藤黄酸对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用

本研究旨在探讨藤黄酸(gambogic acid,GA)对K562/A02细胞株的耐药逆转作用及其逆转机制。采用MTT法检测GA对K562和K562/A02细胞的增殖抑制作用及对K562/A02细胞阿霉素(ADM)耐药逆转效应;用流式细胞术检测GA联合ADM对K562及K562/A02细胞凋亡率的影响;DAPI荧光染色观察ADM联合GA作用后细胞的形态学改变;Western blot法检测K562及K562/A02细胞P-糖蛋白(P-gp)、存活蛋白(Survivin)基因的表达。结果表明:ADM作用48 h抑制K562和K562/A02细胞增殖的IC50值分别为(1.42±0.07)μg/ml和(28.42±1.40)μg/ml。GA≤0.0625μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显增殖抑制作用;0.0625μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞能增加其对ADM的敏感性,耐药逆转倍数为1.53。0.0625μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞48 h能提高细胞的凋亡率(P<0.05),下调Survivin及P-gp蛋白的表达(P<0.05)。结论:GA可以逆转K562/A02细胞的耐药性,增强耐药细胞对ADM的敏感性,其机制可能与提高K562/A02细胞凋亡、下调Survivin和P-gp蛋白的表达有关。     

异硫氰酸苯乙酯对K562／A02细胞阿霉素耐药影响的研究

本实验研究探讨异硫氰酸苯乙酯（phenylhexyl isothiocyanate,PHI）对K562／A02细胞的阿霉素（ADM）耐药性与敏感性的影响,并研究其可能的相关机制。运用MTT法分别检测阿霉素（ADM）以及PHI＋ADM对K562／A02细胞的生长抑制率,计算其耐药倍数;用流式细胞仪检测PHI作用前后细胞的凋亡、细胞内ADM浓度的变化和MRPI蛋白变化;分光光度仪测定细胞内还原性谷胱目肽（GSH）的含量;RT—PCR半定量检测PHI作用前后MRP1 mRNA的水平。结果显示,随着PHI浓度的增加,细胞生存率降低;两药联合应用时K562／A02细胞凋亡率均增加;当PHI≥20μmol／L时其耐药倍数有显著差异（P〈0．05）,两种细胞内ADM浓度增加亦有显著差异（P〈0．05）。单独运用1μg/ml ADM时K562／A02细胞内的GsH含量下降5％,单独运用PHI时K562／A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的增加先是轻度升高尔后下降,GSH含量下降点约在10μmoL／L;当PHI≥20μmol/L与1μg／ml ADM联合应用时,K562／A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的升高而进行性下降;而不同浓度的PHI的作用前后,两种细胞的MRP1的表达无论是蛋白水平还是基因水平都无显著差异（P〉0．05）。结论：PHI对K562／A02细胞的细胞毒作用与细胞内GSH耗竭无直接关系,PHI不但可以增强K562／A02细胞对ADM的敏感性,而且通过耗竭细胞内GSH部分地逆转K562／A02细胞对ADM的耐药。联合使用PHI可减少ADM的用量,从而降低其毒副作用。     

超声空化逆转K562／A02细胞对阿霉素的耐药性研究

本研究观察低频低功率超声联合阿霉素（adriamycin，A02）对白血病耐药细胞株K562／A02的影响，寻找合适的干预参数，探讨耐药细胞耐药逆转的可能机制。取对数生长期的白血病K562／A02细胞株，将研究对象分为空白组、单纯阿霉素组（A02）、单纯超声组（US）、阿霉素加超声组（A02＋US）共4组。细胞在24孔培养板上受低频低功率超声作用，用台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性，应用瑞氏染色法和流式细胞术分别检测细胞凋亡和药物浓度，扫描电子显微镜观察细胞表面变化。结果显示，频率20kHz、声强0．25W／cm^2。、作用时间60秒的超声，可显著降低阿霉素的LC50;当声强0．50W／cm^2、作用时间大于30秒的超声，对细胞有急性杀伤作用。细胞经低频超声作用后细胞膜表面出现直径大约1-2μm的小孔，细胞内阿霉素的药物浓度增加，细胞凋亡增强。结论：适当参数的超声辐射通过超声空化导致肿瘤细胞产生声孔效应，使阿霉素对耐药细胞株的抑制作用增强，从而逆转耐药细胞株的耐药性.     

高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞凋亡的影响

本研究探讨0.2MPa高压氧(HBO)联合阿霉素对白血病多药耐药细胞K562/A02细胞凋亡的影响。利用流式细胞术法和透射电子显微镜检测细胞凋亡和caspase-3表达,用定量qReal-time PCR法检测HIF-1α、BCL-2和BAXmRNA表达水平,运用caspase-8试剂盒检测caspase-8的活性,Western blot法检测P-gp活性。结果表明:0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞凋亡率高于ADM组[(47.36±3.87)%vs(28.51±1.09)%],差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞HIF-1αmRNA、P-gp及BCL-2的蛋白水平低于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。0.2MPa HBO联合阿霉素组细胞的BAX、caspase-3及caspase-8蛋白活性均高于ADM组,差异有统计学意义(p<0.05)。结论 :0.2MPa HBO联合阿霉素可逆转耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药,提高细胞凋亡率,其机制可能与HIF-1α下调P-gp和BCL-2的表达以及提高caspase活性有关。     

雷公藤甲素对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响

本研究旨在探讨雷公藤甲素(TPL)对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响。采用MTT法检测TPL细胞毒性和阿霉素药物敏感性;流式细胞术检测P-糖蛋白表达和细胞内阿霉素浓度;双荧光素酶报告基因系统检测MDR1启动子活性。结果表明:TPL增强K562/A02细胞阿霉素敏感性。TPL作用后,K562/A02细胞P-糖蛋白表达相关平均荧光强度(MFI)由123±13下降到39±13(P<0.05);K562/A02细胞内阿霉素相关MFI由18±5上升到34±6(P<0.05),TPL能够有效抑制K562/A02细胞的药物外排。TPL降低MDR1启动子转录活性约75%。结论:TPL通过下调P-糖蛋白表达增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,其有可能成为一种耐药逆转剂。     

二氢杨梅素对K562/A02细胞阿霉素耐药性的逆转作用

目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02细胞对阿霉素(adriamycia,ADM)耐药的逆转作用及可能机制。方法:用DMY(5、10、20、40、60、80和100 mg/L)和ADM((0.05-100 mg/L)处理K562和K562/A02细胞48 h,采用MTT法检测细胞活力及DMY对K562/A02细胞ADM耐药的逆转效应,流式细胞术检测细胞内阿霉素的相对浓度,Western blot检测耐药相关基因的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein 1,MRP1)、谷胱甘肽转移酶π(glutathione transferaseπ,GSTπ)和BCL-2蛋白表达。结果:DM Y能抑制K562和K562/A02细胞的增殖且呈剂量依赖效应(r1=0.37,r2=0.38),IC_(50)分别为71.23±6.51和72.88±5.49 mg/L。5、10和20 mg/L为DMY的低细胞毒性剂量。DMY(5、10和20 mg/L)增敏K562细胞和K562/A02细胞对ADM耐药性且呈剂量依赖效应(r1=-0.62,r2=-0.71),耐药逆转倍数介于1.38-28.59之间。DM Y(5,10和20 mg/L)增加K562/A02细胞内ADM的浓度也呈剂量依赖效应(r=0.34)。与对照组比较,DMY(5,10和20 mg/L)均显著降低了K562/A02细胞中Pgp、M RP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达,呈剂量依赖性(r1=-0.41,r2=-0.37,r3=-0.58,r4=-0.46)。与ADM组比较,DM Y(5,10和20 mg/L)+ADM组P-gp、M RP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达均显著降低(r1=-0.55,r2=-0.41,r3=-0.38,r4=-0.44)。结论:DM Y可以逆转K562/A02细胞对ADM的耐药性,其作用机制可能与下调耐药相关基因P-gp、MRP1、GSTπ和BCL-2的表达有关。     

HMGB1基因沉默对阿霉素诱导K562/A02细胞凋亡增敏作用的研究

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因沉默对白血病细胞耐药逆转的作用.方法 将HMGB1基因特异性干扰RNA(HMGB1 siRNA)导入K562/A02细胞中,通过Western blot和RTPCR方法检测HMGB1基因在转染前后的表达;WST8法检测阿霉素(ADM)对转染前后K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测凋亡细胞百分率;Western blot检测线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO的释放;采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-3的活性.结果 ①与未经处理的K562/A02细胞组相比,转染HMGB1 siRNA的K562/A02细胞组HMGB1 mRNA和蛋白水平分别下降86%和71%;②HMGB1基因沉默使K562/A02细胞对ADM的药物敏感性增强,其IC50值从转染前的(4.83±0.08)μg/ml降低到(1.33±0.10)μg/ml,并在ADM浓度为1μg/ml和5μg/ml时,细胞凋亡百分率分别增加27%、32%;③HMGB1基因沉默可促进ADM所致Smac/DIABLO从线粒体向胞浆释放,并增加caspase-3的活性.结论 HMGB1基因沉默能明显增加K562/A02细胞对ADM的敏感性,逆转K562/A02细胞对ADM耐药.     

5溴汉防己甲素逆转多药耐药的体内体外研究

本研究旨在探讨5一溴汉防己甲素（BrTet）和汉防己甲素（Tet）对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用。采用MTT法检测阿霉素（ADM）联合应用BrTet、TeL,对K562／A02细胞和K562细胞增殖的影响;采用流式细胞术（FCM）检测细胞内ADM浓度和P糖蛋白（P—gp）的表达;采用RT—PCR测定细胞mdrl基因mRNA表达水平。建立裸鼠皮下移植瘤模型,比较BrTet、Tet在体内的逆转耐药作用。结果发现,BrTet在0．25、0．5以及1μmol／L浓度条件下对K562／A02细胞多药耐药性的逆转作用呈剂量依赖性。流式细胞术检测提示,BrTet显著增加K562／A02细胞内ADM浓度,并呈剂量依赖性,同时抑制P—gp的表达,下调mdrl mRNA的表达。在荷瘤鼠模型中,BrTet明显增加ADM对K562／A02移植瘤的抗肿瘤作用,从单用ADM的5．8％上升至26．1％,而在K562移植瘤中没有显著差异。结论：BrTet在体内体外试验中均显示出显著的逆转MDR作用,其活性可能与抑制P—gp的过度表达和增加抗肿瘤药物的积聚有关。     

鼠尾草酸逆转K562/A02细胞多药耐药的机制研究

目的 探讨鼠尾草酸(Canosic acid,CA)对人类白血病多药耐药(MDR)细胞系K562/A02细胞的逆转作用及机制.方法 MTT法测定CA作用前后K562/A02细胞对阿霉素(ADM)的敏感性.流式细胞术(FCM)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定细胞内ADM的平均荧光强度,计算细胞内ADM浓度.半定量RT-PCR检测细胞mdr1 mRNA表达水平.采用流式细胞术和Western blot 检测细胞膜P糖蛋白(P-gp)表达.结果 CA可将ADM对K562/A02细胞的IC50值由16.31μg/ml降至1.35μg/ml,逆转倍数为12.08倍.流式细胞术检测结果表明CA可将K562/A02细胞内ADM的荧光强度由17.05提高到60.53(P<0.01).LSCM结果显示CA可恢复ADM在K562/A02细胞的细胞核和胞质中的弥散分布,并使细胞内ADM的浓度由4.9 Oμg/ml提高至15.4μg/ml.RT-PCR结果显示K562/A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞,CA处理后K562/A02细胞mdr1 mRNA水平明显降低(P<0.01).流式细胞术检测K562/A02细胞膜上P-gp的荧光强度在经CA处理后由44.40降至22.80(P<0.05).Western blot结果显示CA处理后的K562/A02细胞膜上P-gp的表达明显降低.结论 在体外,CA可有效逆转人白血病细胞K562/A02的MDR,其逆转耐药的机制可能与P-gp蛋白表达下调并抑制其功能有关.     

高压氧联合阿霉素对白血病K562/A02细胞周期及移植瘤生长的影响

高压氧作为辅助治疗手段已广泛应用于临床[1],有关高压氧对白血病细胞多药耐药的影响研究尚少,我们拟通过体外细胞培养及构建裸鼠移植瘤模型实验,探讨0.2 MPa高压氧联合阿霉素(ADM)逆转多药耐药白血病细胞系K562/A02细胞耐药性的效果.     

Stathmin和CrkL蛋白在耐阿霉素的K562白血病细胞中表达上调

本研究应用蛋白质组学方法比较白血病K562细胞及其耐阿霉素的K562/A02细胞中蛋白质表达谱的差异,筛选新的耐药相关蛋白。利用荧光差异双向电泳（2D-DIGE）技术分离K562细胞及K562/A02细胞的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF/MS）对差异表达蛋白质点进行鉴定,搜索蛋白质数据库,获得差异蛋白质的信息,并用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白质水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证。结果显示,经过DIGE技术和质谱分析,鉴定出8个蛋白质在耐阿霉素的K562细胞中表达有差异,其中2个表达下调,6个表达上调,它们分别参与细胞能量代谢、细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导和基因转录等。在表达上调的蛋白中挑选Stathmin和CrkL蛋白,在K562及其耐药细胞株中进行了蛋白免疫印迹实验,结果与双向电泳结果一致;实时荧光定量PCR显示,CrkL在mRNA水平变化与在蛋白质水平变化一致,而Stathmin在mRNA水平变化与蛋白质水平变化不完全一致。结论：白血病K562细胞及其耐阿霉素K562/A02细胞蛋白质表达谱有差异,Stathmin和CrkL蛋白可能与耐药有关,值得进一步探讨。     

急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞对K562/A02 细胞株耐药的影响

本研究探讨急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对K562/A02细胞耐药性的影响及其机制。从白血病患儿骨髓中分离、培养并鉴定MSC;建立K562/A02细胞株与MSC共培养的体系,应用AnnexinV-FITC检测一定浓度的阿霉素(ADM)对不同培养条件下K562/A02细胞凋亡的影响;RT-PCR检测K562/A02细胞中的凋亡基因家族中bcl-2和bax基因;荧光定量PCR检测多药耐药基因mdr1浓度。结果表明,单独培养组白血病细胞早期凋亡率为(8.38±0.29)%,而黏附培养组为(1.97±0.11)%,差异具有统计学意义(p<0.05)。相对于单独悬浮培养的K562/A02细胞,黏附共培养的K562/A02细胞bcl-2基因表达明显增强,bcl-2/bax比值显著增高;K562/A02单独悬浮培养组、黏附共培养组细胞中mdr1的水平比较无统计学差异(p>0.05)。结论:白血病患儿MSC能够使白血病细胞逃避药物的促凋亡作用,K562/A02对阿霉素产生耐药性可能与黏附共培养后bcl-2基因表达增强有关,而与其本身含有的mdr1基因无关。     

非致死剂量高强度聚焦超声逆转K562／AO2细胞多药耐药的实验研究

目的探讨非致死剂量高强度聚焦超声（HIFU）逆转K562／AO2细胞多药耐药（MDR）的效能及其作用机制。方法（1）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照K562、K562／AO2细胞株，观察HIFU的剂量-效应关系；（2）将K562／AO2细胞株分组为：阿霉素组（ADM组）、ADM加HIFU辐照组（HIFU组）、ADM加维拉帕米组（VRP组），分别观察各组细胞内的ADM浓度、细胞的抑制率和细胞凋亡情况；（3）检测HIFU干预前后K562／A02细胞的P—gP、PDCD5表达情况。结果（1）当辐照时间一定时（5s）声强越高肿瘤细胞存活率越低，当HIFU声强一定时（400w／cm^2）细胞存活率随HIFU辐照时间延长而下降；（2）在K562／AO2细胞株中HIFU、VRP干预均能提高细胞内ADM浓度，HIFU组、VRP组与ADM组比较P均〈0．01，HIFU组与VRP组比较P〉0．05；HIFU组、VRP组、ADM组均能抑制K562／AO2细胞的增殖和促使K562／AO2细胞发生凋亡。HIFU组、VRP组与ADM组比较P均〈0．01，HIFU组与VRP组比较P〉0．05；（3）HIFU辐照K562／AO2细胞后P—gP表达明显降低，PDCD5表达升高。结论非致死剂量HIFU辐照K562／AO2细胞能够提高耐药肿瘤细胞内的化疗药物浓度，增加耐药肿瘤细胞的抑制率和凋亡率。非致死剂量HIFU逆转MDR的可能机理是下调耐药细胞的P—gP表达和上调PDCD5表达。     

miR-451在白血病细胞株K562/A02多药耐药中的作用及相关机制

目的：检测miR-451、ABCB1、ABCC2在白血病药物敏感细胞株K562及其耐药株K562/A02中的差异表达，探讨miR-451与ABCB1、ABCC2表达的调控关系及miR-451参与白血病耐药的相关机制。方法：CCK-8法检测K562/A02及K562细胞的耐药性，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证miR-451在K562及K562/A02细胞中的差异表达，将miR-451模拟物(mimic)及其阴性对照(miR-NC)、miR-451抑制剂(inhibitor)及其阴性对照(miR-inNC)分别转染K562及K562/A02细胞，应用q RT-PCR、Western blot检测ABCB1、ABCC2在K562、K562/A02细胞及转染后各组细胞中的mRNA、蛋白表达水平。结果：K562/A02细胞对阿霉素的耐药是其亲本细胞系K562的177倍。与K562细胞相比，K562/A02细胞中miR-451明显高表达(P<0.001),ABCB1、ABCC2在K562/A02中的mRNA及蛋白表达水平均显著高于K562细胞(P<0.001)。K562/A0...     

WT1基因表达下调对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响

目的 探讨WT1基因表达下调对人红白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素敏感性的影响.方法 将WT1mRNA的短发夹RNA(short hair RNA,shRNA)构建至真核表达载体后转染K562/A02细胞,流式细胞术检测转染效率;荧光定量RT-PCR和Western blot法分析WT1基因在转染前后表达的差异;pWT1shRNA转染K562/A02细胞48 h并经阿霉素作用后,MTT法检测各组细胞阿霉素IC50值;流式细胞术检测细胞阿霉素累积量及细胞凋亡率.结果 与未转染对照组及空载体组相比,转染WT1shRNA质粒的K562/A02细胞WT1mRNA和蛋白水平均明显降低;经阿霉素诱导24 h后,其对阿霉素的敏感性明显增高,相对逆转率为71.5%,细胞内阿霉素的累积量较各对照组明显增高(P值均<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论 靶向WT1shRNA干扰质粒可有效抑制K562/A02细胞WT1基因表达,增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性.     

细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转人红白血病耐药细胞株K562/ADR的研究

目的 探讨细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞与阿霉素对肿瘤多药耐药逆转作用的影响.方法 体外诱导、扩增人外周血单个核细胞(PBMC)作为效应细胞,联合不同浓度的阿霉素与其耐药靶细胞K562/ADR进行共培养,经四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素相对含量和P糖蛋白(Pgp)表达水平;RT-PCR检测mdr-1基因mRNA表达.结果 阿霉素对K562和K562/ADR的IC50分别为(0.68±0.04)μmol/L和(66.23±4.38)μmol/L;K562/ADR对阿霉素的耐药倍数为97.43倍;经CIK细胞联合阿霉素处理48 h(效靶比1:5、ADR 1.1 μmol/L)后,IC50为(32.15±0.79)μmol/L,联合逆转倍数为2.06倍.细胞内的阿霉素相对含量增加的同时Pgp表达降低.mdr-1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势.结论 CIK细胞联合阿霉素可增加化疗药物阿霉素对耐药靶细胞K562/ADR的敏感性,提高耐药靶细胞内的阿霉素浓度,有效下调mdr-1基因及Pgp的表达,使CIK联合阿霉素对多药耐药的逆转效果得以显现.     

吡喃阿霉素、阿霉素为主联合方案治疗非霍奇金淋巴瘤

目的：观察以吡喃阿霉素(THP)为主的改良CHOP方案治疗非霍奇金淋巴瘤的疗效、不良反应，并与以阿霉素(ADM)为主的经典CHOP方案进行比较。方法：以THP组成改良CHOP方案治疗NHL59例；以ADM组成的CHOP方案治疗NHL36例。结果：初发患者以THP为主治疗后有效率(CR PR)为84．38%，复发或难治患者的有效率为53．33％；ADM治疗初发患者的有效率为75．00％，复发或难治患者的有效率为45．45％。两组治疗效果相似。贫血、白细胞减少、血小板减少、肝功能损害、肾功能损害等不良反应两组间无显著差异。但THP组心电图异常、脱发率及胃肠道反应低于ADM组。结论：吡喃阿霉素及阿霉素治疗非霍奇金淋巴瘤的疗效无差异，而前者的心脏毒性、脱发率、胃肠道反应低于后者。THP是治疗非霍奇金淋巴瘤另一种可选择的高效低毒化疗药物。     

孤啡肽联合阿霉素逆转K562/ADM细胞多药耐药及其分子机制研究

本实验室已研究证实,在细胞水平孤啡肽(OFQ)单独用药可逆转K562/ADM细胞多药耐药。本研究目的是探索OFQ联合阿霉素(ADM)逆转K562/ADM细胞多药耐药的分子机制及其与MDR1 mRNA/P-gp表达的相关性。MTT法检测OFQ和ADM单药及两者联合后对K562/ADM细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测P-gp的相对表达量。结果显示,OFQ(0.1μmol/L)联合ADM(15 mg/L)后细胞增殖抑制率增加,与ADM组比较,48 h数据具有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.01);OFQ联合ADM作用于细胞后MDR1 mRNA/P-gp表达水平明显低于ADM单独用药组(P<0.01),且MDR1 mRNA(r=0.91)及P-gp(r=0.98)表达水平在48 h内呈时间依赖性。结论:OFQ联合ADM可时间依赖性的逆转K562/ADM细胞多药耐药性,48 h为最佳逆转时间,逆转机制与下调MDR1 mRNA和P-gp的表达量相关。     

细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的研究

目的:探讨细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的可能性及其机制。方法:以人外周血分离单个核细胞后进行体外诱导、扩增作为效应细胞,联合不同浓度的阿霉素与其耐药靶细胞K562/ADR进行共培养,经四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素相对含量和P糖蛋白表达水平;RT-PCR检测mdr-1基因mRNA表达。结果:未经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理时,阿霉素对K562和K562/ADR的IC50分别为(0.68±0.04)μmol/L和(66.23±4.38)μmol/L;K562/ADR对阿霉素的耐药倍数为97.43倍;经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理48 h(效靶比1∶5、阿霉素1.1μmol/L)后,IC50为(32.15±0.79)μmol/L,联合逆转倍数为2.06倍,细胞内的阿霉素相对含量增加1.83倍;P糖蛋白表达下调36.7%,mdr-1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。结论:细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素可提高耐药细胞K562/ADR胞内的阿霉素浓度,下调mdr-1基因及P糖蛋白的表达,提高阿霉素对耐药细胞K562/ADR的敏感性,使细胞因子诱导杀伤联合阿霉素对多药耐药的逆转效果得以显现。     

复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562／A02移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

本研究旨在探讨复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562／A02移植瘤细胞凋亡及BCL-2、BAX蛋白表达影响。将多药耐药K562／A02细胞接种于BALB／c—nu裸鼠腋前皮下构建多药耐药移植瘤模型,用Annexin V—FITC／PI流式细胞术检测实验各组移植瘤细胞的凋亡率;用免疫组织化学染色法检测实验各组移植瘤细胞的BCL-2、BAX蛋白表达,并计算蛋白表达积分的光密度值（IOD）。结果发现,复方浙贝颗粒各剂量联合阿霉素组的细胞凋亡率与对照组、阿霉素组相比有统计学意义（P〈0．05）;与对照组和阿霉素组相比,复方浙贝颗粒各剂量联合阿霉素组多药耐药移植瘤BCL-2表达的IOD值降低（P〈0．05）,BAX表达的IOD值增高（P〈0．05）。结论：复方浙贝颗粒是通过增强阿霉素对耐药移植瘤的促细胞凋亡,减少耐药移植瘤的BCL-2蛋白表达,增加BAX蛋白表达而逆转多药耐药。