非促有丝分裂型人酸性成纤维细胞生长因子的受体结合特性及对MAPK信号通路的影响

目的:研究非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子(non- mitogenetichumanacidicfibroblastgrowthfac tor,nm haFGF)促细胞增殖活性的变化及其作用机制。方法:采用MTT法测定人酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)和nm- haFGF对NIH3T3细胞株的增殖活性;采用受体放射性配基结合法,测定haFGF和nm- haFGF与其受体结合的亲和力及受体总结合位点数RT ;利用Western印迹检测haFGF和nm- haFGF分别作用于NIH3T3细胞后MAPK信号通路中ERK信号分子的表达。结果:与haFGF比较,nm- haFGF对NIH3T3细胞的促增殖活性降低,nm -haFGF与NIH3T3细胞胞膜上aFGF受体结合的亲和力下降,但与受体结合的总位点数不变。Western半定量检测结果显示,nm -haFGF组信号蛋白ERK的表达水平明显低于haFGF组。结论:nm -haFGF与受体结合能力下降,下调MAPK信号通路是导致nm haFGF的促分裂活性降低的主要原因之一。     

截断型人酸性成纤维细胞生长因子的表达及活性鉴定

目的:稳定且具有活性的截断型人酸性成纤维细胞生长因子(shaFGF)的构建、表达及纯化.方法:以含全长人酸性成纤维细胞生长因子cDNA的质粒pUC-haFGF为模板,设计一对引物,PCR扩增获得shaFGF cDNA,将其克隆到表达载体pET3c中,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG诱导表达,通过离子交换和肝素亲和层析纯化目标蛋白,MTT法检测促分裂活性.结果:shaFGF的表达量约为25%,纯化的shaFGF的促分裂活性与haFGF标准品相当.结论:BL21(DE3)/pET3c表达系统能高效表达shaFGF,纯化得到的shaFGF可供下一步的药学研究.     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的生殖毒性

目的:研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)在破损皮肤表面给药时的生殖毒性。方法:从SD大鼠怀孕第6天起对破损皮肤连续给药10 d,剂量分别为3 600 U/cm2,1 800 U/cm2,900 U/cm2,观察rhaFGF对大鼠的生育能力、胎鼠的生长发育及骨骼发育的影响。结果:大鼠破损皮肤外用相当于有效剂量603、0和15倍的rhaFGF对母体的毒性、胚胎毒性和致畸作用均无明显的影响。结论:在相当于有效剂量60倍的剂量下使用rhaFGF对母体和胎儿是安全的。     

改构型酸性成纤维细胞生长因子对体外培养肝细胞增殖活性的影响

目的 探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对体外培养大鼠肝细胞增殖的影响.方法 采用“0.25％胰酶+0.1％胶原酶”消化法分离培养大鼠肝细胞并传代纯化扩增,取第3代细胞鉴定后实验:①形态学法观察在不同浓度MaFGF组中细胞的形态变化;②将实验随机分为对照组和MaFGF组,MaFGF组加入一系列浓度的MaF-GF,MTT法测定不同浓度MaFGF组作用于肝细胞24、48、72h的促增殖活性;③MTT法筛选出最适的MaFGF浓度,用此浓度和不加生长因子2种方式培养细胞,并绘制细胞生长曲线.结果 ①MaFGF对体外培养的肝细胞有一定的促增殖作用,但是与浓度不成正比;且实验表明24 h的增殖率较其它时间点显著增高(P＜0.05);比较对照组和各组(4.68×10-3 ～7.80×10-3 mg/L MaFGF组)均差异有统计学意义(P＜0.05),但各组间对肝细胞的促增殖作用的差异无统计学意义;②最适浓度(6.24×10-3 mg/L) MaFGF的第4天细胞数量较对照组明显增加(P＜0.05);MaFGF组的第10天细胞数(12.4×104)是对照组(6×104)的2.1倍(P＜0.05).结论 在适宜浓度和时间内,MaFGF对肝细胞具有一定的促增殖作用且不具有浓度依赖性.     

酸性成纤维细胞生长因子及其在创伤愈合中的应用

机体的创伤愈合包括炎症、增殖、重新塑型三个阶段，需要多种细胞和多种生长因子参与调控。采用外源性生长因子治疗慢性难愈合性创伤是目前临床研究的热点。酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor，aFGF）具有促有丝分裂和非促有丝分裂活性，临床上可用来加速创伤愈合、提高愈合质量。本文对酸性成纤维细胞生长因子的分子结构及其在创伤愈合中的作用作一综述。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化

采用肝素-sepharose亲和层析和SephadexG-100凝胶过滤层析法,从含haFGF基因重组体的大肠杆菌菌体中分离纯化得到人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF)。SDS-PAGE,IEF电泳检测均为单一谱带。HPLC层析显示单一蛋白峰,SDS-PAGE测定rhaFGF分子质量为16.67ku,IEF测定等电点pI为4.8,并用Edman降解法测定了N-末端氨基酸序列,Balb/c3T3细胞培养法测定纯化的rhaFGF生物活性ED50为6μg/L,表明其对细胞分裂有明显促进作用。     

非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对急性肾功能衰竭大鼠血尿素氮、肌酐和尿蛋白含量的影响

目的研究非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对大鼠急性肾功能衰竭的保护作用。方法腹腔注射氯化汞复制大鼠急性肾功能衰竭模型,5 min后,nmhaFGF组经舌静脉注射nmhaFGF 40μg.kg-1,模型组经舌静脉注射等剂量的生理盐水,对照组大鼠麻醉后注射生理盐水,在30 min、90 min、24 h、48 h取血检测大鼠血液中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和尿液中蛋白含量的变化。结果模型组大鼠注射氯化汞后48 h血液中BUN含量达到高峰(P<0.01),Cr含量以及尿蛋白含量在24 h达到高峰(P<0.01)。nmhaFGF组24 h和48 h血液中BUN和Cr与模型组相比显著下降(P<0.01,P<0.05);尿蛋白含量在24 h明显下降(P<0.05)。结论nmhaFGF能够改善氯化汞诱导的大鼠急性肾功能衰竭。     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠创伤性脑水肿的防治作用

目的 观察酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）对创伤性脑水肿的作用。方法 大鼠脑损伤前应用aFGF持续脑室内注射12 h,观察脑含水量、病理组织学和超微结构改变。结果 脑水肿和神经细胞结构损伤明显减轻。结论 aFGF具有明显减轻脑水肿和神经细胞保护作用。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子促进创伤愈合的研究

目的：研究重组人酸性成纤维细胞生长因子（rh-aFGF)对兔创伤的促愈合作用。方法：采用兔背部刀割伤模型,将rh-aFGF溶液隔日一次滴注于创面,用创面照像、透明膜描记称量法记录伤后第4、8、12、16天创面面积,用注水法测量伤腔容积,伤后第8、16天取创面组织,观察创面的病理学变化,包括肉芽组织生长与再上皮化情况。结果：rh-aFGF可明显加速兔皮肤创伤的愈合,使创面面积明显缩小（P＜0．05）,使伤腔容积明显减少（P＜0．05）。组织学检查：rh-aFGF组创面伤后8天成纤维细胞生长活跃、数量多,其毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于对照组;伤后16天,创面收缩与再上皮化明显,新生上皮向创面中心爬行较快。结论：rh-aFGF对兔背部刀伤创面有明显的促修复作用。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子皮肤用药的长期毒性研究

目的：研究重组人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF)皮肤用药的长期毒性。方法：对新西兰兔破损皮肤连续给药28d,剂量分别为3600,1800,900U／cm^2,观察rhaFGF用药期间和停药后对动物血液学、血液生化学、组织学等方面的影响。结果：rhaFGF的无毒剂量为900U／cm^2;rhaFGF1800U/cm^2用药可见个别动物出现淋巴结、脾白髓、圆小囊固有层及胸腺滤泡增生;3600U／cm^2用药可见半以上动物淋巴结出现淋巴等器官滤泡增生,偶见大脑血管周围出现少量淋巴细胞浸润,个别动物睾丸生精小管精子细胞数量增加。停药2周,上述病理改变减轻。未观察到rhaFGF的延迟性毒性反应。结论：rhaFGF在有效剂量及大于有效15倍的剂量下皮肤外用是安全的。     

酸性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增殖作用的实验研究

目的　探讨不同浓度的aFGF对体外培养的大鼠主动脉内皮细胞生长的影响。方法　通过组织块培养法获取主动脉内皮细胞。将浓度为 5ng/ml,10ng/ml,2 0ng/ml的aFGF分别加入内皮细胞的培养液中作为实验组(Ⅰ～Ⅲ组 ) ,不加aFGF的组作为对照组。分别在 2 4h、48h和 72h应用MTT法进行细胞计数。结果　从大鼠主动脉成功地获取了内皮细胞。 3天内 ,实验组和对照组的主动脉内皮细胞都有不同程度的增殖 :培养 2 4h ,实验各组与对照组比较P >0 .0 5 ,无统计学差异 ;48h和 72h时 ,Ⅱ、Ⅲ组与对照组以及与Ⅰ组两两比较 ,有非常显著的差异 (P <0 .0 0 1) ;各时间段内 ,Ⅰ组与对照组 ,Ⅲ组与Ⅱ组比较 ,细胞数改变未见差异 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的aFGF有非常明显的促血管内皮细胞生长的作用 ,可能对缺血性心脏病的促血管形成治疗有较大的帮助。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子在半月板损伤关节镜术中的临床应用

目的评价重组人酸性成纤维细胞生长因子（rh—aFGF）冲洗关节腔对半月板损伤的修复作用。方法人选我国3个中心480例半月板损伤患者,根据随机数列分为对照组和治疗组,两组根据撕裂类型给予关节镜修整、切除术,清理关节腔治疗。对照组240例,339条患肢,给予生理盐水冲洗关节腔;治疗组240例,324条患肢,给予rh—aFGF溶于生理盐水冲洗关节腔。术后随访6个月,观察关节功能的恢复情况。结果随访6个月,治疗组关节功能优等率为41．7％,对照组为33．4％,两组差异有统计学意义（x2=4．422,P=0．035）。治疗组纵裂、水平裂、斜裂的Lysholm膝关节功能评分分别为（98．7±5．2）、（95．2±5．4）、（89．3±2．3）分,对照组分别为（81．6±5．0）、（78．4±7．4）、（76．6±6．4）分,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论关节腔内冲洗rh—aFGF,有利于半月板损伤修复．改善关节功能。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子复方喷剂治疗宫颈糜烂临床研究

目的观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)-蛇床子复方喷剂对宫颈糜烂的治疗效果。方法将复方喷剂每日早晚各1次,喷于阴道深部,连用10d。计算治愈率、显效率、有效率及创面痊愈时间。比较单用复方喷剂与复方喷剂宫颈波姆光照射联用的疗效和创面痊愈时间。结果单用复方喷剂治疗宫颈糜烂的总有效率为94.5%,其中治愈率38.2%,显效率40.0%,有效率16.4%,同对照药治糜灵栓的疗效相似(P>0.05),但痊愈时间缩短(P<0.05)。复方喷剂与宫颈波姆光照射联用,可使后者的疗效提高,痊愈时间缩短(P<0.05)。结论复方喷剂可促进宫颈糜烂的愈合。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子促进慢性溃疡性创面愈合的临床研究

目的观察重组人酸性成纤维细胞生长因子（rh-aFGF）促进慢性溃疡性创面（静脉曲张性溃疡、压疮、糖尿病足溃疡）愈合作用及安全性。方法选择2012年8月～2013年8月于石家庄市中医医院、石家庄市第二医院、唐山协和医院三家医院收治的253例慢性溃疡患者,分为三组,试验组（90例）采用rh-aFGF冻干粉均匀外敷后喷雾治疗（3～4喷/cm2）,对照组1（91例）则仅给予rh-aFGF喷雾治疗（3～4喷/cm2）,对照组2（72例）采用湿润烧伤膏外敷后生理盐水喷雾治疗。观察三组的愈合时间、肉芽生长情况、瘢痕形成情况。结果试验组与对照组1和对照组2比较,患者创面渗出更少,肉芽生长状况更佳,差异均有统计学意义（P〈0.05）。试验组患者完全愈合时间、20 d累积愈合率、延迟愈合率均低于对照组1和对照组2,差异均有统计学意义（P〈0.05）。远期随访显示试验组瘢痕面积小于对照组1和对照组2,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 rh-aFGF促进愈合作用强于湿润烧伤膏,另外冻干粉直接外敷效果较喷雾的促进愈合效果更佳。     

混合痔吻合器痔上黏膜环切术后应用重组人酸性成纤维细胞生长因子对创面愈合及瘢痕的影 响简

目的 评价混合痔吻合器痔上黏膜环切术（PPH）后应用重组人酸性成纤维细胞生长因子（rh-aFGF）对伤口愈合及远期瘢痕的影响.方法 采用前瞻性、随机数列表、分配隐藏等临床试验设计方法选择2012年6月～2013年2月河北省三个研究医院混合痔患者104例为研究对象,随机分为试验组和对照组,每组各52例.两组均给予PPH套扎技术,试验组给予20 mL外用冻干rh-aFGF冲洗,对照组给予太宁栓治疗.评价两组患者的住院时间、症状体征评分、恢复工作时间,并观察患者的瘢痕形成、肛门狭窄、肛门失禁指数及复发情况.结果 试验组完全愈合时间、恢复工作的时间及住院时间[（9.58±1.56）、（11.48±0.59）、（3.740.44）d]明显少于对照组[（7.42±1.42）、（15.41±0.38）、（4.67±0.45）d],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.试验组延迟愈合发生率（1.9％）明显低于对照组（13.4％）,甲级愈合率（96.1％）明显高于对照组（84.6％）,两组相比,差异有统计学意义（P＜ 0.05）.试验组瘢痕形成率及肛门狭窄率（17.3％、1.9％）均低于对照组（38.4％、11.5％）,两组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 rhaFGF仅能缩短PPH后伤口愈合时间,减少远期瘢痕形成及肛门狭窄,对患者复发无明显影响.     

人类重组酸性成纤维细胞生长因子对新生大鼠生长发育的影响

目的：比较野生酸性成纤维细胞生长因子（waFGF）和其核转位序列 (NLS) 敲除后的重组aFGF（raFGF）对新生大鼠生长发育的影响,评价raFGF的有丝分裂活性及其相关的生物学特性。 方法：实验用Wistar新生大鼠,观察waFGF、raFGF和suramin对其体重、外观、存活率和睁眼时间的影响。 结果：体重时程的变化表明,suramin+raFGF组大鼠在生后16 d内体重明显低于suramin+waFGF组,但两组均明显低于正常组和空白对照组,且明显高于suramin组。suramin组和suramin+raFGF组幼鼠背部有皮屑现象, 出现不同程度的角弓反张症状。suramin组幼鼠生后均未睁眼,在16 d内全部死亡;而正常组幼鼠、空白对照、suramin+waFGF和suramin+raFGF组幼鼠分别在出生后14、14、19和22 d睁眼,21 d其存活率分别为99.3％、87.6％、66 .7%和20.0%,后两者比较差异有显著性（P<0.05）。 结论：suramin作为aFGF的抑制剂,可抑制机体的生长发育,在一定程度上可被外源waFGF反转,但raFGF作用较弱。提示,aFGF经过基因敲除核转位序列后,对新生大鼠发育影响较小,可能与其促细胞分裂性降低有关。     

负压引流联合重组人酸性成纤维细胞生长因子治疗难愈性创面的临床随机对照研究

目的：观察负压引流系统联合重组人酸性成纤维细胞生长因子(rh-aFGF,recombinant human acid-ic fibroblast growth factor)治疗难愈性创面的有效性及安全性。方法入选3个研究中心194例深Ⅱ度烧伤、Ⅲ度烧伤、糖尿病足溃疡、血管性慢性溃疡患者,根据随机数列表、多中心分层随机方法分为两组,治疗组98例,对照组96例。治疗组采用创面封闭式负压引流技术同时引流前,引流中给予rh-aFGF冲洗治疗。对照组采用VSD治疗,同时围引流期给予生理盐水水冲洗。连续治疗15 d,观察创面愈合情况。结果联合VSD治疗,rh-aFGF干预后肉芽组织生长评分显著高于对照组[(2.6±1.5)分vs (1.9±1.4)分,P=0.027],此外治疗组完全愈合时间[(14..6±5.2) d]比对照组[(19.5±7.9) d]短,治疗组住院时间[(13.4±4.7) d]明显短于对照组[(16.4±5.2) d],引流后残余创面面积明显[(15.4±1.9) cm2]明显小于对照组[(19.3±2.1) cm2],两组比较差异具有显著统计学意义。此外远期随访显示,rh-aFGF有利于降低愈合后创面感觉异常发生率,两组比较差异具有统计学意义(χ2=25.16,P=0.000)。结论负压引流与rh-aFGF联合治疗可显著促进肉芽组织生长,两者联合治疗可作为难愈性创面重要的治疗方案。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子对糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡的促愈合作用

目的：研究外用大肠杆菌表达的重组人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF）对糖尿病大鼠难愈性创面的促愈合作用。方法：雄性Wistar大鼠10只，制备糖尿病大鼠难愈性皮肤溃疡模型；创面局部分别用rhaFGF（90U•cm^-2）及生理盐水喷洒；记录创面面积、伤腔容积及愈合时间，观察创面肉芽组织生长及再上皮化，评价创伤修复情况。 结果：与生理盐水对照组比较，rhaFGF组伤后各时间点的创面面积、伤腔容积均明显缩小﹙P＜0.05﹚，愈合率显著提高﹙P＜0.05﹚，创面愈合时间明显缩短﹙P＜0.05﹚。rhaFGF组的肉 芽组织生长及再上皮化明显加速。 结论：局部应用大肠杆菌表达的rhaFGF对糖尿病大鼠难愈性创面有明显的促愈合作用。     

Basic Fibroblast Growth Factor and Fibroblast Growth Factor Receptor-1 in Human Meningiomas

The expression of basic fibroblast growth factor (bFGF) and fibroblast growth factor receptor-1 (FGFR-1) in human meningiomas and the relationships between their expression and the tumors‘ histological features and angiogenesis were investigated by means of immunohistochemical technique. The expression of bFGF and FGFR-1 was detected by antibody of bFGF or FGFR-1.The tumors‘ angiogenesis was evaluated by microvascular density (MVD) and, which was observed by use of CD34-antibody immunohistochemically. The results showed that there were varied degrees of the expression of bFGF and FGFR-1 proteins in meningiomas. The expression was correlated with the tumors‘ histological characters and angiogenesis. It was concluded that bFGF and FGFR-1 might play important roles in meningiomas‘ angiogenesis and proliferation. The expression positive rate of bFGF and FGFR-1 may provide an indication of evaluating the histological and malignant degree of the tumor.     

aFGF重组腺病毒载体的构建、转染效率和使用安全性的初步研究

目的：旨在构建人酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibrolast growth factor,aFGF）重组腺病毒载体，为基因转染的研究作准备。方法：将用于转染的重组粘粒和DNA－TPC混合后，以磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293细胞，获取重组腺病毒。结果：重组腺病毒DNA经酶切鉴定为正确，所得重组腺病毒为E1缺陷型并带有aFGF基因，同时证明重组腺病毒体外转染效率高且使用安全，结论：此重组缺陷型腺病毒载体可用于体内基因治疗研究。