内毒素刺激Kupffer细胞对肝星状细胞前胶原基因表达的影响

背景：肠源性内毒素血症对肝纤维化具有启动作用,肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化发生、发展的中心环节。目的：探讨内毒素刺激Kupffer细胞对HSC前胶原基因表达的影响及其可能机制。方法：改良链酶蛋白酶、胶原酶原位灌流和密度梯度离心分离大鼠肝脏Kupffer细胞和HSC。以RNA斑点杂交检测脂多糖（LPS）、Kupffer细胞、LPS与Kupffer细胞共培养和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对HSC前胶原mRNA表达的影响,放射免疫法检测LPS对Kupffer细胞和HSC产生TNF-α的影响,RNA印迹法检测LPS和TNF-α对Kupffer细胞和HSC转化生长因子-β（TGF-β）mRNA表达的影响结果：经低浓度（0.5、1、5μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清可增加HSCⅠ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA表达,经高浓度（10、15、20μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清、单独LPS、未经处理的Kupffer细胞培养上清、单独TN-α均无此作用。Kupffer细胞培养上清中的TNF-α含量随LPS浓度梯度的增加而递增,HSC培养上清中的TNF-α含量则无明显变化。TNF-α不能增加HSC TGF-βmRNA表达,但能增加Kupffer细胞TGF-βmRNA表达;经LPS或TNF-α处理的Kupffer细胞培养上清能增加HSC TGF-βmRNA表达。结论：低浓度内毒素能上调HSC前胶原基因表达,该作用有赖于内毒素激活Kupffer细胞所产生的活性介质的参与。     

肝纤维化的治疗

当肝受到损伤时,炎症细胞和肝窦Kupffer细胞释放出活化因子激活肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),使HSC转化为表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的肌成纤维细胞(myofibroblast),并且产生大量Ⅰ型胶原。活化的HSC胞膜上血小板衍生的生长因子(platelet-de-rived growth factor,PDGF)、转化生长因子(trans-forming growth factor-β1,TGF-β1)等增生性细胞因     

S-腺苷蛋氨酸对人肝星状细胞增殖和氧应激及转化生长因子β1表达的影响

目的 研究S-腺苷蛋氨酸(SAM)对人肝细胞和肝星状细胞(HSC)(LX-2细胞株)增殖和氧应激及转化生长因子(TGF)β1表达的影响.方法 用不同浓度的SAM培养肝细胞和HSC,用MTT法检测SAM对肝细胞和HSC增殖的影响;用次氮基三乙酸铁(Fe-Nta)和SAM共同培养肝细胞和HSC,检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;用不同浓度的SAM培养HSC,ELISA方法检测HSC表达TGF-β1状况.结果 在一定浓度范围内,SAM可抑制HSC增殖,而对肝细胞增殖无影响;SAM可增加肝细胞和HSC的SOD活力,降低其MDA含量,同时可抑制HSC的TGF-β1表达.结论 SAM可抑制HSC增殖,保护肝细胞和HSC免受氧应激损伤,抑制HSC分泌TGF-β1,显示其具有抑制HSC增殖、抗氧化和抗肝纤维化作用.     

肝细胞凋亡在肝纤维化中的作用

肝纤维化系肝组织内细胞外基质(ECM)过度增生与异常沉积,导致肝脏结构和/或功能异常改变的病理变化。过去20年,对肝纤维化的病理机制研究取得了长足进步,如明确了肝纤维化的细胞学基础在于肝星状细胞(HSC)活化,生化学基础在于ECM代谢紊乱,尤其是近年来基本明确了转化生长因子β(TGF-β)等促纤维化细胞因子刺激HSC活化。但是治疗学进展缓慢,治疗策略主要针对HSC活化与ECM代谢降解等,而这些方法尚未取得理想的临床疗效。肝细胞约占肝脏细胞总量的80%,数量最多,功能重要。肝细胞损伤尤其是肝细胞凋亡、细胞支架结构完整性在肝纤维化中…     

外源性转化生长因子β1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响

目的探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7 d时予TGF-β15 μg/L处理24 h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5 d HSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用最明显,其α-SMA表达增加78.05%,而培养6,7 d的HSC的形态和α-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P＜0.05).结论TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关.     

Kupffer细胞极化和肝星状细胞活化在NAFLD相关炎症和纤维化中的作用

背景:Kupffer细胞和肝星状细胞(HSC)在慢性肝损伤炎症和纤维化的始动和持续过程中发挥重要作用。目的:研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)进展中Kupffer细胞极化和HSC活化对肝内炎症-纤维化发展的影响。方法:分别以高脂(HF)饮食和蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食诱导C57BL/6小鼠非酒精性脂肪肝(NAFL)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型。HE染色和Masson染色评估肝脏组织病理学改变,免疫组化染色检测Kupffer细胞表型和HSC活化状态,real-time PCR检测炎症、纤维化相关基因和PPAR-γ表达。结果:HF和MCD饮食诱导的小鼠NAFL和NASH模型肝内F4/80阳性Kupffer细胞、CD11c阳性M1型巨噬细胞和α-SMA阳性HSC均较对照组明显增加(P0.05),MCD组增加更为显著(P0.05)。NAFL和NASH时肝内TNF-α、TGF-β1 mRNA表达均显著增高(P0.05),α-SMA、Col1 mRNA表达仅在NASH时显著增高(P0.05)。肝内PPAR-γmRNA表达在NAFL时显著增高(P0.05),在NASH时则显著降低(P0.05)。结论:在NAFLD进展过程中,肝内Kupffer细胞呈现持续的M1型极化,HSC在疾病早期已出现活化并随疾病由NAFL向NASH进展而加剧。Kupffer细胞极化和HSC活化促进了NAFLD中肝脏炎症-纤维化的启动和进展。     

外源性转化生长因子β1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响

目的:探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法:分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7 d时予TGF-β15 μg/L处理24 h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果:HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5 d HSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用最明显,其α-SMA表达增加78.05%,而培养6,7 d的HSC的形态和α-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P＜0.05).结论:TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关.     

IL—10／IL—12在病毒性肝炎和肝纤维化中的作用

IL-10是调节巨噬细胞的主要因子,主要由Th_2细胞产生,单核巨噬细胞、Kupffer细胞(KC)、肝星状细胞(HSC)、Th_1细胞、活化的B细胞、肝细胞等也可产生。可调节TNF-α的合成、MHC的表达和NO的合成,并参与抑制细胞合成炎性因子、集落刺激因子(CSF)等,能广谱抑制多种炎性介质和细胞因子IL-2、IFN-Υ、TNF-β、CM-CSF等。其机制是     

柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1和胶原的影响

[目的]观察柔肝冲剂对大鼠肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)和胶原的影响.[方法]采用血清药理学方法处理HSC,以貂肺上皮细胞(Mv1Lu)生长抑制MTT法检测培养上清液中TGF-β1活性,免疫细胞化学染色检测HSC TGF-β1和胶原的表达.[结果]经柔肝冲剂处理的HSC培养上清液中TGF-β1的生物活性和细胞内TGF-β1的表达受到显著抑制,其中对纤维肝HSC的作用更明显,抑制作用优于秋水仙碱.柔肝冲剂能显著抑制纤维肝HSC表达胶原,对Ⅳ型和Ⅰ型胶原具有较高的抑制率.[结论]柔肝冲剂能抑制HSC产生TGF-β1和胶原,阻断肝纤维化时HSC合成胶原等细胞外基质的自分泌放大过程.     

熊去氧胆酸抑制人肝星状细胞活化和NIX蛋白表达的实验研究

目的研究NIX蛋白的表达变化与熊去氧胆酸(UDCA)抑制人肝星状细胞(HSC)活化作用的关系。方法人肝星状细胞-LX2细胞实验分为四组:溶媒对照组、UDCA(0.5μM)组、TGF-β1(5 ng/ml)组、TGF-β1(5 ng/ml)+UDCA(0.5μM)组。通过Western blot检测比较各组间α-SMA、NIX的表达差异。结果TGF-β1刺激LX2细胞后,α-SMA、NIX表达分别较对照组增加60.9%、51.0%;UDCA抑制TGF-β1活化LX2细胞后,α-SMA的表达抑制率达55.6%,与其显著下调NIX的表达呈正相关。结论 UDCA下调HSC细胞NIX蛋白的表达,可能为UDCA抗肝纤维化的药理新机制。     

TGF-β1、α-SMA在慢性乙肝患者肝组织中的表达及意义

用免疫组织化学方法检测了 148例慢性乙肝患者肝组织中转化生长因子β1 ( TGF-β1 )及α-平滑肌肌动蛋白 ( α- SMA)的表达、分布状况 ,并进行定量和相关性分析。结果 :慢性肝炎肝组织 TGF- β1 、α- SMA的表达主要分布于肝窦壁、汇管区、纤维间隔和炎细胞浸润区 ,尤其带分支突起的梭形细胞 (活化的 HSC)有大量表达。TGF-β1 、α- SMA的表达随肝组织病变分级、分期上升而渐增强 ( P<0 .0 5 )。 HBe Ag阳性组与阴性组间 TGF-β1 的表达强度无明显差别 ( P>0 .0 5 )。TGF- β1 与 α- SMA的表达、分布基本一致 ,定量分析呈正相关 ( r=0 .477,P<0 .0 0 1)。认为 TGF-β1 在肝脏炎症、纤维化发展中起重要作用。通过活化 HSC发挥效应 ,抑制 TGF-β1 的产生是防治肝纤维化的新策略     

α-亚麻酸对转化生长因子β1诱导的肝星状细胞的影响

目的:探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)对转化生长因子1(transforming growth factor-β,TGF-β1)诱导的肝星状细胞(hepatic satellite cell,HSC)增殖及分泌功能的影响.方法:采用活化的HSC作为研究模型,将传代的细胞分为5组,以MTT比色法观察ALA对HSC的增殖效应,以ELASA检测细胞培养上清液中Ⅰ型及Ⅲ型胶原的含量,以Westernblot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.结果:TGF-β1能诱导HSC增殖并促进胶原的分泌,ALA可不同程度抑制TGF-β1所诱导的HSC增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性(P<0.05).结论:ALA在高浓度时对TGF-β1能诱导的HSC起抑制作用,可能对脂肪性肝纤维化及其引起的肝硬化有治疗作用.     

1α,25-二羟维生素D3通过上调MiR-146a表达抑制肝星状细胞活化

背景:1α,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]是维生素D在体内的最终活性形式,研究显示其具有一定的抗肝纤维化作用,但具体作用机制尚未完全明确。研究发现有多个微RNAs(miRNAs)参与了肝星状细胞(HSC)的增殖、活化,可促进或抑制肝纤维化发生、发展。目的:探讨1,25(OH)2D3是否可通过调控miRNAs表达而抑制HSC活化。方法:通过文献检索和q PCR技术筛选在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导激活的HSC与未活化HSC之间明显差异表达的miRNAs。分别以差异表达miRNA mimic、阴性对照mimic、1,25(OH)2D3和DMSO与TGF-β1共同干预HSC,采用CCK-8实验和流式细胞术检测细胞活力和细胞凋亡情况。结果:筛选显示miR-146a在活化HSC中的表达显著下调(P0.05)。与DMSO对照组相比,1,25(OH)2D3治疗组HSC中的miR-146a表达和细胞凋亡率显著增高,细胞存活率显著降低(P均0.05)。MiR-146a mimic转染组与阴性对照mimic转染组相比亦表现为miR-146a表达和细胞凋亡率显著增高,细胞存活率显著降低(P均0.05)。结论:1,25(OH)2D3调控miR-146a表达可能是其抑制TGF-β1诱导的HSC活化、促进细胞凋亡的重要机制之一。     

氧化苦参碱对转化生长因子-β1促肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响

目的观察低浓度氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞(HSC)培养活化和转化生长因子-β1,(TGF-β1)促活化作用影响,并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系.方法原代分离培养2d HSC,MTT法检测低浓度氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSG细胞毒作用(作用12 h)和增殖影响(作用48 h),或给予TGF-β1(5 ng/m1)和/(或)氧化苦参碱(2 mg/L)干预,相差显微镜观察HSC形态变化,分别以RT-PCR或Western blot法检测TGF-β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad 2/3、Smad 7以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和/(或)蛋白表达.结果氧化苦参碱(0.25～8 mg/L)对HSC无明显细胞毒作用,大于8 mg/L能抑制HSC增殖.氧化苦参碱(2 mg/L)抑制TGF-β1诱导HSC激活时的α-SMA表达和形态转化,伴随TGF-β1受体mRNA表达升高,Smad 7 mRNA表达上调及TGF-β1mRNA表达下降(与单纯TGF-β1处理组相比,分别上升1.25、0.87倍或下降1.92倍,P均＜0.05),但不影响TGF-β1Ⅱ型受体和Smad 3 mR-NA表达.Western blot检测Smad 2/3、Smad 7蛋白表达,与RT-PCR结果相似.氧化苦参碱对单纯培养激活的HSC有类似作用.结论低浓度氧化苦参碱(2 mg/L)上调Smad 7表达并抑制TGF-β1表达、上调TGF-β1Ⅰ型受体、恢复正常的TGF-β1跨膜信号转导,抑制HSC培养活化和TGF-β1促活化作用.     

转化生长因子β1刺激肝星状细胞中纤溶酶原激活物抑制剂1表达

肝星状细胞(HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节.活化的HSC大量增殖,并合成以胶原为主的细胞外基质(ECM)沉积在肝内.转化生长因子(TGF)β是激活HSC并促进其增殖的最重要细胞因子之一,可促进ECM产生,导致并加速肝纤维化的发生和发展.本实验拟通过免疫细胞化学法检测纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)1在HSC中的定位,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学法等研究TGF β1促进PAI 1 mRNA和蛋白质的表达,探讨PAI 1在肝纤维化发生和发展中的作用.     

转化生长因子β1与肝纤维化的基因治疗

肝纤维化是一个极为复杂的病理过程,其形成的关键环节是肝脏星状细胞(HSC)的活化并转化成为肌纤维样母细胞(MFB),进而合成、分泌大量细胞外基质(ECM),导致ECM代谢失衡.在人们所发现的哺乳动物转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)超家族中,TGF-β1是其中的主要成员,它既能抑制肝细胞、内皮细胞、上皮细胞的增殖,诱导细胞外基质的形成,又可以诱导肝细胞凋亡,是HSC向MFB转化进程中最重要的促进因子.因此,抑制TGF-β1生成,从分子水平阻断TGF-β1的信号转导,才有可能从"源头"上中止肝纤维化的形成.本文将从抑制TGF-β1的产生,阻断其与受体结合以及调控其胞内信号转导过程三个方面对近年来转化生长因子β1与肝纤维化的实验性基因治疗研究状况作一综述.     

TGF-β1刺激肝星状细胞活化与肝纤维化的分子病理机制研究进展

研究证实，肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）是肝纤维化的细胞学基础，转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）是促肝纤维化的关键细胞因子，慢性肝损伤时TGF-β1以自分泌和旁分泌两种形式促进HSC活化，使细胞向肌成纤维细胞（myofibroblasts，MFB）转化并生成大量细胞外基质（ECM），导致肝纤维化。TGF-β1具有广泛的生物学作用，可参与炎症、组织修复、肿瘤发生等病理生理过程，通过其细胞信号转导通路在不同环境条件下的变化而发挥相应作用。     

肝星状细胞活化的启动、维持和调控

肝纤维化的形成是一个多因素、多细胞参与的复杂过程,肝星状细胞(HSC)的活化是其中的中心环节。PDGF、TGFβ、RA、PPAR及ROS等均参与了HSC活化过程的调节。     

丹参酚酸B对大鼠肝星状细胞中丝裂原激活的蛋白激酶通路的抑制作用

目的 探讨丹参酚酸B(SA-B)对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)中丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的抑制作用。方法 分离大鼠HSC，于无包被塑料培养皿中原代培养7d，继以10^-6mol／L浓度的SA-B孵育，再加10ng／ml的转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激。以蛋白印迹法观察SA-B对TGF-β1刺激的HSC内细胞外调节的蛋白激酶(ERK)表达及其磷酸化和对HSC表面TGF-β1 I型受体(TβRI)，Ⅱ型受体(TβRⅡ)表达的影响，观察由此改变致HSC合成Ⅰ型胶原蛋白的变化。ELISA法测定HSC培养液中Ⅰ型胶原的含量。酶谱法观察基质金属蛋白酶2，9、13(MMP-2、MMP-9、MMP-13)的活性。结果 10^-6mol／L浓度的SA-B可抑制原代正常培养9d的HSC及TGF-β1刺激的HSC中ERK1／2的磷酸化，对TβRⅠ和TβRⅡ的表达无影响。SA-B可抑制原代正常培养的HSC合成Ⅰ型胶原，抑制TGF-β1刺激的HSCⅠ型胶原的合成及分泌。SA-B对HSC培养液中MMP-2和MMP-13的活性无明显作用，对MMP-9活性则有明显的促进作用。结论 SA-B抑制了正常原代培养已活化的HSC和经TGF-β1刺激的HSC内ERK信号传导通路，这一抑制作用与HSC的TGF-β1受体表达无关。SA-B通过抑制TGF-β1的信号传导，减少了HSC对Ⅰ型胶原的合成与分泌，此种细胞功能的改变可能与基质金属蛋白酶的降解作用无关。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以0.85%氯化钠溶液和秋水仙碱为对照.免疫细胞化学分析TGF-β1的蛋白合成;半定量RT-PCR法检测TGF-β1mRNA的表达量.结果抗纤软肝冲剂组TGF-β1蛋白表达量为108.41士4.50,mRNA相对表达量为54.41±5.57,明显低于0.85%氯化钠溶液组和秋水仙碱组(P＜0.01)..结论抗纤软肝冲剂能抑制HSC的TGF-β1的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.