黄芪多糖诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

黄芪的临床应用历史悠久,是一味常用的传统中药。黄芪多糖为黄芪的主要活性成分,其抗肿瘤作用日益受到关注。黄芪多糖的药理作用主要有抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗衰老、抗应激、抗氧化等,其中抗肿瘤作用已被大量的体外细胞实验及动物实验研究所证实。本文就黄芪多糖诱导肿瘤细胞发生凋亡的主要机制作一综述,以期为临床抗肿瘤新药研究提供参考。     

黄芪多糖对骨骼肌成肌细胞增殖作用的研究

目的:观察黄芪多糖(APS)对C2C12骨骼肌成肌细胞(成肌细胞)的增殖作用。方法:将成肌细胞接种到96孔培养板,APS分为0.1、0.2、0.4、0.8和1 mg/mL 5组浓度;地塞米松(DEX)分为1、10、100和1 000μM 4组浓度,培养12 h、24 h,MTT法检测计算增殖率和抑制率。根据上述实验确定APS、DEX浓度,再分对照组、DEX组、DEX+APS组,培养24 h,MTT法检测OD值、流式细胞仪检测凋亡率、光镜检测肌管横径。结果:APS在0.6 mg/mL浓度以下对成肌细胞有增殖作用(P0.05),并在0.2 mg/mL达到峰值。100μM浓度以上DEX对成肌细胞有抑制作用(P0.05)。用100μM DEX建立成肌细胞萎缩模型,给予0.2 mg/mL APS干预后,细胞OD值和肌管横径均升高(P0.05),凋亡率下降(P0.05)。结论:APS对成肌细胞有良好的增殖作用,100μM DEX可作为成肌细胞萎缩模型造模有效浓度。     

羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的 :揭示羊栖菜多糖 (SFPS)的抗肿瘤作用机制。方法 :采用流式细胞仪观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响。采用Fluo-3/AM探针标记 ,激光共聚焦技术观测细胞内 [Ca²⁺ ]i。结果 :羊栖菜多可阻滞SGC-7901人胃癌细胞由G₀ /G₁期进入S期 ,升高细胞凋亡指数 (APO% )。可使SGC-790 1细胞内 [Ca²⁺ ]i先升高然后下降 ,给CaCl₂ 后 ,[Ca²⁺ ]i又升高。结论 :羊栖菜多糖通过升高肿瘤细胞内 [Ca²⁺ ]i启动肿瘤细胞凋亡机制而达到抗肿瘤的作用 ,[Ca²⁺ ]i升高时Ca²⁺ 来源于细胞内钙库释放。     

黄芪多糖MAPS-5的化学结构及其体外淋巴细胞增殖活性

目的 研究黄芪多糖MAPS-5的化学结构及其体外淋巴细胞增殖活性.方法 联用微波辅助提取和膜过滤富集黄芪粗多糖,经DEAE-Cellulose弱阴离子交换树脂及Sephacryl S-400HR凝胶柱色谱纯化得到一个黄芪均一多糖MAPS-5.采用酸水解、GC、IR、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化、NMR、刚果红反应、原子力显微镜、电镜扫描等方法 对其化学结构进行研究.并利用对刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)诱导小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响,研究MAPS-5的免疫调节活性.结果 MAPS-5是由α-D-(1-4)Glcp连接构成主链,且平均约每15个糖残基中有2个糖残基的C-6位被末端葡萄糖取代,其相对分子质量为1.32×10~4;构象研究表明MAPS-5的糖链在水溶液中不具备三股螺旋结构.MAPS-5体外可促进由Con A诱导的T淋巴细胞增殖(P<0.01、0.001),但对LPS诱导的B淋巴细胞增殖没有显著影响(P>0.05).结论 MAPS-5是黄芪中首次分离到的均一葡聚糖,具有促进由Con A诱导的T淋巴细胞增殖的活性.     

黄芪多糖对动物肿瘤细胞凋亡影响的研究

目的：研究黄芪抗肿瘤的机制，为黄芪在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法：采用流程式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡。结果：黄芪多糖具有一定诱发凋亡的作用，可使S期细胞数目减少，促进细胞分化为G0－G1和G2－M期。但随着剂量加大，肿瘤细胞主要停留在G2－M期。结论：黄芪多糖虽然在一定程度上有诱发肿瘤细胞凋亡的作用，但凋亡的数目并不占绝对优势，说明诱发肿瘤细胞凋亡是黄芪多糖抗肿瘤的一条途径，却不是主要途径。     

红芪多糖增强LAK细胞对膀胱肿瘤细胞的杀伤作用

用ＭＴＴ法观察了红芪多糖（ＨＰＳ）对ＬＡＫ细胞的影响，结果表明ＨＰＳ无明显的促进ＬＡＫ细胞扩增的作用，但与ＬＡＫ细胞或ＰＢＭＣ合用可显著增强对膀胱肿瘤细胞株ＥＪ和原代肿瘤细胞的杀伤作用。     

N-CWS中多糖的促进小鼠脾淋巴细胞增殖作用

目的:从红色诺卡氏放线菌细胞壁骨架(N-CWS)中分离筛选新的免疫活性组分。方法:MTT法检测N-CWS中的主要组分对脾淋巴细胞增殖的影响,并对活性组分进行气相色谱分析。结果:在4.5～144μg.mL-1范围内,N-CWS中的多糖(PS)具有明显的刺激脾淋巴细胞增殖的生物活性,并在9～18μg.mL-1时刺激作用最强;它是一种主要由阿拉伯糖和半乳糖按照1∶1.66的摩尔比组成的阿拉伯半乳聚糖。结论:N-CWS的抗肿瘤和免疫调节活性主要与其多糖类成分有关。     

黄芪多糖对结肠癌SW620细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:研究黄芪多糖对结肠癌细胞SW620增殖的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:体外培养的SW620细胞,分别给予黄芪多糖(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g·L~(-1)),培养48 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄芪多糖对人结肠癌细胞SW620增殖的影响;用1.0 g·L~(-1)黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,碘化丙啶(PI)单染检测药物处理后的肿瘤细胞周期,Annexin V/PI双染检测药物处理后的肿瘤细胞凋亡率;分别加入0.25,0.5,1.0 g·L~(-1)黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-9和细胞色素C的表达。结果:黄芪多糖能够抑制人结肠癌细胞SW620的增殖(P0.05,P0.01),且呈浓度依赖效应;与空白组比较,黄芪多糖1.0 g·L~(-1)处理组G2/M期比例增加,早期凋亡率增加,并且晚期凋亡率和总凋亡率均增加(P0.05,P0.01);与空白组比较,黄芪多糖0.25,0.5,1.0 g·L~(-1)组Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C和促凋亡基因Bax表达量增加,Caspase-9前体和抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P0.05,P0.01)。结论:黄芪多糖对结肠癌细胞SW620具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用,其诱导凋亡机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的。     

红芪多糖增强LAK细胞对膀胱肿瘤细胞杀伤作用的实验研究

用ＭＴＴ法观察了ＬＡＫ细胞和ＰＢＭＣ对红芪多糖（ＨＰＳ）预处理的膀胱肿瘤细胞株（ＥＪ）及原代肿瘤细胞杀伤作用的影响。结果表明将ＥＪ和原代肿瘤细胞经ＨＰＳ预处理后,ＬＡＫ细胞和ＰＢＭＣ对ＥＪ和原代肿瘤细胞的杀伤作用显著增强     

羊栖菜多糖诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的研究羊栖菜多糖(SFPS)对人白血病HL-60细胞系增殖抑制和凋亡诱导作用。方法MTT法检测SFPS对HL-60细胞增殖的抑制作用;扫描电镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系;药物浓度为300 mg/L和500 mg/L作用HL-60细胞后,观察到典型的细胞凋亡形态学特征;DNA凝胶电泳呈现梯状条带;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2/M期细胞比例增多。结论SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞有关。     

不同来源黄芪多糖提取物对淋巴细胞增殖的影响及其化学组成分析

目的 考察不同来源黄芪多糖提取物对体外脾淋巴细胞增殖的影响,明确其活性差异,对比分析其化学组成.方法 MTT法分别检测黄芪多糖提取物对正常脾淋巴细胞、ConA活化脾淋巴细胞增殖的影响;硫酸苯酚法结合重量法分别测定样品中总糖、多糖、醇不溶组分含量.结果 各批样品对正常脾淋巴细胞均有显著的促增殖作用(P＜0.01或P＜0.05),除SSK外,各样品在低浓度时促增殖作用较强,促增殖率为39.4％ ～ 186.4％;XZX、XHS、SLH1对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖具有显著抑制作用(P＜0.01),且在4 mg·ml-时抑制作用最强,抑制率为52.9％～104.0％,作用大小为XZX＞XHS＞SLH1,其余各批样品无明显抑制作用;各批样品醇不溶组分含量为18.74％～60.67％,多糖含量为7.22％～44.74％,大小顺序为XZX＞ XHS＞ SLH1＞ SLH2＞ SSK.结论 不同来源黄芪多糖提取物的质量差异十分显著.     

中药多糖诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展

多糖,又称多聚糖,是由醛糖或酮糖通过糖苷链连接而成的多聚物,其分子量一般为数万甚至达数百万,广泛存在于植物、动物和微生物等有机体中,是生命活动不可缺少的一类生物高分子物质。到目前为止,已从天然产物中提取出300多种多糖类化合物,其中从中药中获得的水溶性多糖最为重要[1]。研究表明,中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等多种药理作用,尤其是抗肿瘤作用成为中药多糖研究的热点。凋亡,即     

香菇多糖诱导CIK细胞对肺癌A549细胞杀伤作用的研究

目的:明确香菇多糖对CIK细胞(细胞因子诱导的杀伤细胞)体外增殖及抗肿瘤活性的影响,为临床应用香菇多糖提高CIK细胞过继免疫治疗疗效提供理论数据。方法:于CIK细胞培养第11天加入不同浓度香菇多糖,诱导培养72h后比较细胞密度,流式细胞仪检测CIK细胞CD3、CD56双阳率,CCK8法检测比较经不同浓度香菇多糖诱导后的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率。结果 :诱导72h后,加入5、25、50μg/m L香菇多糖的CIK细胞密度虽有上升但与未加入香菇多糖的空白对照组比较无统计学差异(P0.05)。经5μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率与空白对照组相当(P0.05);而经25、50及75μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞CD3、CD56双阳性率较空白对照组明显升高(P0.05),以50μg/m L香菇多糖诱导组的差异最为明显。经5μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌A549细胞的杀伤率与空白对照组相当(P0.05);而经25、50及75μg/m L香菇多糖诱导的CIK细胞对肺癌细胞杀伤率明显高于空白对照组(P0.05),以50μg/m L香菇多糖诱导组对肺癌细胞的杀伤率最高。结论:香菇多糖对CIK细胞的体外增殖无促进作用,高浓度香菇多糖反而抑制CIK细胞增殖;适当浓度的香菇多糖处理CIK细胞能使CD3、CD56双阳性率上升,同时可提高CIK细胞对肺癌A549细胞株杀伤率。香菇多糖诱导CIK细胞的最适浓度在50μg/m L。     

黄芪多糖对过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的保护作用

目的:观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉内皮细胞HUVECs损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:不同浓度的黄芪多糖孵育内皮细胞1h后加入400μmol/L的H2O2继续培养24h,用MTT法检测细胞活性;DAPI/PI双染法观察细胞形态并统计细胞凋亡率;硝酸还原酶法测定NO释放量;Western blot法测定Cu/Zn-SOD蛋白表达。结果:H2O2模型组细胞活性较之空白对照组下降42.87%,细胞核皱缩形态不规则化,细胞凋亡率升高了7倍、NO释放量降低42.96%,Cu/Zn-SOD蛋白表达下降45.31%;与模型组相比黄芪多糖各剂量组可不同程度改善这些变化,其中黄芪多糖1μg/ml组作用最为明显,其细胞活性和NO释放量分别增加24.96%、32.13%,细胞凋亡率降低36.02%,Cu/Zn-SOD蛋白表达升高37.14%。结论:黄芪多糖可能通过影响内皮细胞NO释放量和Cu/Zn-SOD蛋白表达,改善细胞NO与氧自由基的平衡发挥保护作用。     

黄芪抗γ射线辐射对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2的作用研究

目的 :从免疫学方面探讨中药黄芪对辐射损伤小鼠淋巴细胞增殖和 IL - 2的研究。方法 :用 10 0 %黄芪水浸出液定期给小鼠灌胃 ,行γ线照射后检测小鼠淋巴细胞增殖和 IL - 2的产生。结果 :用药组小鼠脾淋巴细胞增殖和 IL - 2产生有显著增强作用 ,与照射组相比均有非常显著性差异 (P<0 .0 1)。结论 :黄芪有明显抗 γ线辐射、促进小鼠淋巴细胞增殖和IL- 2产生的作用。     

黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的研究黄芪多糖对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞肥大的保护作用。方法新生1～2 d的SD大鼠心肌细胞培养48 h后,设对照组,模型组,黄芪多糖低、中、高质量浓度(1、10、100 mg/L)组。计算机图像分析系统测量细胞体积;RT-PCR法检测心房利钠多肽(ANP)mRNA的表达;ELISA法检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的量;采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的瞬间变化。结果与对照组相比,LPS 1 mg/L可使心肌细胞体积显著增大,ANP mRNA的表达显著增强,细胞分泌TNF-α蛋白的量显著增加,心肌细胞内[Ca2+]i瞬间峰值增大(P<0.01)。与模型组相比,黄芪多糖1、10、100 mg/L预先给药均可抑制心肌细胞体积增大;细胞产生的TNF-α显著减少,ANP mRNA的表达不同程度地减少(P<0.05),其中10、100 mg/L组这两项指标可恢复到对照组的水平(P>0.05);黄芪多糖10 mg/L可拮抗LPS对正常心肌细胞内[Ca2+]i瞬间变化幅度增大的作用(P<0.01)。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞肥大有良好的保护作用,其机制可能与抑制TNF-α的产生、降低[Ca2+]i有关。     

白术多糖对Ang-Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖及氧化应激的作用

目的 探讨白术多糖对血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及氧化应激的影响及其对p38MAPK信号通路的作用.方法 培养VSMCs细胞,采用不同质量浓度(0、20、40、80、160 μg/mL)白术多糖处理VSMCs细胞24、48、72 h,MTT检测细胞增殖活力.随后将细胞分为对照组、An...     

加味黄芪补气汤促进肿瘤患者外周血淋巴细胞增殖及活化的研究

目的:研究加味黄芪补气汤对肿瘤患者外周血淋巴细胞的促增殖及活化作用。方法:以黄芪和苦参为主药,辅以适量人参、黄精及甘草,制备加味黄芪补气汤。分离5位肿瘤患者的外周血淋巴细胞,分别将补气汤、黄芪甲苷、氧化苦参碱作用于淋巴细胞。细胞计数法检测各组淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-2含量;ELISPOT法检测各组细胞分泌IFN-γ的情况。结果:加味黄芪补气汤浓度为2.5、5.0μg/m L(原药冻干物)时能够促进肿瘤患者外周血淋巴细胞增殖,其中浓度为2.5μg/m L时效果最好,与对照组相比具有统计学意义(P<0.01);黄芪甲苷浓度为2.0、4.0μg/m L时能够促进肿瘤患者外周血淋巴细胞的增殖,其中4.0μg/m L时效果最好(P<0.01);氧化苦参碱各浓度对肿瘤患者外周血淋巴细胞的增殖基本无影响(P>0.05);IL-2分泌水平检测显示,加味黄芪补气汤、黄芪甲苷、氧化苦参碱浓度分别为2.5、4.0、8.0μg/m L时,较组内其他浓度效果较好,与对照组相比均有统计学意义(P<0.05);IFN-γ的ELISPOT实验结果显示,加味黄芪补气汤、黄芪甲苷、氧化苦参碱浓度分别为2.5、4.0、8.0μg/m L时,阳性细胞计数最多,与对照组相比均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味黄芪补气汤在一定浓度范围内能够促进肿瘤患者外周血淋巴细胞增殖与活化,其中黄芪的有效成分黄芪甲苷参与淋巴细胞的增殖与活化过程,而苦参的有效成分氧化苦参碱可能只参与活化淋巴细胞的作用。     

大蓟总黄酮诱导肿瘤细胞凋亡作用的研究

目的 研究大蓟总黄酮对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度的大蓟总黄酮对人肝癌SMMC-7721和人子宫癌细胞Hela进行处理,MTT法检测细胞活性,再用琼脂糖凝胶电泳观察DNA"梯子"(Ladder)和DAPI染色观察凋亡小体.结果 大蓟总黄酮对SMMC-7721的半数致死量(IC_(50))为93.64 μg/ml;对Hela细胞的半数致死量(IC_(50))为85.1 2 μg/ml.可见清晰的"梯子"状DNA带纹和凋亡小体.结论 大蓟总黄酮能诱导癌细胞的凋亡,从而达到抗肿瘤的作用.     

黄芪多糖抗肿瘤作用研究进展

从体外细胞分子水平、在体动物肿瘤模型及临床肿瘤治疗中的应用等3个层次综述了黄芪多糖抗肿瘤作用研究进展,研究显示该药可以提高机体免疫力,诱导肿瘤细胞凋亡,和其他化学合成药联合使用时可降低其他化疗药的毒副作用,同时增强其抗肿瘤作用。为进一步深入研究黄芪多糖抗肿瘤作用机制提供参考。