miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

肝细胞生长因子对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 :探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对胃癌细胞株AGS增殖、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养AGS细胞,应用浓度为25、50、100 ng/m L的HGF处理AGS细胞,采用CCK-8法检测AGS细胞的增殖,transwell法分别检测HGF对AGS细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:CCK-8法检测结果显示,HGF对AGS细胞有促增殖作用。随着HGF浓度的增加或作用时间的延长,细胞增殖活力呈上升趋势,在72 h最为明显,呈时间、浓度依赖关系。Transwell迁移、侵袭实验显示,不同浓度的HGF对AGS细胞的迁移和侵袭能力有促进作用,以50 ng/m L最为明显(P     

沉默lncRNA ST7-AS1通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭影响的实验研究

目的：探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)致癌性抑制基因7反义RNA1(ST7-AS1)通过Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：肝癌细胞系HCCLM3分成Control组、Vector组、ST7-AS1组、sh-NC组、sh-ST7-AS1组和sh-ST7-AS1+Wnt/β-catenin通路激动剂（SKL2001）组。结果：与Control组比较,ST7-AS1组HCCLM3细胞的吸光度（A570）值及N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vemintin）、Wnt1和β-catenin的表达升高,克隆数量和迁移、侵袭数目增多,上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和GSK-3β的表达降低（P<0.05）。Wnt/β-catenin通路激动剂SKL2001可部分逆转沉默ST7-AS1对HCCLM3细胞增殖、迁移、侵袭的影响（P<0.05）。结论：沉默ST7-AS1可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的:探讨姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞株、人结肠癌SW620细胞株至对数生长期,选用不同浓度的姜黄素分别处理两种结肠癌细胞,采用MTT、克隆、流式细胞术、Transwell、Western blot等实验观察姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学作用的影响。结果:MTT实验和克隆实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的增殖,流式细胞术实验结果表明姜黄素可诱导结肠癌细胞的凋亡,Transwell实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭,Western blot实验结果表明姜黄素可抑制P13K/AKT信号通路。结论:姜黄素可显著抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移,诱导结肠癌细胞凋亡,其机制可能与抑制P13K/AKT信号通路有关。     

circDOCK4促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探索在肾透明细胞癌(ccRCC)中高表达的circDOCK4对ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR检测circDOCK4在ccRCC组织和细胞系ACHN、Caki-1的表达水平;核酸电泳和Rnase R消化实验验证circDOCK4的成环性;EdU、MTS和克隆形成实验检测circDOCK4对ACHN、Caki-1的增殖能力的影响;Transwell小室实验和划痕愈合实验检测circDOCK4对ACHN、Caki-1的迁移和侵袭能力的影响;核浆分离实验检测circDOCK4在ACHN、Caki-1的细胞亚定位。结果 circDOCK4在cc RCC组织和细胞系ACHN、Caki-1中显著高表达。核酸电泳和Rnase R消化实验证实circDOCK4的成环性。沉默circDOCK4的表达可明显抑制ACHN和Caki-1的增殖、迁移和侵袭能力。核浆分离实验提示circDOCK4主要定位于细胞浆。结论 circDOCK4具有促进ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭的能力,有望成为ccRCC的生物标志物或治疗靶点。     

三结构域蛋白28通过上皮-间充质转化对肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒,对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,组间比较采用t检验。结果RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG20.84±0.02,HCCLM30.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG21.00±0.05,HCCLM31.00±0.07,t=5.488、7.240,P<0.01),差异有统计学意义。划痕实验结果显示,48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%],差异有统计学意义(t=22.971、5.780,P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个,明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个,差异有统计学意义(t=23.050、13.242,P<0.01)。Western blot结果显示,HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06,0.63±0.08,t=4.822、2.951,P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03,0.32±0.02,t=2.909、7.944,P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03,0.12±0.02,t=2.970、4.157,P<0.05)低于对照组,E-cadherin表达升高(0.25±0.05,0.27±0.07,t=3.242、5.021,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示,实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30,1.40±0.17,t=4.571、3.095,P<0.01),差异有统计学意义,N-cadherin(0.42±0.01,0.84±0.03,t=22.460、8.441,P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00,0.84±0.02,t=52.230、6.194,P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07,0.34±0.07,t=2.972、4.174,P<0.01),差异均有统计学意义。结论降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。     

HMGB1介导TLR4/NF⁃κB信号通路干预骨关节炎研究进展

骨关节炎(osteoarthritis, OA)作为临床常见老年退行性疾病,目前尚无有效治疗手段。研究发现OA是一种慢性低度炎性疾病。损伤相关分子模式HMGB1（high mobility group box-1）在OA病理过程中发挥中心分子作用。HMGB1与固有免疫模式识别受体TLR4(toll-like receptor 4, TLR4)结合后激活NF-κB信号通路导致OA软骨退变和滑膜炎等免疫炎症反应。通过综述HMGB1介导TLR4/NF-κB信号通路在OA发病机制中的作用,为靶向阻断HMGB1治疗OA提供理论依据和参考。     

TLR4/NF-κB信号通路在脊髓损伤中的作用

[目的]探讨TLR4/NF-κB信号通路在急性脊髓损伤发病机制中的作用.[方法]SD大鼠随机分为假手术组、损伤组和单唾液酸神经节苷酯组(monosialoganglioside,GM1组).其中,前一组仅行假手术,后两组采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型.术后,GM1组给予静脉GM1,假手术组、损伤组静脉给予等量...     

叉头框蛋白A2表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在机制

目的:探究叉头框蛋白A2(FOXA2)对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法:收集2019年1月至2020年12月武汉大学中南医院10例肝细胞癌患者肝癌组织和癌旁组织,其中男性7例,女性3例,平均53岁。检测人肝癌细胞系中FOXA2的表达,肝癌细胞系HepG2中表达最高用于后续实验。FOXA2过表达和阴...     

跨膜丝氨酸蛋白酶4对肝细胞癌增殖侵袭作用的影响

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4 (transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖侵袭的作用.方法 构建并鉴定慢病毒转染TMPRSS4过表达的人肝细胞癌细胞系BEL-7402.Western blot及RT-PCR检测TMPRSS4的表达.MTT实验检测TMPRSS4对BEL-7402细胞增殖能力的影响.Transwell实验检测TMPRSS4对细胞侵袭性的影响.结果 RT-PCR及Western blot结果显示TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白及mRNA表达均显著高于对照组及空白载体转染组.MTT实验结果显示,慢病毒转染后,对照组、空白载体转染组和TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异(P＞0.05).侵袭实验显示TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为49.3±7.4,显著高于对照组(23.3±5.0)和空白载体转染组(19.3±3.2)(P＜0.05).结论 HCC细胞表达TMPRSS4.TMPRSS4过表达可促进HCC细胞的侵袭能力,但是不影响HCC细胞增殖.     

LYN通过Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的 探讨LYN对胃癌细胞迁移、侵袭等生物学行为的影响,并分析其对Wnt/β-catenin信号通路的调控机制.方法 选取2017年10月-2018年5月承德医学院附属医院收治的胃癌患者的胃癌组织和癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测在临床收集的胃癌和癌旁组织样本中的LYN表达水平.以胃癌AGS细胞为实验对象,利用脂质...     

七氟烷通过BACE1-AS和糖酵解途径抑制肝癌细胞的增殖及侵袭迁移

目的分析七氟烷对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭迁移、糖酵解以及BACE1反义RNA(BACE1-AS)表达的影响。方法培养肝癌细胞,经过4%七氟烷处理后,用CCK-8方法检测肝癌细胞细胞增殖,用流式细胞检测细胞凋亡、用Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移,利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas, TCGA)数据库对BACE1-AS的相关生物学信息进行挖掘,包括肝癌组织中的BACE1-AS表达量,预后相关分析等。结果七氟烷刺激明显降低HepG2细胞的存活率(P0.05)。此外,七氟烷是一种有效的促凋亡因子(P0.05);Transwell实验表明,与未处理细胞相比,七氟烷刺激明显降低HepG2细胞的侵袭力(P0.05)。划痕实验表明,经过七氟烷处理,HepG2细胞的迁移能力下降(P0.05);七氟烷刺激明显降低HepG2细胞的葡萄糖摄取以及乳酸的生成(P0.05)。经过七氟烷处理后,HepG2细胞的细胞外酸化(ECAR)明显下降,而耗氧量(OCR)明显上升(P0.05),BACE1-AS在肝癌组织中,不管是配对样本,还是非配对样本中的表达均高于对照组织(P0.05)。预后分析表明,高表达BACE1-AS的肝癌病人生存期更短,风险比达1.75(P0.05)。BACE1-AS在3种肝癌细胞中的表达高于正常肝细胞(P0.05),而经过七氟烷处理后,肝癌细胞BACE1-AS的表达明显降低(P0.05)。结论 BACE1-AS是一个肝细胞癌相关癌基因,七氟烷通过抑制BACE1-AS的表达,抑制肝癌细胞的增殖、侵袭迁移和糖酵解,同时促进其凋亡,七氟烷有望用于肝癌的辅助治疗。     

CENP-A通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞侵袭、迁移的影响

目的:探究着丝粒蛋白-A（CENP-A）对卵巢癌（OC）细胞侵袭、迁移的影响,并探讨相关机制。方法:体外培养OC细胞系A2780细胞株,分为NG组（空白对照组）、pcDNA组（阴性转染组,转染pcDNA载体质粒）、pcDNA-CENP-A组（过表达CENP-A组,转染pcDNA-CENP-A载体质粒）、通路抑制剂组（转...     

miR-146a介导TLR4/NF-κB信号通路延缓骨关节炎的作用及机制

骨关节炎（osteoarthritis, OA）作为慢性低度炎症性疾病,对它的研究一直是重点和难点,因此如何延缓OA的进展成为最主要的问题。miR-146a作为维持软骨稳态的关键调节因子,其表达的变化对软骨退变和炎症具有调节作用。Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)/核因子-κB(nuclear Factor-κB, NF-κB)信号通路通过调节免疫炎症反应,维持软骨代谢稳态。虽然miR-146a介导TLR4/NF-κB信号通路延缓OA已有研究,但是具体作用机制仍然不完善。本研究通过miR-146a介导TLR4/NF-κB信号通路对炎症及软骨细退变方面的综述,为OA的治疗提供理论依据和潜在分子靶标。     

GPC3基因对肝癌细胞SK-Hep-1体外迁移、侵袭能力的影响

目的 利用构建好的GPC3真核表达载体,观察GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附、侵袭能力的影响.方法 将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法 转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察肝癌细胞转染前后增殖、黏附、迁移及侵袭能力的改变.结果 GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,迁移实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为131.70±7.44.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为71.60±4.76.侵袭实验中,200倍目镜下实验组细胞的穿膜细胞数为220.00±12.80.空质粒对照组细胞的穿膜细胞数为138.00±10.50.两组细胞比较,迁移、侵袭能力均显著增强(P＜0.01).结论 GPC3真核表达载体抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径抑制肝癌细胞的增殖.     

FOXC2介导Hedgehog/Gli信号通路对乳腺癌侵袭及迁移的影响

目的探讨FOXC2介导Hedgehog/Gli信号通路通过调控上皮间质转化（EMT）途径参与乳腺癌侵袭及迁移的机制。 方法应用不同浓度环靶明（Cyclopamine）处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率及计算药物半数抑制浓度（IC₅₀）;采用Cyclopamine或沉默FOXC2基因表达以阻断Hedgehog/Gli信号通路活化;通过Transwell小室体外侵袭实验及划痕实验分别检测阻断Hedgehog/Gli信号通路对MDA-MB-231细胞侵袭及迁移影响;Western blotting检测阻断前后Hedgehog/Gli信号通路分子Smoothened（Smo）、Gli1和EMT相关标志物FOXC2,E-cadherin及Vimentin蛋白表达变化。 结果与空白对照组比较,Cyclopamine可显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖并呈现时效-量效关系,48 h的IC₅₀为25 μmol/L。Transwell小室体外侵袭实验及划痕实验均显示,与未转染组及Control-siRNA组相比,FOXC2-siRNA组和Cyclopamine组细胞穿膜数及迁移率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blotting显示,与未转染组及Control-siRNA组相比较,FOXC2-siRNA组及Cyclopamine组Smo、Gli1及FOXC2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。而沉默FOXC2表达可显著降低Vimentin蛋白表达及增加E-cadherin蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论FOXC2通过介导Hedgehog/Gli信号通路从而调控EMT促进乳腺癌侵袭及迁移,提示阻断该信号通路有望成为乳腺癌靶向治疗新线索。     

罗哌卡因通过circ_0044516/微小RNA-198通路调控肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探讨罗哌卡因对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法:2019年1月至2020年4月,将体外培养A549细胞(购自中国科学院上海细胞库)分为对照组、不同剂量[25、50、100 mg/L,罗哌卡因组(Rop组)]、乱序无意义阴性序列组(si-NC组)、si-circ_0044516组、Rop＋pcD...     

瑞芬太尼通过抑制AKT/mTOR通路阻碍肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究瑞芬太尼对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响以及潜在机制.方法:常规培养的ACHN细胞作为参照,噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度瑞芬太尼(1、10、50、100μmol/L)作用的ACHN细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法(Western Bl...     

PAQR4在肝细胞癌组织中的表达及其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用

目的 探讨孕激素和脂联素受体4（PAQR4）在肝细胞癌（HCC）中起到的调控作用。方法 （1）在TCGA数据库中调查HCC组织中PAQR4的表达,分析PAQR4与HCC患者预后的关系。（2）转染两种不同的PAQR4特异性siRNA致HCC细胞系Hep3B和Huh7中PAQR4的表达降低,通过细胞增殖、侵袭和迁移实验来分析PAQR4对HCC的影响。（3）通过TCGA获取数据并采用Pearson卡方检验评估PAQR4的表达与HCC组织中免疫细胞浸润的关系。结果 （1）HCC患者肝脏肿瘤组织中PAQR4表达水平高于癌旁组织（P＜0.05）,PAQR4高表达与HCC患者预后不良相关（P=0.0014）。（2）在Hep3B和Huh7细胞中敲低PAQR4可抑制细胞增殖、侵袭和迁移。（3）PAQR4在HCC组织中的高表达与多种免疫细胞浸润存在相关。结论 PAQR4与肝细胞癌具有相关性,敲低PAQR4会抑制HCC细胞的增殖、侵袭和迁移。