circ_0009910在胃癌细胞中作用机制初步研究

目的通过检测分析胃癌细胞中circ_0009910表达,初步探讨其在胃癌细胞中的作用机制。方法用qRT-PCR检测胃癌细胞系BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910表达水平,在BGC823、AGS细胞中采用circ_0009910 siRNA转染敲降circ_0009910,验证转染效果;在circ_0009910敲降的BGC823、AGS细胞中,用MTT法检测细胞增殖、平板法检测集落形成、Transwell检测迁移和侵袭、western-blotting检测上皮间质转化(EMT),采用SPSS 18.0软件进行统计学分析。结果BGC823、SGC7901、AGS、MGC803、MKN45中的circ_0009910相对表达水平为(7.238±0.895)、(5.023±0.786)、(4.184±0.356)、(8.561±1.026)、(3.478±0.301),较正常胃癌显著升高(P<0.01),siRNA转染敲降circ_0009910后,BGC823、AGS细胞活力、集落形成数目、迁移和侵袭能力与对照组相比均明显降低(P<0.01),N-cadherin、Snail蛋白的相对表达降低,而E-cadherin表达增加。结论circ_0009910在胃癌细胞中高表达,可促进胃癌细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭及EMT。     

lncRNA MEG3靶向调节miR-27a-3p抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞GES-1和GC细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics组;比较各组AGS细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系。结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P<0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用。miR-27a-3p是MEG3的靶基因。结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭。     

SIRT1蛋白在胃癌中的表达及其与P-gp、Top-Ⅱα关系的研究

目的:探讨SIRT1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达,分析SIRT1蛋白表达与耐药相关蛋白P-gp和Top-IIα的相关性。方法:免疫组化SP法检测SIRT1、P-gp及Top-IIα蛋白在15例胃癌组织和15例正常胃黏膜组织中的表达。Western blot检测正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1和人胃癌细胞株SGC7901、MKN45、MKN28、HGC27、AGS、MGC803中SIRT1蛋白的表达;检测GES-1、SGC7901及MKN45中的SIRT1、P-gp和Top-IIα的蛋白表达;siRNA-SIRT1/脂质体转染胃癌细胞SGC7901后,Western blot检测SIRT1、P-gp和Top-IIα的蛋白表达变化;MTT检测SGC7901细胞的体外增殖能力变化及对化疗药物5-Fu的敏感性变化。结果:15例胃癌组织中SIRT1蛋白表达阳性15例,P-gp蛋白表达阳性13例,Top-IIα蛋白表达阳性3例;15例正常胃黏膜中SIRT1蛋白表达阳性6例,P-gp蛋白表达阳性5例,Top-IIα蛋白表达阳性0例。GES-1、SGC7901、MKN45、MKN28、HGC27、AGS、MGC803中SIRT1相对蛋白表达量平均值分别为0.385、0.827、0.009、0.232、0.275、0.159、0.117;GES-1、SGC7901、MKN45中的P-gp相对蛋白表达量平均值分别为0.339、0.526、1.03;Top-IIα的蛋白相对表达量分别为0.093、0.889、0.158。siRNA-SIRT1转染SGC7901 8 h,培养72 h后检测control、BC-V、negative、siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3的SIRT1相对蛋白表达量平均值分别为0.965、0.937、0.958、0.567、0.253、0.083;P-gp相对蛋白表达量平均值分别为1.893、1.905、1.932、0.465、0.006、0.005;Top-IIα的蛋白相对表达量分别为0.09、0.07、0.073、0.085、0.168、0.195。MTT结果显示抑制SIRT1蛋白表达后,SGC7901体外增殖能力无明显变化,对化疗药物5-Fu的敏感性显著增加。结论:SIRT1在胃癌组织中过表达,且过表达的胃癌组织、细胞中SIRT1扮演促癌因子角色;SIRT1蛋白过表达能促进P-gp蛋白表达,降低Top-IIα蛋白表达,导致胃癌细胞化疗多重耐药性的增加。     

胃癌中硒结合蛋白-1的表达及其临床病理学意义

目的 检测硒结合蛋白1(SBP1)在胃癌细胞系SGC7901、BGC823、正常胃黏膜上皮细胞系GES-1、胃癌组织以及正常胃黏膜组织中的表达水平,分析其表达变化与胃癌临床病理因素之间的联系,探讨其作为胃癌标记物的可能性.方法 回顾性分析2006年至2007年武汉大学中南医院收治的135例胃癌患者的临床资料,利用免疫组织化学染色法对胃癌组织及16例正常胃黏膜组织中SBP1蛋白表达部位及水平进行测定,并进行半定量评分.Western blot和RT-PCR检测细胞系SGC7901、BGC823、GES-1中SBP1蛋白和mRNA的表达水平.组间比较采用单因素方差分析,SBP1表达强度与临床病理因素的关系采用x2检验.结果 SBP1 mRNA在胃癌细胞系BGC823、SGC7901中的表达分别为0.120±0.020、0.133±0.015,显著低于其在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达(0.907±0.015)(F=2106.462,P＜0.05).胃癌细胞系BGC823、SGC7901中的SBP1蛋白表达分别为0.253±0.015、0.273±0.015,显著低于其在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达水平(0.877±0.025)(F=1026.758,P＜0.05).3例胃癌组织中SBP1呈强免疫反应,而16例正常胃黏膜中SBP1呈强免疫反应.SBP1蛋白表达减少与胃癌患者临床分期相关(x2=12.629,P＜0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤组织学分型、分化程度、浸润深度以及淋巴结转移无关(x2=2.142,0.860,1.838,5.001,4.858,1.994,P＞0.05).结论 SBP1表达减少可以作为一种胃癌诊断的新指标.SBP1下调在胃癌发生及进展中可能发挥着重要作用.     

不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物表达与腹膜转移潜能相关的体外研究

目的比较不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达及其活性与腹膜转移潜能的关系。方法采用ELISA和Western印迹方法,比较不同胃癌细胞系uPA表达的差异,并测定其活性。在24孔培养板或Boyden小室中与生长良好的间皮细胞共同培养不同时间,在显微镜下直接计数与间皮细胞黏附的胃癌细胞,而用MTT法评估胃癌细胞在间皮细胞间的迁移和侵袭情况。结果4株胃癌细胞(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)的uPA表达以SGC7901最高,uPA活性以MKN45最高,AGS两者皆最低。MKN45的黏附能力明显强于MKN28(P<0.05)、SGC7901(P<0.05)和AGS(P<0.01),但其迁移和侵袭能力与SGC7901和MKN28相比差异无统计学意义;而AGS在3方面均明显弱于其他3株细胞。结论4株胃癌细胞uPA表达量及其活性差异较大,并且与其腹膜转移潜能呈正相关。     

沉默信息调节因子1对胃癌侵袭的影响及其机理研究

目的 研究沉默信息调节因子1 （SIRT1）蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌侵袭的影响和可能机理。方法 采用免疫组化SP法检测46例胃癌组织中SIRT1和血管内皮生长因子A （VEGF-A）蛋白的表达;采用Kaplan-Meier法分析SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白表达对胃癌患者预后的影响;采用Western blot法检测GES-1人胃黏膜细胞株及SGC7901人胃癌细胞株中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;采用siRNA小干扰技术特异性干扰SGC7901细胞株中SIRT1基因的表达后,检测SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;通过细胞侵袭实验检测不同处理后SGC7901细胞侵袭能力的变化。结果 与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白均呈高表达（P＜0.050）。SIRT1蛋白阳性表达患者的生存情况较差（P=0.001）,SIRT1及VEGF-A蛋白均呈阳性表达者的生存情况较差（P=0.006）,但VEGF-A蛋白表达与胃癌患者的预后无关（P=0.091）。SGC7901细胞中SIRT1蛋白（P=0.010） 和VEGF-A蛋白（P=0.020） 的表达较GES-1细胞上调。构建SIRT1-siRNA特异性抑制SIRT1基因的表达后（siRNA阳性组）,SIRT1蛋白和VGEF-A蛋白的表达均下调（P=0.010）,且SGC7901细胞的侵袭能力下降（P=0.000）。结论 SIRT1基因可能通过促进VEGF-A蛋白的表达而促进胃癌的侵袭,其可能是抑制胃癌侵袭的一个治疗靶点。     

miRNA-34a靶向HDAC1对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化的影响

目的:探讨miR-34a通过靶向组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1)对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:以胃癌组织及癌旁组织、体外培养的胃癌细胞系BGC-823、MKN28、AGS、SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞NGEC为研究对象。利用Lipofectamine 2000转染试剂对SGC-7901细胞进行转染,并分组为空白对照组、miR-NC组、miR-34a mimics组、miR-34a mimics+pcDNA组、miR-34a mimics+pc-HDAC1组。结果:与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞NGEC相比,胃癌组织和细胞系中miR-34a表达降低(P<0.05),HDAC1 mRNA表达升高(P<0.05)。miR-34a mimics可提高miR-34a表达、E-cadherin表达上调,细胞增殖活性、PCAN、Ki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低,细胞侵袭数明显减少(P<0.05)。miR-34a靶向负调控HDAC1蛋白表达(P<0.05)。pc-HDAC1可使m...     

趋化因子CXCL1通过整合素β1调控胃癌转移的机制研究

目的探讨过表达趋化因子CXCL1促进胃癌细胞迁移及相关分子机制。 方法应用胃癌细胞株（SGC-7901、BGC-823）,重组慢病毒方法构建过表达CXCL1细胞株,siRNA敲低胃癌细胞表达整合素β1（integrin β1）。Western blotting法检测CXCL1、integrin β1、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、FAK、SRC和ERK的表达,Transwell实验评估胃癌细胞的迁移能力。 结果过表达CXCL1的SGC-7901和BGC-823细胞中integrin β1表达水平高于对照细胞,siRNA干扰CXCL1表达后,胃癌细胞integrin β1表达水平下降。外源性CXCL1分别增强SGC-7901和BGC-823细胞迁移能力（2.40±0.44）倍（P=0.002）和（2.08±0.30）倍（P=0.001）。此外,CXCL1还增强FAK、SRC和ERK的磷酸化水平。integrin β1-siRNA可以阻断CXCL1所引起的SGC-7901和BGC-823细胞迁移能力增强（P<0.05）及FAK、SRC和ERK的磷酸化水平。CXCL1调控SGC-7901和BGC-823细胞的MMP-2、MMP-9表达,而敲低integrin β1后MMP-2、MMP-9表达随之下调。MMP抑制剂GM6001抑制7901-CXCL1和823-CXCL1细胞的迁移能力（P<0.05）。 结论CXCL1通过integrin β1激活FAK-SRC-ERK通路和调控MMP-2、MMP-9的表达,最终调控胃癌细胞迁移。     

趋化因子受体CXCR4、CCR7在胃癌细胞中的表达及其与胃癌细胞侵袭能力的关系

目的 观察趋化因子受体CXCR4及CCR7在不同侵袭能力人胃癌细胞株中的差异表达.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot分析CXCR4及CCR7在人胃癌细胞株MGC803、AGS、BGC823、SGC7901的表达;体外侵袭实验测定4株胃癌细胞的侵袭能力.结果 MGC803、AGS、BGC823、SGC7901中CXCR4 mRNA相对表达量分别为:1.2556±0.1384、0.7943±0.0913、0.4749±0.0744、0.2463±0.0344,CCR7 mRNA相对表达量分别为:0.6071±0.1404、0.5355±0.0750、0.2549±0.0522、0.2466±0.0342,CXCR4及CCR7蛋白表达趋势同其相对应的基因表达趋势基本一致.4株胃癌细胞侵袭实验测定的侵袭细胞数分别为:400.0±18.2、310.0±4.0、110.0±13.9、85.0±9.5.CXCR4在不同侵袭能力的胃癌细胞株中存在差异性表达(P<0.05).结论 CXCR4的表达与胃癌细胞侵袭能力成正相关,CCR7的表达与胃癌细胞侵袭能力无明显相关.     

胃癌细胞中长链非编码RNA CCAT2的表达及其作用

目的:探讨长链非编码RNA(lnc RNA)CCAT2在胃癌细胞中的表达及其作用。方法:用q RT-PCR检测胃癌细胞系AGS、Hs746T和BSG823及正常胃黏膜上皮细胞GES-1中CCAT2的表达,将胃癌AGS细胞分别转染CCAT2si RNA(si-CCAT2组)与阴性对照si RNA(阴性对照组)后,以无转染的AGS细胞为空白对照,CCK-8法检测细胞的增殖情况,并分别用流式细胞术分、细胞划痕和Trans well实验、Western blot检测si-CCAT2组与阴性对照组的凋亡情况、迁移和侵袭能力以及凋亡相关蛋白的表达。结果:各胃癌细胞系中CCAT2相对表达量均明显高于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(均P0.05);转染后72、96h,si-CCAT2组的增殖能力明显低于空白对照组与阴性对照组(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组各时间点增殖能力均无明显差异(均P0.05);与阴性对照组比较,si-CCAT2组细胞凋亡率明显升高、划痕愈合率明显降低、侵袭细胞数明显减少(均P0.05);P53、caspase-8、Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下调(均P0.05)。结论:CCAT2在胃癌细胞中高表升高,敲低其表达可抑制胃癌细胞的增殖及迁移与侵袭能力,机制可能与其调控凋亡相关蛋白的表达有关。     

白细胞介素-1受体Ⅱ对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨人白细胞介素-1受体Ⅱ(IL-1R2)对胃癌细胞生物学行为的影响及其对血管的影响。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法检测胃癌细胞株(AGS、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、HGC-27、HSC-39)及人胃黏膜细胞(GES-1)中IL-1R2的mRNA、蛋白水平, 选择MGC-803、BGC-823构建下调及过表达IL-1R2细胞模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖、划痕实验、Transwell侵袭实验明确IL-1R2对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。细胞周期及凋亡实验探究IL-1R2对细胞周期及凋亡的作用。RT-PCR检测下调及过表达IL-1R2的MGC-803、BGC-823细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF) mRNA水平。下调、过表达IL-1R2细胞组及其对照组与血管内皮细胞(HMEC-1)共培养, 明确IL-1R2对HMEC-1增殖、迁移及VEGF、IL-6 mRNA水平的影响。两组间差异表达采用t检验方法比较;多组间采用方差分析(ANOVA)和T...     

lncRNA HAGLR通过靶向miR-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLR通过靶基因微小RNA(miR)-93-5p调控胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测胃癌细胞株(HS-746T、BGC823、SGC7901、MGC803)和正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中HAGLR的表达水平。选择HA...     

长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA,miR)-612的调控作用。方法2017年1月至2020年3月,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量;体外培养肾癌细胞ACHN,分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞;采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量;采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织(t=52.113,P<0.05),miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织(t=47.062,P<0.05);si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组(t=18.007、21.169、18.514、21.466,P<0.05),si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组(t=16.188、18.984,P<0.05),si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组(t=23.398,P<0.05);miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组(t=14.920、19.551、17.441、24.512,P<0.05),miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组(t=14.950、14.062,P<0.05),miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组(t=24.820,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612;抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-339-3p和miR-339-5p在体外胃癌细胞中的表达和意义

目的观察人胃癌细胞株及正常人胃黏膜上皮细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平,通过功能获得型（gain of function）实验验证miR-339-3p和miR-339-5p与胃癌的相关性,并阐明二者在肿瘤发生中的意义。方法采用SYBR GreenI嵌合荧光法实时定量PCR技术分别检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,胃癌MKN．45、SGC．7901及BGC-823细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平;将外源性miR-339-3pmimics和miR-339-5p mimics转染胃癌MKN．45细胞株,采用RT-PCR法检测其转染率,并应用流式细胞术和CCK-8法分别检测转染72h后MKN．45细胞的凋亡及增殖能力的变化。结果miR-339-3p和miR-339-5p在胃癌MKN-45、SGC一7901及BGC-823细胞株中的表达均下调;与对照组相比,转染miR-339-3pmimics及miR-339-5pmimics后,MKN-45细胞株的凋亡率明显增高P〈0．05）,而增殖能力明显减弱（P〈0．01）。结论miR-339-3p和miR-339-5p在3种胃癌细胞株中均呈低表达。miR-339-3p和miR-339-5p可能参与了胃癌细胞的增殖与凋亡机理。     

真核起始因子4A1在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖、侵袭及迁移中的作用

目的:探讨真核起始因子4A1(eIF4A1)在胃癌中的表达及其在胃癌细胞增殖、侵袭及迁移中的作用。方法:收集116对胃癌组织及相应的癌旁正常组织,用免疫组化、RT-PCR及Western blot检测eIF4A1的表达;用MTT法检测不同浓度的eIF4A1抑制剂hippuristanol(0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)对胃癌细胞株AGS、MGC-803及正常胃黏膜细胞GES-1增殖的影响;Transwell及划痕实验检测hippuristanol对胃癌细胞株的侵袭和迁移能力的影响。结果:免疫组化结果显示,eIF4A1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P0.05),RT-PCR及Western blot验证结果与免疫组化结果一致。MTT结果显示,hippuristanol呈浓度与时间依赖性抑制胃癌细胞株AGS、MGC-803的增殖,而达0.5μmol/L以上时才对正常胃黏膜细胞GES-1的增殖有抑制作用(均P0.05);用0.125μmol/L的hippuristanol处理的AGS、MGC-803细胞24 h后,两种细胞的侵袭能力及迁移能力均明显下降(均P0.05)。结论:eIF4A1在胃癌中呈高表达,且与胃癌细胞的恶性特征密切相关,eIF4A1抑制剂有望成为治疗胃癌的候选药物。     

TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化及其上调CD44表达的实验研究

目的 观察TGF-β1诱导胃癌SGC7901细胞发生上皮间质转化及其对胃癌细胞生物学特性与肿瘤起始细胞特性的影响.方法 TGF-β1处理胃癌SGC7901细胞后,观察其形态学变化;CCK-8法检测细胞增生能力;划痕实验及transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力;免疫荧光法检测上皮钙黏素及间质钙黏素表达的变化;逆转录PCR法与免疫蛋白印迹法检测上皮间质转化相关因子及CD44的表达.结果 TGF-β1处理SGC7901细胞后,细胞形态由上皮细胞形态向间质细胞样形态转变;TGF-β1处理后,处理组划痕愈合程度明显高于对照组(P＜0.05),处理组穿膜细胞数目(107.67±5.48)显著高于对照组(53.33±8.47,P＜0.05),TGF-β1处理组SGC7901细胞上皮钙黏素表达显著降低(P＜0.05),间质钙黏素(P＜0.05)与Snail(P＜0.05)表达显著增加,肿瘤起始细胞相关标志物CD44表达显著增加(P＜0.05).结论 TGF-β1可诱导胃癌SGC7901细胞发生上皮间质转化,增加CD44表达,抑制胃癌细胞增生,促进其侵袭和迁移.     

miRNA-214对胃癌细胞BGC823|MKN45的细胞周期和凋亡的影响

目的探讨miRNA-214对胃癌细胞的细胞周期和凋亡的影响,及其对靶基因PTEN蛋白表达的影响。方法荧光定量PCR法检测人低分化胃癌细胞BGC823、MKN45和人正常胃黏膜细胞GES-1中miRNA-214的表达;检测瞬时转染反义核苷酸(miRNA-214抑制剂)后的miRNA-214的表达;流式细胞术分析转染后的细胞生长周期和凋亡率的变化;免疫荧光检测miRNA-214抑制剂对靶基因PTEN表达的影响。结果 miRNA-214在人胃癌细胞BGC823及MKN45中表达上调(P0.05)。转染miRNA-214抑制剂后能使BGC823中miRNA-214的表达下调(P0.05),且BGC823和MKN45在转染组的G1期细胞较未转染组明显增高[分别为(60.20±3.38)%vs.(49.33±7.99)%(P0.05);(69.90±0.28)%vs.(54.85±0.64)%(P0.05)],S期细胞在转染组较未转染组明显降低[(21.87±3.20)%,(18.25±1.34)%,P0.05)],但对细胞凋亡率无影响(P0.1)。免疫荧光显示,转染miRNA-214抑制剂后PTEN呈强表达。结论 (1)人胃癌细胞系BGC823,MKN45中的miRNA-214呈高表达;(2)miRNA-214可使这两株细胞的G1期细胞减少,S期细胞增多,下调PTEN可能是其作用机制之一;(3)miRNA-214对上述两株细胞的凋亡无影响。     

人胃癌耐药细胞株中锌指蛋白139和MMP-2、MMP-7、细胞间黏附因子1的表达及其意义

本研究拟通过检测人胃癌细胞株SGC7901及耐药细胞株SGC7901/ADR中锌指蛋白139 (zinc finger protein 139,ZNF139)与侵袭相关基因基质金属蛋白酶2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-7、细胞间黏附因子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)的表达,了解侵袭相关基因与胃癌多药耐药性的关系,并探讨ZNF139在其中发挥的作用.     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(C3G)对人胃癌细胞株MGC803和SGC7901增殖、迁移和侵袭运动能力的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 用C3G处理人胃癌MGC803和SGC7901细胞株,用MTF比色法检测C3G对该细胞系增殖的抑制作用,Transwe1l小室进行迁移实验和人工重组基底膜侵袭实验.用RT-PCR及Western blot方法检测用药前后肿瘤细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因和蛋白的表达水平.结果 C3G在体外明显抑制人胃癌MGC803和SGC7901细胞的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P＜0.01),MGC803 24 hIC50=6.27μg/ml,SCC7901 24 h IC50=5.42 μg/ml.经C3G处理后,MGC803和SGC7901细胞迁移、侵袭能力明显降低(P＜0.01),MGC803和SGC7901阴性对照组24 h侵袭细胞数分别为(207±9)个和(115±9)个,C3G 10 μg/ml组侵袭细胞数则分别减少至(24±5)个和(14±6)个.MMP-2基因和蛋白表达水平显著下降(P＜0.01),且呈现浓度依赖性.结论 C3G具有体外抗胃癌细胞增殖的作用,且可能通过抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭运动能力来发挥预防肿瘤侵袭的作用,其机制可能与抑制MMP-2的生成有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of cyanidin-3-glucoside extracted from Chinese bayberry on the proliferation. migration and invasion ability of the gastric cancer cell lines MGC803 and SGC7901 in vitro, and explore the possible mechanism of the preventive effects of C3G on tumor metastasis.Methods After treatment by C3G, the growth inhibiting of C3G on MGC803 and SGC7901 was determined by MTF assay, cell migration and invasion ability was evaluated with transwell chamber. Expression of Matrix metalloproteinase 2( MMP-2 )mRNA and protion on cells were analyzed by RT-PCR and Western blot.Results C3G significantly inhibited the proliferation of MGC803 and SGC7901 cells in a concentration and time-dependent manner as measured by MTT method ( P ＜0. 01 ), and the IC50 were: MGC803:24 h IC50 =6. 27 μg/ml;SGC7901:24 h IC50 = 5.42 μg/ml. After the cells were treated with C3G, the migration and invasion ability of MGC803 and SGC7901 cells decreased significantly ( P ＜ 0. 01 ) the number of invasive cells in 24 hours of the negative control MGC803, SGC7901 group was ( 207 ± 9 ) and ( 115 ± 9 ),respectively, while in C3G 10 μg/ml group the number of invasive cells decreased to( 24 ± 5 ) , ( 14 ± 6). In addition, the expression of MMP-2 mRNA and protion decreased abviously ( P ＜ 0. 01 ), all that was in a concentration-dependent manner. Conclusions In vitro, C3G has a concentration- and time-dependent growth inhibiting effect on MGC803 and SGC7901 cells, and may prevent metastasis by affecting migration and invasion ability of tumor cells. This action may be mediated by down-regulation of MMP-2mRNA and protein.     

RASSF1A基因对胃癌SGC7901细胞蛋白表达谱的影响

目的探讨RASSF1A基因对胃癌SGC7901细胞蛋白表达谱的影响。方法建立SGC7901和RASSF1A-SGC7901细胞双向凝胶电泳图谱,筛选和鉴定部分分离较好的差异蛋白质点。RT-PCR验证差异基因mRNA的表达。结果建立了分辨率较高、重复性较好的RASSF1A-SGC7901细胞和SGC7901细胞的二维凝胶电泳图谱。筛选出8个差异蛋白质点,包括galectin-1,TRP-14,ACBP,PSMB5,PSMB4,TIM,vimentin及CD79α。RASSF1A过表达诱导了胃癌细胞SGC7901的galectin-1、TRP-14、ABCP的mRNA表达上调。结论 galectin-1,TRP-14及ABCP可能参与了RASSF1A抑制胃癌细胞SGC7901的生长。