细胞内hTERT蛋白含量也相应降低，其端粒酶活性明显受到抑制，结论：As2O3可通过下调hTERT基因的表达而抑制HL－6细胞的端粒酶活性。     

转铁蛋白受体的单克隆抗体 OX26偶联三氧化二砷免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞系的体外抑制作用

目的：探讨转铁蛋白受体单克隆抗体（ OX26）偶联三氧化二砷（ As2 O3）免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞株的体外抑制作用。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,实验分为盐水组,As2 O3（6μmol· L－1）组和OX26偶联As2 O3脂质体（6μmol· L－1）组;采用四唑盐比色法（MTT）,检测OX26偶联As2O3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞生长的抑制作用, DAPI染色观察OX26偶联As2 O3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞促凋亡的影响。免疫印迹法检测OX26偶联As2 O3免疫脂质体对脑胶质瘤细胞胶质瘤胶质纤维酸性蛋白（ GFAP ）蛋白表达的影响。结果 MTT比色法检测显示：OX26偶联As2 O3免疫脂质干预对脑胶质瘤生长的抑制率为40．21％,显著高于As2 O3组的25．77％,比较差异有统计学意义（ P＜0．05）;核染显示：与盐水组和As2 O3组比较,OX26偶联As2 O3免疫脂质组脑胶质瘤细胞的光密度和面密度值显著减少,比较差异有统计学意义（P＜0．01）;Westernblot检测显示：OX26偶联As2O3免疫脂质组脑胶质瘤细胞GFAP蛋白的表达较盐水组和As2 O3组少。结论 OX26偶联As2 O3免疫脂质体对鼠脑胶质瘤细胞具有明显的体外抑制作用,其作用机制可能与促进脑胶质瘤细胞凋亡和GFAP蛋白的表达相关。     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI 8226凋亡的机制探讨

目的:探讨三氧化二砷（As2O3）诱导人骨髓瘤细胞RPMI 8226凋亡的机制。方法:不同浓度As2O3作用RPMI 8226细胞48h后,用MTT法计算细胞增殖抑制率。流式细胞仪检测1.0、2.0、5.0μmol/L As2O3干预RPMI 8226细胞48h后的凋亡率;透射电镜观察As2O3作用前后RPMI 8226细胞超微结构的变化;RT-PCR、Western Blot法检测As2O3作用前后Bcl-2及Caspase-3表达的变化。结果:不同浓度的As2O3对RPMI 8226细胞均有增殖抑制作用(P<0.05）。1.0、2.0、5.0μmol/L As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,细胞凋亡率随As2O3浓度的增加而呈上升趋势,与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,电镜下可见典型的凋亡小体;RT-PCR、Western Blot结果均显示上述浓度的As2O3干预RPMI 8226细胞48h后,Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调（P<0.05）,Caspase-3 mRNA及蛋白表达上调（P<0.05）。结论:As2O3可能通过激活Caspase-3、下调Bcl-2的表达从而诱导RPMI 8226细胞凋亡。     

三氧化二砷对人肺巨细胞癌细胞系（PLA—801D株）运动能力、尿激酶的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对人肺巨细胞癌细胞系PLA－801D株细胞运动能力和尿激酶（uPA）、尿激素受体（uPAR)mRAN表达的影响。方法 采用0．5μmol/L、1．0μmol／L及2．0μmol／L三种浓度的As2O3处理人肺巨细胞癌细胞（PLA－801D株）,120h后收取细胞,分别采取Boyden小室测定细胞穿膜运动能力及ERT－PCR方法检测细胞uPA及uPARmRNA转录表达水平。结果 经As2O3处理的PLA－801D株细胞,穿膜运动能力和uPA及uPARmRNA转录表达水平均显著下降,As2O3作用呈剂量依赖方式。结论 As2O3可抑制肿瘤细胞的运动能力;可下调uPA、uPAR表达,可能影响肿瘤细胞基质降解过程。     

在CerbB-2表达不同的乳腺癌组织中Maspin的表达

目的　对CerbB 2表达不同的乳腺癌组织中肿瘤抑制基因Maspin的表达变化进行比较研究。方法　采用免疫组化SP染色法检测2 9例乳腺癌组织中Maspin蛋白的表达情况。结果　Maspin蛋白在CerbB 2阴性表达的乳腺癌组织中的高表达率为47% (7/15 ) ,在CerbB 2阳性表达的乳腺癌组织中的高表达率仅为7% (1/14 ) ,两者有显著性差异(P <0 .0 5 )。结论　在CerbB 2表达不同的乳腺癌组织中Maspin表达亦存在显著差异,Maspin也可作为判定乳腺癌恶性程度及预后的指标。     

胃癌组织中Maspin 蛋白与血管内皮生长因子-C的表达及其相关性

 目的 探讨胃癌组织中Maspin蛋白与血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及其相关性。方法 收集哈尔滨医科大学附属肿瘤医院2002年～2003年间手术切除的胃癌组织石蜡标本61例,采用免疫组化技术检测胃癌组织中Maspin蛋白与血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达情况,结合临床病理特征进行分析,并探讨两者蛋白表达水平的相关性。结果 Maspin蛋白的阳性表达率为50.8%（31/61）。淋巴结转移阳性组织中Maspin蛋白的阳性表达率明显低于淋巴结转移阴性的组织（32.6%vs94.4%,P=0.000）。且Maspin蛋白在组织分化较低,TNM分期较晚,周围有肿瘤浸润的病例中表达率显著降低（P分别为0.018,0.011和0.028）。VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率为86.9%（53/61）。淋巴结转移阳性组织中VEGF-C蛋白的阳性表达率明显高于淋巴结转移阴性的组织（95.3%vs66.7%,P=0.006）。Maspin蛋白与VEGF-C在胃癌组织的表达存在负相关（Spearmanr=-0.429,P〈0.05）。结论 Maspin蛋白在胃癌组织中低表达,胃癌的浸润转移能力增强可能与Maspin蛋白表达下调、缺失相关;VEGF-C的高表达与肿瘤淋巴结转移关系密切;Maspin蛋白与VEGF-C在胃癌组织中的表达呈明显负相关。     

Disruption of cell-type-specific methylation at the Maspin gene promoter is frequently involved in undifferentiated thyroid cancers

Cancer-associated DNA hypomethylation is as prevalent as cancer-linked hypermethylation, but the biological significance of DNA hypomethylation in carcinogenesis is less understood. The expression of Maspin (mammary serpin) in differentiated normal cells is regulated by epigenetic modifications in a cell-type-specific manner. Paradoxical Maspin expression due to epigenetic modification has been addressed in several cancer cell types. To elucidate the role of the Maspin gene in thyroid cancer, we studied methylation status in the promoter region and its expression in six human undifferentiated thyroid cancer cell lines and in specimens from 92 primary thyroid tumors, consisting of six follicular adenomas, 56 well-differentiated thyroid cancers (WDTCs), 17 poorly differentiated thyroid cancers (PDTCs) and 13 undifferentiated thyroid cancers (UDTCs). Three of the six cell lines overexpressed Maspin mRNA and its protein product, but the remaining three did not. The methylation status at the promoter region was inversely correlated with Maspin expression. In Maspin-negative cell lines, Maspin expression was induced by treatment with 5-aza-2'-deoxycytidine, a DNA demethylating agent. Immunoreactivity for Maspin protein was frequently detected in UDTCs (8/13, 62%) and PDTCs (7/17, 41%). Immunoreactivity for Maspin was diffusely positive in UDTCs, and was restricted to dedifferentiated components of the tumor in PDTCs. Positive immunoreactivity was infrequent in WDTCs (1/56, 2%), and all follicular adenomas and normal thyroid glands were completely negative. Their methylation status evaluated by the methylation-specific PCR method showed a good inverse correlation with their immunoreactivity in surgically resected specimens. Our data suggest that overexpression of Maspin by DNA hypomethylation is closely associated with morphological dedifferentiation in thyroid cancers.     

鼻咽癌中Maspin和Bmi-1基因表达及其临床意义

目的 探讨鼻咽癌组织中Maspin和Bmi-1的表达及其与临床病理特征的关系。方法 应用免疫组织化学法检测Maspin和Bmi-1在60例鼻咽癌及40例正常鼻咽组织中的表达情况,探讨两者表达的相关性及与鼻咽癌临床病理特征的关系。结果 Maspin在鼻咽癌及正常鼻咽组织中的阳性表达率分别为45.0%（27/60）和90.0%（36/40）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Bmi-1在鼻咽癌及正常鼻咽组织中的阳性表达率分别为75.0％（45／60）和25.0％（10／40）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Maspin和Bmi-1表达与年龄无关（P＞0.05）,而与肿瘤分化程度、淋巴结转移及临床分期有关 （P＜0.05）。Maspin与Bmi 1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关（r=-0.406,P＜0.05）。结论 Maspin和Bmi-1表达可能在鼻咽癌的发生、增殖和转移中起重要作用。     

三氧化二砷-泊洛沙姆４０７缓释剂瘤内注射治疗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

目的：观察三氧化二砷-泊洛沙姆４０７（Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７）缓释剂对裸鼠皮下人肝癌移植瘤的有效性。方法：以人肝癌ＨｅｐＧ２细胞为来源建立裸鼠皮下移植瘤模型,实验共分３组：Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂治疗组、Ａｓ_２Ｏ_３治疗组和生理盐水（ＮＳ）对照组,于造模成功后６～８天行瘤体注射,每４天１次,共４次。比较各组抗癌疗效,观察裸鼠体重、肿瘤体积变化、抑瘤率、肿瘤组织病理及骨髓涂片以及裸鼠的存活情况、生存质量。结果：Ａｓ２Ｏ３ Ｐ４０７缓释剂治疗组肿瘤生长受到显著抑制,肿瘤体积较Ａｓ_２Ｏ_３组小（Ｐ＜０.０５）,瘤重分别为（０.２５７±０.０８０）ｇ和（０.６４１±０.１０９）ｇ,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）;两组与ＮＳ对照组瘤重（１.０９４±０.１４７）ｇ相比,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。治疗后Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂组裸鼠体重大于Ａｓ_２Ｏ_３组和ＮＳ对照组,差异有统计学意义（Ｐ＜０.０５）。各组均未见骨髓抑制现象。结论：Ａｓ_２Ｏ_３-Ｐ４０７缓释剂瘤内注射,使用安全,可维持局部有效药物浓度、延长作用时间,疗效优于Ａｓ_２Ｏ_３注射液。     

人食管鳞癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1 凋亡的变化

 目的 探讨人食管癌紫杉醇耐药细胞株凋亡的变化。方法 以体外诱导的人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1为模型,采用反转录—多聚酶链反应（RT-PCR）检测NF-κB-p65、bcl-2和caspase-3 mRNA的表达;应用免疫组织化学方法检测NF-κB-p65、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达;采用吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡变化。结果 RT-PCR法显示NF-κBmRNA和bcl-2 mRNA在Ec9706/P-1细胞中表达条带亮度强于Ec9706;caspase-3 mRNA在Ec9706/P-1细胞中条带亮度较Ec9706细胞弱。免疫组织化学方法显示NF-κB p65蛋白和Bcl-2蛋白在Ec9706/P-1细胞中的表达率高于Ec9706细胞,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）;Caspase 3蛋白在Ec9706/P-1细胞中的表达率低于Ec9706细胞,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。吖啶橙荧光染色法表明Ec9706/P-1细胞的凋亡率低于Ec9706细胞,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 人食管癌紫杉醇耐药细胞株Ec9706/P-1产生耐药可能与NF κB p65、Bcl 2表达水平升高,Caspase-3表达水平降低有关,其逃避凋亡而导致耐药。     

子宫内膜样腺癌组织中Maspin蛋白表达及其临床意义

目的探讨Maspin蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Envision TM二步法,检测67例子宫内膜样腺癌、30例子宫内膜不典型增生、18例正常子宫内膜组织中Maspin蛋白的表达情况。结果Maspin蛋白在正常子宫内膜组织、子宫内膜不典型增生、子宫内膜样腺癌中的阳性表达率分别为16.67%（3/18）、40.00%（12/30）、68.66%（46/67）,3组比较,有显著性差异（χ^2=18.17,P〈0.05）,Maspin蛋白表达与子宫内膜样腺癌的分期、脉管浸润和淋巴结转移相关,与患者年龄、组织学分级和肌层浸润深度无关。结论Maspin蛋白在子宫内膜样腺癌中呈高表达,但随着肿瘤的发展其表达水平下调,其在子宫内膜癌的发生、发展和转移过程中起着一定调控作用。     

Maspin protein expression correlates with tumor progression in non-muscle invasive bladder cancer

Maspin is a 42-kDa protein that belongs to the family of serine protease inhibitors. It is involved in various physiological processes. In cancer tissue, Maspin was found to influence angiogenesis, tumor growth, metastasis and the prognosis of tumor patients. This study was performed to analyze the involvement of Maspin in transitional cell carcinoma of the bladder as well as its prognostic impact in a large patient cohort. Specimens from 162 non-muscle invasive bladder cancer patients (pTa, 91; pT1, 71) treated by transurethral resection with a minimum 3-year follow-up (median 58.5 months) were included in the present investigation. Tissue microarrays were constructed, and the specimens were immunohistochemically stained for Maspin protein expression. Each tissue specimen was assessed on a staining scale ranging from 0 (no staining) to 300 (strong staining) and correlated with various clinicopathological parameters. Maspin protein expression predicted progression with a sensitivity of 95% and a specificity of 70% (p<0.001). In predicting recurrence, Maspin staining showed 52% sensitivity and 67% specificity (p<0.05). Kaplan-Meier analyses were performed, and a low Maspin protein expression was correlated with a higher incidence of tumor progression (p<0.0001). However, expression levels of Maspin protein did not distinguish between pTa and pT1 specimens. Multivariate analyses indicated Maspin expression as an independent factor for predicting progression (p<0.0001) and recurrence (p<0.05). The present results suggest that the Maspin protein expression is an independent prognostic indicator for predicting recurrence and progression to muscle invasive disease. This study further emphasizes a possible clinical role of this novel tumor suppressor gene in transitional cell carcinoma of the bladder.     

As2O3对人膀胱癌细胞株BIU-87作用的体外研究

目的　观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人膀胱癌细胞株BIU 87的作用 ,并探讨其作用机制。方法　采用四氮唑蓝(MTT )法检测As2 O3 不同浓度、不同作用时间对BIU 87细胞株的生长抑制率 ;流式细胞术 (FCM )检测不同浓度As2 O3 作用 72h后细胞中凋亡相关蛋白Fas、bcl 2的表达及细胞周期变化。结果　As2 O3 可有效抑制BIU 87细胞株的生长 ,具有浓度、时间依赖性特点。Fas、bcl 2的表达与As2 O3 浓度增高分别呈正、负相关 (P <0 .0 5 ) ,且随As2 O3 浓度增高Fas、bcl 2的表达呈负相关 (P <0 .0 5 )。随As2 O3 浓度增高细胞周期被阻滞在G0 /G1期。结论　As2 O3 可有效抑制人膀胱癌BIU 87细胞株的生长增殖 ,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起了重要作用