口腔扁平苔藓组织环状RNA表达谱的筛选与初步探讨

目的: 构建人口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）组织的环状RNA(circular RNA, circRNA)表达谱,筛选并验证口腔扁平苔藓组织中异常表达的circRNA,为疾病的诊断和治疗提供理论基础。方法: 选择2018年9月—12月就诊于上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔黏膜病科的口腔扁平苔藓初诊患者6例,同期健康志愿者6例,利用高通量测序技术对口腔扁平苔藓和正常口腔黏膜组织中RNA进行测序和鉴定分析,分析组间circRNA的表达差异,然后利用qRT-PCR对分析结果进行验证。采用 SPSS 24.0 软件包对数据进行统计学分析,最后应用生物信息学技术GO（Gene Ontology）富集分析和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析差异基因的功能及相关通路。结果: 测序结果显示,与健康口腔黏膜组织相比,在口腔扁平苔藓组织中共检测出85种差异表达2倍以上的circRNA,其中66种高表达,19种低表达。分别取上调、下调最显著的3个circRNA,在更多样本中进行qRT-PCR验证,其结果与测序结果一致。结论: 口腔扁平苔藓组织与正常口腔黏膜组织之间存在差异表达的circRNAs,这些circRNAs可能参与口腔扁平苔藓的致病调控,是潜在的疾病新型诊断和治疗的生物学标志物。     

COX-2、VEGF在口腔扁平苔藓、口腔白斑及口腔鳞状细胞癌中的表达

目的研究环氧合酶(COX)-2、血管内皮生长因子(VEGF)在口腔扁平苔藓(OLP)、口腔白斑(OLK)及口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及分布,探讨其在OLP、OLK癌变机制中的作用。方法采用免疫组化法检测33例OLP患者(单纯扁平苔藓19例,伴异常增生14例)、35例OLK患者(单纯增生14例、伴异常增生21例)、31例OSCC患者及10例正常对照者口腔黏膜组织(NOM)中COX-2、VEGF的分布和表达。应用统计分析软件SPSS 13.0对结果进行统计分析。结果COX-2、VEGF在正常口腔黏膜组织无表达或低表达;在单纯扁平苔藓组均为26.32%过表达;在扁平苔藓异常增生组分别为71.43%、64.29%过表达;在白斑单纯增生组过表达情况均为21.42%;在白斑异常增生组分别为80.95%、71.43%过表达;在口腔鳞状细胞癌组分别为93.55%、90.32%过表达;COX-2、VEGF在扁平苔藓异常增生组的表达明显高于单纯扁平苔藓组(P<0.05),低于OSCC组(P<0.05),与白斑异常增生组无明显差异(P>0.05)。COX-2的表达与VEGF表达呈明显正相关(r=0.595,P<0.01)。结论COX-2、VEGF在NOM、OLP及OLK伴异常增生、OSCC的表达逐渐增高,表明COX-2及VEGF与OLP、OLK的异常增生及癌变有关。     

有吸烟史的口腔白斑病患者microRNA异常表达及癌变相关生物信息学分析

目的 研究有吸烟史的口腔白斑病（oral leukoplakia,OLK）患者病损组织microRNA(miRNA)的异常表达,并对差异miRNAs进行癌变相关生物信息学分析。方法 利用人miRNA OneArray?v5.1微阵列芯片检测吸烟组（n=6）和非吸烟组（n=4）OLK石蜡标本间差异表达的miRNA,并运用生物信息学方法从中筛选出与OLK癌变密切相关的目标miRNA,随后对目标miRNA的靶基因进行基因本体数据库（gene ontology,GO）富集分析和KEGG通路分析以预测其可能的作用机制。结果 吸烟组与非吸烟组OLK组织中共检出174个差异表达的miRNAs(P <0.05),其中,39个miRNAs在吸烟组表达上调（log2(FC)≥0.585）,135个miRNAs表达下调（log2(FC)≤-0.585）。运用生物信息学方法从中筛选出8个与OLK癌变密切相关的目标miRNAs,包括：hsa-miR-6857-5p、hsa-miR-6745、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-363-5p、hsa-miR-6867-3p、hsa-miR-95-3...     

PD-L1、PD-L2 mRNA在OLP组织中的表达研究

目的:研究PD-L1和PD-L2 mRNA在OLP损害组织中的表达.方法:采用Real-time PCR方法,检测PD-L1和PD-L2 mRNA在20例OLP不伴异常增生、10例OLP伴轻度异常增生损害组织中的表达水平,并以10例健康人正常黏膜为对照.结果:PD-L1 mRNA在不伴异常增生组、伴轻度异常增生组的表达水平分别较正常对照组上调1.3倍、1.7倍,但3组之间均无显著性差异(p＞0.05).PD-L2 mRNA在不伴异常增生组的表达水平较正常对照组上调3.0倍,两者之间有显著性差异(p＜0.01);OLP伴轻度异常增生组的表达水平较正常对照组上调3.2倍,两者之间有显著性差异(p＜0.01);OLP不伴异常增生组与伴轻度异常增生组之间无显著性差异(p＞0.05).结论:PD-L2可能在OLP的发病机制中起重要作用,而PD-L1可能并未参与OLP的发病.     

CD25~＋ Foxp3~＋调节性T细胞和Th17细胞在口腔白斑组织中的表达

目的：通过观察CD25＋Foxp3＋和IL-17阳性细胞在口腔黏膜白斑（oral leukoplakia,OLK）和口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）组织中的表达情况,探讨Treg细胞和Th17细胞在口腔癌发生发展过程中的变化。方法：采用免疫组织化学方法检测CD25＋Foxp3＋、IL-17阳性细胞在10例单纯增生性白斑、32例异常增生性白斑、13例OSCC和10例正常口腔黏膜中的变化情况。结果：正常口腔黏膜组、单纯增生性白斑组、异常增生性白斑组和OSCC组CD25＋Foxp3＋Treg细胞数量逐渐增高（P〈0.05）,依次为（2.5±0.65）、（5.22±1.19）、（31.4±16.8）和（42.8±12.67）个/每高倍镜视野。重度异常增生白斑组织中,CD25＋Foxp3＋Treg细胞的数量高于轻、中度异常增生白斑组织（P〈0.05）。此外,正常口腔黏膜组、单纯增生性白斑组、异常增生性白斑组和OSCC组中表达IL-17的阳性细胞虽有递增趋势,但差异无统计学意义。CD25＋Foxp3＋Treg细胞和Th17细胞数量改变在口腔白斑和OSCC组织中呈正相关（r=0.318,P〈0.05）。结论：Treg细胞的数量在白斑和OSCC组织中增多,Th17细胞协同Treg细胞,在口腔癌发生发展过程中发挥了一定的作用。     

核因子-кBp65与IкBα在口腔白斑及鳞癌中的表达

腔鳞癌(OSCC)中的表达及其关系.方法:应用免疫组织化学技术检测正常口腔黏膜上皮(n=10)、OLK(n=46)及OSCC(n=36)中的NF-кBp65、IкBα表达.结果:NF-кBp65在正常口腔黏膜、单纯增生型OLK、异常增生型OLK及OSCC的表达率分别为:0%、9.09%、42.86%、72.22%,4组之间差异具有统计学意义(P＜0.05);IкBα在4组中呈动态表达,分别为:10%、81.82%、48.57%、86.11%,4组之间差异具有统计学意义(P＜0.05).NF-кBp65与IкBα的表达在OLK癌变过程中呈负相关(P＜0.05),在癌组织中呈正相关(P＜0.05).结论:二者可能是检测OLK的恶变潜能及OSCC早期诊断的敏感指标.     

HERG1在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中的表达

目的：研究钾离子通道蛋白HERG1在正常口腔黏膜（normal oral mucosa,NOM）、口腔扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）、口腔鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma,OSCC）中的表达及意义。方法：免疫组织化学技术检测16例NOM、20例OLP、30例OSCC组织中HERG1的表达。采用χ2检验,P〈0.05为差异具有统计学意义。结果：HERG1在OSCC中的表达强度高于OLP（P〈0.05）,HERG1在OLP组织的表达高于正常组织（P〈0.05）,且糜烂型OLP中的表达高于非糜烂型OLP（P〈0.05）,差异均具有统计学意义。结论：HERG1可能与OLP及OSCC的发生发展有一定的关系。     

核仁素和Ki-67在口腔鳞癌与癌前病变中的表达及意义

目的：探讨核仁素和ki-67在口腔正常黏膜（Normal oral mucosa,NOM）、口腔黏膜白斑（Leukoplakia,LK）和口腔鳞状细胞癌组织（Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC）中表达的变化,研究核仁素在口腔癌发病中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学PV法检测10例NOM、34例LK伴异常增生上皮和47例OSCC组织中核仁素及Ki-67的表达。采用SPSS17.0进行统计分析。结果：光镜下核仁素和Ki-67的阳性部位为细胞核,但核仁素在OSCC的部分细胞的胞浆和/或胞膜亦有阳性表达。核仁素和Ki-67在NOM,LK,OSCC的表达强度依次增高,差异有显著性（P〈0.05）。核仁素和Ki-67随着LK和OSCC的病理分级升高表达强度逐渐升高;核仁素和Ki-67在OSCC的分化（高分化比中低分化）差异均有显著性（P〈0.05）。其中,核仁素在NOM和OSCC,NOM和LK,OSCC浸润肌层差异均有显著性（P〈0.05）。Ki-67在NOM和OSCC,LK与OSCC差异有显著性（P〈0.05）。核仁素和Ki-67在淋巴结转移,性别,年龄,民族,吸烟,饮酒表达差异无显著性。经Spearman相关分析,核仁素和Ki-67在NOM,LK和OSCC病理分级表达的阳性率中分布呈正相关（r=0.90,P〈0.05）。结论：核仁素可能参与OSCC的发生、发展,且与其亚细胞定位的变化有一定关系,在OSCC发生浸润方面有较高的敏感性。其与Ki-67一样可以作为细胞增殖的一个指标。     

口腔扁平苔藓差异表达MicroRNAs的筛选

目的:芯片筛选口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)损害黏膜中差异表达的miRNAs。方法:收集白纹型OLP损害黏膜和正常口腔黏膜各2例,抽提总RNA预扩增后运用Taqman低密度芯片(v2.0)测定人类667种miRNAs的表达谱,随后应用实时定量PCR在68例样本中进一步验证miR-27b的表达水平。采用miRNAs生物信息库预测miR-27b所对应的靶基因,对芯片数据进行统计学分析。结果:筛选获得30个OLP相关的miRNAs。相对于正常口腔黏膜,OLP损害黏膜中有18个miRNAs表达下调,12个上调。扩大样本量至68例验证miR-27b表达水平,结果与芯片实验一致。生物信息学分析得出miR-27b的预测靶基因中有10个与OLP发病有关。结论:筛选得到的OLP损害黏膜中差异表达的miRNAs可能与OLP的发生相关。     

核因子-κBp65与IκBα在口腔白斑及鳞癌中的表达

目的：探讨核因子-κB（nuclear factorκB,NF-κB）p65及其抑制蛋白IκBα在口腔白斑（OLK）及口腔鳞癌（OSCC）中的表达及其关系。方法：应用免疫组织化学技术检测正常口腔黏膜上皮（n=10）、OLK（n=46）及OSCC（n=36）中的NF-κBp65、IκBα表达。结果：NF-κBp65在正常口腔黏膜、单纯增生型OLK、异常增生型OLK及OSCC的表达率分别为：0%、9.09%、42.86%、72.22%,4组之间差异具有统计学意义（P〈0.05）;IκBα在4组中呈动态表达,分别为：10%、81.82%、48.57%、86.11%,4组之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。NF-κBp65与IκBα的表达在OLK癌变过程中呈负相关（P〈0.05）,在癌组织中呈正相关（P〈0.05）。结论：二者可能是检测OLK的恶变潜能及OSCC早期诊断的敏感指标。     

环状RNA在口腔鳞状细胞癌中的作用探讨

目的: 探讨环状RNA在口腔鳞癌中的作用。方法: 选取8对口腔鳞癌组织,采用高通量测序,检测环状RNA在口腔鳞癌中的表达。挑选出差异表达的环状RNA,采用qRT-PCR技术对40对口腔鳞癌及癌旁组织进行验证。采用GraphPad Prism 5.0软件,通过t检验得到表达有显著差异的环状RNA,利用生物信息学方法预测差异表达的环状RNA在口腔鳞癌中的可能作用。结果: 口腔鳞癌中存在大量环状RNA。经qRT-PCR验证,口腔鳞癌组织中hsa_circ_ 0093229、hsa_circ_0006208和hsa_circ_0006677显著下调。经生物信息学分析,此3种环状RNA可能吸附miRNA,在口腔鳞癌中起调控作用。结论: 口腔鳞癌中存在大量环状RNA。首次发现 hsa_circ_0093229、hsa_circ_0006208和hsa_circ_0006677可能参与口腔鳞癌调控,为口腔鳞癌生物标志物的研究提供了新的方向。     

PLAG1转基因小鼠中差异表达长链非编码RNA的筛选分析

目的 应用基因芯片技术,筛选PLAG1转基因小鼠下颌下区多形性腺瘤中差异表达的长链非编码RNA（LncRNA）。方法 取3对PLAG1转基因小鼠下颌下区多形性腺瘤组织、对侧无瘤腺体组织、空白对照小鼠腺体组织,抽提标本总RNA并反转录合成cDNA探针,与芯片杂交后获得荧光信号, 分析在肿瘤组织中差异表达的长链非编码RNA。随机挑选其中5个LncRNA,利用实时荧光定量PCR在6对样本中验证其表达。采用SPSS13.0软件包中的t检验评价表达差异。结果 基因芯片结果显示,与PLAG1转基因小鼠无瘤腺体组织、空白对照小鼠腺体组织相比,PLAG1转基因小鼠肿瘤中共有5627个LncRNA同时发生差异表达,其中2871个上调、2756个下调。实时荧光定量PCR结果显示,5个随机挑选的LncRNA中,4个（AK146794、ENSMUST00000119440、ENSMUST00000140495、Gm12873）与基因芯片结果一致。结论 应用基因芯片筛选出PLAG1转基因小鼠中差异表达的长链非编码RNA,为进一步研究多形性腺瘤的发病机制提供了依据。     

环状RNA研究进展及其在口腔疾病中的研究展望

环状RNA（circular RNA）是一类共价闭合环状结构的RNA,具有保守性高、稳定性高、组织特异、广泛存在的特点。环状RNA能发挥miRNA海绵体的作用,调控相应的通路;能与RNA结合蛋白结合,调控基因的表达;环状RNA在疾病组织中的特异性表达,使它有望成为新的疾病诊断标志物和治疗靶点。本文就环状RNA的研究进展作一综述,并展望其在口腔病方面的研究前景。     

口腔白斑组织中树突状细胞亚群的免疫组化分析

目的：分析口腔白斑（OLK）组织中树突状细胞的特征性表型。方法：应用免疫组化 SP 法检测10例正常黏膜、10例单纯增生白斑和20例异常增生白斑中树突状细胞特异性标记 CD1 a、CD209、CD123、CD83的表达状况,并进行统计学分析。结果：3组样本中 CD1 a、CD209均有表达。固有层内 CD1 a 阳性郎格汉斯细胞（LCs）数量随病变程度逐渐升高,且异常增生白斑组高于单纯增生白斑组及正常黏膜组（P ＜0．01）。异常增生白斑及单纯增生白斑中 CD209阳性 DCs 被大量召集,其数量显著高于正常黏膜。正常黏膜中未见 CD123及 CD83表达,但在单纯增生及异常增生白斑中 CD123阳性和 CD83阳性细胞数逐渐升高（P ＜0．01）。结论：朗格汉斯细胞、间质 DC 及浆细胞样树突细胞在 OLK 间质的表达水平增加逐渐成熟与机体的免疫监视功能密切相关,在 OLK 发展过程中均可能起到重要作用。     

口腔黏膜白斑组织转化生长因子-β受体Ⅱ及受体Ⅲ的表达

目的研究转化生长因子-β受体Ⅱ(transforming growth factor type-Ⅱreceptor,TβRⅡ)及转化生长因子-β受体Ⅲ(transforming growth factor type-Ⅲreceptor,TβRⅢ)在口腔黏膜白斑组织中的表达情况。方法应用免疫组织化学技术分析临床收集的25例口腔正常黏膜组织、21例不伴上皮异常增生的口腔白斑组织、24例伴有异常增生的口腔白斑组织中TβRⅡ和TβRⅢ的表达。结果 TβRⅡ弥漫性强阳性细胞数正常组织中为40.0%,白斑不伴异常增生组织中下降到32.3%,白斑伴有异常增生组织中下降到19.7%,差异有统计学意义(P=0.039)。TβRⅢ弥漫性强阳性细胞数正常组织中为28.0%,白斑不伴异常增生组织中下降到19.1%,白斑伴有异常增生组织中下降到12.6%,差异有统计学意义(P=0.032)。结论 TβRⅡ和TβRⅢ的表达下调在口腔黏膜癌变过程中是一种频发现象,且可以发生在癌变的早期阶段即口腔白斑组织中。     

RIP,NF-κB在口腔鳞癌及癌前病变中的表达及意义

目的：检测RIP,NF-κB在口腔鳞癌及癌前病变中的表达情况,探讨其在口腔鳞癌及癌前病变中的作用及意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测39例口腔鳞癌﹑17例口腔扁平苔藓﹑19例口腔白斑﹑12例正常黏膜中RIP和NF-κB表达情况。结论：RIP在正常口腔黏膜、口腔扁平苔藓、口腔白斑、口腔鳞癌中的阳性表达率依次递增,分别为50%（6/12）,76.5%（13/17）,84.2%（16/19）,94.9%（37/39）（P〈0.05）;NF-κB在正常口腔黏膜、口腔扁平苔藓、口腔白斑、口腔鳞癌中的阳性表达率也依次递增,分别为75%（9/12）,82.4%（14/17）,84.2%（16/19）,92.3%（36/39）（P〈0.05）。结论：RIP,NF-κB在口腔鳞癌及癌前病变的发生和发展中起一定的作用。     

The role of SPP1 as a prognostic biomarker and therapeutic target in head and neck squamous cell carcinoma

Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is one of the most common malignancies and has a low 5-year survival rate. Mounting evidence suggests that oral potentially malignant disorders, such as oral leukoplakia (OLK), may progress to HNSCC. Given that OLK and HNSCC are often insidious and asymptomatic, the identification of markers of OLK malignant transformation and therapeutic targets in HNSCC is critical. Using various online tools and publicly available gene expression datasets, the secreted phosphoprotein 1 gene (SPP1) was identified as a significant differentially expressed gene among OLK, HNSCC, and non-cancerous tissues. SPP1 mRNA levels were elevated in HNSCC tissues and were associated with cancer stage, tumor grade, and human papillomavirus infection status. High SPP1 mRNA levels were correlated with poor overall survival of HNSCC patients. In contrast, SPP1 mutations were not significantly associated with overall survival, although their frequency in HNSCC was very low (0.6%). Furthermore, SPP1 expression levels in HNSCC were positively correlated with the infiltration of CD4⁺ cells, macrophages, neutrophils, and dendritic cells. The study results suggest that SPP1 may represent a diagnostic and prognostic biomarker, as well as a potential therapeutic target in HNSCC.