雄激素应答元件陷阱DNA抑制PSA基因启动子的作用并诱导LNCaP细胞凋亡(英)

目的：研究雄激素应答元件陷阱DNA（ARE decoy）对前列腺特异抗原（PSA）基因启动子的抑制作用及其对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响，为前列腺癌的基因治疗寻求新的策略。 方法:联合运用报告基因和陷阱DNA策略，构建含PSA基因5’侧启动子区640 bp DNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA， ARE陷阱DNA共转染前列腺癌细胞株PC3-M。应用双荧光素酶测定系统，检测荧光素酶的表达活性。然后，应用2 mg/L ARE decoy转染LNCaP细胞，通过相差显微镜观察细胞超微结构变化，MTT比色法检测细胞生长活性，DNA ladder和流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡以研究ARE decoy DNA对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响。同时提取LNCaP细胞核蛋白，应用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测ARE decoy DNA与雄激素受体的特异结合。结果:ARE decoy DNA显著抑制报告基因荧光素酶的表达，抑制率可达95%。EMSA显示ARE decoy DNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染ARE decoy DNA后，镜下观察部分细胞出现凋亡形态学的改变，细胞体外生长受到抑制，染色体DNA凝胶电泳可见明显梯形条带。转染48h的凋亡率为22.4%。 结论:实验表明ARE decoy DNA能竞争结合雄激素受体(AR)，阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡，有可能为前列腺肿瘤的治疗提供新的策略。     

Inhibition of Epigallocatechin Gallate on Telomerase Activity of Prostate Carcinoma Cell Line PC-3M-2B4 in Vitro and Its Possible Mechanism

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞端粒酶的抑制作用及可能的作用机制.方法:用不同浓度的EGCG处理体外生长的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,MTT法检测EGCG对PC-3细胞的抑制作用,TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性以及荧光定量PCR法检测人端粒酶逆转录酶mRNA的表达.结果:与对照组相比,EGCG处理组可使存活率明显降低,并随药物剂量的增加呈下降趋势(P＜0.01);TRAP-PCR银染法显示,EGCG能明显抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞端粒酶的活性,并呈剂量依赖性(P＜0.05);荧光定量PCR法显示,被EGCG作用的人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞端粒酶逆转录酶mRNA的表达呈下降趋势,并呈剂量依赖性.结论:EGCG可能通过抑制癌细胞的端粒酶的活性来抑制前列腺癌细胞的生长,对癌细胞端粒酶的抑制作用可能是通过抑制端粒酶的关键调节酶-端粒酶逆转录酶来实现的.     

CIP2A过表达对胃黏膜上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究蛋白磷酸酶2A癌性抑制因子(CIP2A)过表达对胃黏膜上皮细胞GES-1增殖和凋亡的影响。方法:RT-q PCR检测正常胃黏膜组织和胃息肉组织中CIP2A和cyclin D1的表达。将胃黏膜上皮GES-1细胞分为空白对照组、空载体对照组和CIP2A过表达组,分组感染GES-1细胞后,分别用MTT法和Brd U试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blot法和RT-q PCR检测凋亡蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清炎性因子的浓度。用E2F1 siRNA转染细胞,检测各组细胞中p-Rb、E2F1和cyclin D1的蛋白水平。结果:与正常胃黏膜组织相比,腺瘤性胃息肉组织中CIP2A和cyclin D1的mRNA表达水平均明显升高,而增生性胃息肉中CIP2A和cyclin D1的水平并无明显变化。GES-1细胞感染CIP2A过表达重组腺病毒之后,细胞的增殖能力和细胞活力提高,细胞凋亡率降低,炎性因子IL-1β和IL-10分泌增加,p-Rb、E2F1和cyclin D1蛋白水平升高,而E2F1沉默降低p-Rb、E2F1和cyclin D1的蛋白水平。结论:CIP2A通过激活Rb/E2F1促进GES-1细胞的增殖并抑制凋亡。     

Survivin-siRNA对前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制作用

目的：探讨survivin-siRNA对前列腺癌细胞株PC-3M的增殖抑制作用。 方法:构建两个针对survivin siRNA表达载体，与脂质体和空质粒两个对照组一起分别转染前列腺癌PC-3M细胞后，利用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平，MTT法测定细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。 结果:转染72 h后，两个实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体组的48%±6% (n=3)和30%±5%(n=3)，蛋白表达水平是脂质体组的38%±4%（n=3）和36%±4%（n=3）。MTT检测实验组细胞的生长速度分别是脂质体组的44.20%±2.08%(n=3)和39.20%±1.93%（n=3），流式细胞术发现实验组G1期细胞比例明显高于两个对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡。 结论:利用survivin-siRNA可明显抑制前列腺癌PC-3M细胞的增殖，细胞受阻于G1期, 诱导细胞凋亡，为进一步进行动物体内研究奠定了基础。     

p53AIP1基因转染对PC-3M人前列腺癌细胞生物学特性的影响

目的观测p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)对PC-3M人前列腺癌细胞的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法构建真核载体pDC316-p53AIP1,并进行双酶切及PCR鉴定。在LipofectamineTM2000介导下转染至体外培养的PC-3M人前列腺癌细胞系中,Western blot法检测其表达,CCK-8法检测PC-3M细胞增殖情况,流式细胞术分析PC-3M细胞周期变化和annexinV-FITC/PI结合流式细胞术凋亡情况,TranswellTM实验检测p53AIP1对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功构建了pDC316-p53AIP1真核表达载体,重组质粒转染PC-3M细胞后,Western blot法检测p53AIP1在PC-3M细胞中有表达,CCK-8结果显示表达的p53AIP1能抑制PC-3M细胞增殖(P0.05),流式细胞术检测细胞周期阻滞在S/G2-M期(P0.05)且p53AIP1能促进PC-3M细胞凋亡,TranswellTM侵袭和迁移实验显示p53AIP1使细胞侵袭迁移能力均降低(P0.05)。结论p53AIP1抑制PC-3M细胞的周期、增殖、侵袭及迁移,并能促进其凋亡。     

维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的凋亡诱导作用

目的： 观察维生素K3对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M的凋亡诱导作用。方法： MTT增殖抑制实验；吖啶橙染色检测细胞凋亡；流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化；NAC抗氧化试验；DCFH-DA荧光分光光度法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平；RT-PCR检测GSH-Px和CAT基因表达的改变。结果： 60 μmol/L剂量以上的VK3均可以有效抑制PC-3M细胞的增殖，并且呈时间剂量依赖性；联合应用不同剂量NAC（5、10、20、40、80 μmol/L）与VK₃（60 μmol/L）共同作用于PC-3M细胞后，结果显示与单独应用VK3相比各浓度的NAC能不同程度增加细胞存活率；吖啶橙染色证明在VK₃（60 μmol/L）作用12 h后，PC-3M细胞出现凋亡的形态学改变；流式细胞计数结果显示VK₃（60 μmol/L）作用12 h后细胞出现凋亡峰，细胞周期被阻滞于G₀/G₁期；DCFH-DA荧光染色，在VK₃作用后1-2 h，细胞内即出现了较强的荧光表达；RT-PCR结果显示，在VK₃作用后细胞内的CAT和GSH-Px两种主要的抗氧化酶类表达降低。结论： VK₃可能主要通过引起PC-3M细胞内氧化应激诱导细胞发生凋亡。     

前列腺癌PC-3M细胞hmSD活性与细胞凋亡相关性的实验研究

目的：研究前列腺癌PC-3M细胞株hmSD的活性与细胞凋亡的相关性。方法： 应用丁酸钠诱导前列腺癌PC-3M细胞发生凋亡，吖啶橙/溴化乙锭染色检测细胞凋亡率；收集丁酸钠作用后的PC-3M细胞，匀浆后离心取上清，与底物共同孵育，以硫代巴比妥酸（TBA）显色反应检测所生成的唾液酸，计算唾液酸酶活性；将细胞凋亡率与hmSD活性进行相关性分析。结果：丁酸钠诱导PC-3M细胞凋亡的同时显著下调hmSD的活性，凋亡率与hmSD活性呈负相关。结论：hmSD活性变化与前列腺癌细胞凋亡呈相关性。     

黄芩苷抑制CA46细胞增殖和诱导凋亡的作用机制探讨

目的： 研究中药黄芩苷（baicalin）对人Burkitt淋巴瘤细胞株CA46细胞增殖、凋亡的影响并探讨其可能作用机制。 方法：应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对CA46细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、细胞DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法检测黄芩苷诱导CA46细胞凋亡的能力;RT-PCR法检测黄芩苷作用前后c-myc、bcl-2 mRNA表达水平的变化,Western blotting法检测c-Myc、Bcl-2、procaspase-3(caspase-3前体)、PARP(多聚ADP核糖聚合酶)蛋白水平的变化。结果：细胞生长曲线结果显示黄芩苷能明显抑制CA46细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)约为10 μmol/L;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术早期凋亡的检出、TUNEL晚期凋亡细胞的检出和细胞DNA片段化凋亡梯带的检出,均证实黄芩苷能有效诱导CA46细胞凋亡,细胞凋亡率呈现浓度依赖性递增。黄芩苷作用后CA46细胞c-myc、bcl-2 mRNA和c-Myc、Bcl-2、procaspase-3、PARP(116 kD)蛋白的表达呈现时间依赖性递减,而PARP(85 kD)表达呈现时间依赖性递增。结论：黄芩苷能有效抑制CA46细胞增殖,诱导其凋亡;c-Myc、Bcl-2表达水平下调和caspase-3激活可能参与了这一作用过程。     

麦冬皂苷B对前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨麦冬皂苷B对前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制.方法 体外培养PC-3细胞,分别以5、10、20μmol/L麦冬皂苷B处理后,MTT实验检测PC-3细胞增殖能力;Transwell实验检测PC-3细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测PC-3细胞的细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blot检测细胞周期蛋白Dl(cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2/9(matrix metalloproteinase-2/9,MMP-2/9)的表达.结果 不同浓度麦冬皂苷B处理后,PC-3细胞的细胞增殖能力、迁移和侵袭能力降低(P＜0.01);G0/G1期细胞比例与细胞凋亡率明显升高(P＜0.01);PC-3细胞cyclinD1、MMP-2与MMP-9的表达水平均明显降低(P＜0.01).结论 麦冬皂苷B抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭及迁移,促进凋亡.     

cyclinD1过表达对子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞增殖及上皮间质转化的影响北大核心CSCD

目的 探讨cyclin D1过表达对子宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、分化的影响及其他信号分子的变化情况.方法 采用PCR法扩增cyclin D1基因全长,构建cyclin D1-pcDNA3.1质粒转染人乳头状瘤病毒16阳性的SiHa细胞,筛选cyclin D1稳定过表达细胞株.采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Western blot分别检测转染细胞cyclin D1 mRNA和蛋白表达.采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法绘制细胞生长曲线,采用RT-PCR法和Western blot检测转染细胞CK7、E-cadherin、波形蛋白、Snail基因的mRNA和蛋白表达;采用RT-PCR法检测增殖分化相关基因CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E、Rb、E2F、E6/E7、Ki-67基因的mRNA表达水平.对细胞同步化处理,用RT-PCR法检测细胞周期不同时间点cyclin D1及p21基因的mRNA表达情况.结果 成功构建cyclin D1稳定过表达的G-3细胞株.生长曲线及Ki-67 mRNA升高（P〈0.05）提示G-3细胞增殖速度加快,G-3细胞中波形蛋白、Snail基因和蛋白表达明显增加（均P〈0.05）,E-cadherin、CK7基因和蛋白表达明显降低,提示转染细胞发生了上皮间质转化.cyclin D1过表达后,CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E表达增加,Rb、E2F、E6/E7、p16表达无明显改变,p21与cyclin D1表达趋势基本一致,在细胞周期不同时间点表达存在波动性.结论 转染诱导cyclin D1过表达可促进SiHa细胞增殖和上皮间质转化,这一过程中伴随着CDK4、CDK2、p21、p27、cyclin E基因表达的上调.cyclin D1过表达时,p21表达量也增高,可能通过影响波形蛋白表达参与了对SiHa细胞上皮间质转化的调控.     

雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响

目的： 构建带有人雌激素受体2（ESR2）全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。 方法：RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hERβ;瞬时转染前列腺癌PC-3M细胞株,应用细胞计数、MTT法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变;半定量RT-PCR法及Western blotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和 P21Cip1 mRNA及蛋白表达。 结果：DNA测序结果显示扩增的ESR2序列与GenBank（NM_001437）所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3.1-hERβ瞬时转染人PC-3M细胞48 h后,与质粒对照组相比：RT-PCR法及Western blotting法显示,ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显增加;细胞计数及MTT结果发现,细胞数目减少,细胞增殖活性下降（P<0.01）;流式细胞实验显示,G0/G1期细胞比例增加（P<0.05）,S期及G2/M期细胞比例减少（P<0.05）;RT-PCR及Western blotting结果还发现cyclinD1的表达减弱,而P21Cip1的表达增强。 结论：成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒;带有ESR2全长基因的重组质粒转染PC-3M细胞后,细胞的增殖活性受到抑制;RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和 P21Cip1的表达抑制细胞的增殖。     

E2F decoy oligodeoxynucleotide ameliorates cartilage invasion by infiltrating synovium derived from rheumatoid arthritis

This study examined the ability of E2F decoy oligodeoxynucleotides (ODN) to inhibit proliferation of synovial fibroblasts derived from patients with rheumatoid arthritis (RA). The effect of E2F decoy ODN on cartilage invasion by RA synovium in a murine model of human RA was also investigated. E2F decoy ODN were introduced into synovial tissue and synovial fibroblasts derived from patients with RA using hemagglutinating virus of Japan (HVJ)-liposomes. The effect of E2F decoy ODN on synovial fibroblast proliferation was evaluated by MTT assay and by RT-PCR for the cell cycle regulatory genes proliferating-cell nuclear antigen (PCNA) and cyclin-dependent kinase 2 (cdk2). Changes in production of inflammatory mediators by RA synovial tissue following transfection with E2F decoy ODN were assessed by ELISA. Human cartilage and RA synovial tissue transfected with E2F decoy ODN were co-transplanted in severe combined immunodeficient (SCID) mice. After 4 weeks, the mice were sacrificed and the implants histologically examined for inhibition of cartilage damage by E2F decoy ODN. E2F decoy ODN resulted in significant inhibition of synovial fibroblast proliferation, corresponding with reduced expression of PCNA and cdk2 mRNA in synovial fibroblasts. The production of interleukin-1beta (IL-1beta), IL-6 and matrix metalloproteinase (MMP)-1 by synovial tissue was also significantly inhibited by the introduction of E2F decoy ODN. Further, in an in vivo model, cartilage that was co-implanted with RA synovial tissue transfected with E2F decoy ODN exhibited no invasive and progressive cartilage degradation. These data demonstrate that transfection of E2F decoy ODN prevents cartilage destruction by inhibition of synovial cell proliferation, and suggest that transfection of E2F decoy ODN may provide a useful therapeutic approach for the treatment of joint destruction in arthritis.     

表达反义细胞周期蛋白cyclinD1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的 …

观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞的生长影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｍｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况。     

Blockade of the type I IGF receptor expression in human prostate cancer cells inhibits proliferation and invasion, up-regulates IGF binding protein-3, and suppresses MMP-2 expression

The type I insulin-like growth factor receptor (IGF-IR) is involved in tumour cell proliferation, invasion, and cancer cell survival. Several studies indicate that the IGF axis contributes to prostate cancer pathogenesis, but there is no consensus regarding the relative expression of the IGF-IR in benign and malignant prostate epithelium. In this study, endogenous IGF-IR gene expression was reduced in stably transfected PC-3 cells by employing an antisense RNA strategy which resulted in significant suppression of both PC-3 cell invasion and proliferation in vitro. Furthermore, it was demonstrated that a direct correlation exists between the inhibition of IGF-IR gene expression and either up-regulation of IGF binding protein (BP)-3 or down-regulation of matrix metalloproteinase (MMP)-2 expression in androgen-independent PC-3 cells. Moreover, inhibition of IGF-IR gene expression in transfected PC-3 cells leads to an enhanced rate of spontaneous apoptosis. In addition, expression analyses by quantitative RT-PCR on RNA from laser microdissected matched normal prostate and prostate tumour samples revealed that IGF-IR gene expression was up-regulated in nine of 12 prostate cancers, whereas IGFBP-3 gene expression was down-regulated in all 12 prostate carcinomas analysed. These results indicate an important role for IGF-IR and IGFBP-3 in the homeostasis of prostate carcinoma cells and provide a further basis for targeting IGF-IR or IGFBP-3 gene expression in order to improve understanding of the IGF-IR-activated signalling pathways and as a potential treatment for prostate cancer.     

GRIM-19基因的克隆及其对小鼠前列腺癌细胞株的促凋亡作用

目的构建GRIM-19基因真核表达质粒,探讨GRIM-19基因转染对小鼠前列腺癌rm-1细胞的促凋亡作用。方法采用RT-PCR及重组DNA技术构建pcDNA-GRIM-19真核表达质粒,体外进行基因转染。形态学观察,DNAladder检测转染后rm-1细胞凋亡,RT-PCR方法检测rm-1细胞caspase-3活性。结果扩增出GRIM-19cDNA全长,测序结果与GenBank记载基本一致。转染rm-1细胞48h后证明其能在真核细胞表达,形态学及共聚焦显微镜观察到pcDNA3.1-GRIM-19重组质粒组出现明显的细胞凋亡,并出现典型的DNAladder。转染pcDNA3.1-GRIM-19重组质粒组caspase-3表达强度较对照组及空质粒组明显上调(P<0.05)。结论成功克隆并构建鼠GRIM-19基因真核表达载体pcDNA3.1-GRIM-19,该载体可诱导鼠rm-1细胞凋亡。其凋亡机制与caspase-3酶活性有关。     

应用RNA干扰技术研究激素非依赖性高转移潜能前列腺癌细胞中survivin的表达及意义

目的研究 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中的表达及其与前列腺癌的生物学行为及侵袭和转移潜能的相关性。方法应用 RNA 干扰技术构建 survivin 真核表达载体,转染人激素非依赖性前列腺癌高转移亚系 PC-3M-1E8细胞系。通过细胞生长曲线、肿瘤细胞裸鼠异种接种、软琼脂集落形成实验检测体内、体外细胞生长能力;流式细胞术检测 survivin RNA 干扰质粒对细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot 检测 caspase3活性片段,观察 survivin 抑制细胞凋亡的情况;Matrigel 穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果稳定转染 survivin RNA 干扰质粒的 PC-3M-1E8细胞中 survivin 的 mRNA 及蛋白水平明显降低,蛋白水平与阴性对照组相比,约下降78%～80%,差异有统计学意义(P<0.01);体外培养细胞生长速度及裸鼠体内肿瘤生长速度均明显减慢,锚着不依赖性生长的能力(软琼脂克隆形成数:14.33±3.51)与阴性对照组(52.33±6.81)及空白对照组(54.00±6.00)相比明显降低(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,空白对照组、阴性对照组及干扰阳性组的凋亡比例分别为5.88±0.99、6.97±1.60、16.40±1.95,干扰阳性组的凋亡比例显著高于对照组(P<0.01),并伴有 caspase3活性片段的表达增加;细胞阻滞在 G_0/G_1期(干扰阳性组、阴性对照组及空白对照组的细胞 G_0/G_1期的比例分别为52.71±1.10、43.59±1.83及43.65±3.44,P<0.05),并在细胞形态学上出现多核巨细胞现象;细胞体外侵袭能力明显降低,干扰阳性组的细胞(38.67±6.59)与阴性对照组(46.07±9.97)及空白对照组(47.87±9.58)相比穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中高表达,并与细胞凋亡、细胞生长及肿瘤侵袭有关。抑制 survivin 的表达可能成为临床治疗激素非依赖性前列腺癌的方法之一。     

上调胰岛素样生长因子结合蛋白6基因对乳腺癌细胞 MDA-MB-231细胞周期和凋亡的影响*

目的：探究上调胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期和凋 亡的影响。方法：体外培养人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,转染IGFBP-6 过表达质粒,实时荧光定量PCR 法验证转染效率;流式细胞术检测转染IGFBP-6 后的细胞周期的改变及凋亡的情况;免疫印迹检测增殖细胞核抗 原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、凋亡相关蛋白Bcl-2 和Bax 的蛋白表达水平。结果：IGFBP-6 转染 MDA-MB-231细胞后,IGFBP-6 的mRNA水平明显上调;PCNA、细胞周期蛋白D1 的表达水平明显降低;细胞 G1/S 期阻滞;凋亡细胞增多。结论：IGFBP-6 可以显著抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。     

人前列腺特异性膜抗原基因启动子/增强子表达载体的构建及组织特异性鉴定

目的：构建前列腺特异性表达的人前列腺特异膜抗原（PSMA）基因启动子/增强子表达载体，并进行组织特异性鉴定。 方法：从人外周血中提取基因组DNA，采用PCR技术分别扩增PSMA上游 1 175 bp 的启动子序列，及第三内含子中258 bp的增强子序列，将两个序列定向克隆至荧光素酶报告基因表达质粒pGL3-Basic，构建前列腺特异性表达载体pGL3-PSMP-PSME。将构建载体用脂质体分别转染前列腺癌PC-3M细胞株及4种非前列腺癌细胞株，48 h后通过检测荧光素酶表达活性，确定克隆的启动子及增强子的活性及其组织特异性表达活性。结果：构建的pGL3-PSMP-PSME质粒经酶切及DNA测序分析鉴定，证实克隆片段的大小、插入方向及其序列正确。细胞转染结果显示， pGL3-PSMP-PSME在PC-3M细胞株中表达活性明显高于其它4种非前列腺癌细胞株。结论：构建的前列腺表达载体具有较高的组织特异性, 为进一步研究PSMA调控序列驱动治疗基因进行前列腺癌的靶向生物治疗奠定了基础。